Translate this page to:
German
In JoVE (1)
Other Publications (2)
Automatic Translation
This translation into German was automatically generated.
English Version | Other Languages
Articles by Elly Sinkala in JoVE
JoVE General
Herstellung und Betrieb eines Oxygen Insert für adhärente Zellkulturen
Bioengineering, University of Illinois
Herstellung und Validierung eines Add-on-Plattform, die eine verbesserte Kontrolle über die räumliche und zeitliche Sauerstoffzufuhr in ein 6-Well-Platte bietet. Das Gerät lässt sich an einer Reihe von Kultur-Systeme und kann verwendet werden, um die Wirkung von Sauerstoff auf die Wundheilung zu untersuchen.
Other articles by Elly Sinkala on PubMed
Sauerstoff Empfindliche Inkubation
Sauerstoff Spannung ist wichtig in einer Reihe von Zelle Wege aber wird oft übersehen, in der Zellkultur. Ein Grund hierfür ist die Schwierigkeit bei der Modulierung und Bewertung von Sauerstoff Spannungen ohne zu stören die Kulturbedingungen. Dazu wurde eine einfache Methode zum Generieren von sauerstoffempfindliche Inkubation entwickelt, durch Prägung, Polystyrol (PS) und platinum(ii)-Octaethylporphyrin-Keton (PtOEPK)-Dünnschichten. Zusätzlich zur Überwachung der Sauerstoff-Spannung, waren Inkubation beschäftigt, um einheitliche Clustern von Zellen in Vertiefungen zu isolieren. Die Tiefe und Breite des die Vertiefungen adaptierbar verschiedener experimenteller Parameter leicht durch Ändern der Dünnschicht-Verarbeitung oder Prägung Stempel Geometrien. Das dünne Sauerstoff-sensible Microwell-Substrat ist auch kompatibel mit hoher Vergrößerung Modalitäten wie konfokale Bildgebung. Die Einbeziehung der Sauerstoffsensor in die Vertiefungen produziert Messungen der Sauerstoff Spannung nahe der Zellenoberfläche. Sauerstoff empfindliche Inkubation waren kalibriert und zur Überwachung der Sauerstoff-Spannungen von Madin Darby Canine Nierenzellen (MDCKs) kultiviert bei hohen und niedrigen dichten als Proof of Concept. Wells 500 µm Durchmesser mit durchschnittlich 330 Zellen ausgesät ausgestellt ein Sauerstoff-Niveau von 12,6 %, während die Brunnen mit einem Durchschnitt von 20 ausgesät Zellen pro Well ausgestellt ein Sauerstoff-Niveau von 19,5 %, 35,7 % Unterschied. Diese Plattform stellt ein neues Tool zur Kultivierung von Zellen in Vertiefungen in einem Format, das für hohe Vergrößerung Bildgebung während der Überwachung des Sauerstoff-Status der Kultur Medien zugänglich.
Sauerstoff-Gradienten Für Offene Gut Zelluläre Kulturen über Mikrofluidische Substrate
Steuern der Sauerstoffkonzentration auf Microscale Ebene kann experimentelle Untersuchungen betreffend, oxidativer Stress, Ischämie und reaktive Sauerstoff Spezies (ROS) vermittelten zellulären Wege profitieren. Hier berichten wir über die Anwendung der Microfluidic gradient Generation in einem öffnen-Well-Kultur-Modell, in dem ein Gefälle von Gas über Diffusion durch eine Gas-durchlässigen Substrat geliefert wird, die Zellen von der Gas-Mikrokanälen unten trennt. Mit Verbreitung um Sauerstoffzufuhr zu lokalisieren, kann Microgradients der Sauerstoffkonzentrationen rasch und Seilbremsen angewendet werden ohne Zellen, mechanische Belastungen auszusetzen oder Kultur-Bände in mikrofluidische Kultur Kammern zu reduzieren. Darüber hinaus zeigen wir die Modulation der intrazellulären ROS-Ebenen in Madin Darby Canine Kidney (MDCK) Zellen durch diese Sauerstoff-Microgradients anwenden. Die Anstiege in einem ROS mit oxidativem Stress und Hypoxie Forderungen wurden in MDCK-Zellen. Die gemessenen ROS-Zuwächse waren vergleichbar mit 100 MicroM-Wasserstoffperoxid-Exposition in einem Steuerelement-Vergleich, die innerhalb des Bereichs von Standardmethoden der ROS-Induktion ist. Inkubation mit 200 MicroM Vitamin C konnte die ROS-Reaktion auf Hypoxie demodulieren und Hyperoxic Forderungen. Durch die Bereitstellung mikrofluidische kontrolliert Farbverläufe, konstanter ROS-Exposition und ein Scheren-freie offene gut Design, verbessern die Geräte eingeführt hier stark auf Sauerstoff basierenden culturing Standardmethoden.
