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Articles by Suzanne M. Hickerson in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Imágenes in vivo de los cultivos transgénicos parásitos Leishmania en un host en vivo
1Interdisciplinary Immunology Program, University of Iowa, and the VA Medical Center, 2Department of Biochemistry, University of Iowa, and the VA Medical Center, 3Department of Internal Medicine, University of Iowa, 4Department of Molecular Microbiology, Washington University School of Medicine, 5Division of Dermatology, Harbor-UCLA Medical Center, Hanley-Hardison Research Center, 6Interdisciplinary Immunology Program, Iowa City VA Medical Center, 7Departments of Internal Medicine, Microbiology and Epidemiology, University of Iowa
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Other articles by Suzanne M. Hickerson on PubMed
Localización De IFN-gamma-activado Stat1 Y IFN Factores Reguladores 1 Y 2 En Las Células De Cáncer De Mama
El objetivo del presente trabajo fue evaluar la inducción y la localización de Stat1, factor regulador de interferón (IFN)-1 (Fig-1), y líneas, SKBR3, MDA468 y MCF7 BT20 de la célula de IRF-2 después de la exposición de IFN-gamma del cáncer de mama humano. Se compilaron los resultados de ensayos de crecimiento, tinción occidental, análisis de cambio de movilidad electroforética (EMSA) y tinción inmunohistoquímica para probar nuestra hipótesis que análisis immunohistochemical de Stat1, IRF-1 y 2-IRF proporcionaría información adicional acerca de la funcionalidad de la vía de señalización de IFN-gamma en líneas tumorales humanas. EMSA resultados mostraron que en cada una de las cuatro líneas celulares, expresión de Stat1 aumentó y demostró actividad funcional después del estímulo de IFN-gamma. El análisis occidental y EMSA demostró upregulation de IRF-1 pero no IRF-2 en cada línea celular. Microscopia confocal de células teñidas de Stat1, IRF-1 y 2-IRF confirmó los resultados y también nueva información sobre la localización intracelular de proteínas e intercelulares variaciones en las respuestas. La proporción de células con estimulación de IRF-1 y desplazamiento se correlacionó positivamente con la supresión del crecimiento de IFN-gamma in vitro. En conclusión, utilizando cuatro ensayos independientes, hemos demostrado que puede detectarse en vitro heterogeneidad en upregulation mediada por IFN-gamma de las proteínas de transducción de señal y que estas diferencias pueden explicar los efectos distintos de crecimiento celular.
El Papel De La División De La Glicina Mitocondrial Complejo En El Metabolismo Y La Virulencia Del Parásito Protozoo Leishmania Major
Para el patógeno humano comandante de Leishmania, una función metabólica dominante es la síntesis de timidilato, que requiere de 5, 10-Metilenotetrahidrofolato (5,10-CH(2)-THF). 5,10-CH 2-THF puede sintetizarse de glicina por el clivaje de la glicina mitocondrial complejo (GCC). Análisis bioinformático revelaron las cuatro subunidades del CCG en el genoma de L. principal, y el papel del CCG en metabolismo del parásito y virulencia se evaluó a través de estudios de la subunidad de P (decarboxilasa de la glicocola (GCVP)). En primer lugar, una proteína GCVP etiquetada fue expresada y localizada en la mitocondria del parásito. En segundo lugar, un mutante de gcvP(-) fue generado y se muestra a la falta de actividad significativa del GCC usando un indirecto análisis in vivo después de la incorporación de etiqueta de glicina [2-14 C] en el ADN. El mutante gcvP(-) creció mal en presencia de glicina exceso o serina mínimo; Estos estudios también establecieron que los promastigotes principales L. requieren Serina para un crecimiento óptimo. Aunque los amastigotes y gcvP(-) promastigotes mostró virulencia normal en infecciones de macrófagos in vitro, ambas formas del parásito patología substancialmente retrasada de la replicación y lesión en infecciones de ratones genéticamente susceptibles o resistentes. Estos datos sugieren que, como la fisiología del sitio infección cambia durante el curso de la infección, también lo hacen las restricciones metabólicas en la replicación del parásito. Esta conclusión tiene gran importancia para la interpretación de necesidades metabólicas de virulencia. Por último, estos estudios llaman la atención en protozoos Trypanosomatida a la clave metabólico intermedio 5,10-CH 2-THF, situado en el cruce de metabolismo timidilato, glicina y serina. En particular, las predicciones basadas en el genoma sugieren que la relacionados con parásito Trypanosoma brucei depende totalmente del GCC para síntesis de 5,10-CH 2-THF.
Virus De ARN De Leishmania Controla La Severidad De La Leishmaniasis Mucocutánea
Leishmaniasis mucocutánea es causada por infecciones con parásitos intracelulares del subgénero Leishmania Viannia, incluyendo Leishmania guyanensis. La patología se desarrolla después de la difusión del parásito a los tejidos nasofaríngeos, donde se forman las lesiones metastáticas destructivas con inflamación crónica. Actualmente, los mecanismos implicados en el desarrollo de la lesión son poco conocidos. Aquí mostramos que extenderse por metástasis parásitos tienen una alta carga de Leishmania RNA virus-1 (LRV1) que es reconocida por el receptor Toll-like de anfitrión 3 (TLR3) para inducir quimiocinas y citocinas proinflamatorias. Paradójicamente, estas respuestas inmune mediada por TLR3 prestados ratones más susceptibles a la infección, y los animales desarrollaron un bandolero mayor inflamación y parasitemia. Así, LRV1 en los parásitos extenderse por metástasis había subvertido la inmunorespuesta del anfitrión a Leishmania y había promovido la persistencia del parásito.
Muertos, Pero Leishmania Metabólicamente Activo Como Una Novela Vacuna De Células Enteras De La Leishmaniasis Visceral
Actualmente no hay vacunas efectivas para la leishmaniasis visceral, la segunda infección parasitaria más mortal en el mundo. Aquí se describe una novela de células enteras enfoque de la vacuna con el protozoo Leishmania infantum chagasi promastigotos tratados con el compuesto de psoraleno amotosaleno (S-59) y dosis bajas de radiación ultravioleta. Este tratamiento genera entrecruzamientos covalentes de ADN permanentes, dentro de los parásitos, y los resultados en los organismos de Leishmania denominada muerto, pero metabólicamente activa (KBMA). En este informe, se caracteriza el crecimiento in vitro de las características de ambos KBMA-L. importante y KBMA-L. infantum chagasi (KBMA-LIC). Las concentraciones de S-59 que generan parásitos óptimamente atenuadas fueron identificados. Al igual que en vivo L. infantum chagasi, KBMA-Lic parásitos fueron capaces de entrar en un principio las células del hígado in vivo después de la infección por vía intravenosa. Sin embargo, mientras que L. infantum chagasi en vivo infección conduce a la hepatoesplenomegalia en ratones después de seis meses, KBMA-Lic. fueron indetectables en los órganos de los ratones en este punto del tiempo. In vitro, el Lic. KBMA-mantienen la capacidad de entrar en los macrófagos e inducir la producción de óxido nítrico. Estas características de KBMA-Lic. correlaciona con la capacidad de proteger profilácticamente ratones a través de la vacunación subcutánea a niveles similares a la vacunación con organismos vivos, virulentas. Los esplenocitos de los ratones vacunados con ya sea en vivo o de L. infantum chagasi KBMA-Lic muestran los patrones de citoquinas similar in vitro. Estos resultados sugieren que la tecnología KBMA es una estrategia novedosa vacuna potencialmente segura y eficaz contra el protozoo intracelular L. infantum chagasi. Este enfoque puede representar un nuevo método para células enteras vacunación contra otros patógenos intracelulares complejos.
