Mutagénesis Pez Cebra Mutantes Rinde Ojos Morfológicas Con Los Defectos De La Retina Y El Lente

Vision Research. Feb, 2002  |  Pubmed ID: 11853770

Un mutagénesis química para identificar mutantes de pez cebra oculares morfológicas se realizó mediante cribado F (3) larvas en 5 y 7 días después de la fertilización-(DPF) para los cambios en los ojos o tamaño de la pupila. Con base en el análisis histológico, cuatro clases fenotípicas se obtuvieron diferentes. La Clase I y dos de tres mutantes de Clase II se caracterizan por los ojos pequeños y defectos de exhibición en el desarrollo temprano de retina o la muerte celular no regulado, respectivamente. La única clase III mutante ha reducido la pigmentación ocular. Los tres mutantes de la Clase IV muestra los defectos de la lente ocular, incluyendo una línea mutante con ojos normales de tamaño y los alumnos que se desarrolla la opacidad del cristalino a las 7 de DPF.

Reglamento De La Luz-dependiente Translocación Gqalpha Y Los Cambios Morfológicos En Los Fotorreceptores Fly

The EMBO Journal. Feb, 2003  |  Pubmed ID: 12554647

Heterotrimeric proteínas G transmiten señales entre las unidas a la membrana receptores y efectores. Poco se sabe, sin embargo, sobre la regulación de la localización de la subunidad Galpha en el medio natural endógeno de una célula de señalización especializada. Aquí se muestra, utilizando en vivo moscas Drosophila, que la luz provoca la translocación masiva y reversible de la Gqalpha visual para el citosol, vinculado a importantes cambios en la arquitectura en el compartimiento de la señalización. La disección genética molecular junto con el análisis cinético detallado nos ha permitido caracterizar el ciclo de desplazamiento y de desentrañar cómo las moléculas de señalización que interactúan con Gqalpha influyen en estos procesos. El análisis mostró que epistática Gqalpha es necesaria pero no suficiente para lograr los cambios morfológicos en el orgánulo de señalización. Además, el análisis indicó que Gqbeta mutante es esencial para la orientación de Gqalpha a la membrana y sugirió que Gqbeta también es necesaria para la activación eficaz de Gqalpha por rodopsina. Nuestros resultados apoyan la hipótesis del "doble señal de modelo para la membrana de la focalización en un organismo vivo y caracterizar la regulación tanto de la localización de la actividad dependiente de GQ y los cambios celulares de arquitectura en los fotorreceptores de Drosophila.

Nueva Mutación Dominante Rodopsina Activa Dos Mecanismos De Degeneración Retiniana Y La Desensibilización De Fotorreceptores

The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. Mar, 2004  |  Pubmed ID: 15014127

Una variedad de barras de las mutaciones opsin dar lugar a la retinitis pigmentaria autosómica dominante y la ceguera nocturna congénita en los seres humanos. Un subconjunto de estas mutaciones codifica formas constitutivamente activas de la proteína opsina varilla. Algunas de estas proteínas dominantes barra opsin mutantes, que insensibilizan transgénicos barras de Xenopus, un modelo animal para la ceguera nocturna congénita. En un análisis genético para identificar mutantes degeneración retiniana en Drosophila, se identificó una mutación dominante en el gen ninaE (NinaE (pp100)) que codifica la rodopsina que se expresa en los fotorreceptores R1-R6. Profundo análisis de pseudopupil y la histología mostró que la degeneración se debió a una apoptosis de luz independiente. Plenario de células grabaciones revelaron que los NinaE (pp100) las células fotorreceptoras mutantes fueron muy insensibles, que en parte enmascarado su actividad constitutiva. Esta desensibilización principalmente el resultado de tanto la unión persistente de arrestina (ARR2) a la NINAE (pp100) opsina mutante y la actividad constitutiva de la cascada de fototransducción. Mientras que las mutaciones en varios genes de Drosophila que no se ninaE demostrado inducir la apoptosis de las células fotorreceptoras mediante la estabilización de un complejo rodopsina-arrestina, NinaE (pp100) representó la primera mutación de la rodopsina que se estabiliza el complejo de proteínas. Además, el NinaE (pp100) mutación dio lugar a niveles elevados de G (q) alfa en el citosol, que medió una nueva vía degeneración de la retina. La eliminación de dos G (q) alfa y rescató a la arrestina por completo NinaE (pp100) dependiente de la muerte de las células fotorreceptoras, que indicaban que la degeneración es totalmente dependiente de tanto G (q) alfa y arrestina. Tal combinación de múltiples vías patológicos resultantes de una única mutación puede ser la base de varias enfermedades dominantes de la retina en los seres humanos.

El Pez Cebra Pard3 Ortholog Es Requerido Para La Separación De Los Campos De Los Ojos Y La Laminación De La Retina

Developmental Biology. May, 2004  |  Pubmed ID: 15081374

La retina de los vertebrados se desarrolla a partir de una lámina de células neuroepiteliales. Debido a adherentes y uniones estrechas son críticos para la diferenciación epitelial y neuronal en una variedad de sistemas eucarióticos, se analizó el papel de la Par-3, una proteína PDZ andamio que es fundamental en la formación de unión entre la membrana celular. Hemos clonado el pez cebra Par-3 ortólogo (pard3), que codifica dos proteínas Pard3 (150 y 180 kDa) que difieren en su carboxilo-terminal. La inmunohistoquímica reveló que Pard3 localizada en la región apical del neuroepitelio la retina y el cerebro, que se superponen parcialmente los asociados adherentes de unión-haces de actina. Después de la laminación de retina, la proteína Pard3 estaba restringido a la membrana limitante externa y las capas plexiforme interior y exterior de la retina. La reducción de la expresión Pard3 con morfolinos antisentido causó la pérdida del epitelio pigmentario de la retina, la interrupción de laminación de la retina, y la muerte celular en el diencéfalo ventral, que se tradujo en ciclopía. Sobreexpresión de Pard3 por la inyección de ARNm pard3 de tipo salvaje como resultado ciclopía y embriones sin ojos. Por lo tanto, Pard3 desempeña un papel fundamental en el origen y la separación de los campos de los ojos de pez cebra y la laminación de retina.

Opacidad Del Cristalino Y La Degeneración De Los Fotorreceptores En El Pez Cebra Mutante Cristalino Opaco

Developmental Dynamics : an Official Publication of the American Association of Anatomists. May, 2005  |  Pubmed ID: 15765514

El pez cebra lente opaca (LOP) mutante fue identificado en una pantalla de mutagénesis química. El lop mutante, que se desarrolla normalmente a través de 4 días postfertilización (DPF), presenta varios signos de degeneración de la retina y el lente a las 7 de DPF. La histología reveló interrumpido fibras de la lente y un mayor número de células nucleadas dentro de la lente mutante y la cámara anterior. El objetivo mutante también exhibió morfologías aberrantes de células epiteliales y carecía de una zona de transición definitiva, lo que sugiere que la diferenciación de fibra secundaria se vio interrumpida. Además, las exposiciones mutantes severamente reducida fotorreceptores y una reducción en el número de células horizontales a 7 fdd. Otras clases de células retinianas apareció afectado en el mutante. Microscopía electrónica de transmisión e inmunohistoquímica opsina mostró que los tipos de fotorreceptores se generaron en el margen de la retina, pero los conos y bastones no maduran y desapareció. La lente y la retina mutante también muestra el aumento de la proliferación celular basado en la proliferación celular inmunomarcaje antígeno nuclear, lo que sugiere que la opacidad del cristalino era debido a la proliferación celular no regulada y la acumulación de células no diferenciadas dentro de la lente mutante. El fenotipo mutante lop apoya otros estudios recientes que muestran la lente tiene un papel en la regulación del desarrollo de la retina teleósteos.

Cre Mediada Por Recombinación Específica De Sitio En Embriones De Pez Cebra

Developmental Dynamics : an Official Publication of the American Association of Anatomists. Aug, 2005  |  Pubmed ID: 15977183

Cre mediada por recombinación específica de sitio se ha convertido en una valiosa herramienta para la manipulación del genoma murino. La capacidad de activar la expresión génica de forma condicional o para generar alteraciones cromosómicas con esta misma herramienta mejoraría en gran medida la genética del pez cebra. Este estudio demuestra que el promotor HSP70 puede ser utilizado para controlar la expresión inducible de una mayor proteína verde fluorescente (EGFP) proteína de fusión-Cre. La proteína de fusión EGFP-Cre es capaz de promover la recombinación entre los sitios lox en plásmidos inyectados o en los transgenes establemente heredados tan pronto como la inducción 2 horas después de choque térmico. Por último, los niveles de expresión de Cre logrado en una línea de peces transgénicos que lleva el transgén EGFP-HSP70-creación son compatibles con la viabilidad y los peces transgénicos tanto hombres como mujeres fértiles son posteriores a la inducción de la expresión de Cre-EGFP. Por lo tanto, nuestros datos sugieren que Cre mediada por recombinación es un medio viable de manipular la expresión génica en el pez cebra.

Análisis De Secuencia Expresada Etiqueta De Los Tejidos Del Ojo De Pez Cebra Para NEIBank

Molecular Vision. 2005  |  Pubmed ID: 16379021

Para caracterizar los patrones de expresión de genes en diferentes tejidos del pez cebra (Danio rerio) del ojo e identificar el pez cebra orthologs de los genes humanos con la etiqueta de secuencia expresada (EST) el análisis de NEIBank.

El Pez Cebra Foxe3: Roles En La Morfogénesis Ocular Lente a Través De La Interacción Con Pitx3

Mechanisms of Development. Oct, 2006  |  Pubmed ID: 16963235

Foxe3 es un alado hélice / forkhead factor de transcripción de dominio necesarias para el desarrollo del objetivo de mamíferos y anfibios. Humanos FOXE3 mutaciones causan disgenesia del segmento anterior y las cataratas. El pez cebra foxe3 cDNA fue amplificado por PCR a partir de las 24 horas post-fecundación (HPF) de embriones de cDNA. El gen de pez cebra foxe3 consta de un solo exón en el cromosoma 8 y codifica una proteína 422 aminoácidos. Esta proteína posee un 44% y 67% de identidad de aminoácidos con la humana y proteínas FOXE3 Xenopus FoxE4, respectivamente. Un antisuero policlonal se generó contra una proteína de fusión bacteriano que contiene el carboxilo terminal Foxe3. El antisuero purificado detecta el pez cebra Foxe3 immunoblots, en wholemounts embrión, y las secciones de tejido congeladas. La proteína pez cebra Foxe3 se detecta primero en la lente en 31hpf y se limita a la población de células nucleadas, incluyendo las células epiteliales de fibra y elongación. Derribo de la proteína usando un Foxe3 resultados antisentido morpholino en pequeñas lentes multicapa con las células epiteliales y de células dysmorphogenesis fibra. Los morphants poseen retinas normales, aunque las proteínas celulares, incluyendo la retina rodopsina, están anormalmente expresadas en el tejido del cristalino morphant. Interacciones funcionales entre foxe3 pitx3 y durante el desarrollo del objetivo fueron evaluados por RT-PCR y la comparación de Foxe3 Pitx3 y expresión de la proteína en ambos foxe3 y pitx3 morphants. Inmunotransferencias e inmunohistoquímica revelan Pitx3 se expresa en la lente foxe3 morphant, mientras que los resultados Pitx3 caída en la eliminación de Foxe3 expresión. Estos datos demuestran que Foxe3 es necesario para el desarrollo lente en el pez cebra y que se encuentra foxe3 genéticamente aguas abajo de pitx3 en una vía de lente desarrollo pez cebra.

Las Mutaciones En Laminina Alfa 1 Dan Lugar a Fenotipos Complejos, Oculares Independientes De Lente En El Pez Cebra

Developmental Biology. Nov, 2006  |  Pubmed ID: 16973147

Se presentan los análisis genéticos y fenotípicos de un gen recesivo, las larvas de pez cebra mutante letal, bal (A69), caracterizada por defectos oculares graves y de los ejes acortada cuerpo. El bal (A69) mutación fue localizado en el cromosoma 24, cerca de la laminina alfa 1 (lama1) de genes. Se analizó la secuencia de genes dentro de lama1 bal (A69) y dos embriones mutantes alélicos, BAL (ARL) y BAL (UW1). Missense (BAL (A69)), sin sentido (BAL (ARL)), y el marco de lectura (BAL (UW1)) alteraciones en lama1 se encontró que la base de los fenotipos. Amplio análisis de las características oculares bal (A69) reveló perturbado el desarrollo de la lente con la degeneración del objetivo posterior, displasia de la córnea central, y los defectos de hialoides vasculatura. Dentro de la retina neural, las células ganglionares mostró defectos axonales de proyección y las células fotorreceptoras ectópicos se observaron en el interior de lugares de la retina. Para determinar si las anomalías oculares fueron secundarios a defectos en la diferenciación de la lente, BAL (A69) mutantes se compararon con los embriones en el que se retiró la vesícula del cristalino quirúrgicamente. Nuestro análisis sugiere que muchos de los defectos oculares anteriores y posteriores en equilibrio (A69) son independientes de la degeneración de la lente. Análisis de los componentes de los complejos de adhesión focal de señalización sugiere que la reducción de adhesión focal subyace en la activación de la cinasa de la disgenesia del segmento anterior en lama1 mutantes. Para evaluar fenotipos adultos oculares asociadas a mutaciones lama1, mosaicos genéticos se han generado mediante el trasplante de células marcadas en el bal-fated regiones oculares de tipo salvaje blástulas. Adultos ojos quiméricos muestra una serie de defectos, incluyendo disgenesia del segmento anterior y las cataratas. Nuestro análisis proporciona una visión mecanicista en los defectos en el desarrollo y patogénesis oculares causadas por mutaciones en subunidades laminina.

La Clonación Molecular De Tres Genes Del Pez Cebra Lin7 Y Sus Patrones De Expresión En La Retina

Experimental Eye Research. Jan, 2006  |  Pubmed ID: 16109407

La retina de los vertebrados se desarrolla a partir de una hoja indiferenciado de células neuroepiteliales, cuya diferenciación requiere la generación y mantenimiento de la polaridad celular correcto. Para examinar el papel de la polaridad celular en el desarrollo de la retina, hemos clonado tres genes de pez cebra lin7 (lin7a, lin7b y lin7c), que codifica un candidato de cada proteína que se requiere para la generación / mantenimiento de la unión entre las células neuroepiteliales. Estas tres proteínas comparten el pez cebra Lin7 sobre la identidad de ácido del 78% de aminoácidos y contienen L27 y dominios PDZ que están presentes en todos los Lin7 homólogos. Immunoblots reveló que las proteínas y Lin7b Lin7c se expresaron por primera vez en el desarrollo del ojo por postfertilización las 24 horas (HPF), mientras que Lin7a no se detectó en el ojo hasta el 72 HPF. A los 33 HPF, los Lin7 proteínas localizadas en, o ligeramente apical, las uniones actina asociada a adherentes en la retina neuroepithelium. Esta distribución subcelular requiere la expresión de la proteína Nok. En ausencia de Nok, las proteínas no Lin7 para localizar ya sea a la ectópico uniones adherentes o la membrana celular. En postfertilización 4 días, la hibridación in situ reveló que todos los tres lin7 genes se expresan en tanto la capa de células ganglionares y la región de la célula bipolar de la capa nuclear interna. El gen lin7a también se expresó en las regiones de células amacrinas y horizontales de la capa nuclear interna, mientras que lin7c también se expresó en la capa nuclear externa. En la retina de adultos, donde Lin7a es la forma predominante expresado, los Lin7 proteínas fueron localizados en las capas plexiforme interior y exterior, los bipolares y horizontales células de la capa nuclear interna, y las células ganglionares. Estos resultados sugieren que los tres de pez cebra Lin7 proteínas poseen funciones parcialmente redundantes, sin embargo, esencial, en desarrollo de la retina.

Diferencias Regionales En La Retina La Muerte De Fotorreceptores Y La Regeneración Celular De La Luz-lesionado Pez Cebra Albino

Experimental Eye Research. Apr, 2006  |  Pubmed ID: 16199033

Pez teleósteo regenerar las células de la retina de una población de la capa nuclear interna (INL) las células madre. Para la caracterización de la regeneración de los fotorreceptores en el pez cebra (Danio rerio), peces albinos adultos fueron sometidos a una luz intensa constante para causar la muerte de las células fotorreceptoras. Morfometría de retina se realizó en secciones histológicas de control y la luz con lesiones retinas albinos para comparar el grado de daño de la luz en las regiones de la retina ventral, en el centro y dorsal. Además, la opsina inmunohistoquímica TUNEL y se utilizaron para comparar la muerte de células fotorreceptoras en estas zonas de la retina diferentes, mientras que PCNA immunolabeling cuantificó la proliferación de las células que precede a la regeneración de los fotorreceptores. Transgénicos albinos; Tg (alfa1-tubulina: EGFP) el pez cebra también estaban expuestos a la luz intensa con el fin de examinar las relacionadas con la regeneración de los cambios de expresión génica. Las retinas de la luz con lesiones se caracterizan por una amplia barra de cono y de la muerte de las células fotorreceptoras en las regiones central y dorsal. En contraste, muchos de los conos y bastones sobrevivir en la retina ventral. Los niveles más altos de la proliferación celular INL, que se produce con posterioridad a la muerte de fotorreceptores, corresponden a las regiones la retina que sufren los mayores niveles de daño de fotorreceptores. En la retina ventral, donde la muerte de células fotorreceptoras es mínimo, la proliferación celular se limita a la ONL. Además, EGFP expresión a partir del promotor de alfa 1-tubulina se incrementa en las células gliales de Müller en la retina dañada por la luz central y dorsal, mientras que la expresión del transgén en la retina ventral se limita a células pequeñas, INL redondas. Además, la expresión del antígeno HuC / D neuronal se detectó en una subpoblación de las células de Müller en la luz dañada por región retina superior. Estos datos demuestran que los adultos albinos cebra visualización retina diferencias regionales en la muerte de células fotorreceptoras y en la regeneración relacionada con la respuesta INL la proliferación celular. Los altos niveles de proliferación celular INL y alfa1-tubulina: EGFP expresión del transgén en las células de Müller se pueden clasificar en respuesta al grado de muerte celular fotorreceptor. Esto sugiere que los niveles de daño fotorreceptor puede influir directamente en las respuestas de células en las capas retinianas subyacentes.

Dos Transgenes Diferentes Para Estudiar El Silenciamiento Génico Y Re-expresión De Pez Cebra Durante La Aleta Caudal Y La Regeneración Retiniana

TheScientificWorldJournal. 2006  |  Pubmed ID: 17205188

Se utilizó el 500 pb Xenopus EF1-alfa promotor y los 2A.F de 2 KB de pez cebra histonas / promotor de la Z a la generación de varias líneas independientes de pez cebra transgénico que expresan EGFP. Mientras tanto los promotores impulsar la expresión EGFP omnipresente en el desarrollo del pez cebra temprana, que son sistemáticamente silenciadas en los tejidos adultos de varios, incluyendo la retina y la aleta caudal. Sin embargo, la expresión de EGFP se encuentra temporalmente renovado en el adulto ya sea durante la aleta caudal o la regeneración de la retina. En la Tg (H2A.F / Z: EGFP) línea nt, EGFP es moderado tanto en el epitelio de heridas y blastema de la aleta caudal de regeneración. En la Tg (EF1-alfa: EGFP) de la línea NT, la expresión de EGFP se reinicia y se limita a el blastema de regeneración de la aleta caudal y colabels con BrdU, PCNA, y las células msxc-positivos. Por lo tanto, estos dos promotores ubicuos impulsar EGFP expresión de los transgenes en poblaciones de células diferentes durante la regeneración de la aleta caudal. Asimismo, analizaron la capacidad de la EF1-alfa: EGFP transgén para etiquetar las células diferenciadas no terminales durante la regeneración de los tejidos adultos. En primer lugar, hemos demostrado que el transgén está muy metilado en el tejido de la aleta caudal de pez cebra adulto, pero no durante la regeneración de la aleta, lo que implica la metilación como un medio potencial de silenciamiento de transgenes en esta línea. A continuación, se determinó que el EF1-alfa: EGFP transgén también se re-expresadas durante la regeneración de la retina adulta. En concreto, la EF1-alfa: EGFP transgén colabels con PCNA en las células de Müller, una célula especializada que es la fuente de progenitores neuronales durante la regeneración de la retina del pez cebra. Por lo tanto, llegamos a la conclusión de que la Tg (EF1-alfa: EGFP) nt línea visualmente marca las células diferenciadas no terminales en varios entornos de adultos de regeneración y puede llegar a ser un marcador útil en los estudios de regeneración de tejidos en el pez cebra.

La Inhibición De La Regeneración De Aleta De Pez Cebra Empleando Electroporación in Vivo De La Morpholinos Contra FGFR1 Y Msxb

Developmental Dynamics : an Official Publication of the American Association of Anatomists. Feb, 2006  |  Pubmed ID: 16273523

El creciente interés en el uso de pez cebra como modelo ha dado lugar a un resurgimiento de los estudios de regeneración de las aletas. Esto ha permitido la identificación de un gran número de familias de genes, incluyendo moléculas de señalización y factores de transcripción, que se expresan durante la regeneración. Sin embargo, en casos en que no inhibidor específico está disponible para el producto del gen de interés, la determinación de un papel funcional de estos genes ha sido difícil. Aquí demostramos que la electroporación in vivo de los oligonucleótidos morfolino es un enfoque viable para la proteína de knock-down durante la regeneración de la aleta. Oligonucleótidos Morpholino contra FGFR1 y msxb fueron utilizados y knock-down de ambas proteínas dio lugar a consecuencia de la aleta reducida. Es importante destacar que FGFR1 derribo consecuencia la inhibición phenocopied obtenido con un inhibidor de FGFR1. Además, este método proporciona una evidencia directa de un papel funcional para msxb en la regeneración de la aleta caudal. Por último, knock-down de FGFR1, pero Msxb, no afectó la expresión de la blastémicas msxc, lo que sugiere que esta técnica puede ser utilizada para determinar la epistasis en las vías genéticas que afectan a la regeneración. Por lo tanto, este práctico enfoque genético inversa permite a los investigadores de forma rápida (1) evaluar la función de genes conocidos que se manifiesten durante la regeneración de la aleta, (2) genes en busca de relevancia funcional durante la regeneración de la aleta, y (3) asignar a los genes de las vías moleculares que subyacen a aleta regeneración.

La Regeneración De Neuronas De La Retina Interior Tras La Inyección De Ouabaína En El Pez Cebra

The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. Feb, 2007  |  Pubmed ID: 17301179

Se examinó la capacidad de regeneración de la retina del pez cebra adulto por la inyección intravítrea de una concentración baja ouabaína para dañar rápidamente la capa de células ganglionares (GCL) y la capa nuclear interna (INL) con el mínimo daño de las células fotorreceptoras. Por 24 horas después de la inyección ouabaína, los números máximos de desoxinucleotidil transferasa terminal mediada fin de etiquetado biotina UTP nick (TUNEL) de células positivas se detectaron en el INL y GCL, con un bajo número de células TUNEL-positivas en la capa nuclear externa. Immunolabeling reveló que aproximadamente el 85% de la amacrinas HuC / D-positivo y las células ganglionares se perdieron por 7 días post-inyección de ouabaína (ppp). Esta pérdida de células ganglionares era coherente con la pequeña, pero estadísticamente significativa, disminución en el diámetro del nervio óptico. La respuesta de la regeneración se inició el plazo de 1 dpi con un aumento del antígeno nuclear de proliferación celular (PCNA) expresión tanto en la INL y GCL. A los 3 dpi, la expresión de PCNA está restringida principalmente a la células de Müller. Por 5 dpi, la mayor parte de la expresión de PCNA se localizó a progenitores neuronales que expresan el Olig2: egfp transgén en lugar de la células de Müller. A las 7 dpi, los progenitores neuronales comenzó a cometer el destino de las células ganglionares sobre la base de la co-expresión de la atoh7: EGFP transgén y el antígeno ZN5. La regeneración de las células ganglionares y amacrinas continuó hasta los 60 dpi, cuando se alcanzó el 75% de su número de control no inyectado. Esto demuestra que los daños retiniana interna, sin daño fotorreceptor extensa, es suficiente para inducir una respuesta de regeneración que se caracteriza por las células gliales de Müller reingresan el ciclo celular para producir células neuronales progenitoras que regeneran INL y las células ganglionares en la retina del pez cebra.

Un Espejo Simétrica División Celular Que Organiza Morfogénesis Neuroepitelial

Nature. Apr, 2007  |  Pubmed ID: 17392791

El desarrollo de la polaridad celular es un requisito esencial para la morfogénesis de tejidos durante la embriogénesis, en particular en el desarrollo de los epitelios. Además, la división celular orientada puede tener una poderosa influencia en la morfogénesis de tejidos. Aquí identificamos un nuevo modo de división celular polarizada que genera pares de progenitores neurales con espejo simétrico de polaridad en el tubo neural en desarrollo el pez cebra y tiene consecuencias dramáticas para la organización de tejido embrionario. Se demuestra que durante la formación de la barra de proteína neuronal del Pard3 la polaridad se localiza en el surco de división de los progenitores, y luego especular simétrica heredada por las dos células hijas. Esto permite que las células hijas a integrarse en lados opuestos del tubo neural en desarrollo. Además, estas divisiones simétricas espejo-tienen influencia morfogenética potente: cuando se ven obligados a ocurrir en lugares ectópicos durante neurulación, que orquestar el desarrollo de la formación de patrones espejo-imagen y la consiguiente generación de ectópicos tubos neurales.

Tiempo Curso De Análisis De La Expresión Génica Durante La Luz Muerte Celular Inducida Por Los Fotorreceptores Y La Regeneración En El Pez Cebra Albino

Developmental Neurobiology. Jul, 2007  |  Pubmed ID: 17565703

Una luz intensa constante provoca la apoptosis de los fotorreceptores de los bastones y conos en el pez cebra albina adulta. Los fotorreceptores posteriormente regenerarse a partir de la proliferación de la capa nuclear interna (INL), las células progenitoras que migran a la capa nuclear externa (ONL) y se diferencian en los conos y bastones. Para identificar los cambios de expresión génica durante la regeneración de los fotorreceptores esta respuesta, un análisis de microarrays se realizó en cinco puntos de tiempo durante el tratamiento con luz. El curso temporal incluye un punto de tiempo durante principios de la muerte de fotorreceptores (16 h), después los puntos de tiempo durante la proliferación de células progenitoras y la migración (31, 51 y 68 h) y un punto de 96 h de tiempo, lo que probablemente corresponde a la diferenciación fotorreceptor inicial. Los valores medios de expresión de cada gen se calcularon en cada momento con respecto al control (0 h exposición a la luz) y el análisis estadístico mediante ANOVA de una vía identificado 4567 genes que muestran cambios significativos en la expresión genética a lo largo del transcurso del tiempo. Los genes dentro de este conjunto de datos se agruparon en función de sus patrones de expresión temporal y las funciones propuestas. Cuantitativo de PCR en tiempo real validado los perfiles de expresión de microarrays de genes seleccionados, incluyendo STAT3 cuya expresión aumentó notablemente durante la exposición a la luz. Sobre la base de immunoblots, total y activado Stat3 expresión de la proteína también aumentó durante el tratamiento con luz. Inmunolocalización de Stat3 en las secciones de tejido de la retina demostrado el aumento de expresión en los fotorreceptores y las células de Müller por 16 h de exposición a la luz. Algunas de las células Stat3-positivas Müller expresó PCNA a 31 h, lo que sugiere que Stat3 puede jugar un papel en la señalización de un subconjunto de células de Müller a proliferar durante la respuesta de regeneración.

Determinantes Genéticos De La Vasculatura Retinal Hialoides Y En El Pez Cebra

BMC Developmental Biology. 2007  |  Pubmed ID: 17937808

La vasculatura de la retina es una red capilar de los vasos sanguíneos que nutre a la retina interna de la mayoría de los mamíferos. Anormalidades en el desarrollo o las complicaciones microvasculares de la vasculatura de la retina resultado en graves enfermedades de los ojos humanos que conducen a la ceguera. Para aprovechar las ventajas del pez cebra para estudios genéticos, de desarrollo y farmacológicas de la vasculatura de la retina, que caracteriza la vasculatura ocular en el pez cebra.

Por Mitógenos Proteína Quinasa Asociada, Y La Proteína Quinasa A Dependiente De La Regulación De La Expresión Promotor Rodopsina En El Pez Cebra Bastones, Las Células Fotorreceptoras

Journal of Neuroscience Research. Feb, 2007  |  Pubmed ID: 17183589

Mitógenos proteína asociada a la quinasa (MAPK) - y la proteína quinasa A (PKA) dependiente de transducción de señales juegan un papel importante en la regulación de la expresión génica. Tanto las vías MAPK y PKA puede ser activado por exposición a la luz. En este estudio, se investigó el efecto de la luz en MAPK y la transducción de la señal de la PKA y su papel en la regulación de la expresión del promotor rodopsina mediante el uso de pez cebra transgénico [Tg (Rhod :: GFP)]. La Tg (Rhod :: GFP) peces expresa corta vida media GFP que está bajo el control transcripcional del promotor de pez cebra rodopsina y por lo tanto puede ser utilizado para estudios in vivo de la transcripción de genes en células vivas rodopsina. La luz azul tiene un papel en la regulación de la expresión a través de un promotor de la rodopsina cascada de señalización MAPK mediada por transducción. Blue excita criptocromos luz (CRY), que activan la PKC aguas abajo dependen de la vía MAPK. La luz blanca, por otro lado, regula la expresión rodopsina promotor a través de una proteína G acoplada dependiente de cAMP vía PKA. La luz blanca promueve la liberación de dopamina en la retina, lo que activa los receptores de la dopamina y la posterior vía de la PKA. El bloqueo de la señalización MAPK disminuye la luz azul-inducida por el aumento en la expresión de promotor de la rodopsina, pero este tratamiento no tiene efecto sobre la luz blanca mediada por la expresión promotor de la rodopsina. Por el contrario, el bloqueo de la vía PKA disminuye la luz blanca de la expresión inducida por el promotor rodopsina, pero no afecta la expresión de la rodopsina promotor regulado por la luz azul. En conjunto, los datos sugieren que MAPK y PKA regular la transcripción de la rodopsina a través de las vías de transducción de señales en paralelo.

La Tg (ccnb1: EGFP) Transgénicos Etiquetas De Línea Pez Cebra La Proliferación De Las Células Durante El Desarrollo De La Retina Y Regeneración

Molecular Vision. 2008  |  Pubmed ID: 18509551

Para crear la Tg (ccnb1: EGFP) (nt18) línea de pez cebra que espacial y temporalmente las etiquetas de las células progenitoras de la retina con aumento de la proteína verde fluorescente (EGFP) durante el desarrollo del pez cebra y la regeneración de la retina.

Caracterización De Las Células De Müller Y De Progenitores Neuronales Adultos Durante La Regeneración De Retina De Pez Cebra

Experimental Eye Research. Nov, 2008  |  Pubmed ID: 18718467

La retina del pez cebra adulto presenta una respuesta regenerativa tras sólida inducida por la luz la muerte de células fotorreceptoras. Esta respuesta se inicia con la proliferación de las células de Müller en la capa nuclear interna (INL), que da origen a células progenitoras neuronales que continúan dividiendo y migran a la capa nuclear externa (ONL), donde se diferencian en fotorreceptores de los bastones y conos. Previamente llevó a cabo un análisis de microarrays de expresión génica de la retina en 16, 31, 51, 68 y 96 h de la constante de la luz intensa del tratamiento para identificar los genes y sus proteínas correspondientes que pueden estar implicados en la generación y proliferación de las células progenitoras neuronales. Se examinó la expresión de dos factores de transcripción, candidatos y Pax6 Ngn1, y un transgen candidato, Olig2: EGFP, en la regeneración de la luz dañadas de la retina. Se compararon los patrones de expresión temporal y espacial de estos marcadores en relación con PCNA (antígeno de proliferación nuclear de células), un marcador establecido para la proliferación de células en la retina del pez cebra, y la Tg (GFAP: EGFP) NT11 línea transgénica que específicamente las etiquetas de las células de Müller gliales. Hemos encontrado que las células gliales de Müller dedifferentiate durante la regeneración, en base a la pérdida de células específicas de marcadores como GFAP (proteína ácida fibrilar glial) y la glutamina sintetasa tras su reentrada en el ciclo celular para producir progenitores neuronales. Pax6 expresión se detectó por primera vez en la proliferación de los progenitores neuronales en un 51 horas de tratamiento con luz constante, que es significativamente después de la primera vuelva a introducir las células de Müller en el ciclo celular después de 31h de luz. Esto sugiere que Pax6 expresión aumenta en células progenitoras neuronales, en lugar de en la proliferación de las células de Müller. EGFP expresión del promotor Olig2 se detectó por primera vez en 68 h de tratamiento constante de la luz en el las células de Müller dediferenciado, con Pax6 expresada en las estrechamente asociadas proliferación de progenitores neuronales que migran a la ONL. Tanto Pax6 y expresión Olig2 persistió hasta 3 días después de la luz del tratamiento, cuando los progenitores neuronales empezar a diferenciarse en la barra nueva y conos. Ngn1 expresión de la proteína se detectó inicialmente en la proliferación de progenitores neuronales a 68 h de tratamiento con luz. Sin embargo, la expresión Ngn1 persistió en un subconjunto de los núcleos INL hasta 17 días posteriores a la luz de tratamiento. Uso de la Tg (GFAP: EGFP) de la línea transgénica NT11, Ngn1 fue localizado en los núcleos Müller glial que se restableció después de la respuesta regenerativa. Estos marcadores, por lo tanto, se puede utilizar para identificar los diferentes tipos de células en determinadas etapas de la regeneración de la retina: la formación de células progenitoras neuronales, la proliferación y el restablecimiento de las células gliales de Müller. Estos marcadores, será importante para caracterizar la respuesta de la regeneración en otros modelos de daño en la retina, y para dilucidar los defectos asociados con mutantes y morphants que alteran la respuesta de la regeneración.

Generación Y Caracterización De Las Líneas De Pez Cebra Transgénico Usando Diferentes Promotores Ubicuas

Transgenic Research. Apr, 2008  |  Pubmed ID: 17968670

Dos promotores de uso común para expresar transgenes doquier en el pez cebra son la Xenopus laevis factor de elongación de un promotor de alfa (XlEef1a1) y el pez cebra variante de la histona H2A.F / Z promotor (h2afv). Recientemente, los transgenes que utilizan estos promotores, se mostró a ser silenciadas en los tejidos adultos determinados, en particular el sistema nervioso central. Para superar esta limitación, hemos clonado los promotores de los cuatro genes de pez cebra, que probablemente se transcriben en todos los apartados de desarrollo y en el adulto. Estos cuatro genes son el gen caja TATA proteína de unión, el gen Taube Nuss-como, el factor de elongación eucariótico 1-gamma gen, y el gen de la beta-actina-1. Se amplificó por PCR de aproximadamente 2,5 kb aguas arriba del sitio de comienzo putativo de traslación de cada gen y se clonó en un vector de cada expresión Tol2 que contiene el transgén EGFP reportero. Se han utilizado estos cuatro Tol2 vectores para generar líneas estables de forma independiente de peces transgénicos para el análisis de la expresión del transgen durante el desarrollo y en el adulto. Hemos demostrado que los cuatro promotores de impulsar un modelo muy amplio de la expresión de EGFP en todo el desarrollo y el adulto. Uso de la retina como un componente bien caracterizado del SNC, los cuatro promotores apareció para conducir la expresión EGFP en todas las células neuronales y no neuronales de la retina adulta. En contraste, el promotor h2afv no expresar EGFP en la retina adulta. Cuando examinamos la expresión de EGFP en las distintas células del linaje de células de la sangre, se observó que los cuatro promotores mostraron un patrón de expresión más heterogéneo que cualquiera de los XlEef1a1 o promotores h2afv. Si bien estos cuatro promotores ubicuos no expresan EGFP en todas las células sanguíneas adultas, hicieron expresa EGFP todo el sistema nervioso central y en los patrones de expresión más amplias en el adulto que sea el XlEef1a1 o promotores h2afv. Por estas razones, estos cuatro promotores serán valiosas herramientas para la expresión de transgenes en adultos de pez cebra.

La Regeneración De Las Células Ganglionares En General Después De La Retina-la Destrucción En El Pez Cebra

Developmental Neurobiology. Feb, 2008  |  Pubmed ID: 18000816

Las retinas de los peces teleósteos adulto puede regenerar neuronas después de una lesión. El presente estudio proporciona la primera documentación de la regeneración funcional de la retina entera en el pez cebra, Danio rerio, después de la inyección intraocular de la citotoxina, ouabaína. Pérdida y sustitución de tejido retinal laminado fue monitorizada por análisis de la muerte celular y la proliferación celular, y por análisis de la retina-específicos patrones de expresión génica. El proceso espacio-temporal de las células ganglionares de la retina (CGR) de la regeneración fue seguida a través del uso de marcadores selectivos, y se encontró que recapitulan en gran medida el proceso espacio-temporal de la neurogénesis embrionaria de células ganglionares, durante un período de tiempo más prolongado. Sin embargo, la re-expresión de algunos marcadores de células ganglionares no se observó. El crecimiento y pathfinding de axones de las células ganglionares se evaluó mediante la medición de la cabeza del nervio óptico (HNO), y la restauración de tamaño normal de HNO se encontró que corresponden al tiempo de recuperación de dos comportamientos mediados por visualmente. Sin embargo, algunas anomalías se observaron, incluyendo la sobreproducción de CGR, y el crecimiento progresivo y excesivo de la HNO en los tiempos de recuperación más largos. Este sistema modelo para la regeneración de toda la retina-han aportado una visión informativa del proceso de regeneración.

La Inhibición De La División De Las Células Gliales Müller Bloques De Regeneración De La Retina De Pez Cebra Dañadas Por La Luz

Developmental Neurobiology. Feb, 2008  |  Pubmed ID: 18161852

La retina del pez cebra adulto posee una robusta respuesta regenerativa. En la retina de luz dañados, las células gliales de Müller divisiones preceder a la regeneración de los fotorreceptores de los bastones y conos. Progenitores neuronales, que surgen de la las células de Müller, continúan dividiendo y utilizar los procesos de las células gliales de Müller a migrar a la capa nuclear externa y reemplazar los fotorreceptores perdidos. Hemos probado la necesidad de la división de las células gliales Müller para la regeneración de los fotorreceptores. Como herramientas de derribo no estaban disponibles para su uso en la retina del pez cebra adulto, hemos desarrollado un método para inhibir de forma condicional la expresión de proteínas específicas en la electroporación in vivo de morfolinos. Se determinó que dos morfolinos separados dirigidos contra el antígeno nuclear de proliferación celular (PCNA) redujo los niveles de mRNA de la proteína PCNA. Además, la inyección y la electroporación in vivo de PCNA morfolinos inmediatamente antes de la exposición a partir de luz intensa inhibe tanto la proliferación de células gliales Müller y la expresión neuronal marcador de células progenitoras Pax6. Caída PCNA, además, dio lugar a una disminución de expresión de la glutamina sintetasa en las células de Müller y de la muerte de las células gliales Müller, mientras que las células amacrinas y ganglionares no se vieron afectados. Por último, los métodos histológicos e inmunológicos muestran que a largo plazo los efectos de caída PCNA resultó en disminución del número de las células de Müller y la falta de regeneración de fotorreceptores de los bastones cortos y conos sencillos y largos conos individuales. Estos datos sugieren que la división de células gliales Müller es necesario para la regeneración adecuada fotorreceptor en la retina dañada por la luz de pez cebra y son consistentes con la células de Müller de que actúe como fuente de células progenitoras neuronales en la regeneración de la retina teleósteos.

FGF-dependiente De Agotamiento De Los MicroARN-133 Promueve La Regeneración De Apéndice En Pez Cebra

Genes & Development. Mar, 2008  |  Pubmed ID: 18347091

La regeneración de apéndices se define por los rápidos cambios en la expresión génica que se consiguen importantes efectos sobre el desarrollo, lo que sugiere la implicación de los microARN (miRNA). Aquí, nos encontramos con regulación dinámica de muchos miRNAs durante la regeneración de la aleta de pez cebra. En particular, el miR-133 los niveles son altos en las aletas, pero sin lesiones de baja durante la regeneración. Cuando la regeneración fue bloqueado por la inhibición de crecimiento de los fibroblastos receptor del factor (FGF), altos niveles de miR-133 se restablece rápidamente. Experimentalmente aumentar la cantidad de miR-133 la regeneración de la aleta atenuada. Por el contrario, miR-133 antagonismo durante la inhibición del receptor de FGF acelera la regeneración a través de una mayor proliferación en el blastema de regeneración. La quinasa Mps1, un regulador positivo de la proliferación establecido blastémicas, es un objetivo en vivo de miR-133. Nuestros resultados identifican el agotamiento de miRNA como un nuevo mecanismo de regulación de la regeneración de tejidos complejos.

Connexin43 (GJA1) Es Requerido En La Población De Células Que Se Dividen Durante La Regeneración De Aleta

Developmental Biology. May, 2008  |  Pubmed ID: 18406403

En el pez cebra, las mutaciones en el gen connexin43 brecha de la salida principal de cortos segmentos óseos de la aleta de rayos que dan lugar al fenotipo de aleta corta. La SOF (b123) exposiciones mutantes aletas que son la mitad de la longitud de las aletas de tipo salvaje y han reducido los niveles de ARNm de Cx43. Encontramos que la SOF (b123) la regeneración de las aletas exhiben niveles reducidos de la proliferación celular. Curiosamente, el número de células que se dividen por unidad de longitud de crecimiento de la aleta es similar entre las aletas de tipo salvaje y mutante, lo que sugiere que el número de células que entran en el ciclo celular está específicamente afectado en SOF (B123). La expresión de Cx43 se identifica en las células mitóticas, que sugiere además que Cx43 puede contribuir a establecer o mantener la población de células que se dividen. De hecho, los alelos de cambio de sentido con niveles altos o bajos de la comunicación brecha ocasiones revelan una correlación entre los defectos en directa comunicación celular, la proliferación celular, y la longitud del segmento. Por último, dirigido caída del gen de la Cx43 en adultos recapitula la regeneración de las aletas de la SOF (b123) fenotipo, que revela que la pérdida de Cx43 es suficiente para reducir tanto la proliferación celular y la longitud del segmento. Se postula que el nivel de brecha ocasiones la comunicación intercelular entre células que se dividen regula el nivel de la proliferación celular y, finalmente, regula el crecimiento óseo.

Lengsin Expresión Y Función En La Formación De La Lente De Pez Cebra

Experimental Eye Research. May, 2008  |  Pubmed ID: 18406404

Un pez cebra ortholog de los derechos humanos lengsin fue identificado por el análisis de EST de una biblioteca de cDNA de lentes para adultos. Durante el desarrollo del pez cebra, la transcripción lengsin se detectó por primera vez a las 24 horas post-fecundación (HPF). Inmunolocalización, utilizando un antisuero policlonal generado contra una proteína de fusión Lengsin bacteriana, detecta la lente específica de la proteína en todo el montaje embriones a 30 HPF. Lengsin expresión en el pez cebra sigue a la expresión temporal de la alphaA-alphaB1 y betaB1-cristalinas las proteínas del cristalino. A las 72 HPF, Lengsin se localiza en una subpoblación de diferenciación de las células secundarias de fibra, mientras que ninguna expresión se detecta en las células epiteliales del cristalino o fibras centrales de la lente. En la lente de adultos, Lengsin se limita a una estrecha banda de fibras corticales y localiza cooperación con actina en las caras laterales de estas células interdigitación. Líneas transgénicas estables, utilizando un fragmento de 3 kb lengsin genómica para regular la expresión de EGFP, recapitular la Lengsin temporal y los patrones espaciales de expresión. Lengsin función en la formación de la lente de pez cebra fue examinado por antisentido morfolino mediada por la traducción y la inhibición de empalme de ARNm. A las 72 HPF, los lentes de lengsin morphant se reducen en las separaciones de tamaño y exposición dentro de la corteza debido a defectos en la morfogénesis de fibra secundaria. La localización de los defectos de la lente morphant se correlaciona con la localización de la proteína Lengsin a esta edad. Estos resultados demuestran Lengsin es necesaria para la adecuada diferenciación de células de fibra por jugar roles en la elongación celular, ya sea o el establecimiento de las interacciones celulares.

Expresión Celular De Midkine-a Y B-Midkine En Desarrollo De La Retina Y Regeneración De Los Fotorreceptores En El Pez Cebra

The Journal of Comparative Neurology. May, 2009  |  Pubmed ID: 19263476

En la retina de los teleósteos adultos, las células madre se mantienen en dos nichos especializados: la zona marginal ciliar (CMZ) y el microambiente que rodea a las células de Müller para adultos. Recientemente, las células de Müller fueron identificados como las células madre regenerativas en la retina teleósteos. Secretados moléculas de señalización que regulan la regeneración neuronal en la retina son en gran parte desconocido. En una pantalla de microarrays para descubrir estos factores, hemos identificado midkine-b (mdkb). Midkine es una muy conservadas heparina de unión del factor de crecimiento con numerosas funciones biológicas. El genoma del pez cebra codifica dos genes distintos: midkine mdka y mdkb. Aquí se describe la expresión celular de mdka mdkb y durante el desarrollo de la retina y la fase inicial, de proliferación de la regeneración de los fotorreceptores. Los resultados muestran que en la retina embrionario y larval mdka mdkb y se expresan en células madre, progenitoras de la retina, y las neuronas en distintos patrones que sugieren que las diferentes funciones de las dos moléculas. Después de la muerte selectiva de los fotorreceptores en el adulto, y mdka mdkb se coexpresan en las células horizontales y células gliales proliferan Müller y su progenie neurogénica. Estos datos revelan que Mdka y Mdkb están señalando los factores presentes en los nichos de células madre de la retina en las retinas, tanto embrionario y adulto, y que su expresión celular modula de forma activa durante el desarrollo de la retina y la regeneración.

La Maduración Gradual De La Polaridad Apicobasal Del Neuroepitelio Es Esencial Para La Neurulación De Vertebrados

The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. Sep, 2009  |  Pubmed ID: 19759292

Durante la neurulación vertebrados, los movimientos amplios de células transformar la placa neural plano en el tubo neural. Esta morfogénesis dinámico requiere el tejido para soportar una cierta cantidad de plasticidad para adaptarse a cambios en la forma y posición de las células individuales, así como la cohesión intercelular para mantener la integridad del tejido y la arquitectura. Para la mayor parte de la transición del tubo neural placa neural, las células están polarizadas a lo largo del eje apicobasal. El establecimiento y mantenimiento de esta polaridad requiere muchas proteínas de polaridad celular que median la adhesión celular, ya sea directamente o indirectamente. Adhesión intercelular reduce la plasticidad del tejido y aumenta la integridad del tejido. Sin embargo, no queda claro cómo se regula la polaridad apicobasal para satisfacer las necesidades opuestas de la plasticidad del tejido y la integridad del tejido durante la neurulación. Aquí, mostramos que N-Cad/ZO-1 compleja iniciada por la polaridad apicobasal se estabiliza por el complejo Lin7c/Nok finales de onsetting después de los movimientos celulares morfogenéticos extensas en neurulación. La pérdida de cualquiera de las N-Cad o Lin7c interrumpe la formación del tubo neural. Además, la sobreexpresión precoz de Lin7c induce simetría de espejo multiaxial en neurulación pez cebra. Nuestros datos sugieren que la maduración gradual de la polaridad apicobasal juega un papel esencial en la neurulación vertebrados.

CNTF Induce Neuroprotección De Fotorreceptores Y La Proliferación De Células Gliales Müller A Través De Dos Vías De Señalización En La Retina De Pez Cebra Adultos

Experimental Eye Research. Jun, 2009  |  Pubmed ID: 19450453

Factor neurotrófico ciliar (CNTF) actúa en varios procesos en la retina de los vertebrados, incluyendo la neuroprotección de los fotorreceptores en la retina adulta estrés y regulación de la proliferación de células progenitoras neuronales durante el desarrollo de la retina. Sin embargo, la vía de señalización que utiliza (JAK / STAT, MAPK, o Akt) en estos procesos es ambiguo. Debido a que adaptada a la oscuridad exhibición pez cebra albina inducida por la luz vara y muerte de las células del cono y, posteriormente, la regeneración de las células fotorreceptoras perdidos, el pez cebra debe ser un modelo útil para estudiar el papel de CNTF, tanto en la neuroprotección y la proliferación de células progenitoras neuronales. Por ello, investigó el papel potencial de CNTF en tanto las retinas de pez cebra en buen estado y la luz dañada por los adultos. La inyección intraocular de CNTF suprimido la luz inducida por la muerte de células fotorreceptoras, que luego no muestran la respuesta de la regeneración que se caracteriza por la proliferación de las células de Müller y las células progenitoras neuronales. La inhibición de la vía de señalización MAPK, pero ni la Stat3, ni las vías Akt, redujo significativamente la neuroprotección mediada por CNTF de luz inducida por la muerte de células fotorreceptoras. La inyección intraocular de CNTF en no tratados con luz (sin daños) ojos imitaban el tratamiento constante de luz intensa al aumentar la expresión de Stat3 en las células de Müller siguió aumentando el número de la proliferación de las células de Müller y de progenitores neuronales. Derribo de Stat3 expresión en los CNTF inyectados no tratados con luz retinas redujo significativamente el número de la proliferación de las células de Müller, mientras que la coinyección de CNTF, ya sea con inhibidores de MAPK o Akt no inhibió la proliferación inducida por CNTF Müller células gliales. Por lo tanto, el CNTF utiliza una vía MAPK dependiente de la señalización en la neuroprotección de la luz inducida por la muerte de las células fotorreceptoras y una vía de señalización dependiente de Stat3-para estimular la proliferación de células de Müller.

Un Nuevo Modelo De Ablación Retiniana Demuestra Que El Grado De Muerte Celular Rod Regula El Origen De Los Fotorreceptores De Los Bastones Regeneradas Pez Cebra

The Journal of Comparative Neurology. Mar, 2010  |  Pubmed ID: 20058308

La retina del pez cebra adulto constantemente produce fotorreceptores de los bastones de la división celular glial infrecuente Müller, produciendo las células progenitoras neuronales que migran a la capa nuclear externa y convertirse en células precursoras de varilla que se han comprometido a diferenciarse en las barras. Modelos retina daños sugirió que la muerte de células vástago induce la regeneración de las células precursoras de varilla, mientras que la pérdida de cualesquiera otras neuronas retinales activa proliferación Müller glía para producir pluripotentes progenitores neuronales que pueden generar cualquier otro tipo de células neuronales en la retina. Pusimos a prueba esta hipótesis mediante la creación de dos líneas transgénicas que expresaban la enzima de E. coli nitroreductasa fundido a EGFP (NTR-EGFP) en las barras solamente. El tratamiento de adultos transgénicos con metronidazol dio lugar a dos modelos de muerte de células de varilla. En primer lugar, matando a todas las barras a través de la Tg (ZOP: nfsB-EGFP) (nt19) la retina inducida por la proliferación glial sólida Müller, que produjo racimos de células progenitoras neuronales. En contraste, la ablación de sólo un subconjunto de varillas a través de la Tg (ZOP: nfsB-EGFP) (NT20) retina llevó a precursor de caña, pero no Müller gliales, la proliferación celular. Proponemos que los dos criterios diferentes de determinar si la muerte de células vástago que inducen una respuesta regenerativa de la células de Müller y no de las células precursoras de varilla de residentes de la ONL. En primer lugar, debe haber una gran cantidad de muerte celular varilla para iniciar la proliferación Müller glía. En segundo lugar, la muerte celular barra debe ser aguda, en lugar de crónica, para estimular la regeneración de la células de Müller. Esto sugiere que la retina del pez cebra posee mecanismos para cuantificar la cantidad y el momento de la muerte celular barra.

Pax6a Y Pax6b Se Requieren En Diferentes Puntos De La Proliferación Neuronal De Células Progenitoras Durante Pez Cebra Fotorreceptor Regeneración

Experimental Eye Research. May, 2010  |  Pubmed ID: 20152834

Las dañadas por la luz los resultados de la retina del pez cebra en la muerte de las células fotorreceptoras y la posterior regeneración de la barra de desaparecidos y las células del cono. Fotorreceptores de regeneración se inicia con la división celular asimétrica Müller glial para producir células progenitoras neuronales que amplíen, migran a la capa nuclear externa (ONL), y se diferencian en dos clases de células fotorreceptoras. En este estudio, hemos examinado el papel de la proteína Pax6 en la regeneración. En el pez cebra, hay dos Pax6 proteínas, una codificada por el gen pax6a y la otra codificada por el gen pax6b. Se inyectó por vía intravítrea y electroporación morfolinos que eran complementarias a cualquiera de la pax6a o ARNm pax6b a desmontables la traducción de la proteína correspondiente. Pérdida de la expresión Pax6b no afectar a la división Müller células gliales, pero bloqueó la posterior división celular primero de los progenitores neuronales. En contraste, la proteína paralogous pax6a se requiere para las divisiones celulares neuronales progenitoras más tarde, que maximiza el número de células progenitoras neuronales. Sin amplificación neuronal de células progenitoras, la proliferación de las células residentes ONL varilla precursoras, que sólo pueden regenerar varillas, aumentó inversamente proporcional al número de INL células progenitoras neuronales. Esto confirmó que Müller glial-derivado de las células progenitoras neuronales son necesarios para regenerar los conos y que los mecanismos de regeneración de los fotorreceptores de forma selectiva diferentes conos y bastones. Este trabajo también se definen los roles distintos para pax6a Pax6b y en la regulación de la proliferación neuronal de células progenitoras de la retina del pez cebra adulto y aumenta nuestra comprensión de los mecanismos moleculares necesarios para la regeneración de las células fotorreceptoras.

El Pez Cebra Drgal1 Galectina-L2 Se Expresa Por La Proliferación De Las Células De Müller Y Los Progenitores De Fotorreceptores Y Regula La Regeneración De Los Fotorreceptores De Los Bastones

Investigative Ophthalmology & Visual Science. Jun, 2010  |  Pubmed ID: 20071673

El propósito de este estudio fue identificar las proteínas secretadas en la retina del pez cebra adulto que son inducidos por la muerte selectiva de los fotorreceptores y poner a prueba experimental de la función de estas proteínas durante la regeneración de los fotorreceptores.

Pez Cebra De La Clase 1 Fosfatidilinositol Proteínas De Transferencia: PITPbeta E Integridad De La Célula De Doble Cono Exterior Del Segmento En Retina

Traffic (Copenhagen, Denmark). Sep, 2010  |  Pubmed ID: 20545905

Proteínas fosfatidilinositol (PITPs de transferencia) en la levadura de coordenadas metabolismo de los lípidos con las actividades de determinadas vías de la membrana de la trata. Los PITPs metazoan no relacionados estructuralmente (mPITPs), en el otro lado, son una clase bajo-investigado de las proteínas. Aún no está claro cuáles son las actividades biológicas de descarga mPITPs, y los mecanismos por los que estas funciones también están las proteínas no se entiende. Los solubles de clase 1 mPITPs incluyen el PITPalpha y las isoformas PITPbeta. De éstas, las isoformas beta son particularmente mal caracterizado. Aquí, nos informe el uso del pez cebra como un vertebrado modelo para el estudio de la clase 1 la función mPITP biológica. El pez cebra expresa PITPalpha y PITPbeta de isoformas (Pitpna y Pitpnb, respectivamente) y una novela PITPbeta-como isoforma (Pitpng). Pitpnb expresión es particularmente fuerte en las células de doble cono de la retina del pez cebra. Morfolino-mediadas desmontables experimentos proteínas demuestran actividad Pitpnb es principalmente necesario para la biogénesis / mantenimiento de los segmentos de doble cono de células fotorreceptoras exteriores en la retina en desarrollo. Por el contrario, la actividad Pitpna es esencial para navegar con éxito de los primeros programas de desarrollo. Este estudio reporta la descripción inicial de la clase de pez cebra de la familia 1 mPITP, y el primer análisis de la función PITPbeta en un vertebrado.

El Inhibidor De La Fagocitosis, O-fosfo-L-serina, Suprime La Proliferación Müller Glía Y La Regeneración Celular En El Cono Retina De Pez Cebra Dañadas Por La Luz

Experimental Eye Research. Nov, 2010  |  Pubmed ID: 20696157

La retina del pez cebra dañada reemplaza las neuronas perdidas a través de una respuesta regenerativa que se inicia con la división celular asimétrica de las células de Müller para producir células progenitoras neuronales que proliferan y migran a la capa de la retina dañada, donde se diferencian en los tipos de células neuronales perdidas. Debido a que las células de Müller son conocidos para fagocitar células de la retina de apoptosis durante el desarrollo, hemos probado si las células de Müller envuelto cuerpos de las células apoptóticas en la barra de luz dañados por las retinas. Después de 24 horas de luz intensa constante, retinas dañadas reveló tanto una fuerte señal de TUNEL nuclear en los fotorreceptores y una señal débil TUNEL frente al citoplasma de las células de Müller, aunque Müller glial la apoptosis no se observa en la retina la luz dañada. Daño de la luz de una línea específica del periodista de la barra transgénico, Tg (XlRho: EGFP) (FL1), dio lugar a algunos las células de Müller que contiene la señal de TUNEL y EGFP, que indicó que este subconjunto de las células de Müller envuelto apoptosis cuerpos de las células fotorreceptoras. Para determinar si la fagocitosis inducida por la respuesta proliferativa gliales Müller en la retina dañada por la luz, se utilizó S-fosfo-L-serina (L-SOP), una molécula que imita el grupo de cabeza de fosfatidilserina y parcialmente la fagocitosis microglial bloques de células apoptóticas. La inyección intravítrea de L-SOP inmediatamente antes de comenzar el tratamiento constante de luz intensa: i) no redujo significativamente la luz inducida por la muerte de células fotorreceptoras, ii) redujo significativamente el número de PCNA-positivas las células de Müller, y iii) redujo significativamente el número de conos fotorreceptores de la retina regenerada relación con el control retinas. Debido a que la L-SOP es también un grupo específico de receptores de glutamato metabotrópicos III (mGluR) agonista, también a prueba si el más potente agonista grupo específico III, L-2-amino-4-phosphonobutyrate (L-AP4), el grupo antagonista específico III (RS)-α-metilserina-O-fosfato (DIP) o el grupo específico que antagonista, L-2-amino-3-phophonopropanoic ácido (L-AP3) afectado proliferación glial Müller. No se encontraron cambios con alguno de estos factores en comparación con el control de la retina, dejando al descubierto que los receptores metabotrópicos de glutamato no eran necesarias en la respuesta proliferativa las células de Müller. Por otra parte, y la expresión de STAT3 ascl1a no se vieron afectados, ya sea en la L-SOP o SOIC-inyección de la retina respecto a los controles, lo que sugiere la L-SOP interrumpe la proliferación de células de Müller después o en paralelo con ascl1a y la activación de STAT3. Esto implica que al menos un mecanismo de señalización, en adición al proceso interrumpido por L-POE, es necesaria para activar la proliferación Müller glía en la retina dañada por la luz.

La Pérdida De La Clasificación De Proteínas Vacuolar 11 (vps11) Causas Patogenia De Retina En Un Modelo De Vertebrados Del Albinismo Sindrómico

Investigative Ophthalmology & Visual Science. May, 2011  |  Pubmed ID: 21622697

Objetivo: Establecer el platino pez cebra mutante como un modelo para el estudio de los defectos de la visión causados ​​por enfermedades tales como albinismo síndromes de Chediak-Higashi, síndrome de Griscelli, y el síndrome de Hermansky-Pudlak (HPS). Métodos: Análisis abultado segregante y la secuenciación de genes candidatos reveló que la mutación de platino pez cebra es la inserción de un solo nucleótido en el vps11 (proteína vacuolar clasificación de 11) de genes. Expresión de vps11 se determinó por RT-PCR e hibridación in situ. Los mutantes se analizaron para detectar defectos de pigmentación y la patología retiniana por la histología, inmunohistoquímica y microscopía electrónica de transmisión. Resultados: experimentos fenocopia y rescate determinado que una pérdida de Vps11 resultados en el fenotipo de platino. Expresión de vps11 apareció en todas partes durante el desarrollo del pez cebra, con mayor expresión en la retina en desarrollo y el epitelio pigmentado retiniano (EPR). Pez cebra mutantes de platino mostraron reducción de la pigmentación en el cuerpo y el epitelio pigmentado retiniano (EPR), sin embargo, el desarrollo melanóforo, la migración y la dispersión se desarrolló con normalidad. RPE, fotorreceptores y neuronas de la retina interna formada normalmente en los mutantes de platino de pez cebra. Sin embargo, una pérdida gradual de la RPE, la ausencia de melanosomas maduros y la subsiguiente degradación de RPE / fotorreceptor interdigitación se observó. Conclusiones: Estos datos muestran que Vps11 no es necesaria para el desarrollo normal de la retina o el inicio de la biosíntesis de melanina, pero es necesario para la maduración de los melanosomas y el mantenimiento saludable de la EPR y los fotorreceptores.

Sintasa Fosfatidilinositol Se Requiere Para La Integridad Estructural Del Objetivo Y La Supervivencia Celular De Fotorreceptores En El Ojo De Pez Cebra

Experimental Eye Research. Oct, 2011  |  Pubmed ID: 21722635

El pez cebra lente opaca (LOP) mutante fue aislado previamente en una pantalla genética y muestran la falta a la barra y los conos y la opacidad exhibición cristalino, o catarata, a los 7 días después de la fertilización (dpf). En este manuscrito, se ofrecen cuatro diferentes líneas de evidencia que demuestran que el fenotipo lop de un defecto en el cdipt (fosfatidilinositol (PI) sintasa, CDP-diacilglicerol-inositol 3-phosphatidyltransferase) de genes. En primer lugar, el análisis de secuencia de ADN reveló que el mutante Lop contenía una mutación en el marco de lectura abierto Lop, que produce una sustitución no conservativa de aminoácidos (Ser-111-Cys) dentro del dominio catalítico sintasa PI. En segundo lugar, morfolino mediada por el derribo de la proteína sintasa cdipt codificado PI phenocopied la cdipt (LOP / LOP) mutante, con lentes de morfologías anormales de células epiteliales y secundarios de fibra y reducción del número de fotorreceptores. Microinyección En tercer lugar, in vitro de ARNm transcrito, cdipt de tipo salvaje en la etapa de 1-4 células cdipt (LOP / LOP) embriones redujo significativamente el porcentaje de opacidad del cristalino larvas muestra a las 7 de DPF. En cuarto lugar, un cdipt retroviral de inserción alelo, cdipt (hi559), exhibió la lente similar y anomalías de la retina y no para complementar la cdipt (LOP) fenotipo mutante. Para determinar los defectos celulares iniciales asociados con el mutante cdipt, hemos examinado homocigotos cdipt (hi559/hi559) mutantes antes de la opacificación de la lente bruto a 6 dpf. Los cdipt (hi559/hi559) mutantes primero exhibió interrupción fotorreceptor capa de fotorreceptores y la muerte celular en 3 y 4 fdd, respectivamente, seguido por dismorphogenesis lente por 5 fdd. RT-PCR reveló que el gen cdipt se expresó la madre y continúa siendo transcrito largo del desarrollo y en la edad adulta, en una amplia variedad de tejidos. Usando un antisuero anti-sintasa pez cebra PI policlonal, se localiza la proteína a través de los ojos en desarrollo, incluyendo la capa de fotorreceptores y la lente corticales células de fibra secundaria. Como se esperaba, el antisuero policlonal reveló que la proteína sintasa PI se redujo en una cantidad en tanto el cdipt (LOP / LOP) y mutantes cdipt (hi559/hi559). Además, se utilizó un ensayo de levadura heterólogo complementación fenotípica para confirmar que el alelo de tipo salvaje pez cebra cdipt codifica la actividad funcional de la sintasa de PI. Tomados en conjunto, la sintasa cdipt codificada PI es necesario para la supervivencia de las células fotorreceptoras y lentes corticales células epiteliales y secundaria de la fibra. Estos alelos cdipt pez cebra representa una excelente in vivo de herramientas genéticas para estudiar el papel de fosfatidilinositol y sus derivados fosforilados en el vidrio y el desarrollo de los fotorreceptores y el mantenimiento.

FGF Señalización Regula Rod Mantenimiento De Las Células Fotorreceptoras Y Regeneración En El Pez Cebra

Experimental Eye Research. Nov, 2011  |  Pubmed ID: 21945172

FGF señalización es necesaria para muchos procesos biológicos relacionados con la regulación de la proliferación celular y el mantenimiento, incluyendo el desarrollo embrionario, la homeostasis de los tejidos, la cicatrización de heridas, y la progresión del cáncer. Aunque la función de señalización de FGF se sugiere en varios modelos diferentes, incluyendo la regeneración de la regeneración de apéndices en los anfibios y la aleta y la regeneración del corazón en el pez cebra, que aún no ha sido estudiada durante la regeneración de las células fotorreceptoras de pez cebra. Aquí se demuestra que las inyecciones intravítreas de FGF-2 la proliferación celular inducida por la varilla de precursores y la neuroprotección de las células fotorreceptoras en daño de la luz intensa. Usando el dominante negativo Tg (hsp70: dn FGFR1-) línea transgénica, hemos encontrado que el FGF señalización se requiere para la homeostasis de la varilla, pero no cono, fotorreceptores. Aunque FGFR1 se expresa en tanto la varilla y conos, hemos encontrado que el FGF señalización diferencialmente afectado a la regeneración de los fotorreceptores del cono y la varilla en la retina dañada por la luz, con el dominante negativo hsp70: dn-FGFR1 transgén significativamente reprimir regeneración varilla fotorreceptor sin que afecta a los conos. Estos datos sugieren que la homeostasis de la barra de fotorreceptores y la regeneración es el FGF-dependiente y que los fotorreceptores conos y bastones en el pez cebra adultos están regulados por diferentes vías de señalización.

La Pérdida De La Clasificación De Proteínas Vacuolar 11 (vps11) Causas Patogenia De Retina En Un Modelo De Vertebrados Del Albinismo Sindrómico

Investigative Ophthalmology & Visual Science. May, 2011  |  Pubmed ID: 21330665

Para establecer el platino pez cebra mutante como un modelo para el estudio de los defectos de la visión causados ​​por enfermedades tales como albinismo síndromes de Chediak-Higashi, síndrome de Griscelli, y el síndrome de Hermansky-Pudlak (HPS).

Müller Glía Como Fuente De Células Progenitoras Neuronales Para Regenerar La Retina De Pez Cebra Dañado

Advances in Experimental Medicine and Biology. 2012  |  Pubmed ID: 22183361

Caracterización De Múltiples Paradigmas De Daños Causados ​​por La Luz Revela Las Diferencias Regionales En La Pérdida De Fotorreceptores

Experimental Eye Research. Mar, 2012  |  Pubmed ID: 22425727

Pez cebra ofrecer un modelo atractivo para estudiar la respuesta de la retina a la apoptosis de fotorreceptores, debido a su notable capacidad de regeneración espontánea neuronas de la retina después del daño. Actualmente hay dos ampliamente utilizados inducidos por la luz los modelos de degeneración de la retina a los fotorreceptores de daño en el pez cebra adulto. Un modelo utiliza una luz brillante constante, mientras que el otro utiliza una corta exposición a la luz ultravioleta muy intensa. Aunque ambos modelos se utilizan actualmente, no está claro si difieren en cuanto a la extensión del daño fotorreceptor o la respuesta regeneración subsiguiente. Aquí se presenta un análisis detallado de los daños fotorreceptores y la respuesta posterior proliferación inducida por cada tratamiento individual, así como por el uso concomitante de ambos tratamientos. Nos muestran una pérdida diferencial de fotorreceptores conos y bastones con cada tratamiento. Además, nos muestran que el grado de proliferación observado en la retina se correlaciona directamente con la severidad de la pérdida de fotorreceptores. También demuestran que tanto las regiones ventral y posterior de la retina están parcialmente protegidos de daños luz. Por último, nos muestran que la combinación de una exposición ultravioleta corta seguida de un tratamiento con luz brillante constante elimina en gran medida las regiones neuroprotected, resultando en la pérdida generalizada de la barra y los conos y una sólida respuesta regenerativa a través de la retina.