Principer för platsspecifika Recombinase (SSR) Teknik

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Tillkomsten av platsspecifika recombinase (SSR) teknik och Cre / lox system har lett till många framsteg inom molekylärbiologi och har visat sig vara ett värdefullt verktyg för bedömning av geners funktion i transgena djur. Denna intervju diskuterar mekanismen för platsspecifik rekombination av ringslutning recombinase (CRE) och hur användningen av detta enzym har lett till utvecklingen av villkorade mutagenes, vilket har betydande fördelar jämfört med traditionella slå ut strategier.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Bucholtz, F. Principles of Site-Specific Recombinase (SSR) Technology. J. Vis. Exp. (15), e718, doi:10.3791/718 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Platsspecifika recombinase (SSR) teknik gör det möjligt att manipulera genstruktur att utforska geners funktion och har blivit en integrerad verktyg för molekylärbiologi. Platsspecifika recombinases är proteiner som binder till olika DNA-sekvenser mål. Den Cre / lox systemet beskrevs första gången bakteriofager under 1980-talet. Cre recombinase är en typ I topoisomeras som katalyserar platsspecifik rekombination av DNA mellan två loxP (locus för X-over P1) webbplatser. Den Cre / lox-systemet kräver inga kofaktorer. LoxP sekvenser innehåller olika bindningsställen för Cre recombinases som omger en riktad kärna sekvens där rekombination och ombildning sker. När celler innehåller loxP webbplatser och uttrycka Cre recombinase sker en rekombination händelse. Dubbelsträngat DNA klipps både loxP platser av Cre recombinase, ordnas och knyts ihop ("sax och lim"). Produkter av rekombination händelsen beror på den relativa orienteringen av asymmetriska sekvenser.

SSR-tekniken används ofta som ett verktyg för att undersöka geners funktion. Här genen av intresse flankeras med Cre mål sajter loxP ("floxed"). Djur är sedan korsat med djur som uttrycker Cre recombinase under kontroll av en vävnad-specifika promotorn. I vävnader som uttrycker Cre recombinase det binder till målet sekvenser och punktskatter på floxed genen. Kontrollerad gendeletion gör utredningen av geners funktion i specifika vävnader och vid olika tidpunkter. Analys av geners funktion anställa SSR teknik --- villkorlig mutagenes - har betydande fördelar jämfört med traditionella knock-outs där gendeletion ofta dödlig.

Comments

3 Comments

  1. Hi. The presentation was good and substantial. It would much good if the delicate concepts of selection are also included. Thank you. Cheers, Lopez Gilsinia Gilroy

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 31, 2008 - 5:54 AM
  2. request for article

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 13, 2010 - 7:59 AM
  3. request for the articel

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 8, 2010 - 4:52 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics