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Articles by Douglas R. Mackay in JoVE
JoVE General
Zeitraffer-Imaging der Mitose Nach siRNA-Transfektion
1Department of Oncological Sciences, Huntsman Cancer Institute, University of Utah, 2Fluorescence Microscopy Core Facility, University of Utah
Hier beschreiben wir eine grundlegende Protokoll, um Bild und Quantifizierung der mitotischen Zeitpunkt der Live-Säugetier-Zellkultur-Zellen nach siRNA-Transfektion.
Other articles by Douglas R. Mackay on PubMed
Die LEF1/beta-Catenin-Komplex Aktiviert Movo1, Eine Maus-Homolog Von Drosophila Ovo Für Epidermalen Anhängsel Differenzierung Erforderlich
Ovol2, Ein Säugetier-Homolog Von Drosophila Ovo: Genstruktur, Chromosomenkartierung Und Aberrante Expression in Blinden-sterilen Mäusen
Ovol1 Regelt Meiotischen Pachytän Progression Während Der Spermatogenese Durch Unterdrückung Id2 Ausdruck
Das Maus-Ovol2-gen Ist Für Die Kraniale Neuralrohr Entwicklung Erforderlich
Die Ovo-gen-Familie eine Gruppe von evolutionär konservierte Transkriptionsfaktoren codiert und enthält Member, die stromabwärts befinden des Schlüssels Entwicklungsstörungen Signalisierung Wege wie Wg/Wnt und BMP/TGF-Beta. In der aktuellen Studie untersuchen wir die Funktion des Ovol2, einer der drei Ovo-Paralogues in den Mäusen. Wir berichten, dass Ovol2 während der Anfang-Mitte Embryogenese, besonders in der inneren Zelle Masse an E3.5, in Epiblast in E6.5 und in späteren Stadien in ectodermally abgeleiteten Geweben wie dem Ektoderm Körperabschnitt Oberfläche (epidermale) ausgedrückt wird. Embryonen, die in denen Ovol2 ablated ist weisen Letalität von E10, vor denen sie schwere Mängel, einschließlich einer offenen kraniale Neuralrohr anzuzeigen. Die neuronale defekte sind in der zugrunde liegenden Körperabschnitt axial Mesoderm und lokalisierte Veränderungen der neuronalen Marker Ausdruck entlang der dorsoventral Achse sowie mit erweiterten kraniale Nervengewebe und reduzierte kraniale Oberfläche Ektoderm, die ihren Höhepunkt in einer Verstellmöglichkeiten Rahmenseite Neuroektoderm/Oberfläche Ektoderm unsachgemäße Shh Ausdruck zugeordnet. Wir schlagen vor, diese Mängel die Einbeziehung der Ovol2 in unabhängige Prozesse wie regionalisierte Gen Ausdruck und neuronalen/nicht-neuronale ektodermale Musterung widerspiegeln. Darüber hinaus präsentieren wir Ihnen Anhaltspunkte dafür, dass Ovol2 für effiziente Migration und Überleben der Neuralleistenzellen, die sich an der Grenze des Neuroektoderm/Oberfläche Ektoderm, aber nicht für ihre Grundausbildung erforderlich. Zusammenfassend zufolge unserer Studien Ovol2 ist ein wichtiger Regulator der neuronalen Entwicklung und zeigen eine bisher unerforschte Rolle für Ovo-Gene in Säugetieren Embryogenese.
Die Nucleoporin Nup153 Hat Trennbare Rollen in Frühen Mitotischen Fortschreiten Und Die Auflösung Der Mitose
Genaue Vererbung genomische Inhalte während der Zellteilung ist synchronisierte Änderungen im Chromosom Dynamik und zelluläre Organisation abhängig. Elucidating, wie diese Ereignisse aufeinander abgestimmt sind, ist notwendig für ein umfassendes Verständnis der Zellproliferation. Zurück in-vitro-Studien haben vorgeschlagen, dass das nukleare Pore Protein Nup153 ein guter Kandidat ist für die Teilnahme an mitotische Koordination. Um zu entschlüsseln, ob dies der Fall in somatischen Säugetierzellen ist, haben wir das Niveau der Nup153 in HeLa-Zellen und überwachten Auswirkungen auf Zellwachstum reduziert. Reduktion des Nup153 bewirkte eine Verzögerung während der späten Stadien der Mitose, begleitet von einer Zunahme der ungelösten Midbodies. Erschöpfung der Nup153 eine noch niedrigere Schwelle führte zu einen ausgeprägten defekt früh in Mitose und eine Ansammlung von Zellen mit Robbenart Kernen. Obwohl globale Nucleocytoplasmic Transport unter diesen Bedingungen Erschöpfung nicht wesentlich verändert wurde, war die FG-reiche Region des Nup153 benötigt, um Mängel im späten Mitose zu retten. Somit kann dieses Motiv eine spezielle Rolle spielen, wie Zellen Mitose beenden. Rettung des Phänotyps Robbenart Kerne, war hingegen unabhängig von der FG-Domain, zwei trennbare Rollen für Nup153 in der Ausführung der Mitose erhellend.
Mängel in Nuklearen Pore-Assembly Zu Aktivierung Von Einem Checkpoint Aurora B-vermittelte Abszission Führen
Richtige Montage der nuklearen Pore-komplexe (NPCs), die direkt und indirekt nukleare Umwelt und Architektur steuern, ist lebenswichtig, genomische Verordnung. Wir fanden zuvor diesen Nucleoporin 153 (Nup 153) für rechtzeitige Fortschreiten durch späten Mitose erforderlich. In dieser Studie berichten wir, dass die Unterbrechung der Nup 153 von entweder kleine interferierender RNA-vermittelte Erschöpfung oder Ausdruck eines Dominant-Einmischung Nup 153 Fragment führt zu dramatischen mistargeting der Pore Korb Komponenten Tpr und Nup 50 in Midbody-Bühne-Zellen. Wir finden eine gleichzeitige Darstellung von abnorm lokalisierte aktiven Aurora B und eine Verzögerung der Aurora B-abhängige in Abszission. Erschöpfung der Nup 50 reicht auch die Zahl der Midbody-Bühne-Zellen und löst ebenso unverwechselbaren Mislocalization des Aurora B. Together, unsere Ergebnisse legen nahe, dass Mängel in nuklearen Pore Assembly und speziell die Basket-Struktur, in dieser Zeit des Zellzyklus aktivieren ein Aurora B-vermittelte Abszission-Checkpoint, um sicherzustellen, dass die Tochterzellen generiert werden, nur, wenn vollständig geformtes NPCs vorhanden sind.
Koordinierung Der Postmitotischen Nukleare Pore Komplexe Montage Mit Abszission Timing
Zellen teilen und genau erben genomische und zelluläre Inhalt durch synchronisierte Änderungen in zelluläre Organisation und Chromosom Dynamik. Obwohl DNA Trennung, nukleare Reformation und Zellteilung/Abszission zeitlich überlappen, ist wenig bekannt über wie diese unterschiedliche Ereignisse um sicherzustellen korrekte Zellteilung koordiniert werden. Vor kurzem fanden wir diese Unterbrechung der postmitotischen nukleare Pore komplexe Montage, ein wesentlicher Aspekt der neu bilden Kernhülle, Trigger eine Aurora B abhängige Verzögerung bei Abszission. Diese Verzögerung zeichnet sich weiter durch mislocalized, abnorm aktive Aurora B im Zytoplasma der Zellen Midbody-Bühne. Diese Ergebnisse unterstützen ein Modell, in dem ein Aurora B-vermittelte Abszission Checkpoint bietet Überwachung der nuklearen komplexe Porenbildung, um sicherzustellen, dass die Elemente der nuklearen Architektur vollständig gebildet werden, bevor die Tochterzellen physisch getrennt sind. Hier besprechen wir den Prozess nukleare Pore komplexe Baugruppe, beschreiben mögliche Mechanismen, die erklären könnte, wie dieser Prozess könnte koordiniert werden mit Abszission und Postulat, warum solch ein Checkpoint-Mechanismus kann vorhanden sein.
