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Articles by Suvranta Tripathy in JoVE
JoVE General
Isolierung und Reinigung von Kinesin aus Drosophila Embryonen
Dies ist ein Protokoll, um aktiv in voller Länge zu isolieren Kinesin aus
Other articles by Suvranta Tripathy on PubMed
Mechanische Stochastische Tauziehen Modelle Erklären Nicht Bidirektionale Lipid-Tröpfchen Transport
Intrazellulären Transport via Microtubule Motoren Kinesin und Dynein spielt eine wichtige Rolle bei der Aufrechterhaltung der Zellenstruktur und Funktion. Oft Verschieben mehrerer Kinesin oder Dynein-Motoren die gleiche Ladung. Ihre gemeinsame Funktion hängt entscheidend von den einzelnen Motors Loslösung Kinetik unter Last, die wir hier experimentell zu messen. Diese experimentelle Einschränkung--in Kombination mit anderen experimentell bestimmte Parameter--wird dann in theoretischen stochastischen und Mittel-Feld-Modelle integriert. Vergleich der Ergebnisse und in-vitro-Daten Modellierung zeigt guten Übereinstimmung für das stochastische, aber nicht bedeuten-Feld, Modell. In-vivo viele Ladungen verschieben bidirektional, häufig Umkehr Kurs. Da Kinesin und Dynein auf die Ladungen vorhanden sind, ist eine populäre Hypothese erklärt die häufigen Umkehrungen, dass die Gegenteil-Polarity-Motoren in unregulierten stochastische Schlepper von Kriegsgefangenen zu engagieren. Dann lässt sich die Ladungen Bewegung vollständig von dem Ergebnis dieser Wettbewerbe Gegenteil-Motor erklären. Hier verwenden wir vollständig kalibrierten Modelle für stochastische und Mittel-Feld die Tauziehen-Hypothese zu testen. Weder Modell stimmt auch unsere in-vivo-Daten, was darauf hindeutet, dass neben der unvermeidlichen Schlepper von Kriegsgefangenen zwischen gegenüberliegenden Motoren, gibt es eine zusätzliche Ebene der Verordnung in den Modellen nicht enthalten.
Kasein-Kinase 2 Kehrt Schwanz-unabhängige Inaktivierung Von Kinesin-1
Kinesin-1 ist ein Plus-End Microtubule-basierte Motor und Mängel im Verkehr Kinesin-basierte Krankheiten einschließlich Neurodegeneration verbunden sind. Kinesin kann Auto-hemmen über eine Kopf-Schwanz-Interaktion, aber wird geglaubt, um anderweitig aktiv sein. Hier berichten wir einen Schwanz-unabhängige Inaktivierung von Kinesin, reversibel durch das Krankheit-relevanten Signalgebung Protein, Casein Kinase 2 (CK2). Die Mehrzahl der ursprünglich aktive Muskelkontraktion (native oder Schwanz-weniger) verliert seine Fähigkeit zur Interaktion mit Mikrotubuli in-vitro- und CK2 kehrt diese Inaktivierung (etwa um das Vierfache) ohne Veränderung der Kinesin motor Einzeleigenschaften. Diese Aktivierung Option erfordert keine motor Phosphorylierung und ist unabhängig von Kopf-Schwanz-Auto-Hemmung. In kultivierten Säugetierzellen verringert die Verringerung der CK2 Ausdruck, aber nicht dessen Kinaseaktivität, erforderliche Kraft, um Lipid Tröpfchen Transport, mit einer reduzierten Anzahl von aktiven Kinesin Motors abwürgen. Unsere Ergebnisse bieten die erste Beweise für eine Kinase Heraufregulierung Kinesin-basierte Proteintransport und schlagen einen neuartigen Weg zur Regulierung der Aktivität der Ladung gebundene Kinesin.
