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- Utilizando el sistema de electroporación Gene Emisores MXcell para transfectar células primarias con alta eficiencia
- El uso de un contador de células automatizado para simplificar estudios de expresión génica: siRNA Derribo de IL-4 la expresión génica en células dependientes Namalwa
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Articles by Michelle L. Collins in JoVE
JoVE General
Utilizando el sistema de electroporación Gene Emisores MXcell para transfectar células primarias con alta eficiencia
Gene Expression Division, Bio-Rad Laboratories, Inc.
Este procedimiento muestra cómo utilizar el sistema de electroporación Gene Emisores MXcell para identificar rápida y fácilmente las mejores condiciones de electroporación de fibroblastos embrionarios de ratón (MEFs) o de otras células primarias. Consideraciones para la solución de problemas también se discuten en el vídeo asociado.
JoVE General
El uso de un contador de células automatizado para simplificar estudios de expresión génica: siRNA Derribo de IL-4 la expresión génica en células dependientes Namalwa
Gene Expression Division, Bio-Rad Laboratories
Este procedimiento describe un flujo de trabajo rápido y fácil de introducir en siRNA difíciles de transfectar líneas celulares y seguir la expresión de genes por PCR en tiempo real. El uso de un contador de células automatizado, multi-así placa electroporación, y la estación de electroforesis automatizados proporcionar resultados rápidos y confiables sin la necesidad de manipulación robótica caro.
Other articles by Michelle L. Collins on PubMed
Medición De La Síntesis De ADN Mitocondrial En Vivo Usando Una Técnica De Espectrometría De Masa Isotópica Estable
Aquí describimos una nueva técnica espectrométrica estable isótopo masa para medir la síntesis mitocondrial de la DNA (mtDNA). Crecimiento (2-4 mo viejo) y peso estable (8-10 mo viejo) Sprague-Dawley ratas fueron preparadas con (2) H (2) O (agua deuterado) 2.0-2.5% cuerpo agua enriquecimiento, vía la inyección intraperitoneal y luego dado 4% (2) H (2) O en el agua potable para wk. 3-11 las mitocondrias fueron aisladas del músculo cardiaco y trasera, y mtDNA fue aislado y enzimáticamente hidrolizado a deoxyribonucleosides. PCR confirmó la ausencia de contaminación de ADN nuclear. El enriquecimiento isotópico de la molécula de desoxirribosa de Desoxiadenosina se determinó mediante análisis por GC-MS, y mtDNA nuevo porcentaje se calculó en comparación a enriquecimientos de ADN genómicos en un tejido con una facturación de casi completa (médula ósea). Incorporación de la etiqueta inicial al Desoxiadenosina de mtDNA fue lineal, y facturación de mtDNA se observó en ratas hembra adultas nongrowing (1.1-1.3% nuevo mtDNA por día en el músculo cardíaco y esquelético). Curvas Die-lejos del ADNmt después de suspender la administración de H (2) O (2) dieron una constante de velocidad de rotación similar. Seres humanos también recibieron (2) H (2) O por hasta 6 semanas, y las mitocondrias de las plaquetas se aislaron. Incubación con DNasa retirar cualquier contaminante ADN genómico; plaqueta mtDNA exhibe lineal incorporación de (2) H (2) O y alcanzó meseta valores idénticos a los de genomic DNA de vuelta completamente células (monocitos circulantes). En conclusión, replicación del mtDNA puede ser directamente medida in vivo en roedores y seres humanos sin el uso de la radiactividad. Uso de esta técnica puede permitir mejorar la comprensión de la regulación de la biogénesis mitocondrial en salud y enfermedad.
Efecto De Inhibidores Nucleósidos De La Transcriptasa Inversa En La Síntesis De ADN Mitocondrial En Ratas Y Seres Humanos
Inhibidores de la transcriptasa inversa análogos de los nucleósidos (NRTI) han planteado la hipótesis para inhibir gamma polimerasa de la DNA mitocondrial, resultando en la síntesis de mtDNA disminuida e insuficiencia mitocondrial en pacientes infectados por VIH-1. síntesis de mtDNA se midieron directamente utilizando un método de espectrometría de masa de isótopos estables después del tratamiento del Inti en roedores. 3'-Azido-3'-timidina (AZT) fue añadido al agua (1 mg/mL) y administrar ad libitum a ratas Sprague-Dawley 1-8 semanas (n = 4 o 5 animales/punto). Ni ingesta de peso ni comida del cuerpo fue afectado por la ingesta de AZT. Controles no tratados y tratados con AZT ratas recibieron 4% H2O como agua potable durante 2 semanas. AZT (aproximadamente 100 mg/kg/d) produjo una significativa (P 0.05 <) disminución cardiaca y trasera músculo mtDNA fraccional síntesis en comparación con grupos de control (de 13,8 +/-4,2% a 7.0 +/-4,8% y de 7,6 +/-1,8% a 4.5 + /-0,4%, respectivamente) después de 4 semanas. Contenido de citocromo c oxidasa en músculo trasera también disminuyó en un 50% en comparación con controles después de 4 semanas del tratamiento con AZT (P < 0.07) y un índice calculado de tasa absoluta de la biogénesis mitocondrial se redujo significativamente por dos semanas de AZT (P < 0.05) en el músculo del miembro posterior. En estudios preliminares, enriquecimientos de mtDNA de plaquetas se compararon con enriquecimientos de monocitos nDNA (utilizado como marcador de totalmente dado vuelta sobre tejido) en sujetos humanos sanos. Fraccional síntesis del ADNmt en plaquetas alcanzaron 98 +-3% después de 5 semanas de H2O etiquetado. Se concluye que NRTIs disminuyen síntesis de mtDNA y contenido de enzimas oxidativas y así la biogénesis mitocondrial en roedores y que los efectos de NRTIs en la biogénesis mitocondrial en tejidos del VIH-1-seres humanos infectados pueden en principio ser medidos utilizando este enfoque.
Caracterización De La Formación De Complejos Entre Los Miembros De La Familia De Proteínas CFP-10/ESAT-6 Complejo Mycobacterium Tuberculosis: Hacia Una Comprensión De Las Normas Que Rigen La Formación De Complejos Y La Flexibilidad De Tal Modo Funcional
Previamente hemos demostrado las proteínas secretadas M. tuberculosis complejas CFP-10 los ESAT-6 forma un complejo apretado, 1:1, que puede representar su forma funcional. En el trabajo divulgado aquí que una combinación de análisis dos híbridos y bioquímico de la levadura se ha utilizado para caracterizar la formación de complejos entre otros dos pares de CFP-10/ESAT-6 familias proteínas (Rv0287/Rv0288 Rv3019c/Rv3020c) y para determinar si se pueden formar complejos entre genoma no apareados miembros de la familia. Los resultados demuestran claramente que el Rv0287/Rv0288 y Rv3019c/3020c forman complejos apretados, como inicialmente observados CFP-10/ESAT-6. Las proteínas estrechamente relacionadas de Rv0287/Rv0288 y Rv3019c/Rv3020c también son capaces de formar complejos de genoma no apareados (Rv0287/Rv3019c y Rv0288/Rv3020c), pero no son capaces de unirse a las proteínas más distante relacionadas de CFP-10/ESAT-6.
Creación De Un Programa De Pasantías De Enfermera De Paso Descendente
Dentro de Christiana Care Health System, evolucionó una oportunidad para desarrollar una estrategia de reclutamiento de la enfermera para nuestras unidades de paso descendente. Ser un sistema de enseñanza grande, hubo necesidad específica para la educación en este nivel de entrada de enfermería. Gracias a la colaboración de colegas de enfermería, se creó el programa de pasantías de la enfermera de paso descendente. El programa engloba la orientación clínica y clases didácticas. De notable importancia en la terminación del programa fueron la mejora de puntuación de la prueba básica de evaluación de conocimientos y la tasa de retención de la enfermera.
Los Restos De La Formación De La Galaxia De Una Encuesta Panorámica De La Región Alrededor De M31
En los modelos cosmológicos jerárquicos, galaxias crecen en masa a través de la acumulación continua de pequeños. La interrupción de la marea de estos sistemas es que resulte en estrellas libremente consolidados que rodea la galaxia, en distancias que alcanzan de 10 a 100 veces el radio del disco central. El número, la luminosidad y la morfología de las reliquias de este proceso proporcionan pistas importantes a la historia de formación de galaxia, pero obtener un estudio exhaustivo de estos componentes es difícil debido a su debilidad intrínseca y gran alcance. Presentamos un estudio panorámico de la galaxia de Andrómeda (M31). Detectamos estrellas y estructuras coherentes que seguramente son restos de galaxias enanas, destruidas por el campo marea de M31. Un censo mejorado de sus homólogos sobrevivientes implica que las tres cuartas partes de los satélites de M31 más brillantes que M(v) = -6 esperan ser descubiertos. El compañero más brillante, triángulo (M33), está rodeado por una estructura estelar que proporciona evidencia persuasiva para un encuentro reciente con M31. Este panorama de la estructura de la galaxia directamente confirma los principios básicos del modelo de formación jerárquica de la galaxia y revela la historia compartida de M31 y M33 en la incesante acumulación de galaxias.
