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Articles by Antonieta Guerrero-Plata in JoVE
JoVE Immunology and Infection
マウス肺樹状細胞の分離
Pathobiological Sciences, Louisiana State University
マウス肺樹状細胞の高度に精製された調製物が記載されている。特定の重点は、従来の樹状細胞サブセットの分離に与えられます。
Other articles by Antonieta Guerrero-Plata on PubMed
永続的に呼吸器合胞体ウイルスに感染したマクロファージ様細胞株によって抗原提示
人間の呼吸器合胞体ウイルス（RSV）による重症感染症は、人生の早い段階で、おそらく地元の免疫応答の調節異常によって媒介されるその後の再発性気道疾患に関連付けられています。免疫応答の機能障害は、障害のマクロファージ機能に関連する可能性があります。我々はこれまでにマクロファージ培養でのRSVの永続性（MPhiper）を変化させるFcgamma受容体（FcgammaR）を介した貪食と炎症性サイトカインの産生が報告されている。ここでは、プロセスと存在する抗原およびRSV特異的CD8（+）T細胞を刺激するマクロファージの能力がMPhiperに変更されたかどうかを決定した。また、MPhiperと特異的Tリンパ球にウイルス抗原を提示するこれらの細胞の能力のMHCクラスI分子の発現レベルを調べた。我々の結果は、その抗原プロセシングと提示を示した慢性的なRSV感染によって変化し、MPhiperはRSV特異的CD8（+）Tリンパ球を刺激することができたことを示唆していませんでした。
呼吸器合胞体ウイルスやヒトメタニューモウイルスの実験感染症における活性とインターフェロンαの調節
呼吸器合胞体ウイルス（RSV）、ヒトメタニューモウイルス（HMPV）は、ヒトの呼吸器感染症と同様のスペクトルを引き起こす。パラミクソウイルス科に分類、Pneumovirinaeファミリー、RSVとHMPVゲノムの星座、組織、およびタンパク質配列の相違の重要度を示す。 RSVは、α/βインターフェロン（IFN-alpha/beta）とその抗ウイルス活性に部分的に耐性の貧しい人々の誘導物質であることが報告されています。 HMPVに対する自然免疫応答の性質は、現在のところ不明である。ここで、実験的マウスモデルは、RSVとHMPV感染と気道のIFN-αとの間の相互作用を調べるために使用されていました。組換えIFN-αとポリICLC、IFN-αの強力なインデューサー、直接的または間接的に鼻腔内に処理されたRSVに感染したBALB / cマウスは、未処理のコントロールよりも有意に減少し、肺のウイルス力価は、炎症、および臨床的疾患を示した。しかし、RSVはHMPVよりIFN-αの抗ウイルス活性に有意に少ない感受性であった。動態および気管支肺胞洗浄液中に分泌されるIFN-αの絶対量の両方で示すように、同様に、直接、IFN-α産生を誘導する能力が評価されたときに、RSVは、明らかにHMPVよりIFN-αの弱い誘導因子であった。さらに、IFN-α産生に対するこれらのウイルスの推定抑制効果を調べるため、マウスはポリICLCまたは特定のToll様受容体9リガンド、CpGオリゴデオキシヌクレオチドを用いた治療の前に48時間感染させた。驚くべきことに、両方のポリICLCとのCpG媒介IFN-α産生はいずれかのRSVやMPV感染によって廃止されました。これらの結果は、ウイルス特異的およびホストを介した応答の間の複雑な相互作用がPneumovirinae家族のメンバーによって感染時に肺でのIFN-αを調節することをお勧めします。
ヒトメタニューモウイルスは、呼吸器合胞体ウイルスとは異なった肺サイトカインプロフィールを誘導する
ヒトメタニューモウイルス（HMPV）に感染したBALB / cマウスによる肺のサイトカインやケモカインの産生は呼吸器合胞体ウイルス（RSV）感染マウスと比較した。 HMPV感染症は、炎症性サイトカインのインターロイキン-1（IL-1）、IL-6および腫瘍壊死因子αの低レベルを誘導しますが、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子のより強力な誘導因子であり、CXCケモカインのより持続的な生産をトリガKCは、RSVと比較されます。 HMPVは、RSVよりインターフェロンα（IFN-α）とIFN-γ応答の両方の強力な誘導因子であった。免疫調節性サイトカインに関しては、HMPVは、検出可能なIL-10またはIL-12p70を誘導するために失敗しましたが、IL-12 p40サブユニットの強力な誘導因子であった。 HMPVの病因のための含意が議論されています。
ヒトメタニューモウイルスとRSウイルスの樹状細胞の差動応答
樹状細胞（DC）は、気道の抗ウイルス免疫応答を形作る上で極めて重要な役割を果たしています。ヒトメタニューモウイルス（HMPV）は、最近同定された病原体であり、そのよく知られている相対的な、呼吸器合胞体ウイルスのように（RSV）、ますます幼児と高齢者の呼吸器合併症の主な原因として認識されています。本研究では、RSVと比較して感受性と同様にHMPVに対するヒト樹状細胞の細胞応答を調べた。単球由来樹状細胞（moDCs）は、両ウイルスによる感染に感受性であっただけ、RSVは、ウイルス子孫のリリースでは、生産性の高い感染症を誘発することができました。ウイルス感染は、細胞表面マーカーと抗原提示分子（MHC IとII、CD80、CD83、CD86、CD38）の上方に示すように、moDCsの表現型の成熟をもたらしたという事実にもかかわらず、RSV感染moDCsは深刻な障害を示したCD4を刺激する能力+ T細胞の増殖。 HMPVと比較して、RSVはmoDCsと形質細胞様樹状細胞（PDCと）の両方でIL-6、IL-1β、IL-10、IL-12p70、TNF-αを含む、炎症性および免疫調節性サイトカインのより強力な誘導因子であった。一方、HMPV、上ではなく、RSVは、両方のウイルスが強くPDCSにIFN-αを誘導しながら、moDCsによるIFN-αの産生を誘発することができました。最後に、両方のウイルスが顕著にそれぞれ、合成dsRNAをおよびCpG-ODNで刺激moDCsまたはPDCによってIFN-α産生を抑制した。調査結果は、RSVとHMPVは、差動ヒトDCを活性化し、ホスト自然免疫と適応免疫応答を妨害するための明確なメカニズムを使用することが新たな証拠を提供しています。
酸化防止剤治療は、呼吸器合胞体ウイルス誘発疾患と肺の炎症を改善する
呼吸器合胞体ウイルス（RSV）は、子供の下気道感染症の主要な原因である。無治療は大幅にこの感染症患者の臨床転帰を改善することが示されていません。最近の証拠は、酸化ストレスは、急性および慢性の肺の炎症性疾患の病因に重要な役割を果たすことを示唆している。我々は、RSVは、肺の酸化ストレスを誘発するかどうか、および抗酸化治療がRSV誘発性肺疾患を調節することができるかどうかは知られていません。
異なる宿主細胞で生成されたウエストナイルウイルスによるヒト単球由来と形質細胞様樹状細胞の差のアクティベーション
樹状細胞（DC）は、先天性免疫および抗ウイルス応答の中心的な役割を果たします。本研究では、西ナイルウイルス（WNV）、その感染症緊急病原体に感染したヒト単球由来樹状細胞（樹状）と形質細胞様樹状細胞（PDCと）によるインターフェロンα（IFN-α）および誘導ケモカインの産生を調べた高齢者、小児における脳炎の重症の場合、および免疫不全の人につながることができます。私たちの実験では、WNVは樹状の程度は低いが強力なのPDCでのIFN-αの分泌の誘導と、あった（WNV（ベロ））は、哺乳動物細胞で増殖させたことを明らかにした。のPDCでのIFN-αを誘導するWNVの能力（ベロ）がエンドソームToll様受容体の認識に依存していたことが示唆され、ウイルス複製を必要としなかったとバフィロマイシンA1とクロロキンによる細胞の処理によって阻止されました。一方、樹状におけるIFN-α産生は、ウイルス複製を必要とし、IRF3の核移行およびウイルス抗原の発現と関連していた。 MDCがWNV（ベロ）またはWNV（C7/10）と同様に反応しながら、蚊細胞（WNV（C7/10））で栽培さWNVで刺激したときに驚くべきことに、PDCは、IFN-αを生成するために失敗しました。インターロイキン8がWNV（に感染した樹状によってより大量に生産している間にまた、IFN-依存性のケモカインIP-10は、WNV（ベロ）ではなく、WNV（C7/10）に応答してのPDCによってかなりの量で生産されたC7 / WNV（ベロ）に感染したものに比べて10）。これらの知見は、樹状細胞によるI型IFNや炎症性ケモカインの産生につながるWNV認識の細胞特異的なメカニズムは、ヒトへの感染における自然免疫応答と疾患の病因の両方に寄与する可能性があること。を示唆
培養細胞およびマウスにおけるモルホリノオリゴマーと呼吸器合胞体ウイルス感染の抑制
呼吸器合胞体ウイルス（RSV）は、乳児、幼児、および高リスクの成人の下気道感染症の主要な原因である。現在のところ、RSV感染症を防ぐためにはワクチンはありません、利用可能な治療薬は、限られたユーティリティである。ペプチド結合phosphorodiamidateモルホリノオリゴマー（PPMOs）は容易に細胞を入力して、相補的RNAの立体ブロックを介してウイルスタンパク質の発現を妨げる可能性のアンチセンス薬のクラスです。 5 '末端領域とRSVのL mRNAの翻訳開始部位領域を含む配列を標的に設計された2つのアンチセンスPPMOsは、2ヒト気道細胞株の培養では抗RSV活性について試験した。両方PPMOsは最小限の細胞毒性を示し、そのうちの一つ、（AUG-2）> 2.0のログ（10）でウイルス力価を減少させた。鼻腔（IN）8月2 PPMOとBALB / cマウスの治療RSV接種日で7感染後の5日目感染後（PI）の肺組織で1.2ログのウイルス力価の減少（10）、弱毒性の肺の炎症を生成する前に。これらのデータは、AUG-2 PPMOは、強力な抗RSV活性を有し、潜在的な治療への応用の候補として、さらなる調査に値するものであることを示している。
Tリンパ球は、実験的ヒトメタニューモウイルス感染における抗ウイルス免疫と病態への貢献
ヒトメタニューモウイルス（HMPV）、パラミクソウイルス科のメンバーは、子供、高齢者、免疫不全患者における下気道感染症の主要な原因である。病因と免疫防御のウイルスとホスト固有のメカニズムは完全には解明されていません。鼻腔内接種モデルによって、我々はHMPV感染BALB / cマウスでは肺の炎症とウイルス複製の組織病理学的証拠とともに気道閉塞や気道過敏性（AHR）を含む臨床病を、開発したことを示している。 HMPV感染は、検出できないウイルス力価、体重減少の欠如、肺の炎症のレベルが大幅に減少によって示され、その後のウイルスのチャレンジに対してマウスを保護されています。このような呼吸器合胞体ウイルスなどの他のパラミクソウイルス、との交差防御は認められなかった。 Tリンパ球枯渇の研究では、CD4（+）とCD8（+）T細胞は主要な感染時にHMPV撲滅に相乗的に協力するが、CD4（+）以上のCD8（+）T細胞はまた、臨床疾患と肺病変を強化することを示した。同時CD4の枯渇（+）とCD8（+）T細胞は完全にブロックされた気道閉塞などAHR。 CD4の非存在下（+）T細胞に抗HMPV中和抗体の障害世代にもかかわらず、マウスがHMPVチャレンジ後の検出できないウイルスの複製を持っていた臨床疾患から保護されていた、その保護を示唆しているが無傷のCD8（+）T-によって提供することができるセルコンパートメント。これらの知見は、自然に取得したヒトへの感染に影響を与えるかどうかが決定されていない。
復水たばこの煙は、変調NF-κBとインターフェロン調節因子の活性化によって呼吸器合胞体ウイルス誘発ケモカイン放出を促進する
たばこの煙への暴露は呼吸器合胞体ウイルス（RSV）に関連付けられている気道感染症の重症度に寄与危険因子である。コンデンセートRSVまたはタバコの煙のいずれかによる気道上皮細胞（CSC）の刺激は炎症性ケモカインの分泌を誘導することが示されている。しかし、誘導性ケモカイン産生にCSCとRSVの気道上皮細胞のcoexposureの効果は、以前に検討されていない。この研究の結果は、単独でそれぞれの刺激と比較した場合、CSC刺激が大幅にRSV誘発性インターロイキン-8（IL-8）と単球chemoattactantタンパク質1遺伝子とタンパク質の発現を増加させることを示しています。プロモーターの欠失の研究は混合暴露中のIL-8遺伝子転写の相乗的増加の原因の重要な領域としてIL-8プロモーターのインターフェロン刺激応答エレメント（ISRE）を同定した。 CSC刺激強化ISRE部位に結合するインターフェロン調節因子（IRF）-1及びIRF-7のRSV誘導活性。 CSCはまた、IL-8プロモーターのその特定の部位への結合を増加したNF-κBのDNAによって示され、NF-κBの主導遺伝子の転写を増加させ、転写因子核因子カッパB（NF-κBの）のRSV-誘発活性化を進めたしたがって、我々のデータは、CSCとRSVの複合曝露が相乗的にCSCが重複シグナル伝達経路を刺激することにより、RSVに熱狂的な免疫応答に寄与することを示唆し、気道上皮細胞におけるケモカインの発現を増加させることを示している。
パラミクソウイルス感染症による肺樹状細胞機能のSubversion
パラミクソウイルス、ヒトメタニューモウイルス（HMPV）と呼吸器合胞体ウイルス（RSV）に起因する下気道感染症は、Agの変化の結果である可能性があり、どちらも短時間のウイルス特異的免疫、しばしば長期的な気道の罹患率、によって特徴付けられるこれらの感染症に従って肺の機能を提示。本研究では、HMPVとRSV実験的感染が肺に動員される樹状細胞（DC）サブセットの表現型と機能を変化させるかどうかを調べた。肺DCの人身売買の特性は、形質DC（PDC）は、従来のDC（CDC）、肺およびHMPVとRSV感染後のリンパ節を排出へのIFN産生キラーDCの差の募集を実証した。 in vitroで肺DCの感染は、CCL3とCCL4が両方のウイルスによって誘発されたのに対し、PDCに、IFN-α、TNF-α、とCCL5の生産は、唯一のHMPVによって誘導されることが示された。 CDCには、サイトカインの同様のレパートリーはRSVによって誘導されなかったIFN-βを除いて、HMPVとRSVによって誘導された。我々はIL-6、TNF-α、CCL2、CCL3とCCL4に含むだけでなく、他のサイトカインとしてのIFN-αを生成するために肺のPDCの減少能力を示すように肺pDCの機能は、in vivoでのHMPVまたはRSV感染後に変更されたTLR9刺激に対する応答。さらに、CD4（+）T細胞は、感染の急性期を越えて持続効果にAgを提示する感染マウスからCDCの障害能力を観察した。今回の知見は、急性パラミクソウイルス感染症は、肺DCの長期的な免疫機能を変えることができることを示唆している。
単量体と二量体CXCL8は、in Vivoの両方で好中球の募集不可欠である
血管からの細菌/ウイルスの感染や組織傷害部位への好中球の急速な動員は、炎症の成功した解像度で重要なステップです。ケモカインCXCL8は募集好中球の中心的な役割を果たします。 CXCL8の特徴は、可逆的に単量体と二量体の両方に存在するその能力ですが、両方の形式がin vivoで存在するかどうか、そうであれば、in vivoでの機能については、各フォームの妥当性は知られていない。本研究では、 "トラップ"非関連付けるモノマーと非解離性二量体を使用して、我々は、（i）野生型（WT）CXCL8（II）のモノマーのin vivoでの募集プロファイルで、単量体と二量体の両方として存在することを示す、ダイマー、およびWTは明らかに異なっている、及び（iii）二量体は、初期の堅牢な採用のために不可欠であり、WTは、持続的な採用のための最も有効です。マイクロ流体デバイスを使用して、我々はまた、募集はCXCL8の合計量だけでなく、勾配の急勾配にのみ依存していないことを確認し、異なるCXCL8亜種によって作成されたグラデーションは、さまざまな好中球遊走反応を引き出す。 CXCL8を仲介する内皮細胞上の好中球およびグリコサミノグリカン（GAG）のCXCR2受容体に結合することによってその機能。私たちのデータに基づいて、我々はCXCL8単量体と二量体とその差CXCR2に結合し、グリコサミノグリカン仲介およびin vivoの好中球の動員を調節する間の動的平衡を提案する。 CXCL8モノマーおよびダイマーの両方がin vivoで機能していることを我々の発見は、小説であり、CXCL8モノマー - ダイマー平衡と好中球の動員は密接に健康や病気にリンクされていることを示します。
タバコの煙がTLR-7形質細胞様樹状細胞でのウイルス感染に応答して刺激を抑制する
環境たばこ煙（ETS）への暴露は気管支炎など呼吸器合胞体ウイルス（RSV）などのウイルスによって引き起こされる幼年期の臨床症候群を含む呼吸器感染症の頻度と重症度の増加に関連付けられています。 ETSは、ウイルス性呼吸器感染症のリスクを増加させるメカニズムは不明な点が多い。主要なエフェクターの統合の早期抗ウイルスと免疫活動性の高い形質細胞様樹状細胞（PDC）によって産生されるインターフェロン-α（IFN-α）である。本研究では、呼吸器ウイルス感染に応答して人間のPDCの免疫でタバコの煙抽出物（CSE）の効果を決定した。我々は、CSEがIL-1βのリリースでは、IL-10およびCXCL10と同様にPDCにRSV誘導性IFN-αを阻害することがわかった。しかし、このようなIL-6、TNF-α、CCL2、CCL3、CCL5とCXCL8などの追加サイトカインおよびケモカインの産生は変化しなかった。定量的RT-PCR解析では、CSEがToll様受容体（TLR）-7インターフェロン調節因子（IRF）RSV感染PDCに-7の発現を減少させたことが示された。さらに、フローサイトメトリーによるIRF-7のリン酸化の測定は、CSEがIRF-7活性化を防止することが明らかになった。これらのデータは、たばこの煙は、TLR7発現のダウンレギュレーションを含み、IRF-7の活性化を減少させたメカニズムによって、ウイルス感染時に鍵のPDC機能を抑制することを証拠を提供しています。
モノマー - ダイマー平衡とケモカインCXCL8のグリコサミノグリカン相互作用が組織特異的好中球の募集を調節する
ケモカインは、標的組織中の白血球および細胞表面グリコサミノグリカンの受容体GPCRクラスを結合することによってその機能を発揮する。ほとんどのケモカインは、可逆的に単量体と二量体として存在するが、非常に少ないモノマー - ダイマー平衡が生体機能に変調することによって分子メカニズムについては知られています。ケモカインCXCL8のために、我々は最近、単量体と二量体がアクティブであることとWTのモノマー - ダイマー平衡が好中球動員の調節に重要な役割を果たしていることがマウス肺モデルで示された。そこで、本研究では、腹膜のCXCL8少ないアクティブが、よりアクティブな単量体と二量体は、マウスの腹膜にもアクティブになっていることがモノマー - ダイマー平衡の役割はGAG結合残基で、これらの組織とその突然変異の間にはっきりと異なっていることをレンダリング表示肺インチ我々は、GAGの相互作用の組織特異的な違いから生じるケモカイン勾配形成のその組織固有の差異を提案する好中球の動員で観察された差異のために責任があります。異なる組織でCXCL8モノマー - ダイマー平衡とGAGとの対話によって演じ微分の役割私たちの観察は、新規であり、ケモカインの二量体化は、in vivoの募集に制御する方法の複雑さのレベルを明らかにする。
