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Articles by Leah Fohl Villegas in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Une méthode mise à jour EPA 1623 qui utilise tangentielle débit à fibres creuses d'ultrafiltration et de chaleur étapes de dissociation pour la détection de voie d'eau
1National Exposure Research Laboratory, Office of Research and Development, US Environmental Protection Agency, 2Shaw Environmental & Infrastructure, 3Office of Ground Water and Drinking Water, US Environmental Protection Agency
Ce protocole décrit l'utilisation d'un flux de fibres creuses système d'ultrafiltration tangentielle concentration de l'échantillon et une dissociation de chaleur étapes alternatives pour la détection de aqueuse
Other articles by Leah Fohl Villegas on PubMed
Utilisation De La Transcriptase Inverse Quantitative Des Dosages PCR Et Culture Cellulaire Plaque Pour Déterminer La Résistance Des Oocystes De Toxoplasma Gondii à Désinfectants Chimiques
Toxoplasma gondii oocystes sont très résistants à de nombreux produits chimiques désinfectants. Les méthodes utilisées pour déterminer l'infectiosité des oocystes sont appuyés principalement sur la souris, le poulet, et des essais biologiques félins. Bien que considéré comme l'étalon-or, ils ne fournissent une évaluation qualitative de la viabilité des oocystes. Dans cette étude, deux approches alternatives ont été développées pour quantifier viables T. gondii oocystes après le traitement avec plusieurs désinfectants communs. La première est une transcriptase inverse quantitative PCR en temps réel (RT-qPCR) test ciblant les gènes RET1 et SporoSAG d'énumérer viables T. gondii oocystes. RT-qPCR C (T) des valeurs comprises entre Wescodyne (R), l'éthanol acidifié, ou de chaleur oocystes traités n'étaient pas significativement différents par rapport aux témoins non traités. En revanche, le traitement avec du formol ou Clorox (R) a entraîné une 2-log (10) de réduction de C (T) des valeurs. Une in vitro de T. gondii dosage de plaque d'oocystes (TOP-test) a également été développé pour mesurer la viabilité des oocystes. Ce test a utilisé une combinaison de fraisage talon et la digestion bile, suivie par la culture des sporozoïtes excysted dans une monocouche de cellules fibroblastes confluents. Les résultats ont montré qu'aucune réduction significative de la viabilité des sporozoïtes a été détecté dans de l'éthanol acidifié ou Wescodyne (R) des oocystes traités tout au moins une réduction de 2 log (10) dans les plaques formées a été observée avec Clorox (R) des oocystes traités. En outre, le traitement au formol ou la chaleur d'oocystes a fait au moins une réduction de 5 log (10) dans les plaques formées. Cette étude démontre que l'ARNm d'un dosage basé sur la viabilité PCR ciblant les gènes Act1 ou SporoSAG est une technique relativement rapide par rapport à l'in vitro et in vivo. En outre, le TOP-test s'est avéré très efficace et sensible à quantifier la viabilité des oocystes par rapport à des essais biologiques d'origine animale.
