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Articles by Kathy L. Sharpe-Timms in JoVE
JoVE Clinical and Translational Medicine
Modelo de ratón de la endometriosis quirúrgicamente inducida por la Auto-trasplante de tejido uterino
1Obstetrics, Gynecology and Women’s Health and Division of Biological Sciences, University of Missouri, 2Obstetrics, Gynecology and Women’s Health and Animal Sciences, University of Missouri
Una descripción de la inducción quirúrgica de la endometriosis en ratones y ratas por auto-trasplante de tejido uterino de la cascada arterial del mesenterio intestinal.
Other articles by Kathy L. Sharpe-Timms on PubMed
Regulación De Paracrina De La Expresión De Metaloproteinasa De Matriz En Endometriosis
Después de la menstruación retrógrada, arrojar el tejido endometrial fragmentos fije a e invaden la superficie peritoneal a lesiones endometriósicos forma establecida. Con la progresión de la enfermedad, las lesiones bioquímicamente activas se someten a la remodelación y convertido en fibróticas. Enzimas metaloproteinasas de matriz (MMPs) y los inhibidores de tejido de metaloproteinasas (MPsIT) juegan un papel importante en la remodelación endometrial normal durante la menstruación. Expresión anómala de MMPs y MPsIT se ha identificado en lesiones endometriósicos en comparación con su expresión altamente regulada en endometrio eutopic. Los mecanismos de paracrina regulación anómala de MMPs y MPsIT por lesiones endometriósicos son, sin embargo, no bien definidos. Anómala de las MMPs y MPsIT puede deberse a anomalías innatas en el endometrio eutopic de las mujeres con endometriosis, en las células peritoneales que yuxtaponen el endometrio ectópico, y numerosas sustancias presentes en el líquido peritoneal de mujeres con endometriosis y células inmunes residentes. La mayoría de MMPs son bajo estricta regulación transcripcional. Citocinas y hormonas esteroideas parecen actuar en el promotor MMP, independientemente o conjuntamente, para proporcionar la regulación tanto positiva como negativa de estos genes. Misregulated expresión de MMPs y MPsIT está asociado con un fenotipo más agresivo y una cascada de eventos facilitar el establecimiento y la degradación de la matriz extracelular peritoneal o remodelación de lesiones endometriósicos. Los mecanismos que MMP y TIMP son misregulated expresión además autorización la investigación como tal información puede proporcionar la penetración en nuevas modalidades terapéuticas para la endometriosis.
Utilizando Ratas Como Un Modelo De Investigación Para El Estudio De La Endometriosis
Aunque existen desventajas de extrapolar los datos a todas las especies, el modelo de rata puede utilizarse para estudiar eventos involucrados en la patogenia y pathophysiologies de endometriosis o nuevos enfoques terapéuticos para este desorden que no están presentes en los seres humanos. Tejidos endometriósicos rata son similares a las lesiones humanas en vivo, y las células y tejidos endometriósicos rata realizan de una manera similar como tejidos endometriósicos humanos y células en cultivo explante y cultivo de células aisladas. El modelo de rata permite estudios de mecanismos y reguladores de forma controlada sin confundir influencias como variación individual del paciente y las influencias ambientales. El método principal utilizado para la inducción de la endometriosis en ratas ha sido autotrasplante de plazas uterinas (implantes) en la cavidad peritoneal. Más allá del mero crecimiento del endometrio en localizaciones ectópicas, ratas con endometriosis mostrar síntomas similares, incluyendo una reducción en la fertilidad y la fecundidad, y los implantes endometriósicos reaccionan de manera similar a la terapéutica como los de los seres humanos con la enfermedad. Se han observado alteraciones similares en la producción de proteína y expresión génica en tejidos endometriósicos de ratas y seres humanos que pueden, en parte, como agentes implicados en la patogenia o pathophysiologies de la endometriosis.
Expresión De Moléculas De Adhesión Solubles En Sueros De Mujeres Con Endometriosis III Y IV Etapa
Para determinar el efecto de la etapa III y endometriosis IV en la concentración del suero de la molécula 1 de adhesión intracelular soluble (ICAM-1), molécula de adhesión celular vascular-1 (VCAM-1) y E-selectina.
Haptoglobina Endometriósicos Se Une a Los Macrófagos Peritoneales Y Altera Su Función En Las Mujeres Con Endometriosis
Evaluar los efectos de la haptoglobina endometriósicos en función de los macrófagos peritoneales.
Glicosilación Y Sobreexpresión De Haptoglobina Peritoneal Asociada a La Endometriosis
Tejidos endometriósicos peritoneales sintetizan y secretan la haptoglobina (pHp), que tiene un análogo secuencia de nucleótidos a la haptoglobina hepática encontrado en el suero (sHp). Este estudio realizado lectinas obligatorio análisis para determinar si existen diferencias en la glicosilación de proteínas entre sHp y pHp, que puede proporcionar la penetración en función de pHp y/o identificar epitopos para el desarrollo de nuevos métodos de tratamiento médico de la endometriosis y digestión enzimática. Para reducir la dependencia de la colección quirúrgica de tejidos peritoneales de mujeres, Hp peritoneal recombinante (rpHp) fue producido y su glicosilación analizados para futuros estudios funcionales. Estos resultados mostraron que el peso molecular aparente de pHp era más pequeño que ENV 3 kDa. Desialylation y N-deglycosylation completa produce cambios similares en migración electroforética sHp y pHp, sugiriendo el contenido de ácido siálico similar e indicando que la varianza 3 kDa fue debido al contenido de carbohidratos, no la degradación de proteínas, respectivamente. Deglycosylation secuencial de las cuatro cadenas N-glicanos de sHp causó un cambio 3 kDa por N-glicanos quitado sugiriendo que la diferencia de 3 kDa entre sHp y pHp puede ser una cadena de N-glicanos. Lectinas ELISA y lectina-blotting análisis demostradas mayores pHp y rpHp interacciones con MAL y LTL pero ninguna diferencia al enlazarse con SNL comparado con sHp de individuos sanos, identificar las variaciones en las proporciones de alpha(2-3) ácido siálico de alpha(2-6) y residuos de fucosa. PHp recombinante fue cien veces sobreexpresado con un patrón de glicosilación similar a pHp, aunque en una forma de polipéptido de Hp Alfa-beta sin procesar. Estos resultados son los primeros en identificar las diferencias entre pHp y sHp glicosilación y sentar bases más estudios para caracterizar anomalías en glicanos composición y estructura, que probablemente impartir pHp con funciones inmunomoduladoras conocido y puede utilizarse como epitopos para el desarrollo de la terapéutica con base inmune para novela, tratamiento no quirúrgico de la endometriosis.
Comprensión De La Endometriosis Es La Clave Para Un Exitoso Manejo Terapéutico
Endometriosis de comprensión a nivel molecular, bioquímica y genética dará lugar a mejores métodos para el diagnóstico y manejo terapéutico de esta enigmática enfermedad.
Expresión Y Proteasomal La Degradación De La Proteína De La Bóveda Principal (MVP) En Ovocitos Mamíferos Y Cigotos
Proteína de bóveda principales (MVP), también llamada proteína relacionada con la resistencia pulmonar es una ribonucleoproteína que comprende una parte importante (> 70%) de la partícula de la bóveda. La función de partícula de la bóveda se desconoce, aunque parece estar implicado en la resistencia a múltiples fármacos y señalización celular. Aquí mostramos que MVP se expresa en óvulos mamíferos, porcinos y humanos y en el embrión preimplantacional porcino. MVP fue identificado por secuenciación de péptidos de láser asistida por matriz-desorción ionización-tiempo de vuelo (MALDI-TOF) y Western blot como una proteína que se acumula en porcinos cigotos cultivados en presencia del inhibidor específico proteasomal MG132. MVP también acumulado en mala calidad ovocitos humanos donados por las parejas infértiles y embriones porcinos que no se desarrollan normalmente después de in vitro Fertilización o células somáticas de transferencia nuclear. Normales porcinos ovocitos y embriones en diferentes etapas de desarrollo preimplantacional demostraron etiquetado principalmente citoplasmática, con aumento de la acumulación de partículas de bóveda alrededor de inclusiones lipídicas citoplásmicas grande y vesículas de membrana. En ocasiones, MVP se asoció con los cuerpos de precursor de envoltura nuclear y el nucleolo. Se identificaron secuencias de nucleótidos con un alto grado de homología con la secuencia del gene humano del MVP en ovocito porcino y bibliotecas de cDNA de células endometriales. Interpretamos estos datos como la evidencia de la expresión y la facturación de la ubiquitina-proteasoma dependiente de MVP en el óvulo mamífero. Similar a las células del carcinoma, MVP podría cumplir una función de protección celular durante el desarrollo embrionario temprano.
Expresión De La Haptoglobina Por Arrojar Fragmentos De Tejido Endometrial Encontrados Líquido Peritoneal
Para confirmar las células epiteliales y stromal glandulares endometriales en fragmentos de tejido recuperado del líquido peritoneal y cuantificar la expresión de la haptoglobina.
Definición De Las Células Del Endometrio: La Necesidad De Identificación Mejorada En Sitios Ectópicos Y Caracterización En Sitios Eutopic Para El Desarrollo De Nuevos Métodos De Gestión Para La Endometriosis
La endometriosis se define clásicamente como crecimiento ectópico de glándulas endometriales y el estroma. Actualmente, la confirmación histologic de hallazgos laparoscópicos es primordial para el diagnóstico de la endometriosis y están aumentando los datos que sugieren que la patogenia de la endometriosis está relacionado con anomalías endometriales.
Caracterización De La Expresión De Leucocito Humano (HLA-G) Antígeno-G En Adenocarcinoma Endometrial
El presente estudio buscó determinar si adenocarcinomas endometriales expresan antígeno-G de leucocito humano (HLA-G), un inmune-regulador de la proteína, y grado de expresión se correlaciona con la etapa del carcinoma.
La Interacción De Las Interacciones Célula-célula Y Célula-matriz En Las Propiedades Invasivas De Los Tumores Cerebrales
Deterioro de la cohesión del tejido y la reorganización de la matriz extracelular son acontecimientos cruciales durante la progresión hacia el fenotipo de la célula invasora. Estudiamos los patrones de invasión in vitro de nueve líneas de células de tumor de cerebro en geles de colágeno tridimensional. Las interacciones célula-célula y célula-matriz fueron cuantificadas y correlacionadas con el nivel de expresión de moléculas específicas: N-cadherina, metaloproteinasas de la matriz y su inhibidor. Evolución del patrón fue estudiado en función del tiempo y el colágeno de la concentración. Células con expresión de Metaloproteinasa baja o tejido alta cohesión demostraron limitado potencial invasor. Mayor expresión de la metaloproteinasa y cohesión del tejido intermedio resultó en configuraciones con zonas de hipercelular alrededor de las regiones sobre todo carente de células con digiere el colágeno, similar a pseudopalisades en muestras de astrocitoma maligno quirúrgico quitado. En términos físicos, estas configuraciones se presentan como resultado de la competencia entre las interacciones célula-célula y célula-matriz. Nuestros resultados sugieren maneras específicas para caracterizar, control, o Ingeniero patrones migratorios de la célula y hacen alusión a la importancia de la interacción entre biofísicos y factores biomoleculares en la caracterización del comportamiento invasor de la célula y, en general, en la transición epitelial-mesenquimal.
Decidualization Regula La Expresión De Los Receptores De La Gonadotropina Coriónica Endometrial En Los Primates
Gonadotropina coriónica (CG) desempeña un papel importante en el establecimiento de un endometrio receptivo modulando directamente la función de ambas células estromales y epiteliales endometriales en el Babuino. El objetivo de este estudio fue caracterizar cambios en receptor de CG (LHCGR, también conocido como CG-R) expresión durante el ciclo menstrual y el embarazo precoz, particularmente durante el decidualization. LHCGR fue localizado mediante el uso de un anticuerpo específico de péptido generado contra el dominio extracelular. Immunostaining era ausente en cualquiera de los tipos celulares durante la fase proliferativa del ciclo. En contraste, durante la fase secretora, células epiteliales glandulares tanto luminales mancharon positivamente. Tinción stromal se limitó a las células alrededor de las arterias espirales (SAs) y en la capa basal. Este patrón de coloración stromal persistió en el sitio de implantación entre los días 18 y 25 del embarazo y después de la infusión de la CG. Sin embargo, como embarazo había avanzado (40 días a 60), coloración para LHCGR fue disminuido drásticamente en las células del estroma. Estos datos fueron confirmados por hibridación in situ nonisotopic. Para confirmar si la pérdida de LHCGR se asoció con una respuesta decidual stromal fibroblastos fueron decidualized in vitro y lisados celulares obtienen después de 3, 6 y 12 días de cultivo se analizaron mediante Western Blot. Proteína LHCGR disminuyó con la aparición de decidualization in vitro, confirmando los resultados en vivo. Además de las células decidualized de CG dio lugar a la reinducción de LHCGR en la ausencia de dbcAMP. Proponemos que la CG actuando mediante su R en las células del estroma modula SA en preparación para el embarazo y el trofoblasto invasión. Como progresa de embarazo, modificación adicional de SA por migración endovascular trofoblastos y resultados decidualization posterior en la regulación a la baja de LHCGR. Esta inhibición de la expresión de LHCGR también coincide con la disminución de CG mensurable en la circulación periférica.
Reduce La Fecundidad En Ratas Hembras Con Endometriosis Quirúrgico Inducida Y Sus Hijas: Un Papel Potencial Inhibidores De Tejido De La Metaloproteinasa 1
Se desconoce la causa de la reducida fecundidad en mujeres con endometriosis. Expresión de metaloproteinasas de matriz (MMPs) y tejido inhibidores de metaloproteinasas (MPsIT) por ambos ectópico y endometrio eutopic al parecer tiene un papel en la patogenia de la endometriosis. Presumimos que localización, secreción y síntesis de proteínas TIMP endometriósicos anómala también causan patologías reproductivas en fecundidad reducida. Se utilizó un modelo de rata establecida para la endometriosis (Endo) en comparación con controles de nonendometriotic (fundas) para investigar la fecundidad reducida en endometriosis. Comparando Endo y Sham ratas, ratas Endo habían alterado dinámica ovárica, incluyendo menos los folículos ováricos y cuerpos lúteos con folículos unruptured luteinized. Además, se encontraron anomalías en vivo en ovocitos postovulatoria estructura y desarrollo del embrión preimplantacional, incluyendo los cromosomas desalineados, fragmentación citoplasmática y nuclear y retrasado o detenido escote, así como abortos espontáneos, sólo en ratas de Endo. Un papel causal para TIMP1 en estos fenómenos es apoyado por nuestros resultados que Endo las ratas tienen más TIMP1 en su líquido peritoneal como detectado por ELISA y más inmunolocalización de TIMP1 en la teca de folículos antrales como es medido por análisis morfométrico asistido por computadora. Estos datos sugieren que en endometriosis la acumulación de TIMP1 interrumpe el normal medio enzimático de MMP/TIMP en la cavidad peritoneal y afecta negativamente el ovario dinámica, calidad de ovocitos y desarrollo del embrión preimplantacional, fecundidad de tal modo decreciente. Lo más desconcertante es, hijas de ratas Endo que no tenía ninguna intervención experimental exhibieron estas mismas anormalidades reproductivas. Predecimos que la exposición del desarrollo a la endometriosis conduce a permanentes cambios epigenéticos en generaciones posteriores.
Perfil De Expresión Aberrante De Genes En Un Modelo De Ratón De Los Espejos Endometriosis Que Se Observa En Mujeres
Para definir el perfil de expresión genética alterada de las lesiones de endometriosis en un modelo murino de la endometriosis inducida quirúrgicamente.
Expresión De Haptoglobina En Adenocarcinoma Endometrioide Del útero
Las concentraciones séricas elevadas de haptoglobina (Hp) se han divulgado en pacientes con enfermedades malignas. Hemos demostrado que Hp se produce por y se localiza en el estroma y no el epitelio de las lesiones endometriósicos, que comparten muchas características del carcinoma. Además, Hp mRNA y proteína se encuentran exclusivamente en el estroma del endometrio eutopic de mujeres con endometriosis y no aquellos sin endometriosis. Presumimos patrones característicos de la expresión génica de Hp y localización de la proteína en adenocarcinoma Endometrioide del útero puede proporcionar la penetración en la utilidad clínica de Hp como marcador tumoral o alternativa terapéutica.
Neutralizar TIMP1 Restaura La Fecundidad En Un Modelo De Rata De La Endometriosis Y Tratamiento De Las Ratas Control Con TIMP1 Anomalías Causas De La Función Ovárica Y El Desarrollo Embrionario
Las lesiones de endometriosis humano y de rata sintetizan y secretan tejido inhibidor de metaloproteinasas 1 (TIMP1). Más TIMP1 se localiza en la teca ovárica en un modelo de rata establecida para la endometriosis (Endo), en comparación con los controles quirúrgicos (tratamiento simulado). La hipótesis de que TIMP1 endometriósico secretada en el líquido peritoneal (PF) afecta negativamente la función ovárica y la embriogénesis al alterar el equilibrio de las metaloproteinasas de matriz (MMP) y TIMPs. Se realizaron tres experimentos TIMP1 modulación in vitro e in vivo para investigar ovárica y anomalías embrionarias. El experimento demostró por primera vez embriones de control de tratados in vitro con concentraciones PF endometriósicos de TIMP1 desarrollado normalmente. En el segundo experimento, donde TIMP1 fue modulada in vivo, TIMP1-Sham ratas tratadas tenían menos cigotos, los folículos ováricos, y el cuerpo lúteo (CL) y una pobre calidad del embrión y el desarrollo, que es análogo a los resultados en ratas Endo. Es importante destacar que las ratas tratadas con un Endo TIMP1 función de bloqueo de anticuerpos tenían cigoto, folículo, y el número de CL y la calidad del embrión similar a las ratas Sham. Además, la actividad inhibidora más TIMP1 se encontró en los ovarios de Endo y TIMP1 ratas tratadas con Sham que en ovarios de Sham o TIMP1 tratados con anticuerpo-ratas Endo. En el experimento de tres años, las ratas de control (sin cirugía) tratados con Endo PF presentaron un menor número de folículos y el CLS y el aumento de TIMP1 localización en la teca ovárica mientras que el tratamiento con Endo PF despojado de TIMP1 o con Sham PF no tuvo ningún efecto, proporciona más evidencia de que endometriósicos TIMP1 secuestra en el ovario e inhibe la MMP necesarias para la ovulación. En conjunto, estos resultados mostraron que TIMP1 excesiva era perjudicial para la ovulación y el desarrollo del embrión. Por lo tanto, nuevos TIMP1 moduladores de terapias pueden ser desarrollados para aliviar la infertilidad en las mujeres con endometriosis.
TIMP1 Contribuye a Las Anomalías Ováricas En Una Manera MMP-dependiente E Independiente En Un Modelo De Rata
Disfunción ovulatoria ocurre en mujeres con endometriosis, sin embargo, los mecanismos son desconocidos. Hemos demostrado que las lesiones endometriósicos sintetizan y secretan inhibidor de tejido de la metaloproteinasa 1 (TIMP1) en la cavidad peritoneal en los seres humanos y un modelo de rata de la endometriosis; donde TIMP1 exceso se localiza en la teca ovárica en endometriosis y modulación TIMP1 peritoneal altera la dinámica ovárica. Aquí evaluamos si mecanismos por el excesivo TIMP1 de líquido peritoneal afecta negativamente la función ovárica son acciones MMP-dependiente o independiente de MMP. Las ratas fueron tratadas con un TIMP1 mutado sin función inhibidora de MMP (Ala-TIMP1), TIMP1 de tipo salvaje (rTIMP1) o PBS. Ratas tratadas con Ala-TIMP1 o rTIMP1 tenían menos folículos antrales, menos nuevos CLs y la presencia de LUFS en comparación con ratas de PBS. Ala-TIMP1 y rTIMP1 diferencialmente provocado cambios posteriores en la expresión génica y localización de la proteína relacionada con la ovulación como es medido por microarrays de genoma entero con validación de Q-PCR e inmunohistoquímica. Más VEGF y FN fueron expresadas y localizada en los ovarios de Ala-TIMP1 ratas tratadas en comparación con rTIMP1 y PBS tratados ratas inferir funciones de MMP-independiente. Menos caspasa 3 localizada en ovarios de rTIMP1 frente a los otros dos grupos, por lo tanto depende de MMP-acción. Además, después de co-inmunoprecipitación, CD63 más estaba destinado a TIMP1 en ovarios de ratas tratadas con Ala-TIMP1 que ratas rTIMP1 tratado proporciona evidencia de otro mecanismo de MMP-independiente de disfunción ovulatoria. Podemos predecir eventos MMP-dependientes e independientes del MMP participan en enriquecimiento indebido de la pared folicular mediante múltiples mecanismos tales como la inhibición de la apoptosis, componentes de ECM y la angiogénesis. Colectivamente, TIMP1 peritoneal excesiva causa cambios en la dinámica ovárica dependiente tanto independientemente de inhibición de MMP.
Bases Celulares Y Moleculares Para La Infertilidad Asociada a Endometriosis
La endometriosis es una enfermedad ginecológica caracterizada por la presencia de endometriales células epiteliales y estromales glandulares crece en el entorno extrauterino. La enfermedad afecta a 10-15% de las mujeres que menstrúan causando debilitante dolor e infertilidad. Endometriosis parece afectar a todas las partes del sistema reproductivo de la mujer, incluyendo la función ovárica, calidad de los ovocitos, desarrollo embrionario e implantación, función uterina y el sistema endocrino coreografiando el proceso reproductivo y resulta en infertilidad o de pérdida de embarazo espontáneo. Los tratamientos actuales están cargados de la menopausia como los efectos secundarios y muchos causan alteración cese o química del ciclo reproductivo, ninguno de los cuales es propicio para lograr un embarazo. Sin embargo, a pesar de la prevalencia, físicas y psicológicas de peajes y los costos de salud, una cura para la endometriosis aún no ha sido encontrada. Presumimos endometriosis causa infertilidad a través de mecanismos multifacéticos que están estrechamente entretejidos, contribuyendo así a nuestra falta de comprensión de este proceso de la enfermedad. Identificar y comprender los mecanismos celulares y moleculares responsables de la infertilidad asociada a endometriosis podrían ayudar a desentrañar las multiplicidades confusión de infertilidad y proporcionar penetraciones en nuevos enfoques terapéuticos y tratamientos potencialmente curativos para la endometriosis.
