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Articles by Minetaro Arita in JoVE
JoVE Immunology and Infection
ポリオウイルスの同定のための粒子凝集法
1Department of Virology II, National Institute of Infectious Diseases, 2New Product Design Department, Fujirebio Inc.
ウイルスの受容体分子を利用して、最近開発された新たな粒子の凝集反応（PA）アッセイは、ポリオウイルス（PV）の迅速かつ容易に識別することができました。この記事では、PVの識別のためのPAのアッセイのための手順が表示されます。
Other articles by Minetaro Arita on PubMed
ポリオ ウイルス 147S 粒子のキャラクタリゼーション: ポリオ ウイルスを Uncoating 新しい洞察力。
セービン 1 ひずみ （PV） ポリオ ウイルス変異、S1(2Y-1I)、運ぶアミノ酸位置 VP2(142) Tyr と Ile の位置 VP1(160)、HEp 2 c 細胞持続感染を確立できます。この変異異型 147S 粒子の相互作用により 0 ℃ 以下 PV 受容体 (PVR) CD155 または細胞外の部位の PVR とヒンジとマウス igg2a 産の Fc 部分のキメラ分子 PVR IgG2a 表現するいずれかのセルを形成します。37 ℃ で録画したテレビ番組との相互作用、時 S1(2Y-1I)、親の緊張と似たような両方の 135 s A 粒子形成して 80 年代カプシド空します。驚いたことの 0 ℃ では濃度で等しい 5 以上 nM、PVR IgG2a 誘起両方押し出し VP4 S1(2Y-1I) のキャプシドと 80 年代の粒子の形成からの。同じ遷移 40 親株セービン 1 と 0 度 C で観察された nM PVR IgG2a。したがって、80 年代の粒子と太陽光発電 uncoating の手順の 1 つとして考慮 VP4 押し出しの形成温度無依存することができます高 PVR 濃度。これは次の低温吸着 PV キャプシドの構造変化が発生したことを意味します。
In Vitroおよびin削減ウイルスタンパク質合成活性を有するポリオウイルス1型変異体のin Vivo表現型の特性
ポリオウイルスのセービンのワクチン株（PV）は、内部リボソーム侵入部位（IRES）、ウイルスのタンパク質合成を指示するエリア内の主要な減衰決定基を含んでいます。 PVの神経毒性に低下し、ウイルス蛋白質合成に及ぼす影響を調べるために、異なる長さの短いオープンリーディングフレームからなるスペーサー配列は、縮小ウイルスタンパク質の合成とPVの変異体で、その結果、IRES、及びウイルスポリタンパク質の開始コドンとの間で導入されました。 HeLa S3細胞で測定されたこれらのPV変異体は、ウイルスのタンパク質合成活性の親マホーニー株のそれの8.8から55パーセントを持っていた。野生型活性の28％以上を持つ唯一のウイルスは、プラーク精製後に無傷のスペーサー配列を持っていた。野生型活性の17％または21％の変異体は不安定であった8.8％の変異体は致死であった。 PV変異体の神経毒性は、ヒトPV受容体遺伝子をもつトランスジェニックマウスで評価した。野生型活性の17％を持つ変異体が部分的に減衰する表現型を示しながら、このテストでは、野生型活性の28％以上の変異体は、神経毒性であった。この変異体は安定して脊髄に複製されますが、安定性が大幅に大脳から脊髄へのウイルス感染の過程で影響を受けました。これらの結果は、培養細胞（野生型活性の17から55パーセント）で測定された削減ウイルスのタンパク質合成活性は、PVの減衰の主な決定要因ではないことを示唆している。
2001年のフィリピンにおける1型ワクチン由来ポリオウイルスの循環
2001年に、ワクチン由来のポリオウイルスを循環させる高度に進化した1型（cVDPV）は、3つの急性弛緩性麻痺患者とフィリピンの3つの別々のコミュニティからの一つの接触から分離された。これら4つのcVDPV分離株の完全ゲノム配列決定は、カプシド領域がセービン1ワクチン株から派生したものがnoncapsid地域のほとんどが経口ポリオワクチン（OPV）株とは無関係の正体不明のエンテロウイルスから派生したことを明らかにした。 cVDPV分離株の配列は互いに密接に関連していたし、分離株は一般的な組換え部位を持っていた。 cVDPV分離株の遺伝的および生物学的特性のほとんどは、野生ポリオウイルスのものと区別がつかなかった。しかし、ほとんどの最近同定されたcVDPVは、温度感受性と部分的な減衰の表現型を維持し、健康の接触から隔離します。株とセービン1間の順序関係は、cVDPVは、1999年に1998年に与えられたOPVの投与に由来するとcVDPVは、伝送の細いチェーンに沿って循環していることが示唆された。 1型cVDPVは、最後の2001年9月にフィリピンで検出され、ポリオの集団の免疫は2001年後半と2002年初めに大規模なOPVキャンペーンによって育てられた。
カニクイザルのエンテロウイルス71の表示の減衰の温度感受性変異株
エンテロウイルス71（EV71）は手足口病の主な原因物質の一つであり、時には重篤な神経疾患に関連付けられています。本研究では、試行はサル感染モデルにおける神経毒性のEV71減衰の分子決定因子を同定しました。 EV71プロトタイプBRCRの強毒株の感染性cDNAクローンを構築した、EV71のか、ポリオウイルス（PV）セービンのワクチン株の弱毒株の温度感受性（ts）変異は、その後感染性クローンに導入した。 in vitroおよび親と変異ウイルスのin vivoでの表現型で、それぞれの培養細胞とカニクイザルで分析した。 3Dポリメラーゼの変異（3D（POL））および3 '非翻訳領域（NTR）、セービン1のTS決定に対応した、EV71に異なる温度感受性を付与する。 EV71変異体[EV71（S1-3 '）] 5に変異を運ぶ "NTR、3D（POL）および3'にNTRは、サルの中枢神経系でのウイルスの限られた広がり、その結果、弱毒神経毒性を示した。これらの結果は、元の病因に異なる性質にもかかわらず、サルの神経毒性のそのEV71とPV1共通の遺伝的決定を示しています。
組換えセービン3由来のポリオウイルスは、ウイルスポリメラーゼコード領域における先住民族の人権エンテロウイルス種Cと相同配列を含んでい
ポリオの流行は、ワクチン由来のポリオウイルスを循環させることにより引き起こされる（cVDPVs）土着の野生ポリオウイルス（PVS）はワクチン接種によって排除された地域で報告されている。これらのcVDPVsのほとんどは、組換えによって、人間のエンテロウイルス種C（HEV-C）に由来すると考えられていた非構造タンパク質をコードする領域で正体不明のシーケンスが含まれていました。そこで、本研究では、2002年にカンボジアの急性弛緩性麻痺（AFP）のケースからセービン3由来のPV組換えの分離（カンボジア-02）を報告します。私たちはカンボジアのAFP症例から1999年から2003年までの非ポリオエンテロウイルス分離株の配列分析によりカンボジア-02の推定組換え相手を識別しようとしました。 PVの前に推定進化率に基づいて、カンボジア-02の結果組換え事象は、経口PVワクチン（99.3％VP1領域の塩基の同一性）の投与後6ヶ月以内に発生したと推定された。 2BCとカンボジア-02の3D（POL）のコーディング領域はウイルスのタイプ17（CAV17）（最高[87.1パーセント]のヌクレオチドの同一性）や先住民CAV13-CAV18のクラスタ（先住民コクサッキーの遺伝子クラスターに分類された最高[94.9パーセント]のヌクレオチドの同一性）HEV-Cの系統学的解析により、それぞれ、2002年に分離します。 CAV13-CAV18とCAV17は、2002年にはなく、2001年と2003年に支配的なHEV-Cの血清型であった。我々はCAV17の3CD（プロ）コーディング領域分離にCAV13-CAV18とCAV17の間に推定される組換えを発見した。これらの結果は、PV3の3D（POL）のコーディング領域（カンボジア-02）の一部がHEV-Cから派生していることが示唆された遺伝的にカンボジアの2002年の先住民CAV13-CAV18株に関連した株。
ポリオウイルスのレプリコンによるマウスのポリオ様麻痺の定量分析
ポリオウイルス（PV）感染症は脊髄の運動神経細胞の破壊によって、一般的に足の、重度の麻痺を引き起こす。本研究では、PVの脊髄内での複製、運動ニューロンの損傷とポリオ様麻痺との関係は、人間のPV受容体（TgPVR21）を発現するトランスジェニックマウスで分析した。最初に、カプシド遺伝子の代わりにPVレプリコンエンコーディングホタルルシフェラーゼ（PV-Fluc mc）は293T細胞においてトランスカプシドだったとtrans-カプシドPV-Fluc MC（TE-PV-Fluc MC）は、その後脊髄に接種したTgPVR21マウスのコード。 TE-PV-Fluc MCは6.3×10（7）の力価と回収されたPV1の系統のものと同等であった感染単位ミリリットル（-1）。 TE-PV-Fluc MCを接種したTgPVR21マウスは弛緩性麻痺を完了するには、握力の低下に至るまで重症度と、後肢の非致死的麻痺を示した。脊髄におけるTE-PV-Fluc MCの複製が認められ、16時間π組織学的分析でプラトーに達し、12時間π早けれで麻痺の出現に続いて10時間接種後（PI）、ピークレベルに達し病変と最もマウスの臨床症状の重症度との相関関係。しかし、重度の麻痺も明らかに低い病変スコア、5.3×10（2）運動ニューロン（腰髄における感受性細胞の1.4％）がTE-PV-Fluc MCによって感染したとしていくつか。で観察することができる。これらの結果は、運動ニューロンの小集団におけるPVの複製はTgPVR21マウスの厳しい残留ポリオ様麻痺のために重要であったことを示している。
RNAウイルスの急速なゲノムシークエンシング
我々は、ゲノム配列をプラスミドベクターにサブクローニングすることなく培養されたウイルス分離株から得られたことによりウイルスのRNA配列の迅速な決定のためのシステムを開発しました。このメソッドは、不明または型別、新興ウイルスの課題に対処する新たな機会を与える。
エンテロウイルス71型の弱毒株は遺伝子型に属しているカニクイザルの神経毒性と弱毒化抗原の広範なスペクトルを示し
エンテロウイルス71（EV71）が原因となる手のエージェント、足、口病であり、また、時には重篤な神経疾患に関連付けられています。本研究では、サル感染モデルにおいて、遺伝子型に属し、[EV71（S1-3 '）] EV71の弱毒株の抗原性と組織特異性を特徴とする。三カニクイザルは、 "（EV71の45日目接種後S1-3）の静脈内経路を介して親の強毒株EV71（BRCR-TR）と致死的に続いて、EV71（S1-3）"を接種した。 EV71（S1-3 '）を接種したサルは、軽度の神経症状（振戦）を示したが、症状の増悪なく、病原性のEV71（BRCR-TR）で致命的なチャレンジを生き残った。免疫サル血清の遺伝子型、B1、B4、C2、およびC4を含むEV71の異なる遺伝子型、に対して中和活性の広いスペクトルを示した。検討した株について、血清は同型（遺伝子型）と遺伝子型C2に対して最低中和活性に対して最高中和活性を示した。次のように血清の中和活性を減少させることの順であった：A> B1> C4> B4> C2。 EV71（S1-3 '）の組織特異性を調べるために、中枢神経系（CNS）とextraneural組織におけるウイルスの分布調査に続いて、（2頭のサルは、静脈内EV71 S1-3）を接種した "。 CNSでは、EV71（S1-3 '）は唯一の脊髄から分離された。これらの結果は、静脈内経路を介して接種する場合は、この弱毒株はまだ神経向性であったがEV71（S1-3 '）は、効果的な抗原として機能することを示しています。
ポリオセービン1株由来の減衰要因の協調効果は、NOD / SCIDマウスの感染モデルではエンテロウイルス71の減衰のために不可欠である
エンテロウイルス71（EV71）が原因となる手のエージェント、足、口病であり、また重篤な神経疾患に関連付けられています。弱毒EV71株[EV71（S1-3 '）]カニクイザル感染モデルにおいて確立されているが、この株は1型ポリオウイルスワクチン株、セービン1 [PV1（セービン）]から派生した減衰決定基を含み、5 '非翻訳領域（NTR）、3Dポリメラーゼ、3' NTR。本研究では、NOD / SCIDマウスの感染モデルにおけるEV71感染にPV1（セービン）の減衰決定の効果を分析した。我々はマウスに適合したEV71株を単離した[EV71（NOD / SCID）] 3で後肢の麻痺を引き起こす - の脳内の病原性のEV71（名古屋市）株の適応による4週齢のNOD / SCIDマウスにNOD / SCIDマウス。キャプシドタンパク質VP1のアミノ酸の変化（グルタミン酸に145位のグリシンの変化）を生じたヌクレオチド2876で単一の変異はNOD / SCIDマウスのマウスに適合した表現型のために不可欠であった。次に、我々はEV71（名古屋）ゲノムにマウスの適応変異と一緒にPV1（セービン）から派生した減衰決定基を導入しました。 4週齢のマウスでは、主要な温度に敏感な決定要因である3Dポリメラーゼおよび3 'NTRの決定要因は、減衰に強い影響を与えた。対照的に、個々の決定の効果は3週齢のNOD / SCIDマウスに弱く、すべての決定は、実質的な減衰のために必要であった。これらの結果は、PV1（セービン）の減衰決定の協同効果がEV71の弱毒神経毒性のために不可欠であることを示唆している。
ポリオウイルスとエンテロウイルス71感染を阻害する薬理活性化合物のキャラクタリゼーション
ポリオウイルス（PV）とエンテロウイルス71（EV71）は中枢神経系のそれらの感染症の重篤な神経症状を引き起こす。抗PVと耐性変異の出現を許可しません抗EV71活動を有する化合物を同定するために、我々は、PVとEV71 pseudovirusesそのカプシドルシフェラーゼをコードするレプリコンと細胞因子を標的薬理学的に活性な化合物ライブラリーを利用することにより、薬剤のスクリーニングを行った。我々は）metrifudil（N-[2 - メチルフェニル] - メチル） - アデノシンことがわかった（A2アデノシン受容体アゴニスト）、（A1アデノシン受容体アゴニスト）N（6） - benzyladenosineとNF449ている（4,4 '、4'' 、4'' ' - [カルボニルビス[イミノ-5 ,1,3-ベンゼントリビス（カルボニル - イミノ）]]テトラキス（ベンゼン-1,3 - ジスルホン酸）octasodium塩）（GS-α阻害剤）は、抗 - 持っているGW5074 EV71アクティビティこと、および（3 - （3、5 - ジブロモ-4 - hydroxybenzylidine -5 - ヨード-1,3 - ジヒドロ - インドール-2 - オン））は（Raf-1の阻害剤）、抗-PVの両方を持っており、抗EV71活動。 EV71 metrifudilへの耐性変異は、N（6） - benzyladenosineとNF449は、これらの化合物の存在下で継代した後に分離されたが、GW5074に耐性の変異体がPVとEV71の両方に分離されていませんでした。 GW5074の抑制効果は、センダイウイルスの感染では観察されなかったと治療はOAS1とSTAT1 mRNAの発現を誘導しなかった。 RAF-1、B-Rafを、PIM-1、-2、-3、HIPK2、GAK、MST2とATF-3は、一貫してPVの複製を抑制しなかったを含むGW5074の推定細胞標的に対する低分子干渉RNAの治療。また、Raf-1およびB-Rafのダウンレギュレーションは、GW5074の抑制効果にRD細胞の感受性に影響を及ぼさなかった。これらの結果は、GW5074は、独立してインターフェロン応答の感染を阻害する保存されたターゲットでPVとEV71の複製に対して強力かつ選択的な阻害効果を有することを示唆している。
エンテロウイルス複製を抑制する細胞のキナーゼ阻害剤はEnviroximeに似たウイルスタンパク質の3Aで保存されてターゲットを持つ
そのターゲットが不明であったが、以前、我々は、強くポリオウイルス（PV）とエンテロウイルス71複製を阻害する細胞のキナーゼ阻害剤、GW5074を同定した。 GW5074のターゲットを識別するために、我々は類似またはGW5074のそれに関連する抗エンテロウイルス活性を有する細胞のキナーゼ阻害剤を探していました。この目的で、我々はGW5074の不在下でGW5074または合成的に協力してPVの複製を阻害することができる細胞のキナーゼ阻害剤を識別するためにスクリーニングを行った。我々は、GW5074との共同抑制作用を有する化合物としてのMEK1 / 2阻害剤（SL327とU0126）、EGFR阻害剤（AG1478）およびホスファチジルイノシトール3 - キナーゼ阻害剤（ワートマニン）を同定し、Akt1の/ 2阻害剤（Aktの阻害剤VIII）としてMEK1 / 2阻害剤とAG1478を持つ合成阻害作用を有する化合物。識別キナーゼ阻害剤が大幅にPVの複製に影響を及ぼさなかった、個々の治療が、MEK1 / 2阻害剤AG1478とAkt1の/ 2阻害剤の併用治療は総合的に複製を抑制した。この合成阻害AG1478の効果は他の受容体チロシンキナーゼ阻害剤（IGF-1R阻害剤IIおよびFLT3阻害剤II）で補正した。我々は、FLT3阻害剤IIおよびGW5074に耐性変異株を単離し、これらの変異体は、それぞれの治療に交差耐性を持っていたことが分かった。これらの変異体は、位置70のアミノ酸の変化（THRへのAla）を、以前に強力な抗エンテロウイルス化合物、enviroximeに耐性変異体で同定された突然変異の結果、ウイルス蛋白質3Aの一般的な変異を持っていた。これらの結果は、細胞のキナーゼ阻害剤とenviroximeは、エンテロウイルスの複製を抑制するウイルスタンパク質の3Aで保存された目標を持っていることを示唆している。
急性弛緩性麻痺の症例の糞便中のエンテロウイルスの高感度検出のための逆転写ループ媒介性等温増幅（RT-LAMP）システムの開発
ポリオ撲滅のためのグローバル·プログラムでは、実験室診断は、急性弛緩性麻痺（AFP）例の糞便検体からポリオウイルス（PV）を単離することにより重要な役割を果たします。本研究では、PVを含むエンテロウイルス陽性の糞便試料を識別するためにPVを含むエンテロウイルスの迅速かつ高感度検出のための逆転写ループ媒介性等温増幅（RT-LAMP）システムを開発しました。
ポリオウイルスの同定のための可溶性ウイルス受容体と粒子凝集法の開発
世界ポリオ撲滅イニシアティブでは、実験室診断は、急性弛緩性麻痺（AFP）患者の糞便検体からポリオウイルス（PV）を分離し、識別することによって、重要な役割を果たします。本研究では、PVの簡単かつ迅速に識別するためのイムノアドヘシン（PVR-IgG2aの）の形で可溶性ヒトPV受容体（hPVR）と粒子凝集（PA）法を開発した。 PVR-IgG2aの感作ゼラチン粒子は、ワンステップ手順での反応の2時間以内にPV-感染細胞の培養液を使用して特定の凝集を示した。タイプ1、2、3 PV（セービン）株の検出限界は1.5×10（6）50％細胞培養感染用量（CCID（50））、5.3×10（5）CCID（50）、および9.1×10であった（5）それぞれCCID（50）。急性弛緩性麻痺症例から、野生型のPVとPV分離株は、PVのマイナー人口が検出に失敗したPVを、別の血清型の混合物を用いたいくつかのサンプルを除いて、このPA法で正しく識別された検討を行った。これらの結果は、感度が混在したPVの中でPVのマイナー人口（大規模な人口の<1月10日）を検出するのに十分高いものではなかったが、このPA法は、PVの簡単かつ迅速同定に有用であることを示唆している。
レプリケーションおよびエンテロウイルス71感染の初期段階を阻害する二官能性抗エンテロウイルス化合物
Enviroximeは、ウイルス蛋白質3Aおよび/または3ABを対象とし、未知の機構によりエンテロウイルスのレプリケーション·ステップを抑制する抗エンテロウイルス化合物である。現在までに、3Aコード領域では一般的耐性変異をenviroximeが誘導する小さな構造的類似性を持っている抗エンテロウイルス化合物数が同定されている。本研究は、機能enviroxime様化合物、A-12-H5の新しいタイプを同定した。この化合物はenviroximeまたはTTP-8307、GW5074とFLT3阻害剤IIを含む知られているenviroximeのような化合物への構造的類似性がありませんでした。 -12-H5が共通していたこれらの化合物のポリオウイルスの耐性表現型（PV）塩酸グアニジンにPVの主要なenviroxime耐性変異（G5318A、3A-Ala70Thr）によってではなく、耐性変異によって授与され、ブレフェルディンA抗エンテロウイルス71（EV71）の化合物-23-F6を持つ構造体。 -12-H5と-23-F6は、ウイルスが細胞に結合した後にEV71感染の初期段階を阻害した。キャプシドタンパク質の変異（G3112A、VP1-Ala224Thrと、G2396A、VP3-Arg227Lys変異は）-12-H5およびEV71感染の初期段階で-23-F6に耐性の変異のように決定した。これらの結果は、A-12-H5はenviroximeのような化合物の新規クラスに属しており、レプリケーション·ステップとEV71感染の初期段階の両方を標的と二官能性抗エンテロウイルス化合物であることを示唆している。
ホスファチジルイノシトール4 - キナーゼIIIベータ版はAntipoliovirusアクティビティのEnviroximeのような化合物のターゲットです。
Enviroximeは、ウイルス蛋白質3Aおよび/または3ABを対象とし、未知のメカニズムによってエンテロウイルス複製のステップを抑制するantienterovirus化合物である。現在までに、4つのantienterovirus化合物、すなわち、GW5074、FLT3阻害剤II、TTP-8307、および-12-H5は、enviroxime（G5318A [3A-Ala70Thrに抵抗性を引き起こす3Aタンパク質コード領域に同様の変異を有することが知られている]ポリオウイルスの変異[PV]）とenviroxime様化合物と見なされます。最近では、ホスファチジルイノシトール4 - キナーゼIIIβ（PI4KB）阻害剤、PIK93のantienterovirus活性はPI4KBがantienterovirus化合物によるターゲット設定の重要な宿主因子（NYスーら、Cell 141:799-811、2010）であることを示唆し、報告された。本研究では、以前に同定enviroximeのような化合物の阻害効果（GW5074と-12-H5）とホスホイノシチド（PI）キナーゼで新たに同定されたantienterovirus化合物、T-00127-HEV1を分析した。我々は、T-00127-HEV1は、PIキナーゼの幅広い特異性を持っていたGW5074とは対照的に、他のPIキナーゼより高い特異性、とPI4KB活性を抑制することがわかった。対照的に、-12-H5はPI4KB活性に対する阻害作用とPI 3 - キナーゼ活性の唯一の中等度の抑制効果を示さなかった。 PIキナーゼを標的と低分子干渉RNA（siRNA）をスクリーニング、抗PV活動のためではなく、-12-H5の、PI4KBはGW5074の標的であり、T-00127-HEV1同定した。興味深いことに、T-00127-HEV1とGW5074-12-H5の強力な阻害作用とは対照的に、C型肝炎ウイルス（HCV）の複製を阻害しませんでした。これらの結果はPI4KBはエンテロウイルス固有の宿主因子のレプリケーションプロセスに必要な、いくつかのenviroxime様化合物（T-00127-HEV1とGW5074）の標的であることとenviroximeのような化合物は、それらのウイルスのためのPIキナーゼ以外のターゲットを持つことが示唆され効果。
エンテロ ウイルス 71 3 D RNA ポリメラーゼの生化学的特性。
珍しいエンテロ ウイルス 71 (EV71) 流行中国では 2008 年以来始めています。EV71 RNA ポリメラーゼ （3D(pol))、Mn(2+) とポリメラーゼ活性を示した。Co(2+) と小さな活動が検出されないアクティビティには、Mg(2+)、カルシウム、Cu(2+)、Ni(2+)、Cd(2+)、または Zn(2+) が検出されました。それはプライマー依存ポリメラーゼと酵素両方ディと 10 ヌクレオチドの RNA のプライマーを機能しました。DNA プライマー、dT15、プライマー他エンテロ ウイルス 3D(pol) に似たような活動の増加。しかし、EV71 3D(pol) デ novo 転写 poly(C) テンプレートとゲノム RNA を開始しました。その RNA 結合活性は弱かった。ターミナルのヌクレオチド転移酵素と逆転写酵素活性が検出されなかった。Km Vmax EV71 3D(pol) の恒星バーク プロット クラシックから算出した.Km 値 2.35±0.05 （ATP）、5.40±0.93 （CTP）、1.12±0.10 （GTP）、2.81±0.31 （UTP）、Vmax 値 0.00078±0.00005/min （ATP）、0.011±0.0017/min （CTP）、0.050±0.0043/min （GTP）、0.0027±0.0005/min （UTP） だった。EV71 Km 3D(pol) 足と口の病気のウイルスおよびライノ ウイルスのそれに類似していた。ポリメラーゼの作業の BrCr TR ひずみおよびひずみから、臨床分離株北京 2008年 3D(pol) 抗ウイルス薬ターゲットとしての可能性を示す類似していた。
ヒト血清中の中和抗体価の測定のためのポリオウイルス偽のポリオウイルス中和試験の開発
世界ポリオ撲滅イニシアティブでは、実験室診断は、急性弛緩性麻痺（AFP）症例からの糞便検体からポリオウイルス（PV）を分離し、識別することによって、重要な役割を果たします。近年では、PVが以前に除去された国におけるPVの循環の回復が悪いワクチン接種に起因する可能性がある、ために減少した集団免疫が発生しました。 PVの循環への国の脆弱性を監視するには、影響を受けやすい集団のPVに対する中和抗体価のサーベイランスは、ポリオ撲滅プログラムの最後の試合に不可欠である。本研究では、ヒト血清サンプル中のPVに対する中和抗体価を決定するために、タイプ1、2、3のPV pseudovirusesでPV中和試験を開発しました。このテストでは、PVに対する中和抗体価は感染PV株を使用せずにルシフェラーゼシグナルの自動化された解釈によって2日以内に決定することができる。我々は、従来の中和試験と比較して年齢層の広い範囲（年齢1>〜60歳）から採取した131ヒト血清サンプルで偽PV中和試験を検証しました。我々は、これらのテストによって決定される中和抗体価は良い相関が認められた。これらの結果は偽PV中和試験は、PVに対する中和抗体価の測定のための安全かつ簡単な手順として働くであろうことを示唆している。
ACBD3 を介した募集 PI4KB のピコルナ ウイルス RNA 複製サイトへ。
ホスファチジルイノシトール 4 キナーゼ IIIβ (PI4KB) は、ヒトのファミリーに属するゲノム RNA レプリケーション エンテロ ウイルス、小さな非エンベロープ ウイルスに必要な宿主因子です。ここでは、PI4KB も愛知ウイルス （AiV） 別ピコルナ ウイルスのゲノム複製のために不可欠ですが、ゲノムのレプリケーション サイトに異なる戦略によるエンテロ ウイルスによって利用から募集して ことを示した。AiV 非構造蛋白質、2 b、2BC、2 C、3 a、および 3AB、ゴルジ体タンパク質、アシル補酵素 3 (ACBD3) を含む結合ドメインの相互作用。さらに、ACBD3 と PI4KB のゴルジ募集の小説の方法を提供します PI4KB 未知相互作用を識別されます。ACBD3 または PI4KB のノックダウンは AiV RNA 複製を抑制しました。ウイルス蛋白質、ACBD3、PI4KB、および phophatidylinositol-4-リン酸 (PI4P) ウイルス RNA 複製サイトをローカライズします。AiV レプリケーションと RNA 複製サイトの PI4KB の募集ブレフェルジン A、エンテロ ウイルス感染症とは異なりによって影響されなかった。これらの結果は、ウイルス蛋白質/ACBD3/PI4KB 複合 AiV RNA 複製サイトで PI4P を合成するが形成されることを示しウイルス RNA 複製に重要な役割を果たしています。
