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 JoVE Bioengineering

高通量微RNA分析:优化复纳升秤定量RT - PCR Fluidig​​m公司动态ArrayTM国际金融中心


JoVE 2552 8/03/2011

1The Eli and Edythe Broad Center of Regeneration Medicine and Stem Cell Research, University of California San Francisco, 2Center for Reproductive Sciences, University of California San Francisco, 3Department of Urology, University of California San Francisco, 4Department of Cell and Tissue Biology, University of California San Francisco, 5Fluidigm Corporation, Fluidigm Corporation, 6Department of Obstetrics and Gynecology, Hadassah-Hebrew University Medical Center, 7UCSF - Helen Diller Family Comprehensive Cancer Center, University of California San Francisco

在这里,我们描述一个优化的多重逆转录定量PCR(QRT - PCR)结合起来作为一个时间和成本效益高通量的microRNA(miRNA)的表达水平的筛检工具的微流体平台的协议,尤其是当样本数量有限的工作。

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第 12 章。胎盘子宫脉管系统的重构。

有胎盘类哺乳动物,在第一次的器官功能是胎盘,在胚外车厢迅速组装的瞬态结构。通过胎盘胚胎之前开发的必要性,它支持宫内通过执行许多相同的函数,肺、 胃肠道及泌尿系统进行出生后。专门的上皮细胞产生的胎盘,称为细胞滋养层会考,负责将产妇血重定向到发展中国家的 conceptus,由于通过产妇子宫内膜间质 (间质入侵) 和驻地血管 (血管内入侵) 单元格的攻击性入侵发生。后者过程涉及产妇的内皮细胞的位移和周围的血管平滑肌细胞凋亡的诱导。在一起,这些事件导致血管弹性和增加的血流量减少。在过去,人类 CTB 血管内入侵的调查一直限于组织切片免疫组织化学检查。在本章中,我们将讨论在体外和体内都最近改编的技术用于 CTB 血管内入侵期间发生的复杂事件的研究。作为介绍,我们提供背景胎盘解剖及城巴行为的分子基础。要遵循,我们目前使用的分离与主 CTBs 和绒毛膜绒毛外植体培养的技术。此外介绍了用于标识修改滋养血管的胎盘组织切片的方法。接下来,我们检讨其他组用于研究 CTB/内皮细胞相互作用中文化注重采用离的细胞和绒毛膜外植体的技术方法。最后,我们得出结论由我们组和其他人探索出现如 CTBs 侵入血管在裸鼠体内的复杂的异型细胞-细胞交互设计的方法。

Notch 信号中滋养细胞血管内浸润和子痫前期发病机制中的作用。

胎盘滋养细胞 (TBs) 侵入并重塑子宫血管动脉的偏向。这一进程,其中涉及血管拟态,重新路由到胎盘产妇血,但在子痫前期中失败。我们调查的槽口家庭成员在这两种情况下,作为他们在动脉分化/函数中扮演重要的角色。Immunoanalyses 组织切片显示人类 TB 侵华期间的槽口受体/配体逐步调制。Notch 信号的抑制作用降低体外培养的人类 TBs 的入侵和动脉标记 EFNB2 的表达。在鼠标胎盘,槽口活动是最高的血管内的 Notch2,唯一受体上调 30-40%的产妇血运河和胎盘灌注了 23%的大小减少动脉入侵,鼠标 TB 侵华期间进行 Tbs 条件删除。通过 E11.5,有垃圾全致死突变的后代数目。先兆子痫,槽口 JAG1 配体的表达是缺席在血管周围和血管内 Tb。我们得出结论 Notch 信号是 TB 血管入侵的关键。

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