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Articles by Alice E. Chen in JoVE
JoVE General
Gewinnung menschlicher embryonaler Stammzellen durch Immunosurgery
Department of Molecular and Cell Biology, Harvard
Die Fähigkeit von humanen embryonalen Stammzellen sich selbst zu erneuern und zu differenzieren sich in alle Zelltypen des Körpers lässt vermuten, dass sie großes Versprechen für medizinische Anwendungen und als Recherche-Tool für die Bewältigung grundlegender Fragen in Entwicklung und Krankheit zu halten. Hier bieten wir Ihnen einen kurzen Schritt-für-Schritt-Protokoll für die Gewinnung menschlicher embryonaler Stammzellen aus Embryonen, die durch immunosurgical Isolierung der inneren Zellmasse.
Other articles by Alice E. Chen on PubMed
Microarray-Analyse Von Somitogenese Enthüllt Neue Targets Verschiedener WNT Signalwege in Der Somitic Mesoderm
Targeting-Genexpression in Der Maus Somiten: Adenovirus-vermittelte Gentransfer Und Ganzen Embryo Kultur
Prospektive Isolation Und Globale Genexpressionsanalyse Der Definitive Und Viszeralen Endodermis
Trotz der therapeutischen Bedeutung der Endodermis Derivate wie die Bauchspeicheldrüse, Leber, Lunge und Darm gibt es einige molekulare Marker speziell für frühe Endodermis. Ermittlung Endodermis-spezifische Gene als auch hinsichtlich transkriptionelle Unterschiede zwischen definitive und viszeralen Endodermis definieren, führten wir Microarray-Analyse auf E8.25 definitive und viszeralen Endodermis. Wir haben eine frühe Endodermis Gen-Ausdruck-Signatur entwickelt und präzisiert die transkriptionelle Ähnlichkeiten und Unterschiede zwischen definitive und viszeralen Endodermis. Darüber hinaus haben wir Methoden fließen Cytometric Isolierung des definitiven und viszerale Entoderm entwickelt. Diese Ergebnisse Aufschluss über den Mechanismus der Endodermis Bildung und Untersuchung der Endodermis Formation aus embryonalen Stammzellen erleichtern sollte.
Induktion Der Pluripotent Stammzellen Durch Definierte Faktoren Wird Durch Kleine-Molekül-Verbindungen Erheblich Verbessert
Eine Anpassung der Maus und menschliche Körperzellen kann durch ektopische Expression von Transkriptionsfaktoren, aber mit geringer Effizienz erreicht werden. Wir berichten, dass die DNA-Methyltransferase und Histon-Deacetylase (HDAC)-Inhibitoren Neuprogrammierung Effizienz verbessern. Insbesondere verbessert Valproinsäure (VPA), einen HDAC-Inhibitor, Neuprogrammierung Wirkungsgrad von mehr als 100-fold mit Oct4-GFP als Reporter. VPA ermöglicht auch effiziente Induktion der Pluripotent Stammzellen ohne Einführung von der Onkogen c-Myc.
Optimalen Zeitpunkt Der Inneren Zelle Masse Isolation Erhöht Die Effizienz Der Ableitung Der Menschlichen Embryonalen Stammzellen Und Ermöglicht Die Generierung Von Geschwister-Zelllinien
Kleine Moleküle Direkt Effizient Endodermalen Differenzierung Der Maus Und Humaner Embryonaler Stammzellen
Ein wesentlicher Schritt für therapeutische und Forschungsanwendungen Stammzellen ist die Fähigkeit, sie in bestimmte Zelltypen unterscheiden. Endodermalen Zellen, einschließlich Lunge, Leber und Bauchspeicheldrüse, Derivate sind von Interesse für die regenerative Medizin, aber Bemühungen, diese Zellen produzieren nur bescheidenen Erfolg erreicht wurden. In einem Bildschirm 4000 Verbindungen wurden zwei Zelle-durchlässigen kleine Moleküle, die Differenzierung des WSR in der endodermalen Linie direkt Nahrungsbedarf. Diese Verbindungen führen fast 80 % der WSR definitive Endodermis, eine höhere Effizienz als die von Activin A oder Nodal erreicht, häufig verwendete Protein Induktoren der Endodermis zu bilden. Die chemisch induzierte Endodermis drückt mehrere endodermalen Marker, kann normale Entwicklung wenn injiziert in die Entwicklung von Embryonen beteiligt und Pankreas Vorläuferzellen bilden kann. Die Anwendung von niedermolekularen, Maus und menschlichen WSR in Endodermis zu unterscheiden ist ein Schritt in Richtung zum Erzielen einer reproduzierbaren und effizienten Produktion von gewünschten ESC-Derivate.
Sox17 Fördert Die Differenzierung in Mäuseder Embryonalen Stammzellen Durch Direkt Regulieren Extraembryonic Genexpression Und Indirekt Davon Selbsterneuerung
In embryonale Stammzellen (ES) ein gut charakterisierten transkriptionelle Netzwerk fördert Pluripotenz und unterdrückt Genexpression für Differenzierung erforderlich. Im Vergleich dazu die transkriptionelle Netze, die Förderung der Differenzierung von ES-Zellen und die Blastozyste innere Zelle Masse sind schlecht verstanden. Hier zeigen wir, dass Sox17 ein transcriptional Regulator der Differenzierung in diesen pluripotenten Zellen. ES-Zellen einen Mangel an Sox17 nicht in extraembryonic Zelltypen differenzieren und Ausdruck der Pluripotenz-assoziierte Transkriptionsfaktoren, einschließlich Oct4, Nanog und Sox2 pflegen. Im Gegensatz dazu erzwungene Ausdruck der Sox17 nach unten-reguliert ES Zelle-assoziierten Genexpression und direkt aktiviert Gene funktionieren bei Differenzierung gegenüber einem extraembryonic Endodermis Zelle Schicksal. Wir zeigen, dass diese Auswirkungen des Sox17 auf ES Zelle Genexpression zumindest teilweise durch einen Wettbewerb zwischen Sox17 und Nanog für gemeinsame DNA-Bindungsstellen vermittelt werden. Durch die Funktion der Sox17 Ausarbeitung, bieten unsere Ergebnisse Einblick, wie die transkriptionelle Förderung ES Zelle Selbsterneuerung Netzwerk unterbrochen wird, damit zelluläre Differenzierung.
Neuprogrammierung Innerhalb Von Stunden Nach Kerntransfer in Maus Aber Nicht Menschlichen Zygoten
Befruchteten Maus Zygoten können somatischen Zellen in einen pluripotenten Zustand umzuprogrammieren. Menschliche Zygoten können daher für die Herstellung von Patienten abgeleiteten pluripotenten Stammzellen nützlich sein. Logistische, juristische und soziale Überlegungen haben jedoch die Verfügbarkeit von menschlichen Eizellen für die Forschung begrenzt. Hier zeigen wir, dass eine beträchtliche Anzahl von normal befruchteten Eier (Zygoten) abgerufen werden kann, für die Neuprogrammierung Studien. Verwenden diese Zygoten, fanden wir, dass als zygotic Genom mit einer somatischen Zelle ersetzt wurde, Entwicklung normalerweise während der Spaltung-Stadien fortgeschritten, aber dann vor dem Morulastadium verhaftet. Diese Verhaftung war verbunden mit einem Ausfall, Transkription im übertragenen somatische Genom zu aktivieren. Im Gegensatz zu menschlichen Zygoten umprogrammiert Maus Zygoten somatische Genom in einen pluripotenten Zustand innerhalb von Stunden nach Übertragung. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass es möglicherweise ein zuvor unbeachtet Hindernis für erfolgreiche menschliche Kerntransfer und zukünftige Studien könnte die Anforderungen für Genom-Aktivierung setzen.
