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Articles by Laura Knoll in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Quiste Toxoplasma gondii Muro de Formación en Activado médula ósea procedentes de los macrófagos y Condiciones bradizoíto
Department of Medical Microbiology and Immunology, University of Wisconsin
Toxoplasma gondii se convierte en una forma de quiste en respuesta al estrés ambiental, que puede ser imitado en los modelos de cultivo de tejidos. Este video muestra las técnicas para examinar la formación de la pared del quiste mediante la activación de médula ósea procedentes de los macrófagos o el cambio de pH de crecimiento medio en las células de fibroblastos.
Other articles by Laura Knoll on PubMed
Nourseothricin Acetyltransferease: Selección De Un Marcador Positivo Para Toxoplasma Gondii
El análisis molecular de los genomas de los parásitos se requieren nuevas herramientas de genética molecular. El gen de Streptomyces noursei NAT1 codifica nourseothricin acetiltransferasa, que confiere resistencia al antibiótico aminoglucósido nourseothricin. La electroporación de NAT1 casetes en cepas RH o Prugniaud de Toxoplasma gondii permite la selección de estables nourseothricin-clones resistentes.
Una Proteína Similar a Patatín Protege Toxoplasma Gondii a Partir De La Degradación En Macrófagos Activados
El apicomplejo parásito Toxoplasma gondii es capaz de suprimir la producción de óxido nítrico en macrófagos activados. Una pantalla de más de 6.000 T. gondii mutantes de inserción identificaron dos clones, que fueron siempre incapaces de suprimir la producción de óxido nítrico de los macrófagos activados. Una cepa, llamada 89B7, creció a la misma velocidad que los de tipo salvaje parásitos en macrófagos no tratados previamente, pero a diferencia de tipo silvestre, el mutante fue degradada en los macrófagos activados. Esta degradación se caracterizó por una reducción en el número de parásitos dentro de vacuolas en el tiempo, la pérdida de GRA4 y SAG1 tinción de proteínas mediante el ensayo de inmunofluorescencia, y la vesiculación y la descomposición de la ultraestructura parásito interno por microscopía electrónica. La mutagénesis plásmido en el clon 89B7 interrumpe el promotor de un ARNm de 3,4 kb que codifica una proteína predicha 68 kDa con un péptido señal escindible y un dominio fosfolipasa patatina similar. Complementación genética con el locus genómico de esta proteína patatina-como restaura la capacidad para suprimir parásitos óxido nítrico y replicarse en macrófagos activados. Una versión de la hemaglutinina de etiquetado de esta proteína patatin-como muestra la localización punteada en atípicos T. gondii estructuras dentro del parásito. Este es el primer estudio que define un producto del gen específico que se necesita para la supervivencia del parásito en los macrófagos activados pero no ingenuo.
La Proteína BSR4 Está Regulado En El Toxoplasma Gondii Bradizoítos, Sin Embargo, El Antígeno Dominante De Superficie Reconocida Por El Anticuerpo Monoclonal P36 Es SRS9
El protozoo parásito Toxoplasma gondii, interconverts entre crecimiento rápido taquizoítos y bradizoítos de crecimiento lento dentro de los hospederos intermediarios. La superficie de T. gondii está cubierto por la SAG1 relacionada con la secuencia (SRS) superfamilia de glicosilo fosfatidil-inositol proteínas ancladas, muchos de los cuales son etapa específica. Transfección transitoria de BSR4 anterior, un miembro de la superfamilia de SRS, mostró reactividad con el mAb bradizoíto específica P36 mediante el ensayo de inmunofluorescencia. BSR4 niveles de mRNA fueron igualmente abundantes en taquizoítos y bradizoítos, lo que sugiere regulación post-transcripcional de la proteína. En este estudio, mostramos que BSR4 proteína está presente tanto en taquizoítos y bradizoítos, pero hasta reguladas en bradizoítos. Sin embargo, la expresión estable de BSR4 en dos cepas BSR4-negativo T. gondii muestra reactividad mínima para el mAb P36 por inmunotransferencia, aunque la proteína BSR4 es abundante. Hemos descubierto que la proteína SRS9, un miembro bradizoíto específica de la superfamilia de SRS y codificada inmediatamente aguas abajo de BSR4, se realizó ablación también en las cepas BSR4-negativas, lo que sugiere que SRS9 es el antígeno de superficie reconocido por el MAB P36. La expresión estable de SRS9 en los BSR4 cepas mutantes muestra la reactividad robusta para el MAB P36. Los experimentos de inmunoprecipitación confirmar que el mAb P36 interactúa con la proteína SRS9. Estos datos indican que mientras que la proteína se BSR4 hasta reguladas en bradizoítos, el antígeno dominante que el mAb reconoce P36 es SRS9.
Mayor Eficiencia De Recombinación Homóloga En La Proteína De Gránulos Densos Toxoplasma Gondii 3 Demuestra Que GRA3 No Es Necesario En El Cultivo Celular, Pero No Contribuye a La Virulencia
Toxoplasma gondii posee orgánulos exclusivos de secreción, que de forma sincrónica liberan proteínas durante y después de la invasión. Uno de estos orgánulos, los gránulos densos, secretan proteínas después de la invasión que se piensa que es importante en el desarrollo del parásito en todas las etapas de su ciclo de vida. Proteína de gránulos densos 3 (GRA3) es una proteína de 30 kDa localizada en la red intravacuolar y membrana de este (PVM). Al igual que muchas proteínas de los gránulos densos, GRA3 no tiene homología con las proteínas con las funciones descritas. Sin embargo, se ha planteado la hipótesis de participar en la adquisición de nutrientes para el parásito, debido a su localización en el PVM. Para comenzar a investigar la importancia de GRA3, el locus fue interrumpido por sustitución homóloga con un gen de resistencia a cloranfenicol en una cepa de tipo II. Dos cepas DeltaGRA3 se obtuvieron después de dos electroporaciones independientes con eficacia superior al 80%. No se observaron diferencias entre los de tipo salvaje y DeltaGRA3 fueron detectados en la tasa de crecimiento de cultivo celular o la formación de bradizoíto. Ubicación de otras proteínas del parásito gránulos densos y asociación con los orgánulos de la célula huésped tampoco se vieron afectados en DeltaGRA3. Curiosamente, en una dosis infecciosa de aproximadamente cuatro veces superior a la dosis letal 50% para los de tipo salvaje parásitos, todos los ratones infectados con DeltaGRA3-2 ratones infectados sobrevivieron a la infección aguda. Complementación de GRA3 expresión en la cepa DeltaGRA3-2 restaura la virulencia de tipo salvaje niveles, y el aumento de la virulencia de la DeltaGRA3-1, lo que confirma que la proteína GRA3 juega un papel durante la infección aguda de una cepa de tipo II.
Descubrimiento De Genes De Virulencia Del Parásito Revela Un Regulador único De La Condensación De Los Cromosomas 1 Ortholog Crítica Para El Tráfico Nuclear Eficiente
Parásitos eucariotas son la principal causa de morbilidad y mortalidad a nivel mundial, sin embargo, se sabe poco sobre las bases genéticas de su virulencia. A continuación, presentamos una pantalla hacia adelante genética para estudiar la patogénesis en el protozoo Toxoplasma gondii. Mediante el uso modificado firma de etiquetado mutagénesis, el crecimiento de 6.300 T. gondii mutantes de inserción se comparó en cultivo celular y la infección murina para identificar los genes requeridos específicamente in vivo. Uno de los 39 mutantes avirulentas se interrumpe en un ortólogo divergente del regulador de la condensación de los cromosomas 1 (RCC1), que es fundamental para el tráfico nuclear en sistemas modelo. A pesar de este mutante RCC1 crece similar a la de tipo salvaje en condiciones normales de cultivo de tejidos, es el crecimiento con impedimentos en virtud de la limitación de nutrientes. Complementación genética de los parásitos mutantes con el gen de T. gondii RCC1 restaura completamente tanto la virulencia en ratones y de crecimiento bajo condiciones de bajo contenido de nutrientes. Un análisis más detallado muestra que existe un defecto significativo en el tráfico nuclear en el mutante RCC1. Estos hallazgos sugieren que la velocidad de transporte nuclear es un factor crítico que afecta el crecimiento en condiciones de baja nutrientes in vivo e in vitro. Adicionalmente, se observó que aunque RCC1 proteínas están muy conservadas en los organismos de los seres humanos a la levadura, sin parásito protozoario codifica una RCC1 característico. Esta divergencia de proteínas puede representar un mecanismo único de transporte nucleocytoplasmic. Este estudio ilustra el poder de este avance enfoque de la genética para identificar los mecanismos de virulencia atípicos.
Un Toxoplasma Gondii Mutante Defectuoso En Respuesta a Los Flujos De Calcio Demostrado Que Reduce La Patogenicidad in Vivo En
Toxoplasma gondii es un importante patógeno oportunista en personas inmunodeprimidas. Éxito en la propagación de un huésped infectado por este parásito intracelular obligado depende de su capacidad para entrar y salir de las células huésped. Salida de la célula puede ser inducida artificialmente, causando flujos de calcio dentro del parásito con el uso de ionóforos de calcio. Si bien esta salida ionóforo inducida (IIE) se ha caracterizado en detalle, no se sabe si se imita un proceso fisiológico normal del parásito. Esto se pone de relieve el hecho de que los mutantes en el IIE, que no presentan defectos fuertes en cualquiera de las características normales de crecimiento del parásito en cultivo de tejidos. Hemos aislado y caracterizado un mutante T. gondii que, junto con un retraso en el IIE presenta un defecto grave en el establecimiento de una infección exitosa en vivo. En el cultivo de tejidos este mutante muestra la capacidad normal para invadir, dentro de las células se dividen y se convierten en la forma latente bradizoíto enquistadas. Sin embargo, los ratones infectados con este mutante son menos propensos a morir y llevar a menos quistes cerebrales que los infectados con parásitos de tipo salvaje. Por lo tanto, nuestros resultados sugieren que la respuesta normal a los flujos de calcio juega un papel importante durante el desarrollo in vivo de T. gondii.
Familia Altamente Polimórfica De Antígenos De Superficie Ancladas Glicosilfosfatidilinositol Con La Evidencia De La Regulación Del Desarrollo En El Toxoplasma Gondii
El ciclo de vida de la apicomplejo parásito Toxoplasma gondii requiere que un quiste infeccioso desarrollar y mantenerse durante toda la vida del huésped. Las moléculas que aparecen en la superficie del parásito son importantes para controlar la respuesta inmune al parásito. T. gondii tiene una superfamilia de glicosilfosfatidilinositol (GPI) anclado antígenos de superficie, llamado el antígeno de superficie (SAG) y relacionadas con el SAG-antígenos de superficie, que están regulado por el desarrollo durante la infección. El uso de un algoritmo de clustering, hemos identificado una nueva familia de 31 proteínas de superficie que se prevé que sea GPI de anclaje, pero no están relacionados con las proteínas del SAG, y por lo tanto llamamos estas proteínas no relacionadas SAG-antígenos de superficie (Susa). El análisis de la densidad de polimorfismo de nucleótido único mostró que los miembros de esta familia son los genes más polimórficos en el genoma de T. gondii. Inmunofluorescencia de SUSA1 y susa2, dos miembros de la familia, reveló que se encuentran en la superficie del parásito. Se confirmó que SUSA1 y susa2 se GPI de anclaje fosfolipasa por escisión. Análisis de las etiquetas de secuencias expresadas (EST) reveló que tenía SUSA1 22 de 23 tecnologías ecológicamente racionales de una infección crónica. Análisis de ARNm y proteína confirmó que SUSA1 es altamente expresado en la forma crónica del parásito. Los sueros de los ratones con infección crónica por T. gondii reaccionó a SUSA1, lo que indica que SUSA1 interactúa con el sistema inmune del huésped durante la infección. Este grupo de proteínas probablemente representa una nueva familia de polimórficas antígenos de superficie anclada a GPI que son reconocidos por el sistema inmune del huésped y cuya expresión está regulada durante la infección.
Análisis Funcional De Los Componentes Clave Del Tráfico Nuclear Revela Una Red Ran Atípica Requiere Para La Patogénesis Del Parásito
Protozoos parásitos representan a los principales retos de salud pública. Muchos aspectos de la biología de la célula son distintos de los ejércitos de sus animales, proporcionando posibles dianas terapéuticas. Toxoplasma gondii es un protozoario parásito que contiene un regulador divergente de condensación de los cromosomas 1 (TgRCC1) que se requiere para la virulencia y el tráfico nuclear eficiente. RCC1 proteínas funcionan como un factor de intercambio de guanina de Ras relacionados con la proteína nuclear (RAN), una GTPasa abundantes responsable de la mayor parte del transporte nucleocytoplasmic. Aquí nos muestran que si bien hay diferencias dramáticas de buen estado de conservación RCC1 proteínas, TgRCC1 asocia con la cromatina, interactúa con Ran y complementa un mamífero sensible a la temperatura de línea RCC1 célula mutante. Durante la investigación de TgRCC1, observamos varios fenotipos sin precedentes para TgRan, a pesar de un alto nivel de conservación de la secuencia. La distribución de celulares TgRan se encuentra en toda la célula del parásito, mientras que Ran a finales de los eucariotas de ramificación es predominantemente nuclear. Además, el T. gondii tolera menos bajo nivel de expresión de mutantes dominantes letales Ran. Parásitos de tipo salvaje que expresan TgRan dominante negativo tuvieron un crecimiento similar al de tipo salvaje en condiciones normales de cultivo de tejidos, pero fueron atenuadas en las células huésped privadas de suero y ratones. Estas características de crecimiento paralela a la mutante TgRCC1 y poner de relieve la importancia de la vía de transporte nuclear para la virulencia de los patógenos eucariotas.
Parásito Etapa Específica De Reconocimiento De Sus Propias Toxoplasma Gondii Derivados CD8 + Epítopos De Células T
Ratones Balb / c de infección de control con el protozoo parásito intracelular obligado Toxoplasma y desarrollar una infección crónica latente en el cerebro, al igual que los seres humanos inmunocompetentes. El interferón-gamma-la producción de linfocitos T CD8 + proporcionan una protección esencial contra la infección por T. gondii, pero reconoce los epítopos hasta ahora había sido difícil de alcanzar.
Las Entradas Y Salidas De Tráfico Nuclear: Aspectos Inusuales En Apicomplexan Parásitos
Apicomplexa es un filo dentro del reino Protista que contiene algunas de las amenazas más graves para la salud pública. Uno de los miembros de este filo, Toxoplasma gondii, es susceptible de análisis genéticos moleculares que permitan la identificación de factores críticos para la colonización y la enfermedad. Un camino resultó ser importante para T. gondii es patogénesis de la red de tráfico nuclear Ran. El análisis de los genomas de Bioinformática apicomplexan muestra que mientras Ran está bien conservada, los reguladores clave de la Ran - Regulador de la condensación de los cromosomas 1 y la proteína GTPasa Ran activación - o son muy divergentes o ausentes. Del mismo modo, la importación de varios de los receptores y las moléculas de exportación que son cruciales para el transporte nuclear no están presentes o han experimentado la deriva genética de tal manera que ya no son reconocibles por las herramientas de la bioinformática. En este minirevisión se describen los fundamentos de tráfico nuclear y comparar los componentes dentro de apicomplexans de los sistemas definidos en los seres humanos y la levadura. Un análisis detallado de la red de tráfico nuclear en estos eucariotas es necesario para entender cómo esta potencialmente única vía biológica celular contribuye a la interacción huésped-parásito.
Un Dominio Transmembrana Que Contiene Proteína De Superficie De Toxoplasma Gondii Replicación Aumenta En Las Células Inmunes Activadas Y Establecimiento De Una Infección Crónica
Toxoplasma gondii mutantes identificados como defectuosos en el establecimiento de la infección crónica fueron seleccionados para aislar a los específicamente afectada en su capacidad para replicarse dentro de los macrófagos activados. Uno de los mutantes identificados contiene una inserción en el gen TGME49_111670 hipotético. Complementación genética restaura la capacidad de los mutantes de replicarse en las células inmunes y producir quistes en el cerebro de los ratones. Mientras que el mutante es más sensible a óxido nítrico que es su cepa parental, no es defectuoso en su capacidad para suprimir el óxido nítrico. La proteína interrumpido no tiene ninguna homología significativa con proteínas con funciones conocidas, pero se prevé que tenga un dominio de transmembrana. Inmunofluorescencia muestra la proteína sobre la superficie del parásito, incluso en los macrófagos activados, colocalizing con un antígeno de superficie taquizoíto, SAG1, y orientado con su extremo C-terminal externo. El análisis Western revela que la proteína es downregulated en bradizoítos. A pesar de la especificidad taquizoíto de esta proteína, los ratones infectados con el mutante sucumben a la infección aguda de manera similar a los infectados con la cepa parental. Las muestras de suero de ratones con infección crónica por T. gondii reaccionar a un polipéptido de TGME49_11670, indicando que la proteína se ve por el sistema inmune durante la infección. Este estudio es el primero en caracterizar una proteína de superficie de T. gondii que contiene un dominio transmembrana y demostrar que la proteína del parásito contribuye a la replicación en las células inmunes activadas y el establecimiento de una infección crónica.
El Papel De Las Moléculas Específicas De Toxoplasma Gondii En La Manipulación De La Inmunidad Innata
La infección por el parásito Toxoplasma gondii estimula una respuesta inmune innata en el huésped. T. gondii también induce alteraciones en monocitos infectados y células dendríticas que probablemente contribuyen a su capacidad para difundir y, finalmente, para establecer una infección persistente. El progreso reciente ha vinculado moléculas específicas del parásito a la estimulación inmune o la capacidad del parásito para subvertir vías de señalización intracelular en las células infectadas para evadir la inmunidad.
Aislamiento De Toxoplasma Gondii Mutantes De Desarrollo Identifica Un Potencial Proteophosphogylcan Que Mejora La Formación De La Pared Del Quiste
Dentro de animales de sangre caliente, Toxoplasma gondii interruptores de una forma activa de replicación llamado taquizoíto en un lento crecimiento en forma enquistada llamada bradizoíto. Para descubrir los genes implicados en el desarrollo de bradizoíto, hemos examinado más de 8.000 T. gondii mutantes de inserción por microscopía de inmunofluorescencia. Se identificaron nueve mutantes de desarrollo bradizoíto que eran defectuosos, tanto en formación de la pared del quiste y la expresión de una proteína específica bradizoíto choque térmico. Uno de estos mutantes, llamada 42F5, contenía una inserción en el gen predicho TGME49_097520. La proteína es interrumpida serina / rico en prolina con homología a proteophosphoglycans de Leishmania. T. gondii proteophosphoglycan (GU182879) expresó desde el promotor nativo fue indetectable en taquizoítos, pero muestran manchas puntiformes bradizoítos en el parásito y las manchas alrededor de la vacuola. Complementación del mutante con 42F5 GU182879 expresado ya sea de la alfa-tubulina o promotor nativo restaura formación de la pared del quiste. En general, GU182879 está incrementada en los bradizoítos y aumenta la expresión componente de la pared del quiste y el montaje.
TgVTC2 Está Implicado En La Acumulación De Polifosfatos En El Toxoplasma Gondii
Polifosfato se encuentra en cada célula, se le atribuyen funciones en diversos procesos, incluyendo la diferenciación y la respuesta al estrés. En este estudio, se caracterizan una Toxoplasma gondii mutante que contiene una inserción dentro del extremo carboxi-terminal de un homólogo de Saccharomyces cerevisiae Vtc2p, un componente de la maquinaria sintética polifosfato. Locus TgVTC2 codifica una proteína que contiene 140kDa conservado SPX, VTC y dominios transmembrana. TgVTC2 se localiza en puntos puntiformes en el citoplasma que no co-localizar con marcadores conocidos. El mutante TgVTC2 mostró drásticamente reducida acumulación polifosfato, un defecto restaurado por introducción de TgVTC2 para el mutante. La inserción dentro de TgVTC2 resultó en el aumento de los niveles de transcripción para dos loci, incluyendo una quinasa FIKK putativo. Estos niveles de transcripción fueron restaurados a la de tipo salvaje en los niveles de complementación con el locus TgVTC2. El lugar TgVTC2 refractaria a octavos de final, y puede ser esencial. El análisis de este mutante TgVTC2 facilitará la disección de la vía de T. gondii síntesis polifosfato.
La Participación De Un Ortholog Remodelación De La Cromatina Complejo Toxoplasma Gondii En El Reglamento De Desarrollo
El ciclo asexual del parásito Toxoplasma gondii tiene dos etapas de desarrollo: una forma rápida replicación llamado taquizoíto y una forma cada vez más lento del quiste llamado bradizoíto. Si bien la importancia de la ATP independientes modificaciones de las histonas para la regulación de genes en T. gondii se ha demostrado, el ATP-dependientes de las vías de remodelación de la cromatina no han sido examinadas. En este estudio se caracteriza C9, un mutante de inserción que muestra la expresión reducida de marcador de diferenciación bradizoíto BAG1, en cultivos de fibroblastos humanos. Este mutante contiene una inserción en el gen que codifica TgRSC8, que es homóloga a la Saccharomyces cerevisiae proteínas Rsc8p (remodelar la estructura de la subunidad de la cromatina complejo 8) y Swi3p (modificador / sacarosa no fermentable [SWI / SNF]) de ATP-dependiente de la cromatina complejos de remodelación. En el mutante C9, TgRSC8 es el marco de lectura abierto aguas abajo en una transcripción dicistrónico. Aunque la proteína se expresa a partir del gen aguas abajo de la dicistron, TgRSC8 niveles se redujeron en C9 de las de tipo salvaje parásitos, según lo determinado por inmunotransferencia Western y citometría de flujo. Como TgRSC8 localizado en el núcleo del parásito, que postula un papel en la regulación génica. Los niveles de transcripción de varios marcadores fueron evaluados por PCR cuantitativa para poner a prueba esta hipótesis. El mutante C9 muestran reducidos niveles estables de transcripción del estado de bradizoíto genes inducidos BAG1, LDH2, los SUSA1 y ENO1, todo lo cual se aumentó significativamente con la adición de TgRSC8 para el mutante. Los niveles de transcripción de algunos marcadores bradizoíto no se alteró en C9, o no puede ser aumentada mediante la complementación con TgRSC8, lo que indica múltiples vías controlar bradizoíto-upregulated genes. En conjunto, estos datos sugieren un papel de TgRSC8 en el control de la expresión génica bradizoíto-upregulated. Por lo tanto remodelación de la cromatina, tanto por los mecanismos de la ATP-dependientes e independientes, es un modo importante de la regulación génica durante la diferenciación en la etapa de parásitos.
Un Dominio Transmembrana Que Contiene Proteína Pellicle De Toxoplasma Gondii Aumenta La Virulencia Y La Invasión Después De Estrés Extracelular
Para identificar los genes Toxoplasma gondii importantes en el establecimiento de una infección persistente, hemos utilizado anteriormente la firma de etiquetado mutagénesis para identificar mutantes con los números del quiste de la reducción en los cerebros de los ratones. Uno de los mutantes, 95C5, tiene una inserción dentro de una proteína predicha seis dominio transmembrana, que se localiza en la película parásito, por lo tanto se nombró proteína transmembrana película 1 (TgTPP1). Aunque el mutante 95C5 se encontró ser reducida en su capacidad para formar quistes cerebrales, es defectuoso durante la infección aguda. La adición de TgTPP1 expresada a partir de su promotor endógeno restauró la letalidad aguda de la mutante 95C5 a niveles parentales. El 95C5 mutante no tiene un defecto de crecimiento en condiciones estándar de cultivo de tejidos, sin embargo, hemos encontrado un defecto significativo en la penetración de la célula huésped después de estrés extracelular. En general, TgTPP1 pueden funcionar durante la infección aguda por el aumento de la capacidad de los parásitos a invadir después del estrés extracelular.
Parásito Mediada Aumento Del Interferón NK De Células Derivadas De Gamma Protege Contra La Severa Infección Por Virus H5N1 Altamente Patógeno Virus De La Influenza
Los brotes de virus de influenza A se asocian con importantes a nivel mundial de morbilidad humanos. Dada la creciente resistencia a los fármacos antigripales disponibles, las nuevas terapias para el tratamiento de la infección por el virus de la influenza se necesitan. Un enfoque alternativo es el de identificar los productos que mejoran la respuesta inmunitaria protectora. En estos estudios, se demuestra que infectar ratones con el gondii Th1 inductor del parásito Toxoplasma antes de la influenza aviar altamente patógena H5N1, la infección por virus de la gripe llevó a los títulos virales pulmonar disminuida y una mayor supervivencia. Una fracción no infecciosa de los antígenos de T. gondii solubles (STAG) indujo una respuesta inmune similar a la provocada por parásitos vivos, y la administración de STAG 2 días después de la supervivencia de la infección por H5N1 de la gripe de virus mejorado, redujo los títulos virales, y la reducción de la enfermedad clínica. La administración STAG protegida H5N1 infectados por el virus ratones que carecen de linfocitos, lo que sugiere que, si bien la respuesta inmune adaptativa no era necesario para una mayor supervivencia, era necesario que STAG mediada por la eliminación del virus. Mecánicamente, se encontró que la administración de STAG llevado a una mayor producción de interferón gamma (IFN-γ) a partir de células natural killer (NK), que eran a la vez necesaria y suficiente para la supervivencia. Adicionalmente, la administración exógena de IFN-γ supervivencia solo mejorada de la infección por virus de la influenza H5N1, aunque no hasta el mismo nivel que el tratamiento STAG. Estos estudios demuestran que uno no infecciosa extracto de T. gondii aumenta la respuesta inmune protectora frente a infecciones graves por virus de la influenza H5N1, incluso cuando una sola dosis se administra dos días después de la infección.
El Examen De Una Mutante De Virulencia Descubre La Proteína Biogénesis De Los Ribosomas Reguladora De Toxoplasma Gondii
Varios mutantes de inserción identificados en una pantalla para Toxoplasma gondii que eran defectuosas en el establecimiento de una infección crónica tenía un sitio común de plásmido de inserción. Este sitio de inserción se determinó que era 43 pb aguas arriba del sitio de iniciación de la transcripción de un gen cuyo producto predicho tiene homología con Rrs1p proteína ribosoma biogénesis reguladora, una proteína esencial requerida para biogénesis de los ribosomas en Saccharomyces cerevisiae. Análisis de Northern blot de este lugar, llamado TgRRS1, mostró que en el mutante C3, la transcripción completa de longitud es el regulado y por lo menos una nueva transcripción más pequeño está presente. Restauración del promotor intacto predicho y el locus de TgRRS1 C3 insercional cepa mutante no restauró la formación del cerebro quiste a los niveles de la cepa progenitora. Epítopo de etiquetado TgRRS1 se encontró a localizar a la nucleolo parásito, en una zona correspondiente a la región componente granular. TgRRS1 puede servir como un marcador para la región sub-componente nucleolar granular de T. gondii.
Un Toxoplasma Gondii Mutante Destaca La Importancia De La Regulación De Traducción En El Apicoplast Durante La Infección Animal
Toxoplasma gondii es un parásito intracelular obligado de todos los animales de sangre caliente. Hemos descrito previamente una pantalla hacia adelante genética para identificar T. gondii mutantes defectuosos en el establecimiento de una infección crónica. Uno de los mutantes aislados fue interrumpido en la región no traducida 3 '(3'UTR) de un orthologue de bacteriana traducción factor G de elongación (EFG). El mutante no tiene un defecto de crecimiento en cultivo de tejidos. Complementación genética de este mutante con el locus genómico de TgEFG restaura la virulencia en un modelo de ratón de infección aguda. Epítopo etiquetados TgEFG localizado en el apicoplast, a través de una señal de no-canónico focalización, donde funciona como un factor de elongación de la traducción en el apicoplast. Las comparaciones de TgEFG construcciones de expresión con 3'UTRs de tipo salvaje o mutante mostró que un 3'UTR de tipo salvaje es necesario para la traducción de TgEFG. En el cultivo de tejidos, la transcripción TgEFG es igualmente abundante en los parásitos de tipo silvestre y mutante, sin embargo, durante una infección de los animales, la transcripción TgEFG se triplicó con creces en el mutante. Estos resultados ponen de manifiesto que en el cultivo de tejidos, la traducción en la apicoplast puede ser disminuido, pero durante una infección de los animales, la traducción en la apicoplast debe ser completamente funcional.
Una Proteína Similar a Patatín Protege Toxoplasma Gondii a Partir De La Degradación Del óxido Nítrico En Una Forma Dependiente De La
Toxoplasma gondii es un parásito intracelular obligado, que utiliza las células inmunes para difundir a través de su anfitrión. T. gondii puede persistir e incluso poco a poco replicarse en los macrófagos activados de acogida mediante la reducción de los efectos antimicrobianos de moléculas como el óxido nítrico (NO). Un T. gondii patatin-como la proteína llamada TgPL1 se había demostrado que es importante para la supervivencia en los macrófagos activados. Aquí nos muestran que uno de T. gondii mutante con una deleción del gen TgPL1 (ΔTgPL1) es degradada en los macrófagos activados. Este fenotipo se suprime la degradación por la eliminación de NO por el uso de un NO sintasa inducible (iNOS) inhibidor de la iNOS o macrófagos deficientes. La adición exógena de NO a resultados macrófagos en el crecimiento del parásito reducido pero no la degradación de ΔTgPL1 parásitos. Estos resultados sugieren que el NO es necesaria pero no suficiente para la degradación de ΔTgPL1 parásitos en macrófagos activados. Mientras que algunas proteínas patatina similares tienen la fosfolipasa A2 (PLA2) actividad, recombinante TgPL1 purificada a partir de E. coli no tiene actividad fosfolipasa. Este resultado no fue sorprendente, ya que contiene una TgPL1 G a S el cambio en el residuo de serina catalítica predijo. Una versión epítopo de etiquetado de la parte TgPL1 colocalized con una proteína de gránulos densos en el espacio vacuola. Estos resultados pueden sugerir que TgPL1 se mueve a la vacuola para proteger a los parásitos de óxido nítrico mediante un mecanismo indeterminado.
