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Articles by Carlos Maluquer de Motes in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Método rentable para el Rastreo de uso microbiana específica virus humanos y animales
El estudio describe un método costo-efectivo para la identificación de la fuente de contaminación fecal / orina o la contaminación por nitratos en el agua utilizando qPCR para la cuantificación específica de los virus de ADN humano / porcino / bovino, adenovirus y poliomavirus, propuesto como herramientas de MST.
Other articles by Carlos Maluquer de Motes on PubMed
La Detección De Adenovirus Bovina Y Porcina Para La Búsqueda De La Fuente De Contaminación Fecal
En este estudio, un procedimiento molecular para la detección de adenovirus de origen animal fue desarrollado para evaluar el nivel de excreción de estos virus por cerdos y ganado y para diseñar una prueba para facilitar el rastreo de las fuentes específicas de contaminación viral del medio ambiente. Dos juegos de oligonucleótidos fueron diseñados, uno para la detección de adenovirus porcino y el otro para la detección de adenovirus bovino y ovino. La especificidad de los ensayos se evaluó en 31 muestras de heces y 12 muestras de aguas residuales que fueron recolectadas mensualmente durante un período de 1 año. Los datos también proporcionaron información sobre la prevalencia del medio ambiente de los adenovirus de origen animal. Adenovirus porcino se detectaron en 17 de 24 (70%) con series de muestras de cerdos estudiados, con la mayoría de los aislados siendo estrechamente relacionado al serotipo 3. Adenovirus bovino estaban presentes en 6 de 8 (75%) piscinas estudiadas, con cepas pertenecientes a la Mastadenovirus géneros y Atadenovirus y siendo similar a la especie bovina de adenovirus tipo 2, 4 y 7. Estos conjuntos de cebadores produjeron resultados negativos en los ensayos de PCR anidada cuando los controles de adenovirus humanos y las muestras de aguas residuales urbanas y se pusieron a prueba. Asimismo, los conjuntos de cebadores previamente diseñados para la detección de adenovirus humano también produjo resultados negativos con adenovirus animales. Estos resultados indican la importancia de realizar más estudios para evaluar la utilidad de estas pruebas para rastrear la fuente de contaminación fecal en el agua y los alimentos y para los estudios ambientales.
La Identificación De Adenovirus Humanos Y Animales Y Poliomavirus Para La Determinación De Las Fuentes De Contaminación Fecal En El Medio Ambiente
Las familias y Adenoviridae Polyomaviridae comprenden una amplia diversidad de virus que pueden ser excretados por largos períodos en las heces o la orina. En este estudio, un análisis preliminar de la prevalencia en el medio ambiente y la utilidad potencial como herramientas de seguimiento de código de adenovirus humanos y animales y poliomavirus se ha desarrollado. Los ensayos moleculares basados en PCR dirigido específicamente a los adenovirus humanos (HAdV), adenovirus porcino (PADV), adenovirus bovino, BADV) y poliomavirus de la especie bovina (BPYV) se aplicaron a muestras ambientales, incluyendo las aguas residuales urbanas, matadero, y las muestras de agua del río. PADV y BPYV fueron detectados en un porcentaje muy alto de muestras que puedan verse afectados por cualquiera de porcino o bovino contaminación fecal, respectivamente. Sin embargo, BADV fueron detectados en una sola muestra, que muestra una prevalencia más baja que BPYV en las muestras de aguas residuales analizadas. Las 22 muestras de mataderos con la contaminación fecal de origen animal mostró resultados negativos para la presencia de HAdV. Las muestras de agua de los ríos analizados fueron positivos a la presencia de adenovirus humanos y animales y los poliomavirus, lo que indica la existencia de diversas fuentes de contaminación. Las identidades de los virus detectados fueron confirmados por análisis de las secuencias amplificadas. Todos los aislados BPYV mostró una similitud del 97% en las secuencias de nucleótidos. Esta es la primera vez que PAdV5, BAdV6, y BPYV Se ha informado que se producen en muestras ambientales. Los adenovirus humanos y porcinos y poliomavirus humanos y bovinos, se proponen como herramientas para evaluar la presencia de contaminación viral y para rastrear el origen de la contaminación fecal / orina en muestras ambientales.
La Excreción De Los Priones De La EEB Y La Tembladera En Las Heces De Los Modelos Murinos
Las heces de animales infectados se han sugerido como una fuente potencial de contaminación y la transmisión de enfermedades por priones en el medio ambiente. Este trabajo describe el desarrollo de un procedimiento para la detección de PrP (res) en las heces que se basa en una extracción con detergente y basado en la inmunoprecipitación (IP). El procedimiento se evaluó mediante el análisis de las EET de pinchos ovejas y las heces ratones y demostró ser específico para la PrP (res) con una sensibilidad de 5.10 microgramos de tejido cerebral infectado. Con el fin de analizar el derramamiento de priones, se estudiaron las heces de los ratones inoculados por vía oral durante 4 días después de la inoculación, así como las heces de enfermos terminales infectadas por la tembladera ratones. PrP (res) sólo se detectó en las heces poco después de la ingestión oral de agentes de las EET. El procedimiento descrito podría ser una herramienta útil para estudiar la excreción de los priones y para evaluar la posible contaminación ambiental por priones.
Desarrollo De Un Ensayo Cuantitativo De PCR Para La Cuantificación De Poliomavirus De Bovino Como Fuente Microbiana De Seguimiento De La Herramienta
Los adenovirus y poliomavirus son dos familias distintas de ADN viral que se excretan en grandes concentraciones y se distribuye en las poblaciones humanas y animales. Targeting virus específico incluido en estas familias ha demostrado ser una herramienta prometedora y útil para el rastreo específicamente fuentes de contaminación ambiental. En este estudio, un ensayo cuantitativo de PCR que es específico para la especie bovina poliomavirus fue desarrollada y utilizada para determinar el nivel de la excreción y la concentración de la especie bovina poliomavirus en la orina y muestras ambientales, incluyendo las aguas residuales urbanas, aguas residuales de matadero, y el agua del río. Un conjunto de cebadores y una sonda TaqMan fueron diseñados para dirigir una región 77-pb del gen VP1 poliomavirus bovina, y las condiciones de la reacción fueron optimizados. Un límite de detección se estableció en copias del genoma 1-10 por tubo de ensayo. El ensayo fue específico y produjo resultados negativos cuando las muestras que contienen contaminación fecal humana o porcina se analizaron. Esto es, a nuestro entender, la primera descripción de la especie bovina poliomavirus excretados en la orina de la especie bovina (valores de 10 (4) GC / l). Poliomavirus de bovino también se detectaron y cuantificaron en el matadero de aguas residuales y las aguas del río, lo que muestra la propagación de estos virus en muchas muestras ambientales que contienen la contaminación de origen bovino. El procedimiento descrito en este documento ofrece un análisis cuantitativo de código de seguimiento de la herramienta para el análisis de poliomavirus de la especie bovina como indicadores de la presencia de contaminación bovina en muestras ambientales.
El Aislamiento De Un Adenovirus Monkey Novela Revela Un Clado Filogenético De Nuevo En La Historia Evolutiva De Adenovirus Simian
Los adenovirus de primates incluyen humana (HAdV) y de simio (SADV) aísla clasifican en 8 especies de adenovirus humano (A a G, y el adenovirus de simio A). En este estudio, un nuevo adenovirus se aisló a partir de una colonia de macacos cangrejeros (Macaca fascicularis) y se subcultivaron en células VERO. Su genoma completo fue purificado y una región que abarca el gen hexón, el gen de la proteasa, la proteína de unión al ADN (DBP) y la proteína de 100 kDa fue amplificado por PCR y se secuenció por caminar cebador. El análisis de secuencia de estos cuatro genes mostraron que el nuevo aislado tenía 80% de identidad a otros adenovirus de primates y carecía de eventos de recombinación. El estudio de las relaciones evolutivas de este AdV mono nuevo basado en las secuencias combinadas de los cuatro genes apoyado una estrecha relación con SADV-3 y SADV-6, linajes aislados de monos Rhesus. El clado formado por estos tres tipos se separa de los restantes clados y establece una rama novedosa que está relacionada con las especies HAdV-A, F y G. Sin embargo, la distancia genética que corresponde a la mono recién aislado AdV considerablemente difiere de éstos como pertenecer a una nueva, aún no establecido especies. Los resultados presentados aquí ampliar nuestro conocimiento sobre SADV y representa una importante contribución a la comprensión de la historia evolutiva de los adenovirus de primates.
Inhibición De La Apoptosis Y La Activación De NF-κB Por Proteína De Vaccinia N1 Ocurrir a Través De Las Superficies De Unión Distintas Y Hacer Diversas Contribuciones a La Virulencia
Vaccinia virus (VACV) proteína N1 es un factor de virulencia intracelular y pertenece a una familia de linfoma de células B VACV (Bcl) -2-como proteínas cuyos miembros inhiben la apoptosis o activación de factores de transcripción proinflamatorios, como factor regulador de interferón (IFN)-3 (IRF-3) y el factor nuclear-κB (NF-κB). Inusualmente, N1 inhibe la apoptosis y la activación de NF-κB. Para entender cómo N1 ejerce estas funciones diferentes, nos hemos transformado residuos en la ranura de Bcl-2-como superficial y en la interfaz utilizada para formar N1 homodímeros. Mutagénesis del surco superficial había suprimido sólo la actividad de anti-apoptotic N1 y Cristalografía de proteínas mostró que estos mutantes se diferenciaron del tipo N1 solamente en el sitio de la mutación. Por el contrario, mutagénesis de la interfaz de dímero había convertido N1 a un monómero y afecta sólo la inhibición de la activación de NF-κB. Colectivamente, estos datos demuestran que inhibe la N1 proinflamatorias y pro-apoptóticos señalización usando superficies independientes de la proteína. Para determinar la contribución relativa de cada actividad a la virulencia del virus, alelos del mutante N1 fueron introducidos en una cepa VACV falta N1 y la virulencia de estos virus se analizó después de la inoculación intradérmica y intranasal en ratones. En ambos modelos, VACV que contiene a un mutante N1 capaces de inhibir la apoptosis tenía virulencia similar al virus de tipo salvaje, mientras que VACV que contiene a un mutante que N1 deteriorado para la inhibición de NF-kB inducida por una infección atenuada similar a la del virus N1-suprimido. Esto indica que la actividad anti-apoptotic de N1 no conduce virulencia en estos modelos en vivo y destaca la importancia de la señalización proinflamatorios en la respuesta inmune contra las infecciones virales.
