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Um grânulo emparelhado e matriz de ímã para moldagem micropoços com geometrias côncavas variáveis

Bioengineering

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Summary

Este manuscrito introduz um método robusto de fabricar micropoços côncavos, sem a necessidade de instalações complexas de alto custo. Usando a força magnética, esferas de aço e uma matriz do através de-furo, várias centenas de micropoços formaram-se em um substrato de polidimetilsiloxano (PDMS) 3 x 3 cm.

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Lee, G. H., Suh, Y., Park, J. Y. A Paired Bead and Magnet Array for Molding Microwells with Variable Concave Geometries. J. Vis. Exp. (131), e55548, doi:10.3791/55548 (2018).

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Abstract

Uma cultura de esferoide é uma ferramenta útil para compreender o comportamento celular em que proporciona um na vivo-como ambiente tridimensional. Vários métodos de produção de esferoide como superfícies não adesivas, frascos de girador, gotas de suspensão e micropoços têm sido utilizados em estudos de interação célula a célula, ativação imune, drogas, triagem, haste diferenciação celular e geração de organoides. Entre esses métodos, os poços da microplaca com uma geometria tridimensional côncavo ganhou a atenção de cientistas e engenheiros, dados suas vantagens de geração de esferoide de tamanho uniforme e a facilidade com que as respostas de esferoides individuais podem ser monitorado. Apesar de cost-effective métodos tais como o uso de membranas flexíveis e litografia de gelo têm sido propostos, estas técnicas incorrer em graves inconvenientes tais como dificuldade em controlar os tamanhos padrão, realização de altas proporções e produção de áreas maiores de micropoços. Para superar estes problemas, propomos um método robusto para fabricar micropoços côncavos, sem a necessidade de instalações complexas de alto custo. Este método utiliza uma matriz de através de-furo 30x30, aço de cem micrômetro-ordem vários grânulos e a força magnética para fabricar 900 micropoços em um substrato de polidimetilsiloxano (PDMS) 3 x 3 cm. Para demonstrar a aplicabilidade do nosso método para aplicações biológicas de células, nós cultivadas as células-tronco adiposas por 3 dias e produzido com sucesso usando a nossa plataforma de microplacas de esferoides. Além disso, realizamos uma simulação magnetostatic para investigar o mecanismo, pelo qual força magnética foi usada para aprisionar os grânulos aço os através de buracos. Acreditamos que o método de fabricação de microplacas proposto poderia ser aplicado para muitos estudos baseados em esferoide celulares como triagem de drogas, regeneração de tecidos, diferenciação de células-tronco e metástases.

Introduction

As células cultivadas em forma de esferoide são mais semelhantes ao tecido real no corpo que uma cultura planar bidimensional1. Dada esta vantagem, o uso de esferoides tem sido adotado para melhorar o estudo da interação de célula para célula2,3, ativação imune4,5e de diferenciação6de despistagem de drogas. Além disso, incorporando vários tipos de células de esferoides recentemente foram aplicados ao organoids (perto de-fisiológicos tridimensional (3D) tecido), que são muito úteis para o estudo de desenvolvimento e doença humana7. Vários métodos têm sido utilizados para produzir esferoides. O método mais simples envolve a utilização de uma superfície não-adesivas, tais que as células agregam-se com os outros e esferoides de formulário. Um prato de Petri pode ser tratada com albumina de soro bovino, pluronic F-127 ou um polímero hidrofóbico (por exemplo, metacrilato de 2-hydroxyethl de poli) tornar-se sua superfície não adesivas,89. O método de girador-balão é outro meio conhecido de produzir grandes quantidades de esferoides10,11. Neste método, as células são mantidas em suspensão por mexendo para impedi-los de tornar-se ligado ao substrato. Em vez disso, o flutuante células agregado de esferoides de formulário. O método de superfície não-adesivas e o girador balão método podem produzir grandes quantidades de esferoides. No entanto, eles estão sujeitos a limitações, incluindo dificuldades em controlar o tamanho de esferoide, bem como o acompanhamento e monitoramento de cada esferoide. Como um remédio para esses problemas, um outro método de produção de esferoide, ou seja, a suspensão drop método pode ser empregado12. Isto envolve depositando gotas de suspensão de células na parte inferior da tampa de um prato de cultura. Estas gotas são geralmente 15 a 30 µ l de tamanho e contêm cerca de 300 a 3000 células13. Quando a tampa é invertida, as gotas são mantidas no lugar pela tensão superficial. O ambiente de microgravidade em cada gota concentra as células, que então formam esferoides único em uma interface líquido-ar livre. Os benefícios do enforcamento método drop são que oferece uma distribuição de tamanho bem controlados, enquanto é fácil de rastrear e monitorar cada esferoide, em relação os métodos de balão de superfície e spinner não adesivas. No entanto, esse método incorre em uma desvantagem em que a produção em massa de esferoides e o próprio processo de produção é excessivamente do trabalho intensivo.

Uma matriz de microplacas é um flat placa com muitos poços de tamanho micro, cada um com um diâmetro que varia de 100 a 1000 µm. O princípio de produção de esferoide quando usando micropoços é semelhante do método de superfície não-adesivas. Os benefícios incluem o fato de que os poços da microplaca fornecem espaços entre os poços da microplaca para separar as células ou esferoides, tal que é fácil de controlar o tamanho de esferoide, enquanto também facilitando a monitorar cada único esferoide. Com um grande número de poços da microplaca, produção de alto rendimento esferoide também é possível. Outra vantagem do micropoços é a opção para poços de formulário de diferentes formas (hexahedral, cilíndrico, trigonal prismáticos) dependendo fins experimentais originais dos usuários. Geralmente, no entanto, uma forma tridimensional (3D) côncava (ou hemisférica) é considerada como sendo o mais adequado para a produção de esferoides único tamanho uniforme. Portanto, a utilidade de micropoços côncavos tem sido relatada para muitos estudos de biologia celular tais como aqueles examinando a casos de diferenciação de células-tronco embrionárias14, a secreção de insulina das células da ilhota clusters de15, o atividade enzimática de hepatócitos16e a resistência de droga de tumor esferoides17.

Infelizmente, a fabricação de micropoços frequentemente requer instalações especializadas micropatterning; métodos baseados em fotolitos convencionais requerem exposição e instalações em desenvolvimento enquanto métodos reativos baseados em íon-gravura precisam de equipamento de plasma e de feixes de iões. Esse equipamento é caro, que, juntamente com o processo de fabricação complicada, apresenta uma alta barreira à entrada para os biólogos que não têm acesso a microtecnologia. Para superar estes problemas, outros métodos de baixo custo tais como gelo litografia18 (usando as gotas de água congelada) e o método de membrana flexível14 (usando uma membrana, substrato do através de-furo e vácuo) têm sido sugeridos. No entanto, esses métodos também incorrer em graves inconvenientes tais como sendo difícil controlar os tamanhos padrão, a obtenção de elevadas proporções e a produção dos poços da microplaca área maior.

Para superar as questões acima, propomos um método de fabricação do romance de microplacas côncavo utilizando um substrato do através de-furo, esferas de aço e uma matriz de ímã. Usando esse método, centenas de micropoços esféricos côncavos podem ser fabricadas, aproveitando o mecanismo de força magnética-assistida de travamento automático grânulos metálicos (Figura 1). O processo de fabricação envolve o uso de muito poucas facilidades caros e complicados e não exige muitas habilidades avançadas. Como tal, pessoas mesmo não qualificadas podem facilmente realizar este método de fabricação. Para demonstrar o método proposto, humanos adiposo-derivado de células-tronco foram cultivadas aos micropoços côncavos para produzir esferoides.

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Protocol

1. preparação do através de-furo alumínio placa e ímã matriz

  1. Preparar duas 50 mm x 50 mm (ou mais) placas de alumínio. A espessura de cada placa foi 300 µm que é metade do diâmetro do grânulo.
  2. Forma uma matriz do através de-furo de 30 x 30 em uma das placas de alumínio usando um gravador giratório do CNC com uma Φ550-µm micro broca com 30 mm/s de taxa de mergulho e 8000 RPM de velocidade do eixo. A distância entre cada buraco (centro) foi de 1 mm (Figura 1a e Figura 2a, eu).
  3. Forma uma matriz de 30 x 30 de Φ750-µm através de buracos na outra chapa de alumínio, usando o mesmo procedimento como descrito em 1.2 (Figura 1a e Figura 2a, ii).
  4. Anexar as duas placas uns aos outros, usando uma fita adesiva e formar Φ3 furos de alinhamento mm em cada um dos quatro cantos de ambas as placas de alumínio.
  5. Mergulhe as placas de alumínio em 15% ácido sulfúrico para 12h limpar suas superfícies. Desde que a fina camada de óxido de alumínio sobre a superfície do alumínio torná-lo resistente à corrosão, o diâmetro do furo e da espessura da placa não são alterados por este tratamento com ácido.
  6. Forma uma matriz de 30 × 30 de 1 x 1 x 1 ímãs de neodímio mm (com uma força magnética de 0.363 N). Certifique-se de que cada ímã é a polaridade oposta a seu vizinho. Para evitar a quebra ou a dispersão da matriz de ímã, anexe uma placa de alumínio de 30 x 30 mm para o fundo da matriz ímã usando fita dupla-face (Figura 2a, iii e baixo-relevo na Figura 2).

2. processo de captura do grânulo

  1. Alinhar e empilhar as duas chapas de alumínio (top placa: 750-µm-buraco placa, placa inferior: 550-µm-buraco placa) usando os furos de alinhamento preparado nos quatro cantos de cada placa (Figura 1b).
  2. Bloquear as duas placas juntas inserindo parafusos M3 os furos de alinhamento e fixe os parafusos com porcas (Figura 1b).
  3. Empilhe o conjunto de placa de alumínio na matriz de ímã preparado (Figura 1b, 2be 2C). Alinhe a matriz de ímãs e a matriz de através de orifícios na placa de alumínio durante o processo de integracao. Em seguida, use uma fita adesiva para fixar a posição da matriz de ímã.
  4. Lugar, um número suficiente de Φ600 mm SUJ2 aço de pérolas sobre o conjunto de placa e manipular as contas usando um acryl (metálicos ou não) da placa tal que um grânulo se torna prendido em cada furo (Figura 1C, 1De 1e), enquanto simultaneamente removendo os excesso grânulos que não tenham apresentado nos buracos.
  5. Remova cuidadosamente a placa superior para evitar dispersão indesejado e luxação dos grânulos presos (Figura 1f).

3. côncavo de microplacas fabricação

  1. Mova o molde côncavo de microplacas, produzido em passos 2.1 a 2.5, acima, para uma placa de Petri.
  2. Misture o monômero polydimethylsiloxane (PDMS) e agente de cura, de acordo com instruções19 as indicações do fabricante com um monômero PDMS: relação de 10:1 do agente de cura.
  3. De gás da mistura PDMS usando um dessecador e bomba de vácuo para remover quaisquer bolhas presas na mistura de PDMS.
  4. Despeje a mistura PDMS no molde côncavo de microplacas e de gás novamente usando o mesmo procedimento como descrito no ponto 3.3 (Figura 1f).
  5. Asse a mistura PDMS em uma chapa de fogão a 80 ° C por 2 h formar um substrato PDMS grânulo-incorporado (Figura 1G).
  6. Remova o substrato PDMS curado do molde (Figura 1G). No processo de remoção, pulverize metanol usando garrafa de lavagem para retirar o substrato PDMS do molde.
  7. Usando um Φ15 x ímã de 2 mm, remova as esferas de aço presas ao substrato PDMS (Figura 1-h). Para este processo, pode ser usado qualquer ímã suficientemente forte para extrair os grânulos de substrato PDMS.

4. cultura de esferoide

  1. Corte o substrato PDMS côncavo de microplacas-modelados usando um soco de biópsia Φ14 mm deve ser montado em placa de 24 neste estudo.
  2. Esterilize o substrato PDMS de mm Φ14 resultante em um esterilizador autoclave a 121 ° C e 15 libras por polegada quadrada.
  3. Coloque o substrato esterilizado de PDMS em um prato bem 24.
  4. Revesti o substrato PDMS inteiro com 4% (p/v) pluronic F-127 solução durante a noite para evitar o acessório de celular para a superfície de microplacas. Durante o processo de revestimento, remova quaisquer bolhas de ar aprisionadas no côncavos micropoços pipetando ou usando um líquido de limpeza ultra-sônico.
  5. Liberar a solução de F-127 três vezes usando tampão fosfato salino (PBS).
  6. Sementes de 1 mL de solução de meio-celular (de Dulbecco meio Eagle modificado) (que contém 2 x 106 células) sobre o substrato PDMS. Observe que a densidade de semeadura pode ser alterada de acordo com o tamanho do esferoide de destino e/ou tipo de célula de destino. Aqui, células-tronco adiposo-derivado (ASC) foram utilizadas.
  7. Aspire a 1 mL de meio usando uma 1000 µ l pipetas para remover qualquer excesso células que não foram presos aos micropoços (Figura 3).
  8. Incube as celulas a 36,5 ° C, umidade de > 95% e 5% CO2 condição. No caso dos ASCs usados em nosso estudo, as células agregam-se um spheroid em 48 h.

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Representative Results

Um molde convexo e padrão de microplacas com êxito foram fabricadas seguindo as etapas 2.1 a 3.7. (Figura 4). As esferas de aço comerciais ficaram presos na matriz do através de-furo de 30 x 30. Os grânulos realizaram-se, firmemente, sem quaisquer lacunas entre os grânulos e os correspondentes através de furos (figura 4a). A forma de fabricados de microplacas côncava é côncavo hemisférica, com um diâmetro de 600 µm, que é o mesmo da esfera de aço (figura 4b). Um corte transversal de um côncavo de microplacas (Figura 4C) mostra que a distância entre as vizinhos de microplacas foi 1mm (centro), que era o mesmo que os furos através de. O substrato de milímetros côncavo de microplacas de Φ14, que foi colocado no prato bem 24, continha mais de 120 micropoços (Figura 4D).

Células-tronco derivadas adiposo foram cultivadas aos micropoços côncavos. Temos semeado 2 x 106 células na matriz de côncavo de microplacas Φ14 mm. Após 24 h, as células tinham agregados em esferoides, conforme mostrado na Figura 4. O diâmetro médio dos esferoides formada em nossa matriz de microplacas foi 185.68 ± 22.82 µm (dia 1, Figura 5a, 5C). No dia 3, as células tinham tornam-se mais agregadas, com o diâmetro médio dos esferoides caindo para 147.00 ± 17.11 µm (Figura 5b, 5D).

Figure 1
Figura 1 : Esquemática do processo de fabricação. (a) fazendo Φ550 de 30 x 30 e matriz de através de-furo 750 µm em placas de alumínio, usando o gravador do CNC. (b) alinhando os dois através de placas usando os furos de alinhamento. Posteriormente, as placas alinhadas foram empilhadas na matriz de ímã. (c) a uma quantidade suficiente de grânulos de aço nas chapas de semeadura. (d) raspando as contas usando uma placa de acrílico para aprisionar os grânulos na matriz do através de-furo. (e) grânulos foram presos na matriz do através de-furo. (f) a placa superior (matriz do através de-furo Φ750-µm) foi removida e não polimerizada mistura PDMS foi derramada no molde. (g) depois o PDMS foi assado em 80 ˚ c por 2 h, o PDMS curado foi técnicos sem forma padrão. (h) o PDMS curado agarra as esferas de aço. Os grânulos são então removidos usando um ímã de neodímio (Φ15 mm com uma espessura de 2 mm). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 2
Figura 2 : Processo de fabricação. (a) preparar duas placas do através de-furo e matriz de ímã. i) placa de alumínio ter 750 µm do através de-furo matriz. II) placa de alumínio ter 550 µm do através de-furo matriz. III) 30 x 30 matriz de 1 milímetros x ímãs de 1 x 1 mm. (b) superior vista das placas empilhadas e alinhadas. (c) vista de inferior das placas empilhadas e alinhadas e matriz de ímã. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 3
Figura 3 : Remover células excessivas pelo recuo do menisco. Por aspirantes a médio, a tensão de superfície foi causada pela interface ar-líquido e, em seguida, a tensão de superfície desmantelada células excessivas na superfície do substrato de microplacas. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 4
Figura 4 : Molde convexo e matriz de microplacas fabricada. (a) presos grânulos em chapa de alumínio de matriz do através de-furo. Os grânulos presos atuam como um molde para fabricar aos micropoços côncavos. O tamanho do grânulo foi 600 µm. Barra de escala é de 1 mm. (b) e (c) SEM imagens de micropoços fabricados. Cada micropoços fabricado tem uma forma hemisférica, 600 µm de diâmetro. (d) matriz de microplacas de Φ14-mm em placa de 24. A matriz contém mais de 120 micropoços côncavos. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 5
Figura 5 : Cultura esferoides na matriz de microplacas côncavo. Matriz de microplacas Φ14-mm foi inoculado com 2 x 106 ASCs e cultivada por 3 dias. (a) cultas esferoides no dia 1; as células começaram a esferoides de forma. Barra de escala é culta esferoides de 2 mm. (b) no dia 3; os formado esferoides são mais rigidamente estruturados, enquanto seu diâmetro médio caiu de 185.68 ± 22.82 µm no dia 1 de 147.00 ± 17.11 µm no dia 3. Barra de escala é 2 mm. (c) a ampliação de imagens de esferoide no dia 1. Barra de escala é 500 µm. (d) ampliação de imagens de esferoide no dia 3. Barra de escala é 500 µm. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 6
Figura 6 : Resultado de simulação para vetor de densidade de fluxo magnético. A densidade do fluxo magnético na matriz de ímã foi computadorizada usando o módulo magnetostatic. O resultado da simulação mostra que a densidade do fluxo magnético mais forte está no centro de cada ímã, fazendo com que os grânulos de ficar presa no centro dos furos por onde eles se tornaram bem fixa. Barra de escala é 2 mm. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 7
Figura 7 : Distribuição de campo magnético de matriz ímã. Cada ímã é a polaridade oposta a seu vizinho. O campo magnético horizontal é dominante na interface entre ímãs vizinhos, enquanto o campo magnético vertical é mais forte no centro de cada ímã. Estas forças direcionais guia um grânulo para o centro de um ímã. (a) campo magnético de matriz de ímã. (b) vetor do campo magnético, conforme determinado pela simulação magnetostatic. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 8
Figura 8 : Limitação usando o único grande ímã e do tamanho do grânulo. (a) ao contrário do caso do uso de uma matriz de pequenos ímãs, quando um grande ímã é usado, quase todos os grânulos tendem a mover-se para a borda ou o centro do ímã onde o campo magnético de alta densidade é formado. Além disso, os grânulos são conectados para formar uma forma de cadeia. Barra de escala é 10 mm. (b) SEM imagem vinculada de microplacas que foi fabricada usando grânulos de Φ800 µm com 1 x 1 mm x 1 matriz de ímã de mm. Usar uma conta que é muito grande em tamanho em relação ao tamanho do ímã pode criar um pequeno buraco na parede entre os poços da microplaca adjacentes. Barra de escala é 100 µm. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 9
Figura 9 : A importância de escolher o tamanho de espessura e furo da placa superior adequada no processo de captura do grânulo. (a) se a placa superior é muito grossa, ocorrerá uma dupla armadilha. (b) por outro lado, se a placa superior é muito fina, há uma tendência para que os grânulos sair. (c) se o tamanho do através de-furo é maior que o diâmetro do grânulo, pode ocorrer luxação armadilha dobro e do grânulo. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Discussion

O grande desafio deste método de fabricação foi a fixação segura dos grânulos da matriz do através de-furo na placa de alumínio. Para resolver este desafio, força magnética sob a forma de uma matriz de 30 x 30 imã foi usada para corrigir os grânulos firmemente, como mostrado nas figuras 6 e 7. A densidade do fluxo magnético da matriz de ímã, que tem a polaridade oposta, é mais forte no centro de cada superfície do ímã. Porque a força da força magnética depende da densidade de fluxo, os grânulos foram guiados para o centro da superfície superior de cada ímã onde eles realizaram-se em posição. Se foi usado um único ímã de grande porte (5 cm x 5 cm x 1 cm), os grânulos, especialmente aqueles localizados no extremo fora buracos, tendem a ser atraídos para o maior intensidade campo magnético criado na borda do ímã. Outro problema com o uso de ímãs grandes é que os grânulos juntos espontaneamente para criar cadeias de pequenas esferas (figura 8a).

O papel da placa superior (750 µm buraco) era para servir a geometria do poço para interceptar os grânulos. Devido a essa estrutura de poço, é possível arranhar os grânulos com uma placa de acrílico para criar um grande número de matrizes do grânulo presos de uma só vez (protocolo 2.4 e Figura 1C e 1D). Se não utilizar a placa superior, cada esfera deve ser inserida manualmente em base (550 µm buraco) um de cada vez.

As limitações do nosso método incluem a necessidade de um gravador do CNC é o dispositivo mais caro usado no método. Tais máquinas CNC são preço de cerca de US $3000. Isto, no entanto, é ainda muito mais barato do que as instalações convencionais de litografia macia. Outra limitação inerente do nosso método é a necessidade de pequenos ímãs, e o fosso entre os poços da microplaca é depende do tamanho do ímã, que foi de 1 mm na demonstração descrita neste artigo. Seria difícil reduzir essa lacuna muito mais desde que ímãs menores que 500 µm não estão prontamente disponíveis. Além disso, o tamanho máximo do grânulo também foi limitado. Os grânulos presos foram magnetizados por ímãs. Se o fosso entre grânulos magnéticos foram muito estreito, a probabilidade de ficar juntos é maior do que alguns dos micropoços estavam ligadas por furos, conforme mostrado na Figura 8b. Portanto, quando são usados 1 x 1 mm x 1 ímãs mm, grânulos com um diâmetro igual ou superior a 700 µm não são recomendados

Em comparação com outros métodos de fabricação, tais como membrana flexível14, litografia de gelo18 e profundo reativo íon gravura20, este método de fabricação não requer instalações especiais de litografia, permite que a posição de microplacas ser facilmente controlado e pode produzir uma forma padronizada de microplacas côncavo. Além disso, gravura molhada de PDMS21, em tons de cinza litografia22e traseiro difundido luz litografia23 têm sido propostos para a produção de geometrias côncavas. No entanto, gravura molhada de PDMS requer uma estrutura retangular primeiro a fazer um teste de côncavo e redondo e não é apropriada para fazer um teste de aberto. O método de litografia de tons de cinza tem a vantagem de utilizar instalações existentes de litografia de foto, mas a necessidade de instalações com preços elevadas e máscara de foto em tons de cinza é uma desvantagem. Parte traseira difundida luz litografia foi outro método recentemente relatado útil para fabricar micropoços côncavos com várias relações de aspecto, mas só em baixa resolução de densidade padrão.

O passo fundamental na fabricação de microplacas côncavo é a seleção da espessura do e o tamanho do através de-furo da placa superior (etapa 1.1 e 1.3). Se a placa do através de-furo é muito grossa, vários grânulos podem ser preso em cada do através de-furo (Figura 9a); Se for muito fino, os grânulos não será fixo na etapa 2.4 e, portanto, deslocados dos através de furos (Figura 9b). No caso do através de-furo maior, armadilha múltiplas e luxação podem ocorrer (Figura 9c).

Como uma diretriz para selecionar o tamanho do íman e a espessura da chapa do através de-furo, recomenda-se que o tamanho do íman e a espessura da "chapa do através de-furo" ser baseado no tamanho do cordão de. O tamanho do ímã deve ser maior que o diâmetro da esfera, e a espessura da chapa do através de-furo não deve exceder o diâmetro da esfera. No entanto, desde a escolha dos ímãs e da espessura da placa é empírica, estudos paramétricos e otimização mais detalhada serão incluídos em estudos futuros.

Objetivos futuros do nosso método incluem a fabricação de micropoços de nicho, como células-tronco para biomimetic em vitro folículos pilosos24, micropoços personalizados por organoides geração25e diversas matrizes de micropoços de tamanhos diferentes para estudar a dependência das células cancerosas e células do sistema imunológico em tamanho de esferoide.

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Disclosures

Os autores têm sem conflitos de interesse a divulgar.

Acknowledgments

Esta pesquisa foi apoiada pelo programa de pesquisa de ciência básica através da nacional Research Foundation de Coreia (NRF) financiado pelo Ministério da ciência, TIC e futuro planejamento (NRF-2014R1A1A2057527 e 2016R1D1A1B03934418-NRF).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
CNC rotary engraver Roland DGA EGX-350
Micro drill bit HAM Präzision 30-1301 TA Φ 0.55 and 0.75 mm
Sulfuric acid 98% Daejung 7683-4100 For cleaning aluminum plate.
Dilute with distilled water with 15% solution
Neodymium magnet Supermagnete W-01-N 1 x 1 x 1 mm
Bearing ball Agami Modeling SUJ2 Φ 600 μm steel bead
Polydimethylsiloxane (PDMS) Dowcorning Sylgard 184
Pluronic F-127 Sigma Aldrich p2443 Dilute with phosphate buffered saline to 4% (w/v) solution
Dulbecco's modified eagle's medium (DMEM) ATCC 30-2002
Dulbecco's phosphate buffered saline (D-PBS) ATCC 30-2200
Fetal bovine serum ATCC 30-2020
Adipose-derived mesenchymal stem cells ATCC ATCC PCS-500-011

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References

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