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Articles by Minsoo Kim in JoVE
JoVE Immunology and Infection
마이 그 레이션의 인간 T 림프구 분리, 문화 및 분석 체외에서
Center for Vaccine Biology and Immunology, University of Rochester
T 림프구 마이 그 레이션 림프 기관, vasculature에서 출구로 유도하는 동안 발생하고, 주변 조직을 체결. 여기, 우리는 T 림프구 마이 그 레이션을 분석하는 데 사용할 수있는 프로토콜을 설명
Other articles by Minsoo Kim on PubMed
양방향 Integrins의 세포질 도메인 분리에 의해 신호 막 횡단
개발, 면역, 상처 치유, 그리고 전이 위한 중요 한, 비록 integrins를 플라즈마 막 수용 체의 몇 가지 클래스의 기본적인 신호 메커니즘 남아 미스 테리 하나를 나타냅니다. 우리는 형광 공명 에너지 전달 시안색 형광 단백질 융합과 노란색 형광 단백질 융합 alphaL 및 beta2 세포질 도메인 사이 측정 하 여 살아있는 세포에서 integrin LFA-1 (alphaLbeta2)의 세포질 구조적 변화를 조사 합니다. 휴식 상태에서 이러한 도메인, 서로 가까이 있었지만 integrin 접착 력 (내부 아웃 신호) 또는 ligand 바인딩 (외부에서 신호)의 어느 세포내 활성화 시 상당한 공간적 분리를 받았다. 따라서, 양방향 integrin 신호 unclasping 및 분리 알파와 베타 세포질 도메인의 원형질 막에 걸쳐 정보를 전송 하기 위한 독특한 메커니즘을 세포 외 구조적 변화를 커플링에 의해 수행 됩니다.
꽃 시간 유전자 Agl20의 함수 Crucifers에 보존 됩니다
MADS 상자 유전자 AGAMOUS-LIKE 20 (AGL20), 환경과 생 꽃 신호 Arabidopsis thaliana에 통합합니다. 역할 다른 식물에 보존 하는 경우를 결정 하기 위해 우리는 AGL20 orthologs 브라 시카 campestris, 황새 냉이, Draba nemorosa에서 고립. Orthologs의 putative 아미노산 시퀀스 94 97% 일치 했다. 우리 AGL20 ortholog C. 냉이, vernalization에 반응 하지 않는 긴 일 식물에서의 개화 형 및 식 수준 분석. Caagl20는 더 높게 표현 긴 일 보다 짧은 일과 그 표현에 vernalization에 대 한 응답 변경 하지 않은 나타내는 식을 Arabidopsis 처럼 개화 시기와 상관. 브라 시카 AGL20 ortholog에 constitutively와 antisense 35S 콜리플라워 모자이크 바이러스 발기인을 사용 하 여 방향 감각 유전자 변형 식물의 일부 매우 일찍 꽃 감각과 센스 식물의 일부에 표시 지연된 꽃 전시. 이러한 결과 agl20의 역할 Crucifers에 보존 되어 좋습니다.
Cbl-c 유비퀴틴 종속 단백질 저하를 통해 V Src 유도 변환을 하지 않습니다
Cbl 가족 단백질 Cbl, Cbl b 및 Cbl c/Cbl 3 단백질-tyrosine kinases와 부정적인 유비퀴틴 ligases 비 계 단백질으로 긍정적으로 통해 신호 조절 생각 된다. 그러나, 정확한 신호 경로 각 Cbl 가족 구성원에 대 한 대상 단백질 잘 이해 되지 않는다. 여기 우리가 Src 성능 저하 Cbl c의 우선 목표는 보여준다. 모든 Cbl 가족 단백질 exogenous 표현의 NIH3T3 셀 v Src 변형 앵커리지 독립적인 성장 억제, 비록만 Cbl c refractile 형태학의 귀선을 발생 합니다. V-Src 단백질 수준의 리소좀 종속 통로 통해 아마도 Cbl c로 감소 했다. TKB 도메인과 Cbl c의 반지를 손가락의 antioncogenic 활동에 대 한 중요 했다. 야생-타입 Cbl c 반지 손가락 돌연변이 되지 않은 반면 293T 세포에 Src의 ubiquitination를 승진. Cbl-c tyr419에서 phosphorylated Src 구체적으로 바인딩됩니다. 또한, Cbl-c UbcH5 함께 ubiquitination Src 체 외의 유도. 중요 한 것은, Tyr419 nonphosphorylated 형태의 Src Cbl c ubiquitinated 했다. 따라서 활성화 된 Src Cbl c vivo에서의 직접 대상이 있을 수 있습니다. 우리의 결과 Cbl, Cbl b Cbl c의 다른 메커니즘을 통해 변환 v Src 유발 억제는 것이 좋습니다.
생 아데노신 차동 인간의 Enterochromaffin 세포 모델에서 5 Hydroxytryptamine 출시를 변조 한다
아데노신 수용 체 캠프, 세포내 무료 칼슘 ([Ca(2+)](i)), 그리고 인간의 카시 노이 드 봉 셀에 5-hydroxytryptamine (5-HT) 릴리스 변조 여부를 확인 하는 목표.
{베타} 2 Integrin {알파} L의 접착 력의 규제에서 클러스터링을 통해 선호도의 제일
Integrin 접착 력의 동적 규칙은 면역 세포-세포 상호 작용 및 백혈구 마이그레이션에 대 한 필요 합니다. 여기, 우리 세포 접착 및 integrin microclustering 형광 공명 에너지 전달, 그리고 높은 해상도 형광 현미경 검사 법에 의해 측정 된 macroclustering에 의해 측정 된 관계를 조사 합니다. 백혈구 기능 관련 분자-1 (LFA-1)을 통해 접착 력을 활성화 자극 리간드의 부재에서 LFA-1의 클러스터링을 변경 하지 못했습니다. Monomeric 세포 접착 분자-1의 바인딩 (ICAM-1) LFA-1의 나 란에 심오한 변화를 유발 하지만 ICAM-1 올리고 바인딩 유도 중요 한 microclustering 반면 클러스터링을 바꾸지 않았다. Cytoskeleton 방해 하 여 멤브레인의 확산도 증가 에이전트 선호도 변조 없이 드라이브 접착 하기에 충분 하 고 접착, 영역 LFA-1의 큰 축적과 연관 되었다 했지만 재배포는 세포 접착을 붙이지 않았다. LFA-1 차단 접착 선호도 변조 에이전트에 의해 자극된 하지만 하지 접착에 의해 자극된의 세포 외 도메인 내에서 구조적 의사 소통의 장애 cytoskeleton 방해 에이전트. 따라서 ligand 바인딩 붙이지 않습니다 LFA-1 클러스터링 및 접착 력 또한 ligands 바인딩 후 강화의 기능을 대신.
Arabidopsis의 꽃 통로 통합자의 분석입니다
꽃이 피 여러 유전적 통로 Arabidopsis의 통합된 네트워크에 의해 규제 됩니다. 여러 꽃이 경로 통합 키 유전자는 피트, SOC1 및 LFY. 하이 통합자 간의 상호 작용, 유전자 분석을 수행 했다. 피트와 soc1는 일반적인 업스트림 규제 공동, 긴 하루 통로 및 FLC, 자율 통합 꽃 진압 및 vernalization 통로 핵심 구성 요소를 공유 합니다. 그러나, soc1 돌연변이 더 긴 날 통로 돌연변이의 ft를 포함 하 여 SOC1 피트 독립적으로 부분적으로 작동을 보여주는 개화 시기 지연. Soc1 꽃 분열 조직 결정 자체에 명백한 결함을 보여주지 않았다, 비록 꽃 개시의 결함을 나타내는 lfy 돌연변이에 coflorescences 수를 극적으로 증가. 따라서, 이중 돌연변이 분석 결과 3 통합자 개화 시기 및 꽃 개시의 결정에 겹치는 및 독립적인 기능을가지고. 식 분석 피트 조절 SOC1 식 SOC1 LFY 식 조절 하지만 반대로,이 피트와 LFY 3 통합 업체 가운데 가장 겹치는 기능을가지고 사실와 일치 했다. 트리플 돌연변이 피트 soc1 lfy 꽃이 완전히 아래 오래 일 다른 통합자의 존재를 나타내는 차단 하지 않았다. 마지막으로, vernalization 가속 flc 피트 피트 및 soc1 soc1 lfy 트리플 돌연변이의 꽃 vernalization 통로 또한 FLC, 피트, SOC1 및 LFY 목표는 보여줍니다. 우리의 유전자 분석 꽃에 대 한 유전자 네트워크의 복잡 한 성격을 보여준다.
억압의 FRIGIDA3 Arabidopsis 꽃 억압에 필요한 핵 ACTIN-RELATED PROTEIN6 인코딩합니다
특성 연간 Arabidopsis thaliana는 주로 두 개의 유전자, 꽃이 피는 로커 스 C (FLC) 및 FRIGIDA (금)에 의해 수 여 하는 겨울에 꽃이. FLC 역할 꽃 진압을 하며 여러 꽃이 경로 의해 규제 됩니다. 우리 frigida3의 초기 개화 돌연변이, 억압을 절연 (suf3), 잎 serration, 약한 apical 지배력 또한 보여줍니다 및 터미널 꽃에는 꽃이 핌의 드문 변환 촬영. Suf3 돌연변이 금 포함 된 선 및 자치 통로 돌연변이 FLC의 대 본 수준에 있는 감소를 일으켰습니다. 그러나, suf3 주로 늦은 꽃 형 억제 비록 FLC 대 본 수준만 부분 감소를 보여주었다. 또한, suf3 돌연변이 35S FLC와 SUF3 꽃의 억압에 대 한 추가 factor(s) 조절 나타내는 flc null 돌연변이 꽃의 가속도 발생 합니다. Suf3은 높은 촬영 꼭대기 표현 되지만 식 금에 의해 통제 되지 않는 자치 통로 유전자, 또는 vernalization. SUF3 인코딩 핵 ACTIN-RELATED PROTEIN6 (ARP6), 효 모에는 체는 ATP 종속 개장 하는 chromatin SWR1 복잡 한 구성 요소입니다. 우리의 분석 SUF3 FLC 식 vernalization, 금, FLC chromatin의 히스톤 수정에 영향을 주는 자치 통로 유전자의 독립적인 조절 했다. 녹색 형광 단백질 퓨전을 사용 하 여 subcellular 지역화 Arabidopsis arp6은 핵 주변의 별개의 영역에 위치 했다.
회사 접착을 압 연에서 전환 중간 선호도 상태로 Integrin Alphalbeta2의 확장에 의해 유사 수 있습니다
세포 접착 분자-1 (ICAM-1)에 대 한 AlphaLbeta2 선호도 나 차례로 나 란 다른 인접 한 도메인의 방향에 의해 제어 되는 도메인은 alphaL의 구조에 의해 규제. 또한, 전반적인 integrin 나 란 (벤 트 대 정리) 도메인 및 접착 효율에 영향을 미치는 그 ligands에 대 한 액세스 나의 방향에 영향을 줍니다. 열기 또는 높은 선호도 나 폐쇄, 낮은 선호도 나 란 중재 약한 상호 작용 또는 압 연 하는 반면 도메인 나 란 강한 접착을 지원 합니다. 우리는 이전에 그 alphaLbeta2 중간 선호도 상태에 있는 세포 표면에 존재할 수도 있습니다 제안 했다. 여기 우리는 돌연변이 포함 하는 접착제 속성 integrin Alphalbeta2의 공부가 나 중간 affinities ICAM-1에 대 한 있는 도메인. 거의 전반적인 구부러진된 형태 Alphalbeta2의 중간 선호도 상태는 기존의 접착 분석 실험에 의해 감지 하지만 강력한 접착 력을 볼 때 확장 된 나 란은 내가 allosteric 적에 게 하는 작은 분자 알파/베타에 의해 유도. 중간 선호도 alphaLbeta2 전단 조건 하에서 야생-타입 alphaLbeta2 보다 압 연 안정을 지원 합니다. 또한, 적에 게 유도 확장 회사 접착 방식으로 연상 integrin Alphalbeta2의 chemokine 활성화의 롤링 접착을 변환합니다. 이 발견은 비활성 및 활성 상태 간 전환에 Alphalbeta2의 중간 선호도 상태의 관련성을 제안 하 고 도메인 선호도 및 세포 접착에 대 한 전반적인 integrin 나 란 두 나의 중요성을 입증.
외부에서 신호 및 선호도 Beta2에 의해 규제 나 Integrin Alphalbeta2의 도메인
Integrin alpha(l)beta(2)의 접착 력 divalent 양이온에 의해 변조입니다. 우리는 3 개의 돌연변이 beta(2) 나 도메인 금속 이온 바인딩 사이트. 금속 이온에 종속적인 접착 사이트 (MIDAS)와 리간드 유발 금속 바인딩 사이트 리간드 바인딩에 필요 하 고 ca(2+)와 Mg(2+) 사이의 성분에 대 한 충분 한 있습니다. 옆에 마 이다 스 (ADMIDAS) 뮤턴트 constitutively 활성 하지만 구부러진 beta(2) 스토킹 지역 epitope의 불 쌍 한 노출으로 남아 있습니다. 형광 공명 에너지 전송 도메인간 형광 단백질 융합 alpha(L) 및 beta(2) 세포질 ADMIDAS 돌연변이 ligand 바인딩 유도 공간 분리 세포질 도메인을 폐지 했다. 또한, ADMIDAS 변이 리간드 베어링 기판에 확산 폐지. 따라서, beta(2) 나 금속 이온 바인딩 사이트 도메인 alpha(L) 규제 나 도메인 선호도는 ADMIDAS는 외부에서 신호에 대 한 필요.
알-57, Integrin LFA-1에 리간드 모방 체 세포의 Chemokine 유도 선호도 최대 규정을 보여준다
Integrin 림프 구 기능 관련 된 항 원 1의 선호도 (LFA-1) 낮은 선호도에서 구조적 변화에 의해 향상에 높은 선호도 (HA) 닫힌된 폼 양식을 엽니다 리간드-바인딩 삽입 (I) 도메인 정화 나 하 고 도메인 사용 하 여 표시 된 대로. 그러나, 선호도 업 레 귤 레이 션 LFA-1의 생리 적 agonists chemokines 등으로 세포 표면에 여러차례 시 약에 의해 증명 해야 아직. 우리는 도메인 mAb, 알-57 (활성화 된 LFA-1 클론 57), 개발 된 선택적으로 LFA-1의 HA 오픈 형태를 대상으로 하는 살 균 소 전시 하 여 난 특징. 알-57 낮은 선호도, 중급 선호도 및 LFA-1의 하 주 차별. 또한, 알-57 리간드 위장 활성화 시 바인딩하고 바인딩에 Mg2 + 필요로 하는 역할을 합니다. 자연 리간드 세포 접착 분자-1에 비해, 알-57 표시는 엄격한 바인딩할 열기 나 도메인 및 250-fold 느린 속도에서. 여러차례 팹 알-57 CXCL-12 (CXC chemokine 리간드 12) 자극 시 림프 구 세포 표면 LFA-1 분자의 일부 (약 10%)에 선호도 증가 보여 줍니다. 선호도 업 레 귤 레이 션 LFA-1의 확장된 형태 변경 글로벌 구조적으로 연관 시킵니다. CXCL-12에 의해 자극된 선호도 증가 일시적 이며 자극 후 2 ~ 5 분 봉우리.
Integrin Alphalbeta2의 길 항는 작은 분자를 제
해당 ligand 세포 접착 분자-1 integrin alpha(l)beta(2)의 바인딩은 면역 반응과 백혈구 인신 매매에 대 한 필요 합니다. Alpha(l)beta(2)의 작은 분자 길 항 제는 잠재적인 항 염증 약으로 강렬한 조사를 받고 있다. 우리는 작은 분자 integrin 길 항 제를 처음으로 설명. 앞에서 설명한 알파/베타 나 allosteric 억제제, 복합 4 기능 ca(2+)와 Mg (2 +) alpha(l)beta(2)의 길 항 제와 mn(2+)에 길 항 제. 우리 다른 화합물 활성화 및 경쟁력과 회장 억제 메커니즘을 특징 있다. Ligand 바인딩 자극, 비록 복합 4는 그럼에도 불구 하 고 림프 구 transendothelial 마이그레이션을 억제 한다. 복합 4 결과 uropod, 익스트림 uropod 연신 율, 결함에 alpha(l)beta(2)의 축적에 의해 agonism de-adhesion. 작은 분자 integrin agonists 새로운 치료 가능성을 열어.
Integrin 약혼 곰 팡이 병원 체 관련 된 분자 패턴에 대 한 인간의 Polymorphonuclear 백혈구 응답 중재
말 초 혈액에서 백혈구의 넘쳐 흐름은 조직 감염의 사이트에서 효과적인 염증 반응에 대 한 필요 합니다. Integrins 넘쳐 흐름을 중재 하 고 감염 소스에 백혈구 이동 도움이 됩니다. Integrins 곰 팡이 병원 균의 세포 벽 구성 요소에 대 한 이펙터 응답 조절에 대 한 새로운 역할을 현재 연구의 주제 이다. 단 세포 균의 식 균 작용 유용 하지만, noningestible 균에 대 한 면역 반응을 잘 하지 않습니다. 곰 팡이 베타 글 루-칸, 병원 체 관련 된 분자 패턴 백혈구 식 균 작용에 대 한 필요 없이에서 superoxide 음이온의 생산을 활성화합니다. 상황 버섯의 모델 polymorphonuclear 백혈구 (PMN) 인식 하는 식 균 작용 수 없습니다 발생에 베타-글 루 칸 炭 조직 문화 플라스틱에 동원 되지 않았습니다. 플라즈마 멤브레인 관련 된 호흡기 버스트 C. 결과 베타-글 루 칸 행렬을 beta(1) integrin ligands의 추가 의해 인간의 PMN 산화 버스트 응답 움직이지 베타-글 루 칸을 억제 하는 ferricytochrome의 감소에 의해 측정 되었다. 억제는 복용량 의존 하 고 입체적 방해 배제 했다. beta(1) integrin ligands 호흡기 버스트 ingestible 베타 글 루 칸 함유 입자, phorbol 에스테 르 또는 살아있는 효 모 균에 영향을 주지 않았다. 또한, 행렬의 부재, VLA3 또는 VLA5, 하지만 하지 다른 beta(1) integrins의 Ab 활성화 호흡기 버스트를 베타 글 루 칸 유도 또한 없습니다. 베타 (1)-유발된 억제 차단 된 및 응답 VLA3 또는 VLA5 호 중구 성 인간의 Fn, 주기적 RGD 펩타이드, 또는 특정 Ab의 셀 바인딩 조각 사용 하 여 치료 하 여 복원 버스트. 함께 이러한 연구 결과 변조 PMN 호흡기 버스트 병원 체 관련 된 분자 패턴을 포함 하도록 beta(1) integrins의 기능적 역할을 확장 합니다.
알파와 베타 소 단위 막 횡단 나선 분리 Integrin 외부에서 신호에 대 한 요구 사항입니다
세포 외 ligands integrins 통해 접착 력을 조절 세포 모양, 마이그레이션, 성장과 생존. 어떻게 integrins 전송 신호를 외부에-에서 방향 알 수 없는 남아 있습니다. 휴식 integrins의 알파와 베타 소 단위 막 횡단 도메인이 연결 되어, 반면 ligand 바인딩 분리 하 고 이러한 도메인의 분리를 촉진 합니다. 여기 우리는 이러한 분리는 외부에서 신호에 대 한 필요 여부를 주소. Intersubunit 이황화 결합의 도입에 의해 돌연변이 integrin alphaIIbbeta3 ligand 바인딩 접착을 중재 하 고 ligand 바인딩 후 확장 된 형태를 채택 하 고 야생 타입 유사 하 게 세포 표면에 항 체 유도 macroclusters을 형성 하는 차단 막 횡단 분리 생성 했습니다. 그러나, 돌연변이 integrin 외부에서 셀 확산, 말라 스트레스 섬유 및 초점 접착 형성과 초점 접착 키 니 아 제 활성화로 측정 된 신호 접착 력을 유도에 깊은 결함 전시. 이 결함은 이황화 결합의 감소에 의해 구출 되었다. 우리의 결과 막 횡단 도메인의 분리는 integrin 외부 신호 변환에 필요한 입증.
세균성 이펙터를 대상으로 Mad2L2, APC 억제제 호스트 셀 변조 사이클링
창 자 상피 세균성 식민지를 제한 하는 중요 한 타고 난 방어 시스템을 제공 하는 몇 일 마다 self-renews. 그럼에도 불구 하 고, 많은 세균 병원 균, 이질균를 포함 하 여 효율적으로 장내 상피 식민지. 여기, 우리가 보여주는 Shigella 이펙터 IpaB, 상피 세포로 전달 하면 세포 주기 검거 Mad2L2, anaphase를 홍보 복잡/cyclosome (APC) 억제제를 대상으로 합니다. Cyclin b 1 ubiquitination 분석 실험 공개 APC 송출 억제제 mad2l2와 Ipab의 상호 작용으로 인해 갑작스런된 활성화를 겪 습. 헬러 세포 B1, Cdc20, 및 Plk1, 누적 실패 Shigella 감염가 두 동기화 일으키는 세포 주기의 G2/M로 IpaB/Mad2L2 종속으로 단계. IpaB/Mad2L2 종속 셀 사이클 Shigella 감염 또한 토끼 장 토 굴 progenitors에서 시연 되었다 하 여 체포 하 고 호스트 세포의 효율적인 식민지 기여 IpaB 중재 체포. 이러한 결과 강력 하 게 그 Shigella 고용 특별 전술을 창 자 상피의 세균성 식민지를 증진 하기 위해 상피 재생에 영향을 나타냅니다.
Nonmuscle Myosin 무거운 체인 IIA 중재 Integrin T 림프 구 마이그레이션하는 동안 LFA-1 De-adhesion
정확 하 게 공간 및 시간 규제의 세포 접착과 de-adhesion 동적 림프 구 마이그레이션에 대 한 중요 합니다. Integrin 림프 구 기능 관련 된 항 원 (LFA)-1에 대 한 정보의 큰 거래를 배웠다 하더라도 접착, 효율적인 LFA-1 조절 메커니즘 de-adhesion에서 세포 접착 분자 (ICAM)-1 T 림프 구 마이그레이션하는 동안 알 수 없으면. 여기, 우리가 보여줍니다 nonmuscle myosin 무거운 체인 IIA (MyH9) 마이그레이션 T 세포의 uropod 및 MyH9 익스트림 uropod 연신 율, 결함 있는 꼬리 초연에서에서 LFA-1 결과 연관의 저해에 LFA-1 모집 chemokine CXCL 12로 LFA-1 활성화 영향을 주지 않고 ICAM-1에 마이그레이션 림프 구 감소. 이 결점 두 LFA-1 친 화력과 욕망 규제를 억제 하는 작은 분자 길 항 제에 의해 반대 하지만 한 길 항 제에 의해 그 억제 선호도 규제만. 마이그레이션 T 세포와 ICAM-1 기판 사이의 접촉 영역의 총 내부 반사 형광 현미경 검사 법 공개 비활성 LFA-1 선택적으로 대립 된 T 세포의 후부에 지역화 된 활성 LFA-1의 앞쪽을 지역화 하는 반면. 따라서, T 림프 구 마이그레이션 중 uropodal 접착은 LFA-1 갈망, MyH9 역할 LFA-1과 LFA-1에 대 한 중요 cytoskeleton 사이 키 기계적 링크 de-adhesion에 따라 다릅니다.
Intramedullary Schistosomiasis 간헐적으로 장기간으로 사춘기에 제시 하 고 허리 통증
안정적인 낮은 허리 통증의 2 개월 역사를 제시 하는 기니에서 여행 14 세 소년. 그의 신경학 적 검사는 원심 더 낮은 말단에 있는 온화한 약점에 대 한 중요 한. 그 주변 eosinophilia 각 성 및 척수 및 conus 꼬리 부분의 확대 공개 자기 공명 상상. 척추 schistosomiasis의 추정 진단 렌더링과 긍정적인 혈 청 학 결과 얻기 전에 적절 한 약물 투여. 환자의 증상을 신속 하 게 해결입니다. 척추 schistosomiasis 허리 통증 및 적절 한 여행 역사 아동의 차동 진단에서 고려 되어야 한다.
P57KIP2 베이스에 관련 된 새로운 유비퀴틴 리가 Osteoblast 세포 분화를 조절합니다
변형 성장 인자 beta1 (TGF-beta1) 많은 생리 적 기능을가지고 하 고 osteoblasts의 분화를 억제 한다. 이전에, 우리는 TGF beta1 자극 osteoblasts에서 p57(kip2)의 저하 유도 보도 했다. p57(KIP2) 베이스 유비퀴틴-프로테아좀 통로 SMAD 중재 전사;에 따라 달라 집니다. 그러나 분자 메커니즘 기본 p57(KIP2) 저하는 대부분 알 수 있다입니다. 여기, 우리가 FBL12, 새로운 F 상자 단백질 배아 개발의 다리를 봉 오리 단위로 TGF beta1 유발 저하 p57(kip2)의 참여 보여줍니다. FBL12 인 산화에 종속적인 방식으로 복잡 한 SCF(FBL12) 및 직접 ubiquitinated p57(kip2)을 형성. RNA 간섭에 의해 fbl12의 저해 p57(kip2)의 저하와 fbl12의 지배적인 부정적인 돌연변이 억제 (FBL12DeltaF) p57(kip2)의 정상 상태 수준 증가. 또한, 야생-타입을 저해 하는 FBL12 및 FBL12DeltaF 기본 osteoblasts의 차별화 추진. Overexpression p57(kip2)의 승진 osteoblast 차별화, fbl12의 성과 저하 osteoblast 세포 분화의 레 귤 레이 션에 p57(kip2)의 이러한 결과 나타냅니다.
Na의 저해 + H + 교환기 향상 낮은 PH 유도 L Selectin 흘리기와 Beta2 Integrin 표면 식 인간 호 중구에서
허 혈 reperfusion 상해는 심장 마비와 뇌졸중에 조직 손상을 일으키는 병 적인 흔한. 이 과정에서 허 혈 성 이벤트 기간 동안은 혈관에 호 중구의 함정 연루 되어있다. Lactacidosis 및 세포내 Ph에 따른 감축 하는이 연구에서 우리는 효과 검사 (pH(i)) 호 중구에 접착 분자의 표면 표현에 있다. 인간의 호 중구 pH 6 젖 산에 노출 했다 때 표면 (었) L selectin 수준에 표시 된 감소 했다 감소 했다 Na(+)/H(+) 교환기 (NHE) 억제제 5-(N, N-hexamethylene)을 포함 하 여 크게 향상 된 amiloride (HMA). 비슷한 효과 때 pH(i) 세척 및 pH 7.4 버퍼 NHE 억제제를 포함 하는 인큐베이션 옵니다 (4) NH Cl prepulse를 사용 하 여 정상 세포 외 산도 유지 하는 동안 감소는 관찰 되지 않았다 [HMA, cariporide, 또는 5-(N, N-디 메 틸) amiloride (DMA)]. NH (4)의 다양 한 농도 의해 유발 하는 피 눈물 L selectin 금액은 prepulse에 Cl 6.3의 명백한 Pk와 세포내 산성화 수준의 상호 연관. 반면, 베타 (2)-integrin (CD11b 및 CD18)만 약간 low-pH(i) 상태에서 upregulated 이었고 훨씬 낮은 범위 NHE 저해에 의해 향상 되었습니다. 인간의 호 중구 세포 외 metalloproteases (RO-31-9790 및 KD-IX-73-4)의 억제제 또는 p38 지도 키 니 아 제 (SB 203580 및 SB 239063)를 통해 세포내 신호의 억제제로 치료 하 여 차단 된 흘리기 L selectin 막 횡단 효과 Ph(i)의 암시. 함께 찍은, 이러한 데이터 호 표면에서 L selectin의 거의 완전 한 제거는 허 혈 reperfusion 부상을 줄이기 위해 HMA 같은 NHE 억제제의 능력 관련이 있을 수 있습니다 것이 좋습니다.
백혈구 Integrins 및 그들의 Ligand 상호 작용입니다
비록 세포 접착 및 정상적인 면역 중재 반응 하는 동안 마이그레이션에 대 한 중요 한, 백혈구 integrins 또한 다양 한 임상 조건이 자가 면역 질환, 만성 염증 등의 병에 참여 하고있다. 따라서 백혈구 integrins 염증 성 질환을 치료 하 깻 요법에 대 한 목표 되었습니다. 최근, integrin 길 항 제 치료 잠재력 건 선 및 다 발성 경화 증에서 증명 되었습니다. 그러나, 현재 치료 학 integrin 기능에 영향을 광범위 하 게 그리고, 따라서, 불리 한 부작용을 얻을. 이 검토 주요 백혈구 integrins 면역 질환 치료를 위한 anti-adhesion 전략에 설명 합니다.
재조합 인간 활성화 단백질 C 호 마이그레이션을 Integrin 중재를 억제 한다
Integrin 중재 셀 마이그레이션 많은 생물 학적 및 pathologic 프로세스 중심 이다. 동안 염증, 조직 상해 과도 한 침투 및 활성화 된 백혈구의 격리에서 유래한 다. 재조합 인간 활성화 단백질 C (rhAPC)이 보호 효과 기본 메커니즘 불분명 남아 있지만 심한 패 혈 증을 가진 환자를 보호 하기 위해 표시 되었습니다. 여기, 우리는 rhAPC 직접 beta(1) 및 beta(3) integrins에 바인딩하고 호 마이그레이션, 생체 외 및 생체 조건 억제 보여줍니다. 우리는 인간의 APC 중요 저해에 대 한 Arg-Gly-Asp (RGD) 시퀀스를 보유 하 고 발견. 이 시퀀스의 돌연변이 integrin 바인딩 및 호 이동의 저해 폐지. 또한, RGD 펩타이드와 정화 조 쥐의 치료 생존에 Rhapc의 유익한 효과 recapitulated. 따라서, 우리는 백혈구 integrins Rhapc와 호 모집을 rhAPC 하 여 잠재적인 메커니즘을 제공 하는 조직으로 패 혈 증 으로부터 보호 될 수 있습니다 상호 작용 감소에 대 한 새로운 세포 수용 체는 결론 지었다.
우주 환경에서 MEMS 마이크로 특성화입니다
이 신문은 국제 우주 정거장에서 지구 궤도 위성 지구 관측에 우리의 공간 응용 프로그램과 관련 된 공간 환경에서 MEMS 마이크로 특성화를 설명 합니다. 마이크로 성능 충격 및 진동, stiction도에서 기체 및 난방 시설 및 정전기 충전 효과 대 한 테스트 되었습니다. 우리는 우주 환경 테스트 후 마이크로 성능 저하 없이 시연. Micromirrors을 갖춘 테스트 베드 악기 전달 되었고 ISS에서 테스트. 결과 제안 된 micromirrors는 광학 공간 시스템에 적합 한 것을 보여줍니다.
수용 G 단백질 결합 된 체, GPR30, 스 트로 겐-중재 Fibronectin 매트릭스 어셈블리와 표 피 성장 인자 수용 체 Transactivation의 규제를 조정 합니다
스 트로 겐 쉽게 스 트로 겐 수용 체, ERalpha 및 Erbeta의 생물 학적 행동에 기인 하는 cytoskeletal 아키텍처의 변화를 촉진 합니다. 특정 에스트로겐 바인딩 및 급격 한 에스트로겐 중재 출시 헤 파 린 바인딩된 표 피 성장 인자 수용 g 단백질 결합 막 횡단 체, GPR30, 연결 된다. 마커 구조와 지배를 방해 하 고 돌연변이 전략을 사용 하 여, 우리는 GPR30 통해 에스트로겐 동작 촉진 인간의 유방암 세포에 의해 fibronectin (FN) 매트릭스 어셈블리 보여줍니다. 17Beta estradiol 또는 응급실 길 항 제, ICI 182, 780, 자극 fibrillar 유착 및 FN 소의 합성에 종사 하는 FN integrin alpha5beta1 conformers의 채용에 발생합니다. 이 휴대 전화 응답과 동시 GPR30 Shc integrin alpha5beta1 단지 Src 종속의 형성을 촉진합니다. Integrin alpha5beta1에 대 한 감독 기능을 차단 항 체 또는 수용 성 Arg Gly Asp 펩 티 드 조각 특히 FN에서 파생 된 GPR30 중재 표 피 성장 인자 수용 체 transactivation 저해. 스 트로 겐-중재 FN 매트릭스 어셈블리와 표 피 성장 인자 수용 체 transactivation 했다 마찬가지로 중단 integrin beta1 불충분 한 GE11 세포에서 GE11 셀으로 integrin beta1의 reintroduction 복원 이러한 응답 반면. 돌연변이 Shc (317Y/F) 차단 GPR30 유도 FN 매트릭스 어셈블리 및 Erbb1의 tyrosyl 인 산화. 흥미롭게도, 재조합 야생-타입 Shc 상대적인 317Y/F Shc 아직이 돌연변이 생 Shc integrin alpha5beta1 복잡 한 형성을 방지 하지 않았다 GPR30 유도 integrin alpha5beta1 단지에서 유지 더 쉽게 되었다. 우리의 결과 GPR30 좌표 에스트로겐 중재 FN 매트릭스 어셈블리 및 성장 인자 방출 integrin alpha5beta1 활성화 Shc 종속 신호 메커니즘을 통해 인간의 유방암 세포에 좋습니다.
박테리아 초점 유착을 안정 하 고 세포 분리 차단 하 니 Integrin 연결을 공중 납치
급속 한 매출 및 점 막 상피 세포의 각 질 제거 세균 감염에 대 한 타고 난 방어 시스템을 제공 합니다. 그럼에도 불구 하 고, 많은 병원 성 세균, 이질균를 포함 하 여 각 질 제거 극복 하 고 효율적으로 상피 식민지 수 있습니다. 여기 Shigella flexneri 이펙터 OspE (Ospe1와 OspE2 단백질으로 이루어진), enteropathogenic 대장균, 대장균 enterohaemorrhagic, Citrobacter rodentium 살 모 넬 라 종자 중에서 고도로 보존 되는 integrin 연결 된 키 (ILK)와 상호 작용 하 여 지하실 막 호스트 셀 준수를 강화 하는 것이 살펴보겠습니다. 초점 유착 수 막 분수 ILK 함께 ILK OspE 바인딩에 의해 증강 되었다. ILK Ospe의 상호작용 1 integrin 셀 표면 수준 및 셀 운동 성 초점 접착의 급속 한 매출에 필요한 초점 접착 키 및 paxillin, 억제 된 인 산화 증가 했다. 초점 접착 Nocodazole 희미하게 유발 분해는 Ospe의 식에 의해 차단 되었습니다. 편광된 상피 세포 감염 Shigella 돌연변이 ospE 유전자 결여 된 야생-타입 Shigella 감염 세포 보다 더 신속 하 게 세포 분리를 받았다. Shigella와 기니 피그 콜론의 감염 상피 초연을 억제, 세균성 세포 세포 확산 및 세균성 식민지 홍보 증가 OspE ILK 상호 작용의 중추적인 역할을 뒷받침. 이 결과 세포 감염 Shigella의 분리를 방지 하기 위해 특별 한 전술을 사용 하 여 그들의 전염 성 발판을 유지 합니다.
활성화 된 Integrin VLA-4는 Lamellipodia Localizes 및 중재 VCAM 1 T 셀 마이그레이션
셀 표면 integrins와 혈관 내 피 세포 외 매트릭스에 표현 된 그들의 ligands 사이의 상호 작용을 통해 혈액에서 염증의 사이트 또는 림프 조직으로 림프 구 마이그레이션 발생 합니다. VLA-4 (alpha(4)beta(1)) 세포의 효과적인 인신 매매에 있는 주요 integrin은. 그것 잘 설립 되었습니다 integrins 세포 접착 중재에 기능적으로 중요 한 구조적 변화를 받아야, 비록에 어떻게 이러한 동적이 고 공간적으로 규제 됩니다 림프 구 양극 화 및 마이그레이션 동안 설명 기계 정보 없습니다. 동적 형광 공명 에너지 전송 분석 소설의 총 내부 반사 형광 현미경 아래 VLA-4 초조해 센서를 사용 하 여, VLA-4 활성화 살아있는 세포에서 lamellipodium에 localizes 살펴보겠습니다. VCAM 1 T 셀 마이그레이션하는 동안 VLA-4 활성화 chemokine 수용 체와 리딩에 지에서 활성 Rap1 공간 재배포와 함께 나 왔. 활성화 된 VLA-4 작은 분자 억제 물와 리딩에 지에서의 선택적 억제 T 세포 마이그레이션을 차단 충분 하다. 이러한 데이터 활성화 VLA-4 subpopulation 주로 편광된 인간 T 세포의 첨단에 지역화 된 VCAM 1 T 셀 마이그레이션에 대 한 중요 하다는 좋습니다.
Listeria Monocytogenes Autophagic 인식에서 액 타 중재 탈출
Autophagy는 불필요 한 organelles 저하 고 misfolded 단백질 집계로 세포질에 침입 박테리아. 그럼에도 불구 하 고, 박테리아 Listeria monocytogenes를 효율적으로 autophagy를 이스케이프합니다. 우리가 여기 Arp2/3 복합체 및 웹사이트, / VASP, 그 모집에 표시 세균 액 타를 통해 세균 표면 단백질 autophagic 인식, 세균의 운동 성 중재 능력의 독립적인 활동에서에서 박테리아 위장. 호스트 단백질을 처음 모집 하는 능력이 부족 액 타 돌연변이 표현 하는 L. monocytogenes 받았다 ubiquitylation, 뒤에 p62 (SQSTM1 라고도 함)의 모집과 LC3, 마침내 autophagy를 진행 하기 전에. Ubiquitylation에서 보호 중재 Acta의 능력 추가 집계 경향이 GFP 액 타-Q79C 및 GFP-ActA-170(*) chimaeras, 액 타 단백질 및 세그먼트 polyQ 또는 Golgi 막 단백질 gcp170의 (참고 6) GFP (녹색 형광 단백질)로 구성 된 생성 하 여 시연 했다. 그러나 이러한 액 타 포함 된 집계 했다 유비퀴틴과 p62 협회를 타겟으로 하지, GFP ActA Q79C 및 GFP-ActA-170(*) 호스트 세포 세포질에 집계를 형성 했다. 우리의 연구 결과 액 타 중재 호스트 단백질 모집 autophagy에서 독특한 세균 위장 전술 나타냅니다.
Integrin 맥 1 구조적 변화에 의해 외부에서 신호 전송
세포내 신호 연관 되거나 integrin 결 찰에 의해 트리거되는 세포 생존, 분화, 증식, 및 마이그레이션 제어할 수 있습니다. 구조적 변화는 ligands integrin 선호도 조절 축적 증거에도 불구 하 고 integrin 구조 조정 어떻게 셀의 내부를 외부에서 신호 전송을 애매 남아 있습니다. 형광 공명 에너지 전달에 사용 하 여, 우리가 해결 integrin 맥 1의에서 구조적 변화는 인간 호 중구에서 외부에서 신호를 전송 하기에 충분. 맥 1 구조적 활성화 리간드 인 또는 활성화 Ab 바인딩에 의해 유발 하지만 하지 integrin 클러스터링, 세포내 단백질 티로신 인 산화, Akt 인 산화 등의 비슷한 패턴을 발생 하 고 글로벌 구조적 변화는 맥 1 종속 외부 신호 전달에 대 한 중요 한 나타내는 자연 호 apoptosis를 저해. Neutrophils 골수성 K562 셀에서 ligand ICAM-1 또는 Ab 바인딩 활성화 맥 1 세포 외 도메인의 규격 재 크 나이프 같은 확장 및 alpha(M) 및 beta(2) 소 단위 세포질 꼬리, integrin 활성화의 두 개의 구조적 특징의 분리 추진. 이러한 데이터 신호 외부에서 맥 1 세대에 글로벌 구조적 변화의 제일을 좋습니다.
마우스 뇌의 해 마에 칼슘 의무적인 단백질에 835 M H Z 고주파 방사선 노출의 효과
휴대 전화의 전자기장 (EMF) 노출 전세계 확장 두뇌와 신 경계에 그들의 가능한 생물 학적 효과 대 한 질문을 제기 하고있다. 고주파 (RF) 방사선 칼슘 (세포 막에 걸쳐 Ca(2+)) 침투성 변화를 통해 세포내 신호 경로 변경할 수 있습니다. 칼슘 의무적인 단백질 (CaBP) calbindin D28 k 같은 식의 변화 (CB) 및 calretinin (CR) EMF 노출 장애 Ca (2 +) 항상성을 나타낼 수 있습니다. CB와 CR 식 쥐의 해 마에 기술 된 다른 노출 시간 및 흡수 속도, 특정 한 흡수 율 (SAR)에 5 일 동안 1 시간/일 835 m h Z에서 EMF 노출 후 측정 1.6 W/k g, 특별 행정구에서 5 일 동안 1 시간/일 = 4.0 W/k g, 특별 행정구에서 1 일 5 h/일 = = 1.6 W/k g특별 행정구에 1 일 5 h/일 4.0 W/k g, 특별 행정구에 1 달 동안 매일 노출 = = 1.6 W/kg. 몸 무게는 크게 변경 되지 않았습니다. CB immunoreactivity (IR) 표시 온건 얼룩 cornu ammonis (CA) 분야와 눈에 띄게 셀의과 립 세포 스테인드. 눈에 띄게 공개 CR IR dendrites 이루면서 캘리포니아 지역에서 실행 된 피라미드 세포 스테인드. 1 개월에 대 한 노출을 생산 CA1 영역의 피라미드 세포의 손실을 거의 완료. CaBP 차이 정상적인 hippocampal 기능 신경 연결 및 통합에 관심된에 해로운 영향을 미칠 수 있는 셀룰러 Ca (2 +) 수준에 변화를 일으킬 수 있습니다.
염증에서 단백질 C 작업을 활성화 합니다
활성화 된 단백질 C (APC)는 자연 항 응고 제 procoagulation 요소 버지니아와 VIIIa 비활성화 하 여 응고 항상성에서 중요 한 역할을 한다. 자사의 anticoagulation 기능 뿐만 아니라 APC는 또한 항 염증, 안티-apoptotic 내 피 방 벽 보호 등 cytoprotective 효과가 있다. 최근, 재조합 인간 APC (rhAPC 또는 drotrecogin 알파 활성화, 상업적으로 'Xigris'로 알려진) 형태의 사망률의 높은 위험과 연관 심한 패 혈 증의 치료를 위해 미국 연방 의약품 안전 청에 의해 승인 되었다. 패 혈 증으로 알려진 조직의 염증 반응 증후군 (해보자) 감염에서 발생 환자 치료 환자에서 심각한 의학적 상태입니다. 패 혈 증, 과민 및 dysregulated 선 동적인 응답에 분 비의 프로-및 안티-inflammatory 이어질 cytokines, 활성화 및 leucocytes의 마이그레이션, 응고의 활성화, fibrinolysis, 및 증가 apoptosis의 저해. 비록 초기 가설에 초점을 맞춘 antithrombotic 그리고 패 혈 증에서 APC의 profibrinolytic 기능, 더 강력한 anticoagulation 기능을 가진 다른 에이전트 심한 패 혈 증 치료에 효과가 되지 않았습니다. 또한, APC 치료 치료 환자에서 심한 출혈의 위험과 연관 이기도 합니다. 따라서, APC의 약 효과 보다는 cytoprotective 효과 심한 패 혈 증의 치료에서 APC의 치료 혜택에 대 한 책임을 져야 postulated 됩니다.
세균성 E3 유비퀴틴 리가 IpaH9.8 대상 호스트 NF KappaB 중재 염증 반응을 저해할 니 모/IKKgamma
NF-kappaB (핵 요소 kappaB)는 많은 포함 하는 염증 성 세포 프로세스 및 면역 반응에 중추적인 역할을 하 고, IKK (IkappaB kinase) 복잡 고 IkappaBalpha 저하 하 여 정품 인증 규제 밀접 하 게 따라서. Shigella 박테리아 상피 세포 내에서 증식 하는 경우 그들은 nod1에 의해 인식 되 고 따라서 심한 염증 반응으로 이어지는 NF kappaB 통로 자극 하는 peptidoglycans 출시. 여기, 우리가 IpaH9.8, E3 리가 활동 소지 Shigella 이펙터에 독특한 방법으로 세균 감염에 NF kappaB 중재 염증 반응 따 윈 보여줍니다. IpaH9.8 니 모를 찾아서/IKKgamma 및 ABIN-1, 유비퀴틴 바인딩 어댑터 단백질 ABIN 1 종속 polyubiquitylation 니 모를 찾아서의 홍보와 상호 작용. 따라서, polyubiquitylated 니 모 NF kappaB 활성화 perturbs 프로테아좀 종속 저하를 겪 습. 니 모 NF kappaB 활성화를 위해 필수적으로 polyubiquitylation와 Shigella 감염 시 니 저하는 변조 호스트 선 동적인 응답을 새로운 세균 전략을 제안 합니다.
Neoepitope 정품 인증 특정 항 체를 선택 하는 라이브러리에 대 한 라이브러리를 조합
나 란 특정 항 체 또는 활성화 유도 neoepitopes 분자와 효소를 신호에 사용 됨을 인식 하는 그의 발견에 대 한 체계적인 접근에는 기초 과학 및 치료에 대 한 항 체 개발에 강력한 도구가 될 것입니다. 여기, 우리가 보고 우선적으로 바인딩 활성화 integrin 맥-1 (alpha(M)beta(2)) 및 차단 호 접착 및 마이그레이션에 강력한 있습니다 항 체 길 항 근의 분리. 소설 전략이이 작업에 대 한, 맥 1 삽입의 효 모 표면 표시로 구성 된 (I) 도메인 라이브러리 개발, 진화 활성 돌연변이 나 격리 도메인과 나 효 모에는 도메인의 활성에 대 한 인간 항 체 라이브러리의 살 균 소 전시 상영 감독. 농축된 항 체 라이브러리 다음 monomeric 항 원 항 체 상호 작용에서 항 체의 정량 최종 선택에 대 한 효 모 표면 2 하이브리드 시스템에 도입 되었다. 이, I 세포 접착 분자 (ICAM)-1에 바인딩 도메인 반감, 보완 하는 c 3 조각 iC3b 및 fibronectin, 도메인 나 활성와 우선적으로 반응 하는 높은 선호도 항 체 중간의 고효율 절연 주도하 고 potently 저해에 차례로 호 마이그레이션. 본 시연 전략 항 체 길 항 제 치료 및 진단 응용 프로그램에서의 발견으로 특히 비활성 및 활성 conformations 사이 전환 하는 모듈형 도메인에 대 한 항 체를 개발에 광범위 하 게 적용할 수 있습니다.
세균성 호스트 상피와의 상호 작용입니다
위장 상피 상피 무결성, 빠른 상피 세포 회전율, 감염 된 세포와 autophagy, 타고 난 면역 반응의 빠른 퇴 학을 포함 한 미생물 침입자를 싸우는 여러 타고 난 방어 메커니즘을 배포 합니다. 그럼에도 불구 하 고, 많은 세균성 병원 균은 이러한 방어 시스템을 우회 하 고 일차 발판으로 상피를 사용 하는 고도로 진화 감염 책략 갖추고 있습니다. 위장 상피 내 복제 하는 동안 위장 세균 병원 균에는 다양 한 구성 요소, 독 소, 및 파괴, 찬탈, 고 세균 생존 혜택을 호스트 세포 기능을 악용할 수 있는 이펙터 분 비. 또한, 세균성 병원 체 상피 올리려면 세균성 식민지 유지와 상피 장벽에 위배 균형 메커니즘의 다양 한을 사용 합니다. 이러한 복잡 한 전략 세균 pathogenesis의 새로운 패러다임을 나타냅니다.
세균성 이펙터 Cif Cullin1의 Deneddylation을 억제 함으로써 SCF 유비퀴틴 리가 기능을 방해 합니다
억제 인자 (Cif) 사이클 enteropathogenic 대장균 (EPEC) 및 유형 III 분 비 시스템 (TTSS)를 통해 enterohemorrhagic 병원 성 대장균 (EHEC)에 의해 상피 세포로 전달 하는 이펙터 중 하나입니다. 아직 정확 하 게 이해 하는 메커니즘을 통해 호스트 세포 주기 진행을 억제, Cif 가족 단백질 EPEC, 가운데 고도로 보존은 EHEC, 페스트 pseudotuberculosis, Photorhabdus luminescens, Burkholderia pseudomallei. 세포 주기 진행에 관련 된 여러 단백질의 수준은 Cullin 반지 ligases (Crl)에 활용 하 고 카트리나에 nedd8의 deconjugation에 의해 활성화 됩니다로 변조 됩니다. 여기 우리가 보여 Cif nedd8와 상호 작용 및 SCF (Skp1 Cullin1 F 상자 단백질) 복잡 한 유비퀴틴 리가 기능을 방해. 우리는 neddylated Cullin 가족 단백질 축적 p27 ubiquitination 감소 EPEC 감염 세포에서 발견. 따라서, Cif CyclinD1, Cdt1, p27, 등 SCF 기판 안정 하 고 G1 세포 주기의 체포 발생. 형광 ubiquitination 기반 세포 주기 표시기 (Fucci)의 시간 lapse-이미징 사용 하 여-우리 EPEC 감염 시 세포 주기 진행을 모니터링할 수 있었습니다 셀을 표현 하 고 g 1에 감염 된 세포의 체포를 확인 했다. 우리의 생체 외 및 생체 조건 데이터 Cif NEDD8 상호 작용 카트리나 deneddylation 억제 CRL 활동 억제 및 G1 체포 유도 표시. 우리는 따라서 세균 이펙터 Cif neddylation 중재 세포 주기 제어와 방해 결론.
새로운 감염 책략으로 세균성 병원 체에 의해 지하실 막 상피 세포 접착 력 강화
창 자 상피 따라서 미생물 침입에 대 한 본질적인 방어 역할 세균 감염에 대 한 응답으로 신속 하 게 각 질 제거 뿐만 아니라 급속 한 매출을 겪 습. 문을된 어떻게 점 막 병원 균 장 방어 시스템을 피할 수 있습니다 것이 오래 되었습니다. Shigella에서 사용 하는 세균성 계략의 우리의 최근의 발견은 신선한 통찰력을 제공 합니다. Shigella는 상피 세포 내에서 증식 하는 동안 유형 III 분 비 시스템을 통해 Ospe를 제공합니다. Effector 단백질이 integrin 연결 된 수용 체 세포 접착, integrin, 및 성장 요인 말라 cytoskeleton에 연결 하는 독특한 세포내 Ser/Thr 니 니 (ILK)와 상호 작용 하 여 지하실 막 상피 준수를 강화 했다. OspE ILK의 상호작용 증가 초점 유착 (FAs)의 형성 및 b1 integrin 표면 수준의 팍와 paxillin의 인 산화를 억제, 따라서 억제 Fas의 급속 한 매출, 셀 운동 성 감소 및 세포 외 기질에 세포 접착 력을 증진 하는 동안. 이 OspE ILK 상호 작용의 영향 생체 외 및 생체 조건 시연 되었다 감염 편광된 상피 세포 monolayers 및 기니 피그 콜론 Shigella 소지 또는 ospE 유전자 결여 된. 따라서 연구 결과 독성 관련 요인의 새로운 클래스를 설정 하 고 그것을 우회 하는 세균성 전략 및 창 자 벽의 기능에 새로운 통찰력을 제공.
Acetylation은 Prolactin 수용 체 Dimerization 변조
Cytokine 활성화 수용 체는 세포내 신호 경로 활성화 하는 데 필요한 세포 외 도메인 dimerization를 받 다. 여기에, 우리는 시내 prolactin (PRL) 보고-대우 셀, PRL 수용 체 (PRLR)는 acetylation 종속적 세포질 루프 dimerization를 겪 습. PRLR 채용 CREB 바인딩 단백질 (CBP) acetylates PRLR의 세포질 루프를 따라 무작위로 배포 하는 여러 개의 lysine 사이트. 두 개의 PRLR 단위체 acetylation 통해 무력화 다중 lysine 사이트 간의 조정에 막 말 초 영역에 막 인접 지역에서 여러 부분에 서로 상호 작용할 듯하다. 세포질 루프 dimerized PRLR stat5는 CBP에 의해 acetylated 또한 acetylation 종속 dimerization 겪 습 활성화 됩니다. PRLR dimerization 및 후속 신호 deacetylase sirtuin (으로 SIRT) 억제제 니코틴아미드 또는 히스톤 deacetylase (HDAC) 억제제 trichostatin A와 세포 치료에 의해 강화 하지만 표현 exogenous deacetylase SIRT2 또는 hdac6에 의해 저해. 우리의 결과 acetylation 및 deacetylation의 세포질 루프 dimerization 및 후속 STAT5 활성화 cytokine 수용 체 PRLR에 대 한 저항기와 같은 규제를 제공 것이 좋습니다.
Coronin7 소설 E3 유비퀴틴 리가 남자 안티 증식 단백질의 저하를 촉진 하는 복잡 한 양식
남자 안티 증식 남자/BTG 가족에 속한다. 세포 주기를 통해 남자의 수준 SCF (Skp1/Cullin/F-상자 protein)(Skp2) 유비퀴틴 리가 (E3) 복잡 한에 의해 규제 됩니다. 여기, 우리가 보여주는 Coronin7 (CRN7)도 남자 저하에 참여 하고있다. 우리 남자 작용 분자 CRN7 식별 합니다. CRN7 중간 6 WD 모티브의 2 개를 포함 하는 시퀀스는 상호 작용에 대 한 책임. CRN7 향상 된 남자 체 외, polyubiquitination 및 overexpression crn7의 승진 남자의 프로테아좀 종속 저하. 또한, CRN7 남자 단백질은 여러 ubiquitination 기계에 의해 규제 제안 소설 SCF 같은 E3 복잡 하 고, 형성 하는 Cullin1 및 roc1와 상호 작용 합니다.
열적으로 안정 된 나노 입자를 사용 하 여 Ultralow 그 임계값을 갖는 오 팔 템플릿 기반 연속 전도 폴리머 필름을 만들기
우리가 제안 하는 소설과 생성 하는 강력한 전략 연속 계면 활성 제를 사용 하 여 골드 나노 폴리머 코팅 (Au NPs) ultralow 그 임계값을 갖는 고분자 필름을 실시. 중 합 유화 제의 어셈블리를 사용 하 여 날조 했다 높은 내부 단계의 연속 poly(triphenylamine) (PTPA) 영화 템플릿으로 폴리스 티 렌 (PS) 콜 로이드 입자를 십자가. Au NPs 폴리머 코팅 열 200 ° C 이상도 안정적이 고 중립적인 PS 및 PTPA 단계를 수 있도록 설계 됐다. 따라서 누구나 NPs PS/PTPA 인터페이스에서 지역화 하 고 효율적으로 매우 낮은 그 임계값을 갖는 연속 실시 PTPA 폴리머 필름을 생산 하기 위해 계면 활성 제 기능. PS 콜 로이드 (전자 현미경 검사 법 및 전도도 측정에 의해 측정)으로 단 열 된 PTPA 위상의 그에 대 한 볼륨 분수 임계값 0.20 발견 되었다. 대조적으로, 매우 낮은 볼륨 분수의 추가 함께 (φ(p) = 0.35 vol %)의 계면 활성 제 Au NPs, PTPA 위상의 그에 대 한 볼륨 분수 임계값 극적으로 0.05로 감소 했다. SEM 및 TEM 측정은 명확 하 게 PS colloids의 polyhedral 단계 연속 PTPA 단계의 형성을 시연 했다. 블렌드 필름에서 나노 입자 계면의 영향을 명료 하 형태와 다른 PS 콜 로이드/PTPA 볼륨 비율에 혼합의 전도성 Au NP 농도의 함수로 특징 신중 하 게 했다. 우리의 접근 방식은 다양 한 분자 종, 이온, 또는 낮은 농도에서 전자 전송에 대 한 지속적인 단계를 필요로 하는 응용 프로그램에 대 한 방법론 및 기계적 지원 또는 별도 종족 전도 대 한 두 번째 단계를 제공 합니다.
조 셀 라인 표현 재조합 단일 클론 항 체의 생산 불안정의 기계 론 적인 이해
설계 된 포유류 세포를 이용한 재조합 단백질의 산업용 bioprocessing에서 가장 중요 한 문제 중 하나는 셀 라인 불안정 현상 생산 셀 라인 특정 생산성 (qP)의 상실을 겪고 있다. 이 현상이 발생 하는 예측할 수 없는 속도 론 고 중국 햄스터 난소 (조) 셀 라인 및 모든 일반적으로 사용 되는 유전자 식 시스템으로 광범위 하 게 관찰 되었다. 기본 (유전자 및 생리) 원인과 셀 라인 불안정을 underpinning 정확한 분자 메커니즘이 아직 완전히 해명 재조합 유전자 침묵 하 고 재조합 유전자 복사본의 손실 qP 손실 표시 되어 있지만. 이 작품에서 우리 조 셀 라인 단일 재조합 IgG(1) 및 IgG(2) 클론 항 체 (Mab)의 생산 장기 sub-culture 이상 qP 불안정성을 underpinning 분자 메커니즘을 조사. 생산 불안정 두 가지 기본 메커니즘에서 파생 시연: (i) epigenetic-메 틸-유도 transcriptional 입을 방지할 조 셀 인구에서 Mab 유전자 녹음 및 재조합 Mab 유전자 사본의 (ii) 유전 진보 손실 운전 CMV 발기인의. 재조합 유전자의 손실 로부터 발생 하는 qP 감소 재조합 조 셀 라인의 고유의 유전자 불안정성의 결과 이다는 것이 좋습니다. Biotechnol입니다. Bioeng입니다. © 2011와 일리 정기 간행물 주식 회사
Monoubiquitination의 남자/BTG 가족 단백질 저하를 대상으로 Polyubiquitination과 경쟁 한다
남자 안티 증식 남자/BTG 단백질 가족에 속한다. Transcriptionally과 포스트 번역 상 수정을 통해 가족 단백질은 남자 식 수준은 엄격 하 게 모두 규제. 유비퀴틴 (Ub) / 남자 가족 단백질의 proteosome 종속 저하는 세포 주기 진행 및 DNA 손상 응답을 조절에 중요 합니다. 다양 한 유비 ligases (E3s)는 남자 단백질의 저하에 대 한 책임. 여기, 우리가 남자 가족 단백질 monoubiquitination E3s 체 외의 부재에도 받 다 보여줍니다. 대량 spectrometric 분석 하 여 남자에 ubiquitination 사이트의 두 개의 lysine 잔류물 (Lys48 및 Lys63) 남자/BTG homology 도메인에 위치한 ubiquitinated는 밝혔다. 돌연변이 남자, Lys48 및 Lys63 알라닌로 대체 됩니다 vivo에서 야생 형 남자 보다 더 강하게 polyubiquitinated 이다. 이러한 데이터는 것이 좋습니다 그 monoubiquitination 남자의 가족 단백질 저하에 대 한 단백질을 대상으로 polyubiquitination에 대 한 저항을 수 여 합니다. 남자 가족 단백질의 안정성을 규제에 대 한 전략 monoubiquitination에 대 한 새로운 역할을 제안 합니다.
인-SXXE/D 모티브 TNF 수용 체 1 TRADD 죽음 도메인 복잡 한 형성 T 세포 활성화 및 마이그레이션에 대 한 중재
TNF 취급 셀, TNFR1, TNFR 관련 된 죽음 도메인 단백질 (TRADD), Fas 관련 죽음 도메인 단백질 및 수용 체 상호 작용 단백질 키 니 아 제 단백질 그들의 C-터미널 죽음 도메인 내에서 모듈의 상호 작용을 통해 복잡 한 신호 형성. 이 논문에서 우리는 죽음 도메인 SXXE/D 모티브 (즉, 죽음에 TNFR1 도메인의 S381DHE 모티브) 물론 죽음에 TRADD 도메인의 S215LKD 및 S296LAE 모티브는 phosphorylated 그리고이 안정적인 TNFR1 TRADD 복잡 한 형성과 NF-Κb의 후속 활성화에 필요한 보고 합니다. 인 s215lkd와 S296LAE 인 모티브 모집 Fas 관련 죽음 도메인 단백질과 수용 체 상호 작용 단백질 키 니 아에 대 한 TRADD 중요 한도 있습니다. IκB 키 니 아 제 β S381 후속 T 셀 마이그레이션 및 축적에 이르게의 TNFR1 인 산화에 중요 한 역할을 한다. 일관 되 게, TNFR1 S381 염증이 점 막에서 높은 숫자에서 축적 했다 그 염증 성 T 세포에에 phosphorylated constitutively는 선 동적인 장 질병 표본에서 관찰 합니다. 따라서 SXXE/D 모티브 많은 TNFR 가족 구성원의 세포질 도메인에서 발견 하 고 그들의 어댑터 단백질 α 헬리컬 죽음 도메인 신호 전달에 대 한 특정 상호 작용 모듈로 기능을 제공할 수 있다.
최첨단: 내부-아웃 CD28 Ligand 바인딩의 TCR 규제에 신호에 대 한 역할
이 신호 통합을 제어 하는 분자 메커니즘을 완전히 이해 되지 않습니다 있지만 효율적인 T 세포 활성화 TCR와 CD28, 모두의 참여에 따라 달라 집니다. 형광 공명 에너지 전달에 사용 하 여, 우리는 T 세포 활성화 CD28 이합체의 cytosolic 꼬리의 재교육을 운전할 수 있습니다 보여줍니다. 그러나, 이것은 CD28 ligand 바인딩을 통해 중재 하지. 오히려, TCR 자체 신호 cd28이 나 란 변화를 중재. 우리는 또한 TCR 신호 CD28-리간드 상호작용을 일으킬 수 보여줍니다. 비록 CD28 dimer 솔루션에서 monovalently ligand 바인딩 나타납니다, 우리는 모두 ligand 바인딩 사이트는 효율적으로 CD28 면역 냅을 모집 하는 데 필요한 다는 것을 보여줍니다. 이 결과 제안 integrin 활성화를 조절 하는 TCR의 크로스 토크 비슷합니다, TCR 시작한 내부 신호 ligand 바인딩 및 시작 CD28 신호 CD28의 세포 외 도메인에 구조적 변화를 일으킬 수 있습니다.
세포 죽음 및 감염: 호스트와 병원 체 생존을 위한 양날의 검
호스트 세포의 죽음은 미생물 감염에 대 한 응답에서 본질적인 면역 방어 메커니즘. 그러나, 세균성 병원 체 그들의 복제 및 생존을 향상 시키기 호스트 세포 죽음과 생존 경로 조작 하 많은 전략을 사용 합니다. 이 조작은 병원 균 자주 복제 수 있도록 세포 죽음 억제 및 보급을 위한 홍보와 함께 매우 복잡 한. 자주, 이러한 효과 감염 시 미토 콘 드리 아 싱크대, NF κB 종속 pro-survival, 및 inflammasome 종속 호스트 세포 죽음 통로의 변조를 통해가 해지는. 세균성 병원 체 세포 죽음 통로 조작 하는 분자 정보를 이해 감염 제어에 새로운 치료 접근에 대 한 통찰력을 제공할 것입니다.
Shigella는 호스트 타고 난 면역 반응에 대 한 여러 대책을 배포 합니다
창 자 상피 감각 세균 구성 요소 면역 시스템에 경보를 전송 박테리아, 취소 및 부상된 상피 안 대기를 갱신 여러 방어 시스템을 갖추고으로, 비록 점 막 세균성 병원 체는 염증 조절 시스템과 호스트의 면역 반응 진화 하 고 악용 일차 틈새와 유해 환경 때문에 창 자 상피를 효율적으로 정착 할 수 있다. 이 리뷰에서 우리는 타고 난 면역 체계를 방해 Shigella의 전술에 관한 현재 주제 강조.
Lectin 사이트 결 찰 Cr3의 구조적 변화와 시그널링을 유도합니다
호 중구 조직의 Candida albicans 등 곰 팡이 병원 균에 감염에 대 한 타고 난 면역 응답을 제공 합니다. 이 응답 밀접 하 게 함께 감염 된 조직 내에서 배포 되는 세포 외 기질 ligands integrins의 상호 작용을 통해 부분적으로 통제 된다. Β(2) integrin CR3 (CD11b/CD18) 포함 하는 곰 팡이 병원 체 관련 된 분자 패턴 β-글 루 칸을 바인딩하고 인간의 granulocytes 하 여 곰 팡이 병원 균의 인식에 대 한 지배적인 수용 체로 서 역할 하는 lectin 같은 도메인에서 integrins 가운데 독특합니다. Β-글 루 칸, 수용 성 형태로 분리 하는 경우는 안전 하 고 효과적인 면역 potentiator therapeutically 투여 하면 되도록 표시 되었습니다. 현재 제약 학년 준비 β-글 루 칸의 항 암 표시와 함께 여러 임상 시험에서입니다. 세포 외 기질, 탄수화물, 또는 두 ligands의 CR3 바인딩 차동 동시에 하지 명확 하 게 이해 하는 메커니즘을 통해 호 기능을 통제 한다. 우리 세포내 및 세포 외 CR3 구조에 수용 성 β-글 루 칸의 효과 심문 무서 워 기자를 사용 하 여. 비록 정식 CR3 리간드 차례로 전체 활성화 유도, 글 루 β-칸 혼자 또는 함께 차례로 적당 한 투구 확장 및 완전 세포질 꼬리 분리 중간 형태 안정. Phosphopeptides 차동 β-글 루 칸 CR3 종속 방식에서에 의해 규제의 세트 기능성 단백질을 사용 하 고 분자 및 단백질 transcriptional 규제, mRNA 처리 및 대체 접합에 관련 된 신호에 대 한 농축 발견 발견 되었습니다. 이러한 데이터 확인 CR3 β-글 루 칸에 대 한 신호 패턴 인식 수용 체 이며, 글 루 수용 성 β-칸 바인딩 및 살아있는 세포에 신호 유능한 중간 CR3 형태에 영향을 미치는의 첫번째 직접 증거를 나타냅니다.
박테리아 창 자 상피 장벽에서 상호 작용을 호스팅합니다
반면 주민 공생 하 고 외국 침입 박테리아 창 자 상피와 밀접 하 게 상호 작용 하 고 호스트 세포 및 면역 시스템에 영향을 미칠 창 자 점 막 미생물 침략자에 대 한 장벽 역할. 상피 장벽 많은 세균성 병원 체에 대 한 전염 성 발판과 깊은 조직에 전파 하는 병원 균에 대 한 엔트리 포트로 사용 됩니다. 장의 세균 병원 균 용기에서 방어 장벽을 우회 하는 박테리아를 허용 하는 매우 정교한 독성 메커니즘을 사용 하 여 창 자 점 막을 감염 효율적으로 수 있습니다. 우리 점 막 장벽 구성의 개요를 제공 하 고 세균성 effector 단백질의 역할에 특별 한 강조와 함께 이러한 장벽을 우회 세균 책략에 대해.
Integrin 형광 공명 에너지 전달에의 한 활성화를 모니터링
탈 선 integrin 활성화 여러 면역 병 리와 연결 됩니다. 백혈구 접착 결핍증 (젊은이)에서 재발 성 감염 성 에피소드 및 장애인된 상처 치유, 부재 또는 선호도 upregulation 받 다 β(2) integrins의 수 기여에 과도 한 integrin 활동 관련된 조직 손상으로 과장 된 염증 반응에 이르게 하는 동안. 따라서 integrin 활성화 immunotherapies에 대 한 매력적인 대상 이며 전 임상 신약 개발 하는 동안 필요는 integrin 활성화에서 에이전트의 효과 모니터링 합니다. Integrins의 활성화 및 세포질 세포 외 도메인의 구조 재편을 포함 한다. 여기, 우리가 integrin 구조적 활성화 형광 공명 에너지 전달 (FRET)을 사용 하 여 모니터링 하는 방법을 설명 합니다.
문화 매체 Aureobasidium Pullulans에서 Exopolysaccharide의 향상 된 생산을 위한 최적화
미생물에 의해 생산 하는 다 당 류는 다양 한 목적으로, 화장품 및 식품 첨가물으로 사용을 포함 하 여 활용 됩니다. 더 최근에, 다 당 류는 의료 및 제약 산업에 의해 악용 하 고 그 버섯의 많은 종에서 유래 되어 산업용 애플 리 케이 션;에 특히 유용 그러나, 생산 및 이들이 화합물의 합성 비용과 시간이 소요 됩니다. 이 연구에서 우리는 exopolysaccharide (EPS)을 효과적으로 구성 요소 차단 및 통계적 방법 (Plackett Burman 상자 Behnken 디자인)를 사용 하 여 중간 구성 최적화의 저가 생산을 위한 방법을 개발. 그 결과, 우리가 얻은 다음 최적화 된 매체: 자당 165.73 g/L, 나트륨 질 산 3.08 g/L, dipotassium 인산 1.00 g/L, 염화 칼륨 0.50 g/L, 황산 마그네슘 0.50 g/L, 철 황산 0.01 g/L, 그리고 0.71 g/L, Ashbya gossypii의 압축을 풉니다. 약 29 g/L EPS의 최대 생산 최적화 된 매체에서 84 h 일괄 발효 하는 동안 달성 했다.
S-adenosylmethionine (SAM) 합성 Pichia Ciferrii에서의 구조적 및 기능적 특성
S adenosylmethionine 합성 (SAM s) S-adenosylmethionine (SAM), 메 틸 화, 전사, 확산, 및 2 차 대사 산물의 생산을 위해 필수적인 합성 catalyzes. 여기 샘-s Pichia ciferrii에서 선택적으로 RNA CapFishing 및 cDNA 끝 (경주)의 급속 한 확대를 사용 하 여 복제 된. SAM s의 상 전장 cDNA 인코딩된 383 아미노산 단백질 (42.6 kDa)는 금속 바인딩 사이트, 인산 바인딩 사이트 및 기능적으로 중요 한 모티브 고도로 보존 했다. 해당 효소 Pichia pastoris heterologous the에서 over-expressed 고 동질적인 형태를 정화 하 고. 효소 반응 속도 론, immunoblotting, 원형 양색성 (CD), 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC), 및 분자 모델링 P. ciferrii에서 SAM s의 특성을 실시 했다. 샘 들의 구조 및 기능 연구 산업 응용 프로그램에 대 한 중요 한 통찰력을 제공할 것입니다.
