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Articles by Jerome W. Breslin in JoVE
JoVE General
GFP - 굴지 표현 라이브 내피 세포 굴지의 Cytoskeleton 연구
Department of Physiology, Louisiana State University Health Sciences Center
GFP - 굴지 표현 라이브 내피 세포의 미세 영상은 cytoskeletal 구조에서 동적 변화 특성화 수 있습니다. 고정 표본을 사용하는 기술과는 달리,이 방법은 전에 동일한 세포에있는 굴지의 cytoskeleton의 시간적 변화에 대한 자세한 평가, 동안 다양한 물리적, 약리, 또는 염증성 자극 후를 제공합니다.
JoVE Immunology and Infection
Cytosolic CA의 측정 2 + 절연 수축성 Lymphatics에
Department of Physiology, School of Medicine, Louisiana State University Health Sciences Center
우리는 cytosolic CA를 평가하는 접근 방법을 소개합니다
Other articles by Jerome W. Breslin on PubMed
P42/44MAPK 규제 기준 투과율과 내 피 세포에서 CGMP 유도 Hyperpermeability
우리는 가설을 p42/44MAPK 및 p38MAPK 테스트 (물질 활성화 단백질 kinases; MAPK) 신호 경로 고분자를 내 피 세포 투과율을 조절. 통로 2-4 인간의 탯 줄 정 맥 내 피 세포 (HUVEC) Snapwell 막 fibronectin 코팅에 합류로 성장 했다. Fluorescein isothiocyanate 표시 된 dextran-70 HUVEC monolayers에 걸쳐 플럭스 침투성을 확인 제공. 1 M m 8-브로 모 응용 3' 5'-주기적 guanosine monophosphate (8-Br-cGMP) 1.6 x 10(-6) + 7.0에서 2.8 x 10(-6) cm/s ± 12.5에 침투성 증가 (P < 0.05). 선택적 p42/44MAPK 억제제와 함께 60 분에 대 한 HUVEC의 전처리 (AG126 2.7 27 Microm에서) 차단 8 Br cGMP 유도 hyperpermeability. 그러나 p38mapk의 저해 (sb203580에서 0.6 microM) cGMP 유도 hyperpermeability 응답에 영향을 주지 않았다. AG126, 27 Microm에서 관리 5.9 10(-6) cm/s x 0.5 + 0.5 x 10(-6) + 7.9에서 초기 투과율 감소 (P < 0.05). 우리의 결과 p42/44MAPK 통로 초기 투과율 및 cGMP 유도 hyperpermeability 규정에 중요 한 신호를 나타냅니다.
VEGF ERK-1/2과 산화 질소와 관련 된 별도 신호 경로 의해 내 피 침투성을 증가 시킵니다
VEGF ERK-1/2 MAPK 경로 활성화 하 여 고분자를 내 피 hyperpermeability을 조절 하는 가설을 테스트 했습니다. 우리는 또한 테스트 PKC 및 산화 질소 (NO) 침투성 ERK-1/2 통로 통해 VEGF 유발 증가 중재 여부를. 반면에 서양 몰아내고 침투성, 인덱스를 역임 인간의 탯 줄 정 맥 내 피 세포 monolayers에 걸쳐 FITC Dextran 70 플럭스 평가 ERK-1/2의 인 산화. VEGF 유도 hyperpermeability 센스 DNA oligonucleotides ERK-1/2에 대 한 감독 및 MEK 및 영국 공군 1 활동 (20 microM PD 98059, 5 microM GW-5074) 봉쇄에 의해 저해 되었다. 이러한 차단 에이전트는 또한 ERK-1/2 인 산화를 감소. 난 (10 microM) VEGF 유도 된 ERK-1/2 활성화 및 hyperpermeability 차단 PKC 억제제 bisindolylmaleimide. NO synthase (NOS) 억제제 N (G)-니트로-l-아르기닌 메 틸 에스테 르 (200 microM) NO 폐품 2-phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidiazoline-1-oxyl-3-oxide (100 microM) 폐지 hyperpermeability VEGF 유발 하지만 ERK-1/2 인 산화를 차단 하지 않았다. 이러한 관측 VEGF 유도 hyperpermeability NOS PKC의 활성화를 포함 보여 영국 공군 1, MEK, 및 ERK-1/2. 또한, 우리의 데이터 ERK-1/2 및 NOS VEGF 유도 hyperpermeability에 다른 신호 경로 요소는 것이 좋습니다.
Rhoa와 노 니 내 피 Hyperpermeability Neutrophil 자극에 참여
Microvascular 누설 neutrophil 유발 허 혈 성 및 염증 성 심장 질환에서 초기 이벤트입니다. 호 중구 microvascular 침투성을 증가 하는 특정 신호 패러다임 아직 설정 되지 않습니다. 우리는 작은 GTPase RhoA 및 다운스트림 이펙터로 니 그 내 피 hyperpermeability neutrophil 자극 중재 여부 조사. 우리는 Rho GTP 풀 다운 분석 결과와 소 관상 venular 내 피 세포 (CVEC)로 활동에 호 중구의 영향을 평가. FITC 알 부 민을 침투성 CVEC monolayers를 사용 하 여 평가 되었습니다. 다음 두 개의 구조적으로 독특한 약리 억제제를 사용 하 여 호 중구에 대 한 투과율 응답에서 노 니의 역할 테스트: Y-27632 및 HA-1077을 밝혔다. 또한, 내 피 F 말라 조직 변화 neutrophil 자극을 형광 현미경으로 조사 했다. 결과 C5a 활성화 neutrophils 침투성 CVEC에 RhoA 활성화와 결합의 증가 유발 합니다. Y-27632 또는 HA-1077로 니의 저해 hyperpermeability 응답 감쇠. Rho kinase 저해 또한 침투성 호 상쾌한 자극된에 증가 감쇠. 또한, 활성화 된 호 중구 Y 27632 또는 HA-1077 감소는 CVEC에서 말라 스트레스 섬유 형성을 발생 합니다. 이러한 연구 결과 RhoA 및 노 니 내 피 말라 neutrophil 유도 조직 개편 및 장벽 기능 장애의 중재에 관련 된 것이 좋습니다.
혈관 내 피 성장 인자 차동 신호 경로 Vivo에서 미세 혈관을 자극
혈관 내 피 성장 인자 (VEGF) microvascular 침투성에 가벼운 엷게 하 고 강한 증가 유도합니다. Intravital 현미경 검사 법 및 디지털 통합된 광 강도 이미지 분석을 사용 하 여, 우리는 테스트, 햄스터 뺨 주머니 microcirculation 가설 arterioles 및 venules 차동 신호 경로 혈관 직경 및 투과율 제어 생체 조건 규제 메커니즘을 나타냅니다. 실험 설계 포함 된 특정 신호 분자 하 고 동시에 평가 arteriolar 직경 및 FITC Dextran 150 microvascular 전송 VEGF 유도 된 변화를 차단 합니다. (Bisindolylmaleimide)와 [phosphatidylinositol 3-LY 294002 또는 wortmannin 키]를 통해 간접적으로 Akt의 PKC 억제 감소 VEGF 유도 hyperpermeability. 그러나, phosphatidylinositol 3-kinase/Akt 저해 초기 위상 강화 및 PKC 차단 효과가 없 었 반면 VEGF 유도 vasodilation의 후반 단계를 감쇠. 억제의 세포 외 신호 통제 키 니 아 제 (ERK)-1/2 (와 PD 98059 또는 AG 126) 또한 VEGF 유도 hyperpermeability 감소 하지만 VEGF 유도 엷게 차단 하지 않았다. (와 N(omega)-monomethyl-l-arginine) 저해 침투성 및 직경의 변화를 VEGF 유도 내 피 산화 질소 synthase의 봉쇄. 또한, 인간의 탯 줄 정 맥 내 피 세포와 면역 형광 검사 연구 bisindolylmaleimide, PD 98059, 및 l NMMA 감쇄 혈관 내 피 cadherin 개편 VEGF 유도 밝혀. 우리의 데이터는 1 보여) 내 피 산화 질소 synthase arteriolar 직경 및 microvascular 침투성; VEGF 유도 된 변화에 대 한 일반적인 수렴 통로 이다 2) PKC와 ERK-1/2 햄스터 뺨 주머니 microcirculation;에 엷게 VEGF 유발에 중요 한 역할을 재생 되지 않습니다. 고 3) Akt, PKC, ERK-1/2은 microvascular hyperpermeability VEGF 자극을 조절 하는 신호 캐스케이드의 요소. 우리의 데이터 microvascular 역학 VEGF 자극 규제 단계로 차동 시그널링에 대 한 증거를 제공 합니다.
PKC 종속, 화상을 이용한 Adherens 접합 개편 및 장벽 부전 폐 Microvascular 내 피 세포에서
쥐 폐 microvascular 내 피 세포 monolayers 1:3 희석 30 분 면역 형광 분석에 대 한 공개 변경 adherens 접합 (에) 단백질 베타-catenin에 혈관 내 피 cadherin 보인 갭 형성을 수 반하는 구운된 쥐 (25% 몸 전체 표면적)에서 기증자가 플라즈마에 노출 했다. 이러한 구성 요소 모두 치료 되지 않는 셀에 셀 주변에 부드러운, 균일 한 배치에 표시 했다. 그러나, 플라즈마 점화에 노출 되 면이 균일 잃었다 고에 단백질 세포의 가장자리에 교란, 지퍼 같은 패턴을 보였다. 또한, 이러한 단백질이 결 석 했다 격차의 영역에서 셀, 셀에 걸쳐 punctate 얼룩 증가 사이 형성 제안 그들은 플라즈마 점화에 대 한 응답에서 내 면 되었다. Transendothelial 전기 저항 및 셀 단층에 걸쳐 FITC 알 부 민 속 측정 장벽 무결성을 평가 하기 위해 사용 되었습니다. 우리의 연구는 급속 하 게 전기 저항 감소 confluent monolayers와 알 부 민 유량 증가, 장벽 기능 장애와 관련 된 현상에서 발생 하는 플라즈마 점화에 노출 발견. 또한, PKC 화상 유발 폐 내 피 기능 장애에 대 한 필요 하다는 제안 PKC 억제제 bisindolylmaleimide와 셀 pretreated 했다 때 플라즈마 구울 모든 위의 응답 감쇠 했다.
혈당 Pi3k를 Akt 신호 및 리드 내 피 세포 증식 기능 장애
당뇨병 mellitus 혈관 합병증의 개발을 위한 주요 위험 요소 이다. 혈당 감소 내 피 세포 (EC) 확산 및 phosphatidylinositol 3-키 니 아 제 (PI3k) 및 Akt 경로 신호를 통해 생존 가설을 세웠다. 우리 인간의 탯 줄 정 맥 ECs (HUVEC)에서 5, 20, 또는 40 m m d-포도 경작. 5, 20, 40 M m 마 니 톨에서 성장 세포 삼 투 효과 위한 컨트롤을 역임 했습니다. 15 일에 대 한 EC 확산을 측정 했습니다. 우리 V 및 propidium 요오드 화 얼룩 및 흐름 cytometry annexin 의해 apoptosis를 평가, 셀 lysates 서쪽 오 점 분석 하 여 총 phosphorylated PI3k 및 Akt 문화 날 8 가져온 그리고 Akt 키 니 아 제 활동 GSK 융해 단백질을 사용 하 여 측정 분석. HUVEC 확산 약리 억제제 constitutively 활성 Akt 돌연변이와 transfection 전후 PI3k-Akt (wortmannin 및 LY294002)의 존재 또한 시험 되었다. 5 M m d-포도 당 (컨트롤)을 포함 한 미디어의 Ecs에 7-10 일 로그 위상 성장 전시. d-포도 당 20와 40 Mm에서 크게 확산 제어 대 감소 (P < 모두 0.05), 반면 마 니 톨 EC 확산을 손상 하지 않았다. Apoptosis HUVEC 40 m m d-포도 당에 노출에 크게 증가 합니다. d-포도 당 40 m m 크게 감소 하는 티로신 phosphorylated PI3k, 트레오닌 308-phosphorylated-Akt, 고 Akt 활동 상대 5 m m d-포도 당을 제어. PI3k Akt의 약리 저해 EC 확산 복용량 의존 감소 귀착되 었 다. Constitutively 활성 Akt 돌연변이와 transfection 확산 성장 20 및 40 m m d-포도 당을 강화 하 여 Ecs를 보호. 우리 d-포도 당 조절 Akt Akt의 트레오닌 인 산화를 통해 신호 결론 혈당 장애가 그 PI3k Akt 신호 EC 증식 부전 당뇨병에 홍보할 수 있습니다.
Microvascular 누설 Neutrophil 자극에 내 피 긴장 바위 중재 개발의 참여
Neutrophil 유도 관상 microvascular 장벽 부전은 심장 질환에서 중요 한 pathophysiological 행사. 현재, microvascular 누설 neutrophil 유도의 정확한 세포 및 분자 메커니즘이 명확 하지 않습니다. 이 연구의 목적은 그로 키 니 아 제 (바위) 증가 관상 동맥 venular 침투성 높은 내 피 긴장 협회 가설을 테스트 하는. 우리 알 부 민 (관상 동맥 venules 격리 된 돼지와 관상 venular 내 피 세포 (CVEC) monolayers p(a))에 침투성을 평가. 내 피 장벽 기능 또한 CVEC monolayers의 transendothelial 전기 저항 (TER)을 측정 하 여 평가 되었습니다. 동시에 콜라겐 젤에 성장 하는 Cvecs의 아이소메트릭 장력을 측정 했습니다. Constitutively 활성의 전이 (ca)-록 격리 된 관상 venules 또는 CVEC monolayers p(a)에 상당한 증가 원인 단백질과 TER Cvecs에서 감소. 록 억제제 Y 27632 ca 록 유도 변경 차단. C5a 활성화 neutrophils (10(6)/ml) 또한 상당히 높은 복용량에 독립적으로 Y 27632와 구조적으로 뚜렷한 바위 억제제, H 1152에 의해 저해 되었다 venular P(a). CVEC monolayers는 Y 27632 또는 H 1152 저해 했다 isometric 긴장에 수 반하는 상승으로 호 중구 증가 침투성 활성화. Ca 록 치료 또한 크게 증가 CVEC 단층 침투성 및 아이소메트릭 긴장, 말라 함께 중 합과 myosin 규제의 상승 된 인 산화 빛이 Thr18/ser19에 체인. 데이터 호 인증 하는 동안 락 내 피 세포에 긴장 말라 myosin 중재 개발 협회 microvascular 누설을 촉진 것이 좋습니다.
Rho와 락 VEGF 유도 Microvascular 내 피 Hyperpermeability에서 시그널링
혈관 내 피 성장 인자 (VEGF) microvascular 침투성 다양 한 생리 적 및 병 적인 조건 하에서 규칙에 있는 중요 한 역할을 한다. 저자는 작은 GTPase Rho와 그것의 다운스트림 이펙터 락 (Rho 관련 코일-코일-포함 된 단백질 kinase) venular 침투성에 VEGF 유발 증가 중재 가설 테스트. 그들은 또한 myosin 빛 체인 (MLC) 인 산화 및 말라 합 내 피 장벽 기능 규정에 연루로 락 통로의 두 well-characterized 대상 조사.
혈관 내 피 성장 인자 C VEGF 수용 체 3 종속 메커니즘에 의해 림프 펌프를 자극 한다
혈관 내 피 성장 인자 (VEGF)-C lymphangiogenesis;에 중요 한 역할을 한다 그러나, 림프 혈관의 VEGF C 응답 추가 기능 하지 특징 되어 있다. VEGF 수용 체 (VEGFR)-3의 VEGF C 유도 된 활성화 림프 펌프 출력 증가 가설을 테스트 했습니다. 우리 쥐 mesenteric 수집 lymphatics 기저 상태에 있는 동안 고 1 nM 재조합 선택적 VEGFR 3 길 항 제 VEGF Cys (156) Ser 돌연변이 VEGF C와 함께 치료 하는 동안 intravital 현미경 검사 법을 사용 하 여 in vivo 펌프 활동 검사 (C156S; 1 nM), 또는 0.1 nM VEGF-. 특정 응답도 MAZ 51 VEGFR-3의 선택적 저해 하는 동안 분석 했다. 수축 주파수, 끝 확장기 직경, 끝 수축 기 직경, 스트로크 볼륨 인덱스, 펌프 흐름 인덱스 및 방출 분 율 평가 했다. Arteriolar 지름 및 microvascular 넘쳐 흐름 FITC 알 부 민의 평가. 모두 VEGF C VEGF C156S 크게 증가 수축 주파수, 끝 확장기 직경 볼륨 인덱스, 뇌졸중과 시간에 따른 방식으로 흐름 인덱스를 펌프 하는 결과 보기. VEGF A 치료의 30 분 후 크게 증가 뇌졸중 볼륨 특징 다른 응답을 발생 합니다. MAZ-51 (5 엄마) 토 닉 수축이 발생 하 고 수축 빈도 감소. 또한, 0.5와 5 엄마 MAZ 51 림프 펌프 활성화 C VEGF와 VEGF-C156S-유도 감쇠. VEGF A C VEGF와 VEGF c156s는 크게 arteriolar 직경 변경 되지 않은 반면 arterioles, 엷게를 발생 합니다. 또한, VEGF와 VEGF C에는 VEGF C156S 않 았 반면 microvascular 침투성을 증가 발생 해야 합니다. 우리의 결과 VEGF C VEGFR 3를 통해 림프 펌핑 증가 입증. 또한, microvascular hemodynamics 변화 VEGFR 3 중재 림프 펌프 작업 변화에 대 한 필요 하지 않습니다.
긴 체인 Myosin 빛 체인 키 (MLCK-210) 심각한 화상 동안 Microvascular Hyperpermeability에 대 한 역할
Microvascular 누설 외상 중 여러 장기 부전의 병 인에 연루 되어있다. 이전 연구 myosin 빛 체인 (MLC) 인 산화 트리거 내 피 수축 microvascular hyperpermeability의 개발에의 참여를 권해 드립니다. MLC-인 산화 상태; 제어에서 myosin 빛 체인 키 니 아 제 (MLCK)은 중요 한 역할 따라서, 세포내 수축 기계는 레 귤 레이 션을 통해 장벽 기능 변조 생각 된다. 이 연구의 목표는 더 이상 화상, 혈관 내 피 세포에서 표현 하는 주된 isoform으로 최근 확인 (MLCK-210) MLCK의 긴 isoform에 초점을 맞추고에 MLC 종속 장벽 부상의 내 피 메커니즘을 조사 했다. MLCK-210 녹아웃 마우스 모델은 3도 scald 굽기 25% 총 신체 표면적 취재의 대상. Intravital 현미경 검사 법을 사용 하 여 mesenteric 미세 혈관을 관찰 하 고 microvascular 침투성 fluorescein isothiocyanate-알 부 민 transvenular 유량을 측정 하 여 평가 되었다. 별도 실험에서 생체 조건 mesenteric 유압 전도도 (Lp) 수정된 랜디 스 기술을 사용 하 여 측정 했다. 부상 이었던 24 시간 기간 내에 높은 사망률과 관련 된 알 부 민 유동적에서 2-fold 증가 및 초기 단계에서 Lp 4-fold 증가 의해 표시 된 대로 깊은 microvascular 누설을 발생 합니다. 야생-타입 컨트롤에 비해, MLCK 210 불충분 한 쥐 알 부 민 및 유체는 크게 감쇠 microvascular hyperpermeability 응답을 크게 향상 된 생존 표시. 이러한 결과 중재 microvascular 장벽 화상 유발 부상에서 MLCK-210의 역할에 대 한 직접적인 증거를 제공 하 고 화상 부 종 치료에 잠재적인 치료 대상으로 MLCK-210의 유효성을 검사.
당뇨병과 인슐린 저항에 Microvascular 침투성입니다
Microvascular 장벽 부상 개시와 당뇨병 mellitus의 최종 장기 합병증의 진행 상황에 연루 되어있다. 플라즈마 누설 및 액체 유지 볼 수 있습니다 당뇨병 환자 또는 동물의 다양 한 조직에서 질병의 초기 단계에서 구조 microangiopathy를 감지할 수 있습니다 전에. 임상 및 실험 증거 종종 인슐린 부족 이나 인슐린 저항, 함께 그의 혈당 증 원인과 장애 autoregulation 침투성을 증가 microvessels에서 나왔다. 산화 스트레스를 촉진 증가 폴리올 플럭스를 포함 하 여 변경 된 유체 항상성 참여자 고급 glycation carbonyl 스트레스와 과도 한 포도 당 대사는 단백질 키 니 아 제 C 활성화 하는 여러 분자 경로 확인 되었습니다. 이러한 비정상적인 대사 활동 성장 인자 신호 반응 및 내 피 방 벽에서 구조적 변화를 자극 하 고 궁극적으로 microvascular 누출을 일으킬 수 있는 프로 염증 성 cytokines의 생산에 연결 됩니다. 이러한 대사 및 염증 경로 조작 하는 개입 당뇨병 microvascular 합병증;의 진행 지연에 효능 입증 그러나, 그들의 직접적인 효과는 미세 혈관에 행동의 메커니즘 애매 남아 있다. 내 피 장벽 당뇨병 유발 장애의 분자 기준의 깊은 이해가 만성 쇠 약 질병 과정을 치료 하는 새로운 치료 목표의 개발을 위한 프레임 워크를 제공 합니다.
내 피에서 파생 된 매트릭스 Metalloproteinase-2 내 피 지하실 막 장벽 가로질러 유 방 암 세포 환생에 대 한 역할
침 윤 성 암 세포 활용 매트릭스 metalloproteinases (MMPs) 세포 외 기질과 전이 과정에서 지하실 막 저하. MMP 가족의 여러 구성원 간에 gelatinase MMP 2 개발 및 악성 종양의 보급에 연루 되어있다. 그러나, MMP 2 및 전이성 넘쳐 흐름에 미치는 영향의 셀룰러 소스 있다 하지 되었습니다 잘 특징입니다. 이 연구의 목적은 microvascular 장벽을 가로질러 유방암 세포의 환생을 촉진 활성 MMP-2 내 피 세포에서 파생 된 가설을 테스트 하는. 젤라틴 zymography MDA-MB-231 인간 유방암 세포, 인간의 폐 microvascular 내 피 세포 (HLMVEC) 및이 두 세포의 co-culture에서 바른된 미디어에 잠재 하 고 적극적인 MMP-2 생산을 평가 하기 위해 사용 되었다. Transmigrated 암 세포는 siRNA 및 OA HY MMP 활동의 약리 저해 MMP 2 최저 동안 측정 했다. MDA-MB-231 셀에 낮은 수준의 생산 본 반면 결과 일관 된 MMP 2 분 비는 Hlmvecs로 나타났다. MMP-2 식 또는 Hlmvecs에서 활동의 저해 크게 재구성된 지하실 막에서 자란 내 피 단층 장벽을 가로질러 MDA-MB-231 셀의 환생을 감쇠. 데이터 암 셀 넘쳐 흐름을 홍보에 Mmps의 내 피 생산에 대 한 잠재적인 역할을 지 원하는 증거를 제공 합니다. 악성 세포와 혈관 내 피 포함 하 여 peritumoral 양성 조직 간의 상호 작용 규제 종양 내 습 및 전이에 중요 한 메커니즘으로 사용할 수 있습니다 하는 것이 좋습니다.
VEGF C VEGFR 3 종속 메커니즘을 통해 경작된 한 림프 내 피 세포의 장벽 기능을 변경합니다
림프 endothelium 중간 공간에서 림프를 분리 하면 중요 한 반 투과성 방 벽 이다. 그러나, 현재는 림프 내 피 방 벽의 제한 된 이해 하 고 림프 형성의 메커니즘입니다. 이 연구의 목표 했다 림프 내 피 세포 장벽 규제의 잠재적인 적극적인 역할을 조사 하 고 테스트 여부를 내 피 세포 agonists VEGF와 VEGF C 수 림프 내 피 장벽 기능 변경.
VE Cadherin 및 내 피 Hyperpermeability 히 스타 민 유발 하는 동안 베타-catenin 바인딩 역학
베타-catenin 복잡 한 VE cadherin 접합 된 cytoskeleton에 연결 하 여 혈관 내 피 세포-세포 유착 규제 장벽 기능에에서 중요 한 역할을 한다. 이 연구의 목적은 염증 성 자극 하는 동안 히 스타 민에 의해 베타-catenin 및 내 피 침투성에 VE cadherin 상호 작용의 효과 평가 했다. 우리는 먼저 경쟁 VE cadherin 체 외에 베타-catenin 바인딩 베타-catenin 및 T 셀 팩터 (ICAT) 억제제로 알려진 베타-catenin 바인딩 polypeptide 능력 평가. 우리는 다음 재조합 플래그-ICAT 인간의 탯 줄 정 맥 내 피 세포 (HUVECs)에 셀 유착에 의해 제어 하는 내 피 장벽 기능에 미치는 영향을 연구에 overexpressed. Transendothelial 전기 저항 (TER)과 알 부 민 (동일한 조건 하에서 p(a))에 명백한 투과율의 측정 함께 히 스타 민으로 자극 전후 VE cadherin에 베타-catenin의 바인딩 계량 했다. ICAT 베타-catenin에 바인딩된 및 경쟁적으로 저해 농도 의존 방식으로 베타-catenin에 VE cadherin 세포질 도메인의 바인딩 결과 보여주었다. 변경 되지 않은 TER P(a);에 의해 표시 된 대로 플래그 ICAT의 내 피 세포 monolayers에 overexpression 그들의 기저 침투성 속성 미치지 않 았 어 그러나, 크기와 TER에 히 스타 민 유발 감소의 기간 크게 증강 했다. 마찬가지로, 히 스타 민 존재 P(a) 증가 악화 되었다. 플래그 ICAT overexpression 또한 크게 감소 베타-catenin 관련 된 VE cadherin 수준을 다음과 같은 히 스타 민 자극. 함께 찍은, 이러한 데이터 히 스타 민 같은 염증 성 에이전트 일시적이 고 가역 베타-catenin 및 내 피 침투성 상승 하는 동안 VE-cadherin 사이의 바인딩 중단 일으킬 것이 좋습니다.
수용 체 통행세 같이 4 열 부상을 Microvascular 염증 및 장벽 기능 장애에 기여 한다
체계와 microvascular 염증 감염, 패 혈 증, 외상 성 부상 후 여러 기관 실패의 개발에서 핵심적인 역할을 하고있다. 수신자 같은 수용 체 (TLRs) 호스트 응답 병원 균 및 살 균, 부상 관련 선 동적인 응답을 조절. 우리 열 상해 취 야생-타입에 생체 조건 동안 microvascular 기능 장애에 기여 하는 TLR-4 여부 TLR-4 (-/-) 쥐 중 25% 몸 전체 표면적 전체-두께 받는 데 굽기 또는 가짜 치료 등 피부에 조사. Intravital 현미경 검사 법을 사용 하 여, 우리 화상 상처에서 원격 사이트에 splanchnic 미세 혈관의 대표로 mesenteric microvasculature의 hemodynamics 및 백혈구 역학 평가. Fluorescein isothiocyanate-mesenteric venules에서 알 부 민 transvascular 유동 microvascular 침투성의 지표로 서 측정 되었다. 또한, 교양 microvascular 내 피 세포 모델 TLR 4 중재 장벽 기능 장애에 관련 된 내 피 관련 메커니즘을 평가 하는 데 사용 했다. 결과 나타났다 크게 상승된 microvascular 침투성 야생-타입 마우스의 화상, 후 반면이 응답은 현저히 감쇠 TLR-4 (-/-)에 쥐. 화상 부상 야생-타입 마우스의 mesenteric venules에서 백혈구 접착 력 증가 및 무딘된 백혈구 응답 TLR 4 쥐에 보였다. 굽기 플라즈마와 내 피 세포 monolayers의 치료 유도 전기 휴대폰 기판 임피던스 감지 하 여 측정, 내 피 세포-세포 접착 장벽 부전을 나타내는 transendothelial 전기 저항에 신속 하 게 감소 된다. 이 응답 감쇠 siRNA 치료 TLR-4의 식을 줄이고. 함께 찍은, 이러한 데이터 표시 TLR-4 nonseptic 열 상해와 관련 된 염증 성 조건 microvascular 누설 및 백혈구 접착에 중요 한 역할을 한다.
림프 내 피 세포 전단 응력의 변화에 대 한 응답에서 장벽 기능 그들의 적응
림프 내 피 세포는 중요 한 장벽을 정상적인 림프 형성 및 추진에 필요한 양식. 그러나, 작은 림프 혈관 내에서 어떻게 물리적인 힘에 대 한 내 피 장벽 기능에 영향을 미칠 알려져 있다. 이 연구의 목적은 류 림프 내 피 장벽 기능에 미치는 영향의 특성 및 내 피 세포 장벽 기능을 향상 시키기 위해 세포내 말라 cytoskeleton 활성화 하 여 흐름 변화에 대응 하는 여부를 테스트 하는.
아니 캐스케이드, 노스, 장소와 Microvascular 침투성
산화 질소 (NO) 캐스케이드 및 내 피 NO synthase (eNOS) 그들의 역할에 혈관 부드러운 근육의 이완 endothelium 중재에 대 한 가장 잘 알려져 있다. 정품 인증 향상 된 없고 특정 염증 성 자극에 의해 노스의 출시 또한 홍보 microvascular 침투성을 증가 표시 되었습니다. 그러나, 그것은 완전히 명확 microvascular 침투성, 아 세 틸 콜린, 처럼 vasodilatory 특정 에이전트에 의해 Enos의 활성화에 영향을 주지 않습니다 왜 증가 침투성, 다른 염증 성 에이전트 Enos의 활성화 같은 혈소판을 활성화 하는 반면 요소, 엷게 발생 하지 않습니다. 이 검토 eNOS microvascular 침투성 상승에서의 역할을 보여 주는 증거를 다루겠습니다. 우리는 또한 노스 인 산화 및 홍보 뿐만 아니라 신흥이 노스 및 microvascular 침투성 규제 항목으로 높은 microvascular 침투성 기능 지역화의 상대적 중요도 검사 합니다.
Mesenteric 수집 림프 펌프 기능 따라 급성 알코올 중독의 적응
급성 알코올 중독 잠재적으로 점 막 면역에 영향을 미치는 알 수 없는 메커니즘에 의해 창 자 림프 흐름을 증가 시킵니다. 향상 된 내장 펌프 기능 mesenteric lymphatics의 가설 테스트 알코올 중독 동안 증가 창 자 림프 흐름에 기여 한다.
바위와 캠프 림프 내 피 세포 장벽을 무결성을 홍보 하 고 히 스타 민 및 트 롬 빈을 이용한 장벽 부전 변조
염증 신호 림프 혈관 침투성을 조절할 수 있지만 림프 내 피 장벽 기능을 조절 하는 메커니즘의 현재 이해는 제한 된 최근의 증거가 이다. 이 연구의 목적 1) 조사 여부 microvascular 침투성 증가 염증 성 중재자도 하 고 림프 내 피 세포 monolayers의 장벽 장애를 일으킬 2) 세포 접합 및 세포 수축 림프 내 피 장벽 기능에 영향을 주는 신호 통로의 역할을 확인 했다.
ISG15 Cytoskeletal 건축을 방해 하 고 인간의 유방암 세포에 운동 성을 촉진
인터페론을 자극 진 15 (ISG15) 통로 매우 높은 유 방 암; 그러나, 거의 ISG15 통로 유 방 tumorigenesis에 기여 하는 방법에 대 한 알려져 있다. 현재 연구에서 우리는 보여주는 유전자 장애 방식을 사용 하 여 ISG15 및 UbcH8 (ISG15-특정 효소 어근) F 말라 건축과 초점 유착 ZR-75-1 유 방 암 세포에서의 형성을 방해 합니다. 또한, ISG15 및 UbcH8 유 방 암 세포 마이그레이션 추진. 우리는 또한 ISG15 유비퀴틴/26S 프로테아좀 중재 회전율 종양 세포의 운동 성, 침략 및 전이에 관련 된 단백질의 억제 방법을 보여 줍니다. 함께, 우리의 결과 ISG15 경로의 탈 선 활성화에 셀 건축을 방해 하 고 세포의 운동 성, 침략 및 전이에 관련 된 단백질을 안정화 하 여 유방암 세포를 운동 형 수 여 것이 좋습니다. 셀룰러 건축 보존 ISG15 통로 constitutively 다른 계보의 종양 세포에서 활성화 되어 있기 때문에 유방암에 우리의 관찰 많은 다른 종양에 대 한 진정한 보유 해야 합니다 가정 하는 것이 적당 하다.
