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Articles by Nazim El-Andaloussi in JoVE
JoVE Immunology and Infection
아데노 바이러스 파생 시스템의 도움으로 효율적인 재조합 파르 보 바이러스 생산
1Tumour Virology Division F010, German Cancer Research Center (DKFZ), 2Inserm Unit 701, German Cancer Research Center (DKFZ)
여기에는 오직 사용중인 다른 프로토콜에 비해 100 개 이상의 배 이상에 의한 재조합 파르 보 바이러스 생산의 효율성을 향상시켜 세포 감염에 기반 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜은 파르 보 바이러스의 부사장의 전송 단위 (광고-VP)를 포함하는 5-기반 도우미 소설 아데노 바이러스의 사용에 의존하고 있습니다.
Other articles by Nazim El-Andaloussi on PubMed
Acetylation은 DNA 중 합 효소 베타의 DNA 엔드 트리밍 활동을 규제
우리는 DNA 중 합 효소 베타 (Polbeta), DNA 기본 절단 복구 (BER)에 관여 하는 단백질에 대 한 새로운 규제 메커니즘을 설명합니다. Polbeta colocalized in vivo 및 복잡 한 transcriptional coactivator p300 형성. p300 고유 도메인을 통해 Polbeta와 상호 작용 하 고 체 외 Polbeta acetylated. Polbeta acetylation 또한 vivo에서 관찰 되었다. Lysine 72 Polbeta의 p300에 의해 acetylation의 주요 대상으로 확인 됐다. 흥미롭게도, acetylated Polbeta 재구성된 BER 분석 결과에 참여 하는 심각 하 게 감소 능력을 보여주었다. 이것은 Polbeta의 dRP lyase 활동의 장애 때문. 따라서 Polbeta의 acetylation 역할 intranuclear 규제 메커니즘을 하 고 그 p300 BER에 중요 한 규제 역할을 담당 하는 것을 의미.
인간 Rad9/Rad1/Hus1 손상 센서 클램프 DNA 중 합 효소 베타와 상호 작용 하 고 DNA 기판 활용도 효율성 증가: DNA에 대 한 의미를 복구 합니다
진 핵 세포에서 DNA 손상에 대 한 응답에서 검사점 활성화 됩니다. 이 DNA 손상 센서 Rad 가족 단백질 등의 조치가 필요합니다. 3 인간의 단백질 Rad9, Rad1 및 Hus1 형성 복잡 한 heterotrimeric (9-1-1 이라는 복잡 한)는 DNA에 손상 시 모집. DNA 손상 DNA 복구 단백질 전문된 DNA 폴을 포함 하 여 병 변에서의 채용을 트리거합니다. 이 작품에서 우리는 9-1-1 보여 복잡 한 DNA 중 합 효소 베타 생체 외에서 물리적으로 상호 작용할 수 있습니다. 기능 분석 공개 하는 9-1-1 복잡 한 DNA 중 합 효소 베타 활동에 물질로 영향을 미쳤다. 그러나, 9-1-1의 존재 람다 DNA 중 합 효소, 다른 제품군 DNA 중 합 효소도 2 일차 DNA 폴 알파와 델타 복잡 한 어느 쪽도 아니 영향. Dna 중 합 효소 베타 자극 뇌관 템플릿과 9-1-1 상호 작용에 대 한 선호도 증가에서 결과 DNA 중 합 효소 베타 하 여 복잡 한 자극된 deoxyribonucleotides misincorporation. 또한, 9-1-1에서 복잡 한 DNA 중 합 효소 베타 1 nt 갭 DNA 기판에 의해 DNA 가닥 변위 합성 강화. 우리의 데이터 발생 가능성을 9-1-1 복잡 한 DNA 중 합 효소 베타 DNA 손상 사이트, 따라서 검사점 및 DNA 복구 직접 연결을 유치 수 있습니다.
간장 Lipase 불충분 한 쥐에 만성 ACTH 자극 Corticosterone 응답 감쇠: 부 신 생리학 간장 Lipase의 역할에 대 한 증거
간장 lipase (HL) 간 표현 lipolytic 효소 트리 글리세라이드와 인지질 단백질에 hydrolyzes 및 전체 입자 수용 체-중재 및 선택적 콜레스테롤 통풍 관을 통해 콜레스테롤 납품을 추진 하 고. HL 활동 단백 콜레스테롤 합성 뇌 하 수 체 ACTH에 대 한 응답에서 스테로이드 제제를 활용 하는 부 신 분 비에도 발생 합니다. 부 신 HL의 역할 배달 glucocorticoid 합성에 대 한 외 인 성 콜레스테롤의 촉진은 높습니다. 이 기초에, 우리는 HL hypothesized 결핍 glucocorticoid 응답 ACTH 무딘 것 이다. 또한, exogenous 콜레스테롤도 LDL 수용 체 (LDLR) 통로에서 파생 하 고, 때문에 우리는 LDLR 가상 결핍 ACTH에 대 한 응답을 둔 것 이다. 이러한 가설을 테스트 하려면 우리 HL 결핍에 8 개의 일일 ACTH 주사 corticosterone 응답 비교 (hl-/-), LDLR-불충분 한 (Ldlr-/-), HL-및 LDLR-이중 결핍 하 고 (Ldlr-/-hl-/-) 야생-타입 (WT) 쥐에서와 쥐. 2, 5, 8 일에는 플라즈마 corticosterone 수준은 측정 했다. Kruskal-월리스 단방향 ANOVA 순위와 쌍에 의해 genotypes 플라즈마 corticosterone 수준 차이 분석 했다 던의 테스트 하 여 여러 비교. 우리의 결과 하루 5 및 녹아웃 모델에 8 일에 하루에 2 플라즈마 corticosterone 레벨의 감소 추세와 상당한 절감을 보여 줍니다. 따라서, 5 일에 플라즈마 corticosterone 레벨 57, 70, 73%로 감소 했다 (모든 P < 0.05)와 하루 8 76 여 59, 그리고 63% (모든 P < 0.05) hl-/-, Ldlr-/-, 및 Ldlr-/-hl-/-생쥐, 각각. 이러한 결과 LDLR 결핍 같은 HL 결핍, 만성 ACTH 자극 부 신 응답을 무디게 하 고 부 신 생리학에서 HL에 대 한 새로운 역할을 제안 입증.
아르기닌 메 틸 화 조절 DNA 중 합 효소 베타
DNA 변경 수리 genomic 불안정성 및 암의 높은 위험으로 이어질. DNA 기본 절단 복구 (BER) 손상 된 기지, apurinic 사이트와 단일 가닥 DNA 나누기를 수정합니다. 여기에, 베타 버전 DNA 중 합 효소 (Pol 베타)에 대 한 규제 메커니즘을 설명 합니다. Pol 베타 복잡 한 단백질 아르기닌 methyltransferase 6 (PRMT6)를 발견 하 고 생체 외 및 생체 조건 갠 구체적으로. PRMT6 Pol 베타의 메 틸 화는 강력 하 게 단일 뉴클레오티드 삽입 및 dRP lyase 활동은 영향을 받지 동안 DNA 바인딩 및 processivity, 강화 하 여 DNA 중 합 효소 활동을 자극. 두 잔류물, R83 및 R152, prmt6에 의해 메 틸의 사이트로 Pol 베타에서 확인 되었다. R83/152 K 돌연변이와 유전자 보완성 Pol 베타 마네 셀의 DNA alkylating 에이전트 셀룰러 저항에 대 한 이러한 잔류물의 중요성을 밝혔다. 우리의 연구 결과 바탕으로, PRMT6 BER의 레 귤 레이 터로 서 역할을 한다 제안 한다.
DNA 중 합 효소 단백질 아르기닌 Methyltransferase 1 베타의 메 틸 화 방지할 세포 핵 항 원에 바인딩 조절
베타 버전 dna 중 합 효소 (pol 베타) DNA 기본 절단 복구 (BER)의 핵심 선수 이다. 여기, 우리는 pol 베타 단백질 아르기닌 methyltransferase 1 (PRMT1)와 복잡 한 형성 기술. Prmt1는 특히 생체 외 및 생체 조건 pol 베타 갠. 아르기닌 137 prmt1에 의해 메 틸 화에 대 한 중요 한 대상으로 폴 베타에서 확인 되었다. 효소도 pol 베타의 dRP lyase 활동 PRMT1 메 틸 화에 의해 영향을 받았다. 그러나,이 수정 pol 베타 방지할 세포 핵 항 (PCNA) 상호 폐지. 함께, 우리의 결과 pol 베타의 메 틸 화 PRMT1 pol 베타 PCNA 종속 DNA 대사 이벤트에 참여 하지 못하도록 하 여 BER에 규제 역할을 할 수 있다는 증거를 제공 합니다.
자사의 Nonstructural 단백질 N S 1 통해 Parvovirus H 1 반응성 산소 종의 축적을 통해 Apoptosis를 유도 한다
그것은 인 간에 대 한 병원 성 및 oncotropic 및 oncosuppressive 속성을가지고 있기 때문에 H-1 (H-1PV) 쥐 parvovirus 암 요원으로 높은 눈길을 끈다. 바이러스 성 nonstructural NS1 단백질 H-1PV 세포 독성을 중재할 생각 하지만 정확한 기여가이 프로세스에 정의 되지 않은 상태로 유지 됩니다. 이 연구에서 우리는 인간의 세포 증식과 세포 생존 능력에 대 한 H-1PV NS1 단백질의 효과를 분석 했다. 우리는 NS1 식 G(2) 위상, 9, 3 caspase 활성화 및 세포 세포의 용 해를 통해 apoptosis의 세포의 축적을 유도 하기에 충분 한 표시. 마찬가지로, 감염 된 야생 형 H-1PV 셀 G(2) 단계에서 체포 하 고 apoptosis를 받 다. 또한, 우리 또한 DNA 이중 가닥 나누기와 관련 된 세포내 반응 산소 종 (선생님)의 상부에 n s 1과 H-1PV 감염 리드의 두 식을 보여주는. 항 산화 치료 선생님 수준 줄어들고 NS1 및 바이러스 유발 DNA 손상, 세포 주기 검거와 apoptosis, NS1 유도 선생님은 H-1PV 세포 독성의 중요 한 중재자를 나타내는 강력 하 게 감소 시킵니다.
대상 변경 쥐 Parvovirus H-1PV 바이러스 Capsid의 유전 공학 통해 암 세포에의
쥐 parvovirus H-1pv은 인 간에 있는 그것의 oncosuppressive 속성 및 알려진된 부작용의 부재 주어진 유망한 항 암 에이전트. H-1PV 변환 된 셀에 우선적으로 복제 하지만 바이러스는 정상 및 암 세포를 입력할 수 있습니다. 정상 세포에 의해 글귀 sequesters 종양 대상에서 관리 바이러스 복용량의 중요 한 부분. 따라서, 특히 종양 세포를 H-1PV 항목을 대상으로 parvovirus 기반 치료의 효능을 증가 하는 것이 중요. 이 연구에서 우리는 먼저 그 sialic 산 H-1PV 항목에서 핵심적인 역할을 하고있다 발견. 우리 다음 유전자 조작 인간 종양 세포에 대 한 그것의 선호도 개선 하기 위해 H-1PV capsid. 쥐의 밀접 하 게 관련된 parvovirus 분 바이러스의 확인 된 결정 구조와 비유, 우리는 시내 silico 3 차원 (3D) 개발 H-1PV 야생-타입 capsid의 모델. 이 모델을 바탕으로, 우리 상 아미노산 2-fold capsid 소위 보조 개 지역 내에서 대칭 축의 수준에서 세포 막 인식 및 바이러스 항목에 관련 된 발견. 이러한 잔류물의 원래의 mutagenesis 바인딩 및 관대 한 셀 H-1PV 진입에 크게 줄어듭니다. 다음 항목 불충분 한 바이러스 성 capsid 설계 하 고 순환 RGD-4 C 펩 티 드의 3 축 스파이크의 수준에서 삽입. 이 펩 티이 드 암 세포 및 성장 하 고 있는 혈관에 overexpressed α(v)β(3) 및 α(v)β(5) integrins를 바인딩합니다. 펩 티 드의 삽입 overexpressing α(v)β(5) integrins, 이러한 세포의 효율적인 살인 reengineered 바이러스에 의해 발생 하는 셀 방향으로 바이러스 성 infectivity 구출. 이 작업 대상이 그 H-1PV 수 수 유전자 변경의 capsid 수정을 통해 암 치료에 더 효율적인 활용이이 바이러스에 대 한 큰 약속을 보여주는 하는 방법을 보여 줍니다.
