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In JoVE (2)
- Utilisation du système d'électroporation Gene Pulser MXcell à transfecter des cellules primaires à haut rendement
- Aide d'un compteur de cellules automatisé pour simplifier les études d'expression génique: Knockdown siRNA de l'IL-4 dans l'expression des gènes dépendant cellules Namalwa
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Articles by Michelle L. Collins in JoVE
JoVE General
Utilisation du système d'électroporation Gene Pulser MXcell à transfecter des cellules primaires à haut rendement
Gene Expression Division, Bio-Rad Laboratories, Inc.
Cette procédure montre comment utiliser le système d'électroporation Gene Pulser MXcell rapidement et facilement d'identifier les meilleures conditions d'électroporation pour les fibroblastes embryonnaires de souris (MEF) ou d'autres cellules primaires. Considérations pour le dépannage sont également abordés dans la vidéo associée.
JoVE General
Aide d'un compteur de cellules automatisé pour simplifier les études d'expression génique: Knockdown siRNA de l'IL-4 dans l'expression des gènes dépendant cellules Namalwa
Gene Expression Division, Bio-Rad Laboratories
Cette procédure décrit un workflow rapide et facile à introduire dans les siARN difficiles à transfecter des lignées cellulaires et de suivre l'expression génique par PCR en temps réel. L'utilisation d'un compteur de cellules automatisé, plaque électroporation multi-puits et la station d'électrophorèse automatisé de fournir des résultats rapides et fiables, sans la nécessité pour la manipulation robotisée cher.
Other articles by Michelle L. Collins on PubMed
Mesure De La Synthèse De L'ADN Mitochondriale in Vivo à L'aide D'une Technique De Spectrométrie De Masse Isotopique Stable
Nous décrivons ici une nouvelle technique par spectrométrie de masse isotopique stable pour mesurer la synthèse de l'ADN (ADN mitochondrial) mitochondriale. Croissance (vieux de 2-4 mo) et poids stable (8-10 mo vieux) Sprague-Dawley rats ont apprêté avec (2) H (2) O (l'eau deutérée) 2.0-2.5 % corps eau enrichissement, par injection intrapéritonéale et ensuite à raison de 4 % (2) H (2) O dans l'eau potable pour les 3-11 SEM mitochondries ont été isolées du muscle cardiaque et des membres postérieurs, et l'ADN mitochondrial a été isolé et enzymatiquement hydrolysé désoxyribonucléosides. PCR a confirmé l'absence de contamination de l'ADN nucléaire. L'enrichissement isotopique de la portion de désoxyribose de désoxyadénosine a été déterminée par analyse par CPG-SM et ADNmt nouveau pourcentage a été calculé en comparant à des enrichissements de l'ADN génomiques dans un tissu avec un chiffre d'affaires quasi complète (moelle osseuse). Incorporation de la première étiquette dans désoxyadénosine d'ADNmt était linéaire et chiffre d'affaires de l'ADNmt a été observée chez des rats femelles adultes (1.1-1.3 % nouveau ADNmt par jour dans le muscle cardiaque et squelettique). Die-away courbes d'ADNmt après l'arrêt (2) administration O H (2) donne une constante de vitesse de rotation semblable. Des sujets humains ont également été offerte (2) H (2) O pendant jusqu'à 6 sem et les mitochondries des plaquettes ont été isolés. L'incubation avec la DNase supprimé toute contamination de l'ADN génomique ; l'ADNmt plaquettes exposé incorporation linéaire de (2) H (2) O et atteint des valeurs identiques à celles en génomique de plateau l'ADN d'entièrement remises cellules (monocytes circulants). En conclusion, la réplication de l'ADN mitochondrial peut être directement mesurée in vivo chez les rongeurs et les humains sans l'utilisation de la radioactivité. Utilisation de cette technique pourrait permettre une meilleure compréhension de la régulation de la biogenèse mitochondriale in health and disease.
Effet Des Inhibiteurs Nucléosidiques De La Transcriptase Inverse Sur La Synthèse De L'ADN Mitochondriale Chez Les Rats Et Les Humains
Inhibiteurs nucléosidiques de la transcriptase inverse (INTI) ont émis l'hypothèse pour inhiber mitochondrial DNA polymérase gamma, résultant en une diminution de l'ADNmt synthèse et mitochondrial insuffisance chez les patients infectés par le VIH-1. synthèse de l'ADN mitochondrial a été mesurée directement à l'aide d'une méthode de spectrométrie de masse isotopique stable après un traitement NRTI chez les rongeurs. 3 « - Azido - 3 »-désoxythymidine (AZT) a été ajouté à l'eau (1 mg/mL) et administrée ad libitum à des rats Sprague-Dawley femelles de 1 à 8 semaines (n = 4 ou 5 animaux/évaluation le 6e). Prise de poids ni nourriture ni corps est affecté par la prise d'AZT. Témoins et rats traités à l'AZT ont reçu 4 % H2O comme l'eau potable pendant 2 semaines. L'AZT (environ 100 mg/kg/j) a produit une importante (P 0,05 <) diminuer cardiaque du membre postérieur muscle ADNmt fractionnaire synthèse et par rapport aux groupes témoins (de 13,8 +/-4,2 % à 7,0 +/-4,8 % et de 7,6 +/-1,8 % à 4.5 +/-0,4 %, respectivement) après 4 semaines. Teneur en cytochrome c oxydase dans le muscle du membre postérieur a également diminué de 50 % par rapport aux témoins après 4 semaines de traitement à l'AZT (P < 0,07) et un indice calculé du taux absolu de la biogenèse mitochondriale a été significativement réduit par semaine 2 de l'AZT (P 0,05 <) dans le muscle du membre postérieur. Dans des études préliminaires, les enrichissements de l'ADNmt de plaquettes ont été comparés aux enrichissements ADNn monocyte (utilisé comme marqueur d'un entièrement tourné sur tissu) chez des sujets humains en bonne santé. Fractionnaire synthèse de l'ADN mitochondrial dans les plaquettes atteint 98 +/-3 % après 5 semaines d'H2O d'étiquetage. On en conclut qu'Inti diminuent la synthèse de l'ADN mitochondrial et teneur enzymatique oxydative et donc la biogenèse mitochondriale chez les rongeurs et que les effets d'Inti sur la biogenèse mitochondriale dans les tissus du VIH-1-humains infectés peuvent en principe être mesurées à l'aide de cette approche.
Caractérisation De La Formation De Complexes Entre Les Membres De La Famille De La Protéine De CFP-10/ESAT-6 Complexe Mycobacterium Tuberculosis : Vers Une Compréhension Des Règles Régissant La Formation De Complexes Et De Flexibilité Fonctionnelle Ainsi
Nous avons précédemment montré que les protéines sécrétées du complexes tuberculosis M. CFP-10 et ESAT-6 forme un complexe serré, 1:1, qui peut-être représenter leur forme fonctionnelle. Les travaux rapportés ici qu'une combinaison d'analyses biochimiques et de deux-hybride de levure a été utilisée pour caractériser la formation d'un complexe entre deux autres paires de CFP-10/ESAT-6 protéines de la famille (Rv0287/Rv0288 et Rv3019c/Rv3020c) et de déterminer si les complexes peuvent se former entre les génomes non appariés membres de la famille. Les résultats démontrent clairement que les Rv0287/Rv0288 et Rv3019c/3020c forment des complexes serrés, comme initialement observées pour la CFP-10/ESAT-6. Les protéines de Rv0287/Rv0288 et Rv3019c/Rv3020c étroitement apparentées peuvent aussi former des complexes paires non-génome (Rv0287/Rv3019c et Rv0288/Rv3020c), mais ne sont pas capables de se lier aux protéines CFP-10/ESAT-6 plus apparentées.
Création D'un Programme De Stages D'infirmière Abaisseur
Au sein de Christiana Care Health System, l'occasion a évolué à élaborer une stratégie de recrutement d'infirmière pour nos unités de soins. Etant un système grand enseignement, il y avait un besoin spécifique pour l'enseignement à ce niveau d'entrée infirmier. Grâce à la collaboration de collègues infirmières, le programme de stages d'infirmière abaisseur a été créé. Le programme englobe l'orientation clinique et didactiques classes. D'importance notable à la fin du programme ont été l'amélioration du score base Test d'évaluation de connaissances et le taux de rétention d'infirmière.
Les Restes De La Formation Des Galaxies D'une Enquête Panoramique De La Région Autour De M31
Dans les modèles cosmologiques hiérarchiques, galaxies se développent en masse par l'accrétion continuelle des plus petits. La marée perturbation de ces systèmes devrait se traduire par des étoiles faiblement liées autour de la galaxie, à des distances atteignant 10 à 100 fois le rayon du disque central. Le nombre, la luminosité et la morphologie des reliques de ce processus fournissent des indices importants pour l'histoire de la formation de galaxie, mais obtenir une étude complète de ces composants est difficile en raison de leur faiblesse intrinsèque et la vaste étendue. Nous rapportons ici un sondage panoramique de la galaxie d'Andromède (M31). Nous détectons des étoiles et des structures cohérentes qui sont presque certainement des vestiges de galaxies naines, détruits par le champ marée de M31. Un recensement amélioré de leurs homologues survivants implique que les trois quarts des satellites de M31 plus lumineux que M(v) = -6 attendent découverte. Le compagnon de brillants, du triangle (M33), est entouré par une structure stellaire qui fournit des preuves convaincantes d'une récente rencontre avec M31. Ce panorama de la structure de la galaxie directement confirme les principes de base du modèle hiérarchique galaxie formation et révèle l'histoire partagée de M31 et M33 dans l'accumulation incessante de galaxies.
