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Articles by Lyle A. Simmons in JoVE
JoVE General
이미징 불일치 복구 및 DNA의 손상 세포 응답 바실러스 subtilis
Department of Molecular, Cellular, and Developmental Biology, University of Michigan-Ann Arbor
자세한 프로토콜은 이미징을 위해 DNA 수리 단지의 실시간 형성을 설명
Other articles by Lyle A. Simmons on PubMed
대장균의 DnaAcos 대립 유전자: 활동적인 개시 결함이 있는 ATP 바인딩 및 탈 선 DNA 복제 제어 결과 A184V 및 Y271H, 대체에 의해 발생 합니다
염색체 DNA 복제는이 생 화 확 적인 통로에 헌신의 수준에서 통제 된다. 대장균, DnaA 단백질이이 과정을 규제 하는 나타납니다. (오릭스) 세균 복제 원점에서 활동적인 개시 유도 하기 때문에 돌연변이 형태, DnaAcos, 4 개의 아미노를 함유한 산 성 대체를 들고에 분명히 규정 신호에 응답에 결함이 있습니다. 이 보고서에서 활동적인 개시의 phenotype 두 특정 아미노산 대체 결과 표시 됩니다. 하나 (A184V) 바로 옆에 워커 A (P 루프 모티브) 원인 ATP 바인딩 결함 상자 (카와 Kaguni, 1996, 몰 Microbiol 20: 1307-1318). 두 번째 아미노를 함유한 산 성 대체 (Y271H) A184V 대체 운반 돌연변이 단백질의 활동을 안정 시킬 것으로 보인다. 두 아미노산 대체 (A184V + Y271H)를 운반 하는 돌연변이 단백질 오릭스의 마커 주파수 분석 및 복제 종점 근처 로커 스에서 볼 수 있듯이, 오릭스에서 개시의 주파수 변조에 결함이 있는 것입니다. 이러한 결과 ATP 바인딩 결함 DNA 복제의 탈 선 컨트롤에 결과 나타냅니다.
대장균의 DnaA 단백질: Oligomerization 대장균 염색체 원점에서 개시에 대 한 필요 하 고 특정 N-터미널 아미노산을 포함 한다
박테리아와 prokaryotic plasmids의 복제 기원 내의 이터레이션되며 DnaA 상자 시퀀스 복제 초기자 DnaA 단백질에 의해 인식 됩니다. 대장균 염색체 원점에 오릭스, Dnaa은 추측 DNA 복제를 시작 하려면 oligomerize. 우리는 스스로 의해 활성화 되지 않은 두 dnaA 대립 간의 보완성에 의존 하는 오릭스에서 올리고 형성의 분석 결과 개발. 한 대립 유전자는 dnaA46; 허용 온도에 그것의 비활성 ATP 바인딩에 특정 결함 때문 이다. 두 번째 대립 유전자 T435K, 오릭스 내 DnaA 상자 시퀀스에 바인딩할 수 없기 때문에 DNA 복제를 지원 하지 않습니다. 우리는 T435K 대립 유전자 dnaA46(Ts) 대립 유전자를 보완 수 있습니다 보여줍니다. 결과 Dnaa에 오릭스의 상자 시퀀스 Dnaa46를 T435K 다음 활성 복잡 한 형태로 결속에 의해 묶여있다 oligomer 형성의 모델을 지원 합니다. 이 분석 결과에 의존, 신 5, 트립토판 6 및 예측된 알파 나선에 cysteine 9 했다 확인, 변경, 올리고 형성을 방해. 글루타민 8 또한 제안 하는 염색체 오릭스 로커 스에서 DnaA 오릭스 복잡 한 구조 유사 하지만 동일 하지는 않습니다 그 조립를 플라스 미드에는 포함 된 오릭스 플라스에 올리고 형성에 필요 합니다. 다른 증거는 프롤린 28 Dnaa의 오릭스 Dnab의 채용 관련 제안 합니다. 이 결과 그 DnaA 오릭스에서 oligomerization가 발생 하는 개시에 필요한 직접적인 증거를 제공 합니다.
대장균에서 Hyperinitiation의 DNA 복제는 복제 포크 붕괴와 Inviability 이어집니다
다중 플라스 미드에서 높은 dnaA 식 유도 오릭스, 병원 성 대장균 복제 원점에서 더 자주 개시 하지만 생존 능력을 유지. 비교에서는, chromosomally 인코딩된 dnaAcos 또한 자극 개시, 하지만 이것은 치명적인. 양적 방법으로 수준 높은 dnaA 식에 의해 유도 된 개시의 오릭스의 10 지도 단위 내 주로 축소 된 복제 포크에 이르게 표시. 때문에 포크를 임의로 축소, 데이터와 같은 특정 사이트에 nucleoprotein 단지 원인이 되지 않습니다. 복제 다시 시작을 recB 또는 Pria에 돌연변이 의해 차단 될 때 높은 dnaA 식을 통해 증가 식 이라고 inviability을 발생 합니다. 축소 된 포크 용량은 Dnaa에 비해 Dnaacos의 높은 식에서 실질적으로 더 높은입니다. Chromosomally 인코딩된 Dnaacos의 치명적인 형 자 멸 하는 세포의 복구 용량 hyperinitiation의 결과 제안 한다.
대장균 DnaA 단백질 기능 대장균 복제 원점에 Oligomerization에서의 필수적인 트립토판
세균성 DNA 복제 개시 DnaA 단백질 오릭스,이 사이트에 복제 포크 기계의 어셈블으로 이어지는 염색체 원점 DnaB helicase를 보충 한다. Dnaa의 N 말단 근처 지역 자체-oligomerization 및 DnaB helicase 로드 하는 필요 하기 때문에에서 오릭스, 우리 라는 이러한 함수는 알라닌 필수적인 잔류물을 식별 하기 위해이 지역에 많은 보존된 아미노산을 대체 하 여 분리할 수 또는 상호 의존 하는 경우. 우리는 신 3, 46, 페닐알라닌 및 신 62 알라닌 대체 DnaA 함수 시작에 영향을 주지 않습니다 보여줍니다. 반면, 우리 DnaA 돌연변이 체의 특성 분석에는 트립토판 찾을 6 DnaA 기능을 위해 필수적 이다 알라닌으로의 대체 되어있는 자체 oligomerization, 때문에 오릭스 DnaB 로드 실패의 결과. 이러한 결과 Dnaa가 DnaB helicase을 로드 하는 데 필요한 특정 oligomeric 구조 오릭스 형태에 바인딩되어 있음을 나타냅니다.
Y 가족 DNA 폴 복제 포크 진행의 DNA 손상 독립적인 저해에 응답합니다
대장균 Pol IV (DinB) 및 Pol V Y 가족 DNA 폴에서에서 (UmuD2'C) 복제 차단 DNA 병 변 우회 하 여 DNA 손상 시 세포 생존을 향상. 우리 보고이 폴에 대 한 고유 함수 exogenous DNA 손상에 의해 아닙니다 그러나 hydroxyurea (후), 그로 인하여 ribonucleotide reductase 억제 및 손상 독립적인 DNA 복제 연기에 대해 DNA 복제 포크 진행 체포 때. 놀랍게도, umuC, dinB, 및 umuD 유전자 제품의 특정 형태의 umuC122::Tn5 대립 유전자 HU 치료 (허)를 견딜 수 있는 대장균을 부여 한다. Umuc122와 DinB 단백질의 촉매 활동은 모두 허에 필요한. 또한, 치 사 율 야생 형 파생 상품에서 같은 실속된 복제 포크에 의해 초래 독 소/antitoxin 쌍 Mazef와 Relbe를 통해 계속 나타납니다. 이 소설 함수 Y 가족 폴 뉴클레오티드 굶주림, DNA 손상에 대 한 응답에서 그들의 설립된 기능 이외에 조건 하에서 세포 생존을 향상에 대 한 역할을 보여준다.
복제는 새 균의 Subtilis에 DNA 손상에 대 한 지역화 응답 RecA 필요 합니다
Prokaryotes와 진핵생물 DNA 복구에 관련 된 단백질 종종 살아있는 세포에 foci로 시각화 수 깡통이 복합물으로 구성. RecA-GFP foci DNA 손상에 대 한 응답에서으로 조립에 직접 subcellular 신호 검사 RecA GFP 융해를 사용 했습니다. 우리는 DNA 복제의 개시를 억제 하기 위해 두 가지 방법을 사용 하 고 DNA 복제 에이전트 DNA 손상에 노출 된 후 RecA GFP foci 설정할 셀에 대 한 필요는. 또한, endonuclease 분열 사이트별 이중 가닥 나누기 생성을 사용 하 여 복제 기계 (replisome)와 DNA 합성 이중 가닥 브레이크 수리 하는 동안 RecA GFP foci의 어셈블리에 대 한 필요를 시연 했다. 우리 세포 수준의 RecA 모니터링 하 고 제안 하는 replisome에 의해 발생 하는 피해의 사이트로 기존 단백질의 재배포에서 foci 결과 초점 형성 필요 하지 않습니다 더 유도 단백질 수준의 발견. 함께 찍은, 우리의 결과 지원 모델 단백질 DNA 손상의 사이트에서 replisome에 의해 생성 된 ssDNA 채용 기존 RecA 그. 이 결과 셀에서는 살아있는 세포에 손상 된 DNA 복구 단백질을 보충 하 여 메커니즘에 대 한 통찰력을 제공 합니다.
여러 구 Orthologues DNA 비 동종 끝-합류가 형태와 Sinorhizobium Meliloti의 만성 감염 시 중재
세균성 비 동종 끝에 합류 (NHEJ) 장치는 DNA 이중 가닥 나누기 복구 하 구 및 Ligd를 사용 하 여 두 구성 요소 시스템입니다. 반응 메커니즘 광범위 하 게 공부 했다 하더라도 훨씬 적은 세균 NHEJ의 생리 적 역할에 대 한 알려져 있다. 최근 연구 NHEJ (포자 또는 고정 단계 같이) 결 석 또는 DNA 복제는 감소 하는 조건 하에서 작동 것이 좋습니다. 흥미롭게도, 인코딩 구 및 LigD 유전자가 만성 진 핵 호스트를 감염 시킬 수 있는 박테리아의 넓은 범위에서 확인 되었습니다. 기 막히게, Sinohizobium meliloti, 콩과 식물 식물의 세포내 symbiont 운반 구 homologues 인코딩 하는 4 개의 유전자 (sku4 sku1). Sku 유전자의 분석 삭제 표시 모든 구 homologues는 기능. 하나 이러한 유전자 sku2, 강력 하 게가 셀 뿐만 아니라 호스트 공장 안에 있는 bacteroid 셀에 표시 됩니다. Vivo에서 NHEJ 기구를 시각화 하려면 SKu2 단백질 노란색 형광 단백질 (YFP)를 융합 했다. 전리 방사선 (IR) 복용량 의존 방식에서 SKu2-YFP가 셀에서의 초점 형성 유도. 또한, SKu2 YFP foci 형성 비 나누어 bacteroids, 공생의 만성 감염 단계도 NHEJ 시스템 기능 임을 나타내는에서 IR에 대 한 응답.
베타 클램프 새 균의 Subtilis에 불일치 복구의 지역화를 지정합니다
MutS 불일치 복구 (MMR), DNA 복제 하는 동안 도입 불일치 수정 하는 프로세스를 포함 하 여 여러 가지 세포 경로에서 homologs 함수입니다. 새 균의 subtilis Muts의 C 말단은 베타 클램프와 상호 작용 하는 데 필요한 보여 줍니다. 이 상호 작용은 MutS GFP 초점 형성 불일치에 대 한 응답에서에 대 한 요구. 시프, 우리 베타 클램프의 돌연변이 높은 돌연변이 빈도 원인과 MutS GFP 초점 형성에 대 한 감소를 보여줍니다. 베타 클램프와의 상호 작용에 대 한 돌연변이 결함 MutS MMR, MutL GFP 초점 형성의 다음 단계를 지원 하지 못했습니다. 우리 결론 MutS 베타의 상호작용은 초점 형성을 촉진 하는 주요 분자 상호 그 베타 클램프 생체 조건 불일치에 Muts의 안정화에 에이즈. 자체 초점 형성 replisomes에서 직접 MutS C 말단의 능력을 눈에 띄는 그것 라이센스 MutS 상호 베타 클램프 불일치 인식 나왔다.
새 균의 Subtilis에 뚜렷한 Subcellular 자리를 차지 하는 Clp와 론 프로 테아
다른 기능 중 ATP 종속 프로 테아 misfolded 단백질을 저하 및 스트레스 응답을 활성화 하는 데 필요한 몇 가지 주요 규제 단백질 제거. 새 균의 subtilis, ClpX, ClpE, 및 Clpc에서 homohexameric ATPases ClpP peptidase에 그 부부를 형성합니다. 이러한 선택성 및 Atpases이 살아있는 세포에서 지역화를 이해 하려면 각 단백질 형광 moiety를 융합 했다. ClpX-GFP (녹색 형광 단백질)와 ClpP GFP는 핵양체에 의해 점령 되지 했다 영역에서 초점 어셈블리로 지역화를 찾았습니다. 우리는 열 충격 단백질 합성 별도로 다음 ClpP GFP foci 포함 된 셀의 비율 증가 발견. 우리는 ClpE-YFP (노란색 형광 단백질)과 ClpC YFP을 형성 결정 foci 핵양체 모서리와 일치할 보통 셀 기둥 근처. 또한, ClpQ-YFP (HslV) 작은 foci 지역화 된 세포 막 근처에 일반적으로 위치를 찾았습니다. 우리 ClpQ YFP foci 동족 hexameric ATPase ClpY (HslU)의 존재에 의존 했다 발견. 또한, 우리가 발견 LonA GFP는 핵양체 일치 정상적인 성장을 하는 동안 이며 그 LonA GFP 또한 지역화는 forespore를 개발 하는 동안. 또한 LonB GFP를 조사 하 고이 단백질으로 개발, 초기에 forespore 멤브레인 개발의 뒷부분에 나오는 forespore 통해 지역화 이어서 발견. 우리의 포괄적인 연구 B. subtilis 여러 ATP 연료 프로 테아 뚜렷한 subcellular 위치 차지할 것으로 나타났습니다. 이러한 데이터는 기질 특이성 결정 못했습니다, 부분, 프로 테아 vivo에서의 공간 및 시간 조직에 의해 하는 것이 좋습니다.
대장균 및 새 균의 Subtilis 사이 더블-스트랜드 나누기에 대 한 응답 비교 SOS 유도 대 한 서로 다른 요구 사항을 보여준다
DNA 이중 가닥 나누기는 genomic 불안정성 및 세포의 죽음으로 이어질 수 있습니다 특히 해로운 병 변. 우리 더블-스트랜드 나누기 대장균 및 새 균의 subtilis에 조 난 신호 응답 조사. 대장균에서 전리 방사선에 의해 유도 된 이중 가닥 나누기는 거의 모든 세포에서 조 난 신호 유도 귀착되 었 다. 대장균 변종 SOS 유도 전리 방사선에 민감 했다. 대비 놀라운는 B. subtilis에 전리 방사선 및 사이트별 이중 가닥 브레이크 발생에 셀의 작은 subpopulation prophage PBSX 및 SOS 유전자 발현 유도 찾았습니다. 이러한 결과 더블-스트랜드 나누기 대장균만 B. subtilis 글로벌 SOS 유도 자극 보여 줍니다. 놀랍게도, RecA GFP 초점 형성은 전리 방사선 도전 대장균과 B. subtilis, 보여주는 그 RecA GFP foci의 형성 더블-스트랜드 나누기에 대 한 응답으로 발생 하지만 않습니다 필요로 하지 않거나 B. subtilis에 SOS 유도 결과에 따라 거의 동일 했다. 또한, 우리는 발견는 B. subtilis 세포 유도 SOS 전리 방사선에 대 한 응답에 생존의 야생-타입 레벨 근처의. 또한, B. subtilis RecN 이중 가닥 휴식 시간 동안 조 난 신호 유도의 낮은 수준을 유지에 기여 하 고 복구 합니다. 따라서, 우리는 이중 가닥 브레이크 수리 SOS 유도 기여 대장균과 B. subtilis 간에 실질적으로 차이가 발견.
Sinorhizobium Meliloti CpdR1 공동 관장 세포 주기 진행과 공생 만성 감염에 대 한 중요 하다
ATP 구동 베이스 세균 세포 주기, 개발 및 스트레스 반응 조절에 중요 한 역할을 한다. 니트로에서-호스트 식물과 공생을 고치고, Sinorhizobium meliloti는 오메의 endoreduplication를 포함 하 여 깊은 세포 분화를 겪 습. Planta S. meliloti 세포 주기의 변경 관리 규제 메커니즘 크게 알려지지 않은.입니다. 여기, 우리는 두 cpdR homologues, cpdR1 및 cpdR2, S. meliloti 인코딩 단일 도메인 응답 레 귤 레이 터의 특성을 보고 합니다. Caulobacter crescentus CpdR 키 protein(s), CtrA, 세포 주기 진행에 참여 등의 레 귤 레이트 된 베이스를 중재 함으로써 ClpXP 단백질의 폴라 지역화를 제어 합니다. 그러나 S. meliloti cpdR1 null 돌연변이 호스트 세포질에 침입할 수 있는,, 세포내 세균 bacteroids로 구분할 수 없습니다. 우리 미 meliloti CpdR1 폴라 지역화 패턴 및 ClpX 위치에서 역할 비슷한 C. crescentus CpdR, CpdR 단백질 중 알파-proteobacteria의 보존된 기능을 제안 하는 보여 줍니다. 그러나, S. meliloti cpdR1 null 돌연변이 세포가 불규칙 한 coccoids 및 탈 선 DNA 복제의 눈에 띄는 형태 표시. 따라서, 우리는 CpdR1 중재가 세포 분열 및 분화 만성 세포내 감염에 필요한 중요 한 세포 주기 이벤트를 공동 안 수 보여 줍니다.
Hydroxyurea 대장균에 Hydroxyl 급진적인 중재 세포 죽음을 유도 한다
Hydroxyurea (후) 특별히 억제 클래스 I ribonucleotide reductase (RNR) 없애고 dNTP 풀 및 복제 포크 마비로 이어지는. RNR의 HU 저해 인식 잘 되는 세포의 죽음에 이르게 하는 메커니즘 알 수 없는 남아 있습니다. HU 유도 된 세포의 죽음의 메커니즘을 조사 후 치료에 대장균의 게놈 및 생리 적 반응을 결정 하 시스템 수준 접근을 사용 했습니다. 우리의 결과 모델을 HU 치료 genomic 불안정성을 관리 보호 응답 세트를 빠르게 유도 한다 하는 것이 좋습니다. 지속적인된 HU 스트레스 철 통풍 관 및 독 소 Mazf와 RelE, 누구의 활동 하면 불완전 하 게 번역 된 단백질의 합성과 봉투 스트레스 반응의 자극을 활성화. 이러한 효과 하나의 셀의 터미널 시 토 크롬 oxidases, 초과 생산에 있는 증가 일으키는 속성을 변경할. 증가 초과 생산의 증가 철 통풍 관 함께 연료 HU 유도 된 세포의 죽음에 기여 하는 수 산 기 래 디 칼의 형성.
불일치에서 DNA 복제에서 그것의 역할을 구분 하는 새 균의 Subtilis 베타 클램프에 돌연변이 복구 합니다
베타 클램프 클램프 processive DNA 합성에 필요한 슬라이딩 필수적인 복제입니다. 베타 클램프 DNA 대사, DNA 불일치 복구 (MMR) 등의 몇 가지 추가적인 측면에 대 한 중요 한 이기도 합니다. 새 균의 subtilis dnaN5 대립 유전자 돌연변이 형태의 베타 클램프 G73R 대체 포함 인코딩합니다. DnaN5 대립 유전자를 가진 세포는 온도 49도 C에서 DNA 복제에 결함 때문에 성장을 위한 중요 한 그리고 그들은 허용 온도에서 MMR의 부분적인 결함에 의해 발생 하는 돌연변이 빈도 증가 보여. 우리는 DNA 복제 결함 분리 될 수 있는 경우 확인 하려면 49도 C에서 생존 능력을 구출 하는 Dnan5의 intragenic 진압에 대 한 선택에서 MMR 결함. 우리 고립 복원 돌연변이 빈도의 증가 유지 하면서 nonpermissive 온도에서 성장 하는 Dnan5의 세 intragenic 진압. 모든 3 개의 dnaN 대립 하나 세 소설 missense 돌연변이 함께 G73R 대체가 인코딩됩니다. 고립 된 missense 변이 했다 S22P, S181G, 및 E346K. 이들 중, S181G 및 e346k는 베타 클램프, 일반적인 사이트 베타 클램프 바인딩 단백질에 의해 점령의 소수 성 분열 근처에 위치. 여러 가지 방법을 사용 하 여, 우리는 각 dnaN 대립 유전자에서 발생 하는 돌연변이 빈도가 증가 MMR의 결함에 연결 된 보여줍니다. 또한, 우리는 S181G 및 E346K 높은 온도에서 성장을 허용 및 g73r에서 분리 될 때 돌연변이 주파수에 영향을 감지할 수 없는 발견. 따라서, 특정 잔류물 변화 B. subtilis 베타 클램프에 MMR의 역할에서 DNA 복제에서 베타 클램프의 역할 분리를 찾았습니다.
Mutl의 Endonuclease 도메인의 구조: 잘라 무면허
DNA 불일치 복구 효소 교정, 복제 충실도 100-를 1000 배 유기 체 박테리아에서 인 간에 이르기까지 증가 탈출 오류 수정. MutL 단백질 MutS 하 여 일치 하지 않는 인식에 따라 가닥 제거 신호 여러 단백질 단백질 상호 작용을 조정 하 여 불일치 수리에서 중앙 역할을 한다. 여기 우리 보고 새 균의 subtilis MutL endonuclease 도메인의 결정 구조. 구조는 dimerization 및 보존된 endonuclease 모티브에 걸친 헬리컬 레버에 의해 연결 된 하위 하는 규제 도메인에 구성 됩니다. 추가 보존된 모티브 레버 주위 클러스터와 vivo에서 MutL 함수에 대 한 중요 한 Zn(2+) 바인딩 사이트를 정의 합니다. 구조 새로 복제 된 DNA의 원치 않는 nicking 방지 하기 위해 강력한 억제 메커니즘을 발표 하 고 우리가 어떻게 MutS 및 processivity 클램프의 상호 MutL endonuclease 활동 라이센스 수를 설명 하는 모델을 제안 수 있습니다. 구조 분자 프레임 워크를 제안 하 고 불일치 복구에서 Mutl의 추가 역할을 테스트를 제공 합니다.
대장균 YbeY, RRNA 처리에서 고도로 보존된 단백질의 역할
UPF0054 단백질 가족은 거의 모든 시퀀스 된 박테리아에 있는 homologues와 고도로 보존 됩니다. 일부 박테리아에 각 유전자 필수적 동안 손실을 결과 매우 다 면 발현 성 표현 형에 다른 사람입니다. 자세한 구조 연구에도 불구 하 고이 단백질 가족에 대 한 셀룰러 역할 알 수 없는 남아 있다. 우리 보고 여기 그 YbeY, 병원 성 대장균 homologue 삭제 원인 리보솜 활동과 변환 충실도 리보솜 어셈블리에 영향을 주는 결함이 눈에 띄는 합니다. 16S, 23s와 5S rRNA 테르미니의 매핑을 보여 YbeY 좌우에 두는 5' 성숙에 특히 강한 효과 함께 모두 3 Rrnas의 성숙-3'-끝 16S Rrna의 물론 5s와 23S Rrnas의 5'-테르미니의 성숙. 또한, 우리는 Ybey와 rnc (인코딩 RNase III), ybeY 및 rnr (RNase R 인코딩) 및 ybeY pnp (인코딩 PNPase) 간의 강한 유전자 상호 작용을 보여, rRNA 성숙에 Ybey에 대 한 제안 하는 역할 추가. YbeY에서 고도로 보존된 아미노산 돌연변이 vivo에서 상당한 효과를 발견 한 두 가지 잔류물 (H114, R59) 식별을 수 있습니다. RRNA 성숙 및 박테리아에서 리보솜 조립에 대 한 이러한 결과의 의미를 살펴봅니다.
복제 포크에서 필수적인 DNA 중 합 효소의 동적 자료를 복구 원인에 일치 하지 않습니다
불일치 수리 (MMR) 게놈 복제 하는 동안 발생 하는 DNA 중 합 효소 오류를 수정 합니다. MMR은 게놈 유지 관리를 위해 중요 한 및 손실을 증가 돌연변이 요금 몇 백 배. 최근 작품 불일치 인식 단백질 MutS 복제 processivity 클램프의 상호작용은 새 균의 subtilis에 MMR에 대 한 중요 한 것으로 나타났습니다. MMR의 DNA 복제의 결합 방법을 더 이해 하기 우리는 DNA 복제 오류 증가 따라 라이브 셀에서 녹색 형광 단백질 (GFP)를 융합 하는 MMR과 DNA 복제 단백질 subcellular 지역화 검사. 우리는 필수적인 DNA 중 합 효소 DnaE GFP foci 불일치 정 관에 따라 감소 DnaE GFP foci의 손실 MutS 필요 합니다 보여 줍니다. 또한, 우리는 MutS MutL 바인딩할 및 체 외, DnaE DnaE 복구를 결합 하 여 제안 보여줍니다. 우리는 또한 그 DnaE GFP foci 감소를 보여주는 DnaE GFP foci의 손실 물결 DNA 복제에 의해 발생 하는 DNA 합성의 DNA 손상에 관계 없이 체포에 따라 vivo에서 발견. 우리는 MutS 직접 연락처 DNA 복제 기계 MMR 동안 복제 포크에 Dnae의 조직에서 동적 변화를 일으키는 것을 제안 합니다. 우리의 결과 눈에 띄는 설정 하며 친밀 하 게 MMR와 생체 조건 복제 DNA 중 합 효소 복합체를 연결 합니다.
DNA 손상 및 반응성 질소 종 유아 마우스 소장의 브리 Cholerae 식민지 장벽입니다
섭취 한 비 브리 오의 cholerae 위장을 통과 하 고 식민지의 호스트의 작은 창 자. 여기, 우리가 V. cholerae 요구 하는 적어도 두 종류의 DNA 복구 시스템 효율적으로 유아 마우스 소장의 식민지에 대 한 경쟁을 보여줍니다. 이러한 결과 V. cholerae 경험 murine 위장 기관에서 DNA 손상 증가 보여줍니다. 이것에 동의 우리 murine 창 자 샛길 cholerae 액체 문화 통로에 비해 대의 돌연변이 빈도가 증가 보여줍니다. 우리의 유전자 분석 알려지고 소설 방어 효소는 또한 필요한 V. cholerae 효율적으로 DNA 손상의 잠재적인 원인으로 반응성 질소 종 가리키는 유아 마우스 소장을 식민지로 (하지만 하지 반응 산소 종) 반응성 질소 종 해독 하는 데 필요한 식별. 우리가 보여 잠재적인 반응성 질소 종 V. cholerae를 해로운 호스트 유도할 수 있는 질소 산화물 synthase (iNOS) 활동에 의해 생성 되지 않습니다 대신 뱃속에 acidified 아 질산염에서 파생 될 수 있습니다. 이 가설에 동의 우리 종자 DNA 수리 또는 반응성 질소 종 방어 결핍 장 식민지에 결함이 성장 감소는 또는 acidified 아 질산염을 포함 하는 미디어에 돌연변이 빈도 증가 보여줍니다. 또한, DNA 수리의 식민 결함 구출 위 산을 중화 하 고 반응성 질소 종 방어 이러한 돌연변이 대 한 일반적인 방어 통로 제안 하는 결함이 있는 돌연변이 보여 줍니다.
