Principios de la recombinasa específica de sitio (RSS) Tecnología

Biology

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Summary

El advenimiento de la recombinasa específica de sitio (SSR) la tecnología y el sistema Cre / lox ha dado lugar a numerosos avances en biología molecular, y ha demostrado ser una valiosa herramienta para la evaluación de la función génica en animales transgénicos. Esta entrevista analiza el mecanismo de recombinación sitio específico por ciclación recombinasa (CRE) y cómo el uso de esta enzima ha llevado al desarrollo de mutagénesis condicional, la cual tiene ventajas significativas sobre las estrategias tradicionales de golpe.

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Bucholtz, F. Principles of Site-Specific Recombinase (SSR) Technology. J. Vis. Exp. (15), e718, doi:10.3791/718 (2008).

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Abstract

Recombinasa específica de sitio (RSS) permite la manipulación de la estructura de los genes para explorar la función del gen y se ha convertido en una herramienta integral de la biología molecular. Específicas del lugar recombinaciones son proteínas que se unen a distintas secuencias de ADN diana. El sistema Cre / lox fue descrita por primera vez en los bacteriófagos en la década de 1980. Recombinasa Cre es un tipo de topoisomerasa I que cataliza la recombinación sitio-específica de ADN entre dos loxP (lugar de la X-over P1) sitios. El sistema Cre / lox no requiere cofactores. Secuencias LoxP contienen distintos sitios de unión para recombinasas Cre que rodean a una secuencia central de dirección en la recombinación y la reorganización se lleva a cabo. Cuando las células contienen sitios loxP y expresan la recombinasa Cre, un evento de recombinación ocurre. ADN de doble cadena se corta en ambos sitios loxP por la recombinasa Cre, reorganizado, y se liga ("tijeras y pegamento"). Productos del acontecimiento de recombinación depende de la orientación relativa de las secuencias asimétricas.

La tecnología RSS se utiliza con frecuencia como una herramienta para explorar la función del gen. Aquí, el gen de interés está flanqueado por sitios loxP Cre objetivo ("floxed"). Los animales se cruzó con los animales que expresan la recombinasa Cre bajo el control de un promotor tejido-específica. En los tejidos que expresan la recombinasa Cre se une a secuencias diana y los impuestos especiales del gen floxed. Deleción del gen controlado permite la investigación de la función de genes en tejidos específicos y en momentos distintos. Análisis de la función génica empleando la tecnología SSR --- mutagénesis condicional - tiene importantes ventajas sobre los tradicionales knock-out en la deleción del gen es frecuentemente letal.

Comments

3 Comments

  1. Hi. The presentation was good and substantial. It would much good if the delicate concepts of selection are also included. Thank you. Cheers, Lopez Gilsinia Gilroy

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 31, 2008 - 5:54 AM
  2. request for article

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 13, 2010 - 7:59 AM
  3. request for the articel

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 8, 2010 - 4:52 PM

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