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Articles by Suzanne M. Hickerson in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Imaging in vivo del transgenico parassiti Leishmania in un host live
1Interdisciplinary Immunology Program, University of Iowa, and the VA Medical Center, 2Department of Biochemistry, University of Iowa, and the VA Medical Center, 3Department of Internal Medicine, University of Iowa, 4Department of Molecular Microbiology, Washington University School of Medicine, 5Division of Dermatology, Harbor-UCLA Medical Center, Hanley-Hardison Research Center, 6Interdisciplinary Immunology Program, Iowa City VA Medical Center, 7Departments of Internal Medicine, Microbiology and Epidemiology, University of Iowa
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Other articles by Suzanne M. Hickerson on PubMed
Localizzazione Di IFN-gamma-attivato Stat1 E IFN Normativi Fattori 1 E 2 in Cellule Di Cancro Al Seno
Lo scopo del presente lavoro è stato di valutare l'induzione e la localizzazione di Stat1, interferone (IFN) regolamentazione factor-1 (IRF-1), e IRF-2 dopo l'esposizione di IFN-gamma di cancro al seno umano cell lines, SKBR3, MDA468, MCF7 e BT20. Risultati dei saggi di crescita, macchia occidentale, analisi di spostamento di mobilità elettroforetica (EMSA) e colorazione immunoistochimica erano fascicolati per testare la nostra ipotesi che l'analisi di immunohistochemical di Stat1, IRF-1 e IRF-2 sarebbe fornire ulteriori informazioni sulle funzionalità della via di segnalazione di IFN-gamma in linee tumorali umane. EMSA risultati hanno mostrato che in ciascuna delle quattro linee cellulari, Stat1 espressione era aumentato e ha dimostrato attività funzionale dopo stimolazione di IFN-gamma. Analisi occidentale e l'EMSA ha mostrato sovraregolazione di IRF-1 ma non IRF-2 in ciascuna linea cellulare. Microscopia confocale delle cellule colorate per Stat1, IRF-1 e IRF-2 ha confermato i risultati e anche romanzo informazioni circa la localizzazione intracellulare di proteine e intercellulare variazioni nelle risposte. La percentuale di cellule con stimolazione IRF-1 e traslocazione è stata positivamente correlata con la soppressione di crescita di IFN-gamma in vitro. In conclusione, utilizzando quattro saggi indipendenti, abbiamo dimostrato che eterogeneità in IFN-gamma-mediata upregulation delle proteine di trasduzione del segnale può essere rilevata in vitro e che queste differenze possono spiegare gli effetti distinti di crescita cellulare.
Il Ruolo Del Clivaggio Di Glicina Mitocondriale Complesso Il Metabolismo E La Virulenza Del Parassita Protozoo Leishmania Major
Per l'agente patogeno umano Leishmania major, una fondamentale funzione metabolica è la sintesi di timidilato, che richiede 5,10-metilenetetraidrofolato (5,10-CH(2)-THF). 5,10-CH (2)-THF può essere sintetizzato dalla glicina da complesso di clivaggio glicina mitocondriale (GCC). L'analisi bioinformatica ha rivelato le quattro subunità del GCC nel genoma major L., e il ruolo del GCC nel metabolismo del parassita e virulenza è stato valutato attraverso studi della subunità P (decarbossilasi glicina (GCVP)). In primo luogo, una proteina GCVP tagged è stato espresso e localizzata per il Mitocondrio parassita. In secondo luogo, un mutante di gcvP(-) è stato generato e mostrato mancanza di significative attività GCC utilizzando un test in vivo indiretta dopo incorporazione dell'etichetta da [C 2-14] glicina nel DNA. Il mutante gcvP(-) è cresciuto poco in presenza di eccesso glicina o serina minimal; questi studi ha inoltre stabilirono che promastigotes major L. richiedono serina per una crescita ottimale. Sebbene amastigoti e gcvP(-) promastigotes hanno mostrato normale virulenza nelle infezioni dei macrofagi in vitro, entrambe le forme del parassita ha mostrato sostanzialmente ritardato replica e lesione patologia nelle infezioni di topi geneticamente sensibili o resistenti. Questi dati suggeriscono che, come la fisiologia del sito di infezione cambia durante il corso dell'infezione, così fanno i vincoli metabolici sulla replica del parassita. Questa conclusione ha un grande significato per l'interpretazione delle esigenze metaboliche di virulenza. Infine, questi studi richiamare l'attenzione in trypanosomatid protozoi per la chiave metabolica intermedio 5,10-CH (2)-THF, situata all'incrocio di Serina, glicina e timidilato metabolismo. In particolare, le previsioni basate su genoma suggeriscono il relativo parassita Trypanosoma brucei è totalmente dipendente da GCC per 5,10-CH (2)-sintesi THF.
Virus a RNA Leishmania Controlla La Gravità Della Leishmaniosi Mucocutanea
Leishmaniosi mucocutanea sono causata da infezioni da parassiti intracellulari del sottogenere Leishmania Viannia, compresi Leishmania guyanensis. La patologia si sviluppa dopo la diffusione del parassita ai tessuti rinofaringei, dove lesioni metastatiche distruttive formano con infiammazione cronica. Attualmente, i meccanismi coinvolti nello sviluppo di lesione sono capiti male. Qui vi mostriamo che metastasi parassiti hanno un elevato carico di Leishmania RNA virus-1 (LRV1) che è riconosciuto dal recettore Toll-like host 3 (TLR3) per indurre chemochine e citochine proinfiammatorie. Paradossalmente, queste risposte immunitarie mediate TLR3 reso topi più suscettibili alle infezioni, e gli animali ha sviluppato un'aumentata footpad gonfiore e parassitemia. Così, LRV1 nei parassiti metastasi sovvertito la risposta immunitaria alla Leishmania e promosso la persistenza del parassita.
Leishmania Ucciso Ma Metabolicamente Attivo, Come Un Romanzo Vaccino a Cellule Intere Per La Leishmaniosi Viscerale
Non ci sono attualmente vaccini efficaci per la leishmaniosi viscerale, il secondo più infezione mortale parassita in tutto il mondo. Qui descriviamo un approccio romanzo vaccino a cellule intere utilizzando Leishmania infantum chagasi promastigotes trattata con il amotosalen composto di psoraleni (S-59) e basse dosi di raggi ultravioletti una radiazione. Questo trattamento genera permanente, covalente legami crociati del DNA all'interno parassiti e si traduce in Leishmania organismi chiamati ucciso ma metabolicamente attivo (KBMA). In questa relazione, caratterizzano le caratteristiche di crescita in vitro di entrambi KBMA-L. major e KBMA-L. infantum chagasi (KBMA-Lic). Concentrazioni di S-59 che generano parassiti attenuati in modo ottimale sono stati identificati. Come vivere L. infantum chagasi, KBMA-Lic parassiti sono stati in grado di entrare inizialmente in vivo le cellule del fegato dopo l'infezione per via endovenosa. Tuttavia, considerando che vivo infezione da L. infantum chagasi conduce a epatosplenomegalia nei topi dopo sei mesi, KBMA-Lic erano rilevabili negli organi di topi a questo punto del tempo. In vitro, KBMA-Lic ha mantenuto la capacità di entrare in macrofagi e inducono la produzione di ossido nitrico. Queste caratteristiche di KBMA-Lic correlata con la capacità di proteggere profilattico topi tramite vaccinazione sottocutanea a livelli simili di vaccinazione con organismi vivi, virulenti. Splenocytes da topi vaccinati con live L. infantum chagasi o KBMA-Lic visualizzato simile cytokine pattern in vitro. Questi risultati suggeriscono che la tecnologia KBMA è una strategia di vaccino romanzo potenzialmente sicuro ed efficace contro il protozoo intracellulare L. infantum chagasi. Questo approccio potrebbe rappresentare un nuovo metodo per cellule intere vaccinazione contro altri patogeni intracellulari complesse.
