Translate this page to:
French
In JoVE (1)
Other Publications (11)
Automatic Translation
This translation into French was automatically generated.
English Version | Other Languages
Articles by Cindy A. Morris in JoVE
JoVE Bioengineering
Rotation systèmes de culture cellulaire de la culture de cellules humaines: les cellules du trophoblaste humain comme modèle
1Department of Microbiology and Immunology, Tulane University Medical School, 2Physician/Scientist Program, Tulane University Medical School, 3Department of Molecular and Cellular Biology, Baylor College of Medicine
Traditionnel, en deux dimensions techniques de culture cellulaire entraînent souvent des caractéristiques modifiées par rapport aux marqueurs de différenciation, de cytokines et de facteurs de croissance. Culture cellulaire en trois dimensions dans le système de culture cellulaire en rotation (CRCT) rétablit l'expression de plusieurs de ces facteurs comme montré ici avec une lignée de cellules trophoblastiques extravilleux.
Other articles by Cindy A. Morris on PubMed
Induction De P53 Dépendant D'activation Du Gène De La Humaine Prolifération Cellulaire Antigène Nucléaire Dans La Chromatine Par Rayonnement Ionisant
Une lignée de cellules de fibroblaste humain avec l'expression de p53 conditionnelle affiche une augmentation proportionnelle de la p53 dans les niveaux d'ARNm et la protéine de l'antigène nucléaire de prolifération cellulaire (PCNA) après exposition à des rayonnements ionisants (IR). La combinaison de l'induction de p53 et IR ont coopéré pour activer un transitoirement humain PCNA promoteur-journaliste gène qui s'exprime par une p53-responsive element. Immunoprécipitation de la chromatine des essais avec des anticorps spécifiques pour p53 ou p300/CREB-binding protein a révélé l'enrichissement spécifique p53 dépendant des séquences promotrices PCNA dans les immunoprécipités de chromatine cisaillée, préparée à partir de cellules irradiées. Association maximale et spécifique des histones acétylées H4 avec le promoteur de l'ANCP dépendait aussi d'induction de p53 et l'exposition à l'IR. Ces résultats démontrent la p53 lier un site cible dans le promoteur PCNA, le recrutement de p300/CREB-binding protein et localisée d'acétylation de l'histone H4 en une fonction de IR. Ces événements moléculaires sont susceptibles de jouer un rôle dans la médiation de l'activation de l'expression génique PCNA de p53 au cours de la réponse cellulaire aux dommages d'ADN. Les analyses indiquent que la combinaison de l'induction de p53 et IR activer le gène PCNA, par l'intermédiaire de mécanismes semblables à celle du facteur d'activation de p53 p21/sauvage, mais dans une moindre mesure. Cette régulation différentielle de PCNA et facteur d'activation de p53 p21/sauvage peut établir le bon ratio de deux protéines de coordonner la réparation de l'ADN avec l'arrêt du cycle cellulaire.
Infection à Cytomégalovirus Humain Permissive D'une Lignée De Cellules Premier Trimestre Cytotrophoblast Extravilleux
Cytomégalovirus humain (HCMV) est la principale cause d'infection virale congénitale aux États-Unis et en Europe. Malgré l'importante morbidité associée à infection prénatale de HCMV, on connaît mal comment le virus infecte le fœtus pendant la grossesse. A ce jour, cytotrophoblastes humains primaires (CTBs) ont été utilisés pour étudier les placentaires infection de HCMV et réplication ; Cependant, le potentiel mitotique minime de ces cellules restreint expérimentation pour quelques jours, ce qui peut être problématique pour des études mécanistes du virus lent répliquées. Le but de cette étude était de déterminer si l'homme premier trimestre CTB lignée cellulaire SGHPL-4 était permissive pour l'infection de HCMV et donc pourrait surmonter ces limitations. HCMV immédiate au début (IE) expression de la protéine a été détectée dès post-infection 3 heures dans les cellules SGHPL-4 et progressivement accru en fonction du temps. Essais de croissance de HCMV a révélé la présence du virus infectieux dans les Lysats cellulaires et des surnageants de culture, ce qui indique que la réplication virale et à la diffusion du virus de la descendance s'est produite. Par rapport aux fibroblastes humains, la réplication virale a été retardée dans la SB-TSC, études précédentes rapports retardé cinétique virale en CTBs primaires infectés HCMV. Ces résultats indiquent que les cellules SGHPL-4 sont entièrement permissives pour l'ensemble du cycle réplicatif HCMV. Nos résultats suggèrent que ces cellules peuvent servir d'outils utiles pour les futures études mécanistes de la pathogénèse HCMV en début de grossesse.
EBV Latent Membrane Protéine-1 Protège Les Cellules De B De L'apoptose Par Inhibition De BAX
Protéine latente de membrane 1 (LMP-1) du virus Epstein - Barr (EBV) favorise la tumorigenèse en inhibant l'apoptose. Nous montrons qu'une activité anti-apoptotiques important de LMP-1 est l'inhibition de la protéine associée aux Bcl2 X (Bax), une protéine pro-apoptotique puissant. Expression de BAX était régulée par LMP-1 activation du facteur nucléaire kappaB (NF-kappaB) par l'intermédiaire de la région de l'activation de C-terminal 1 (CTAR-1) et CTAR-2. Fait intéressant, p65/p50 inhibée, alors que p50/p50 a augmenté, activité de promoteur BAX comme en témoigne la surexpression et l'inhibition sélective de ces isoformes de NF-kappaB. Analyse de décalage de mobilité électrophorétique a révélé que la LMP-1 active 2 des 3 sites de liaison de NF-kappaB (kappaB1-kappaB3) dans le promoteur BAX. LMP-1 induite par la liaison de la NF-kappaB hétérodimère p65/p50, sur le site de kappaB2 et de l'homodimère p50/p50 sur le site kappaB3. Analyse de mutation de promoteur ont révélé que le site kappaB2 est nécessaire pour l'inhibition de l'activité du promoteur BAX et le site kappaB3, pour son activation. Toutefois, l'activation du promoteur BAX de LMP-1 a été observée qu'en présence d'inhibiteurs spécifiques de la p65/p50. Dans tous les autres cas, LMP-1 inhibe l'activité de promoteur BAX. Plus important encore, l'activité anti-apoptotiques de LMP-1 a été considérablement réduite dans les cellules déficientes pour BAX. Ces résultats indiquent que l'inhibition de Bax peut être une activité importante anti-apoptotiques de LMP-1.
Inhibition Synergique De La Réplication Du Cytomégalovirus Humain Par L'interféron-alpha/bêta Et L'interféron-gamma
Des études récentes ont montré que l'interféron gamma (IFN-gamma) assortie avec l'inné interférons (IFN-alpha et bêta-IFN) pour inhiber le virus herpès simplex de type 1 (HSV-1) réplication in vitro. Pour déterminer si ce phénomène est partagé par les autres herpèsvirus, nous avons étudié les effets des interférons sur la réplication du cytomégalovirus humain (HCMV).
Témoignage De Seroreactivity Exposition Et Transitoires De VIH Dans Archivés Séronégatifs De Sérums Hémophiles Sévères
Environ 25 % des hémophiles qui ont été fréquemment exposés à des concentrés de facteur (CFC) contaminés par le virus de l'immunodéficience humaine (VIH) de la coagulation sanguine sont actuellement VIH séronégatif. Dans cette étude, nous avons cherché à déterminer si certaines de ces personnes étaient à chaque fois que transitoirement le VIH séropositif. Du début au milieu des années 1980, la majorité des patients atteints d'hémophilie sévère ont été exposée à la CFC contaminés par le VIH. Bien que beaucoup de ces hémophiles sont devenues séropositives, un petit pourcentage ne pas s'infecter. Pour déterminer que si certaines de ces personnes résisté avec succès à une infection virale, nous avons tenté de documenter la présence d'anticorps réactifs de transitoires du VIH dans les échantillons de plasma archivés (1980-1992) d'actuellement séronégatif hémophiles sévères qui avaient une forte probabilité d'exposition répétée au VIH a contaminé CFC. Plasma archivé échantillons ont été rétrospectivement testé en utilisant par qu'une FDA approuvé VIH-1Ab HIV-1/VIH-2 (ADNr) immunoenzymatique (EIA) et un VIH-1 de l'Ouest blot (Wb), ni de ce qui étaient disponibles dans le commerce jusqu'à la fin des années 1980, qui était après que beaucoup de ces échantillons avaient été attirés.
Kinase Cycline-dépendante 9 Est Requise Pour Stimulée Par Le Facteur De Nécrose Tumorale-alpha Matrix Metalloproteinase-9 Expression Dans Des Cellules D'adénocarcinome Pulmonaire Humain
Le cytokines pro-inflammatoires tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) favorise la progression tumorale grâce à l'activation de l'activité de matrix metalloproteinase (MMP). MMP-9 est une gélatinase sécrétée par les cellules cancéreuses et des cellules stromales environnantes, et il contribue à l'invasion tumorale stimulée par le TNF-alpha et les métastases. Kinase cycline-dépendante 9 (CDK9), le composant catalytique de transcription positive élongation facteur-b, phosphoryle résidus sérine 2 dans le domaine C-terminal de la RNA polymérase II d'élongation de la transcription productifs et est régulée par l'exposition à divers stress. Cette étude porte sur les rôles de CDK9 dans l'expression de MMP-9 stimulée par le TNF-alpha dans les cellules d'adénocarcinome pulmonaire humain. CDK9 est inhibée à l'aide de trois différentes stratégies, y compris les inhibiteurs pharmacologiques CDK9 5,6-dichloro-1-beta-D-ribofuranosylbenzimidazole (DRB), un CDK9 dominant négatif et un spécifique CDK9 petit ARN interférent. Les trois approches réduit par TNF-alpha-accumulation de MMP-9 dans les milieux conditionnés comme en témoigne la zymographie de gélatine. En revanche, transformant l'accumulation induite par le TGF-beta1 de MMP-2 n'est pas affectée par RAN. Expression du gène de la MMP-9 a été étudiée à l'aide de la transcriptase inverse PCR en temps réel et à l'aide d'un test de transfection transitoire pour évaluer l'activité de promoteur de MMP-9. RAN a réduit l'augmentation induite par le TNF-alpha dans les niveaux d'ARNm de MMP-9, mais n'avait pas entraîné transformer l'expression des ARNm de MMP-2 induite par le TGF-beta1. Constamment DRB et dominant négatif CDK9 complètement abrogent stimulée par le TNF-alpha humaine activité du promoteur MMP-9. TNF-alpha ne réglementait pas expression ou localisation de CDK9 ou son partenaire réglementaire cyclines T. Toutefois, TNF-alpha ont stimulé CDK9 liaison à T cycline et l'occupation de gène de MMP-9 par CDK9 et la forme de 2-phosphorylée de sérine de l'ARN polymérase II. Nos résultats indiquent que CDK9 intervient dans la transcription induite par le TNF-alpha MMP-9. Perturbation de la signalisation à l'aide de CDK9 inhibiteurs de TNF-alpha pouvait constituer une stratégie thérapeutique potentielle contre l'invasion tumorale et la métastase.
Activation De La ProMMP-2 Et De La Src Par HHV8 VGPCR Dans Les Cellules Endothéliales Artérielles Pulmonaires Humaines
L'hypertension artérielle pulmonaire idiopathique (iPAH) est associée à l'herpèsvirus humain 8 (HHV8) infection et illustre l'angiogenèse pathologique similaire à celle observée avec une autre maladie liée HHV8, nommément Arcome de Kaposi (KS). Important, le HHV8 codé viral couplés aux protéines G récepteur (vGPCR) induit des lésions de KS dans un modèle murin. L'incidence d'expression vGPCR sur l'activité angiogénique des cellules endothéliales artérielles pulmonaires (HPAEC) peut produire aperçu la pathobiologie de troubles vasculaires associées à HHV8, particulièrement de HAP. HPAECs cultivés étaient transduites avec des vecteurs rétroviraux transportant ni contrôle ni vGPCR régions codantes. vGPCR expression activée sélectivement la matrice métalloprotéinases (MMP) -2, une matrice pivotale modulant l'enzyme au cours de l'angiogenèse. Un anticorps neutralisant de MMP (MT1-MMP) membrane de type 1 et de l'inhibiteur tissulaire de métalloprotéinase-2 (TIMP-2) indépendamment bloquaient vGPCR induite par l'activation de MMP-2. vGPCR expression promu concordante activation de la MMP-2 en augmentant l'expression de la MT1-MMP tout en diminuant l'expression de TIMP-2. vGPCR activé kinase Src, comme en témoigne la phosphorylation de la Src et ses kinase d'adhérence focale de substrat (FAK). vGPCR promu l'angiogenèse du HPAECs, comme en témoigne une augmentation substantielle des tubulogenèse in vitro. Les inhibiteurs de la Src PP2 et SU6656 considérablement amoindri tubulogenèse et activation de MMP-2 induite par le vGPCR. Nos résultats indiquent que vGPCR induit l'activation de la MMP-2 en HPAECs par le biais de régulation de l'expression MT1-MMP et TIMP-2. vGPCR active Src et l'inhibition de cette activation abroge l'activation de la proMMP-2 et angiogenèse in vitro induite par le vGCPR. La présente étude implique vGPCR comme agent étiologique dans iPAH et identifie la Src et la MMP-2 comme cibles thérapeutiques potentielles dans HHV8 associés KS et iPAH.
Sarcome De Kaposi Associé : Activation Des Récepteurs G-protéine a Couplé L'herpèsvirus De Cyclooxygenase-2 Dans Les Cellules Endothéliales Vasculaires
Sarcome de Kaposi associé herpèsvirus (KSHV) est l'agent étiologique du sarcome de Kaposi (SK), un néoplasme fortement vascularisé caractérisé par les cellules tumorales de forme fuselée origine endothéliale. KSHV infectés par les cellules endothéliales microvasculaires montrent une expression accrue cyclo-oxygénase-2 (COX-2) et les lésions de KS ont des niveaux élevés de la prostaglandine E2 (PGE2), un éphémère éicosanoïdes dépend de l'activité de la cyclo-oxygénase qui a été liée à la pathogénèse d'autres néoplasies. To determine whether a augmenté l'expression de COX-2 et PGE2 production est médiée par l'angiogénique et couplés aux protéines G tumorigènes KSHV codé du récepteur (vGPCR), nous avons développé un rétrovirus recombinant à vGPCR express en humain ombilicale vasculaire endothélial cellules (HUVEC).
Cancers De L'ovaire Surexpriment La Protéine Antimicrobienne HCAP-18 Et Ses Dérivés LL-37 Augmente L'invasion Et La Prolifération De Cellules De Cancer De L'ovaire
Le rôle du peptide pro-inflammatoires, LL-37 et ses Pro-Form, humaine antimicrobiens protéine cationique 18 (hCAP-18), dans le développement du cancer et la progression est mal compris. Dans les tissus endommagés et enflammée, LL-37 fonctionne comme un facteur chimiotactique, mitogène et pro-angiogéniques, suggérant que le peptide peut potentialiser la progression tumorale. Le but de cette étude était de caractériser la distribution de hCAP-18/LL-37 dans le tissu ovarien normal et cancéreux et d'examiner les effets de LL-37 sur les cellules de cancer de l'ovaire. Expression de hCAP-18/LL-37 a été localisée à des cellules immunitaires et de la granulosa de tissu ovarien normal. En revanche, tumeurs ovariennes affichent des taux significativement plus élevés de hCAP-18/LL-37 où l'expression a été observée dans la tumeur et les cellules stromales. Expression de la protéine a été statistiquement par rapport au degré de densité infiltration et des microvaisseaux de cellules immunitaires dans les tumeurs ovariennes épithéliales dérivées et une corrélation significative a été observée pour les deux. Il a été démontré que les lysats de tissu de tumeur ovarienne et de lignées cellulaires de cancer de l'ovaire expriment hCAP-18/LL-37. Traitement des lignées cellulaires de cancer de l'ovaire avec recombinant LL-37 stimulée par la prolifération, chimiotactisme, invasion et expression de métalloprotéinase de matrice. Ces résultats démontrent pour la première fois que hCAP-18/LL-37 est significativement surexprimée dans les tumeurs ovariennes et suggèrent LL-37 peut contribuer à une tumorigenèse ovarienne grâce à la stimulation directe des cellules tumorales, l'initiation de l'angiogenèse et le recrutement des cellules immunitaires. Ces données apportent une nouvelle preuve de la relation existante entre les molécules pro-inflammatoires et la progression du cancer de l'ovaire.
Stimulée Par Facteur De Croissance épidermique Cytotrophoblast D'extravilleux Motilité Est Médiée Par L'activation De PI3-K, Akt Et P38 Tant P42/44 Mitogène-protéines Kinases
Invasion trophoblastique est un régime réglementé temporellement et spatialement des événements qui peuvent dicter l'issue de la grossesse. Il semble que le facteur de croissance épidermique mitogène puissant (EGF) réglemente la différenciation cytotrophoblast (CTB) et invasion en début de grossesse.
Inhibition De L'infection à Cytomégalovirus Humain De Peptide
Cytomégalovirus humain (HCMV) est l'infection virale congénitale plus répandue aux États-Unis et en Europe, provoquant une cause de morbidité et de mortalité de la mère et l'enfant. HCMV est aussi un pathogène opportuniste chez les individus immunodéprimés, y compris le virus de l'immunodéficience humaine (VIH)-infected patients atteints de sida et des organes pleins et destinataires de transplantation de cellules souches allogéniques. Les traitements actuels pour les maladies associées à HCMV sont insuffisantes en raison de l'émergence de résistance médicamenteuse et de cytotoxicité, ce qui nécessite de nouvelles approches afin de limiter l'infection de HCMV. Le but de cette étude était de développer des peptides thérapeutiques ciblant la glycoprotéine B (gB), une glycoprotéine majeure de HCMV qui est hautement conservée au sein de la famille Herpesviridae, qui inhibent spécifiquement la fusion de l'enveloppe virale avec la membrane de cellule hôte empêchant l'infection et l'entrée HCMV.
