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Articles by Travis D. Baughan in JoVE
JoVE Neuroscience
Un simple système de notation composite phénotype pour l'évaluation des modèles murins de l'ataxie cérébelleuse
1Department of Biochemistry, University of Washington, 2Department of Neurology, University of Washington, 3Division of Genetics, Departments of Pediatrics and Cellular and Molecular Medicine, and the Institute for Genomic Medicine, University of California, San Diego - Rady Children’s Hospital
Nous décrivons un protocole pour la quantification rapide et sensible de la gravité de la maladie dans des modèles murins de l'ataxie cérébelleuse. Les mesures comprennent des membres postérieurs en joignant, corniche de test, la démarche et une cyphose. Ce protocole est discriminatoire efficace entre les individus affectés et non affectés, et détecte la progression des personnes touchées au cours du temps.
Other articles by Travis D. Baughan on PubMed
Épitope Fonctionnel Sur B558 Flavocytochrome Neutrophiles Humains
mAb Tn7 a été soulevée contre b(558) flavocytochrome purifié, important dans l'inflammation et de la défense de l'hôte. Tn7 reconnu la sous-unité b(558) de gp91(phox) flavocytochrome par immunoblot et neutrophiles perméabilisées et membranes neutrophiles. La cartographie des épitopes par analyse de phage display a indiqué que Tn7 lie (la région 498)EKDVITGLK(506) de gp91(phox). Dans un essai acellulaire, Tn7 inhibe in vitro d'activation de la NADPH oxydase de manière dose-dépendante et avait des effets marginaux sur la constante de Michaelis de substrat oxydase (K(m)). mAb Tn7 ne fait pas inhiber la translocation de p47(phox), de p67(phox) ou de Rac à la membrane plasmique et lié son épitope sur gp91(phox) indépendamment de translocation du facteur cytosolique. Toutefois, après le montage de la NADPH oxydase complexe, mAb Tn7 lié l'épitope mais n'a pas inhibé la production de superoxyde. En trois dimensions de modélisation du domaine C-terminal de gp91(phox) un modèle de réductase de nitrate de maïs suggère tout près de l'épitope Tn7 pour le site de liaison de NADPH proposé, mais la séparation significative depuis les sites de liaison p47(phox) proposée. Nous concluons que le (498)EKDVITGLK(506) segment se trouve sur la surface cytosolique de gp91(phox) et représente une région importante pour la fonction oxydase, mais pas de substrat ou de liaison de composant cytosolique.
Développement D'un Système Unique Qui Améliore Vecteur Trans-épissage De SMN2 Transcriptions
Modalités d'ARN sont en développement comme un moyen puissant pour réorienter les événements pathogènes d'épissage de pré-ARNm. Améliorer l'efficacité de ces molécules in vivo est essentiel à mesure qu'ils progressent vers les applications cliniques. L'amyotrophie spinale (SMA) est causée par la perte de SMN1. Une copie du gène presque identique appelé SMN2 produit de faibles niveaux de protéine fonctionnelle en raison de l'épissage alternatif. Nous avons rapporté précédemment un épissage trans-ARN (tsRNA) qui re-dirigé SMN2 épissage. Nous allons maintenant montrer que la réduction de la concurrence entre les sites d'épissures endogènes amélioré l'efficacité de trans-épissage. Un système de vecteur unique a été élaboré qui a exprimé le tsRNA SMN et une épissure place blocage antisens (ASO-tsRNA). Le vecteur ASO-tsRNA niveaux significativement plus élevés dans les SMN des fibroblastes primaires de patients SMA, au sein du système nerveux central de souris SMA et a augmenté SMN-dépendants in vitro snRNP assemblage. Ces résultats démontrent que la stratégie ASO-tsRNA donne un aperçu du mécanisme de trans-épissage et un moyen de renforcer de manière significative l'activité trans-épissage in vivo.
La Livraison Des ARN Bifonctionnels Qui Visent Une Repressor Intronique Et Augmenter Les Niveaux SMN Dans Un Modèle Animal De L'amyotrophie Spinale
L'amyotrophie spinale (SMA) est une maladie des neurones moteurs causée par la perte de la survie des neurones moteurs-1 (SMN1). Un gène copie presque identique, SMN2, est présent dans tous les patients SMA, qui produit un faible niveau de protéine fonctionnelle. Bien que la séquence de codage SMN2 a le potentiel pour produire normale, pleine longueur SMN, environ 90% de SMN2 dérivés transcriptions sont épissage alternatif et codent pour une protéine tronquée manque la finale de codage exon (exon 7). SMN2, cependant, est une excellente cible thérapeutique. Auparavant, nous avons développé ARN bifonctionnels d'épissage lié SMN SMN2 l'exon 7 et modulée. Pour optimiser l'efficacité des ARN bifonctionnels, une cible antisens différente était nécessaire. À cette fin, nous avons vérifié l'identité génétique d'un putatifs introniques répresseurs et développé ARN bifonctionnels que l'objectif de cette séquence. Par conséquent, il existe un mécanisme de 2 fois de l'induction SMN: inhibition de la répresseur intronique et le recrutement des protéines SR par l'intermédiaire de la séquence de recrutement de la SR bifonctionnel ARN. Les ARN bifonctionnels effectivement augmenté SMN dans des fibroblastes primaires SMA. Candidats de plomb ont été synthétisés comme 2'-O-méthyle ARN et ont été directement injectés dans le système nerveux central de souris SMA. Simple d'ARN-injections ont pu illicite une induction robuste de la protéine SMN dans le cerveau et tout au long de la colonne vertébrale de souris SMA néonatales. Dans un modèle de grave de SMA, la longévité moyenne a été prolongé suite à la livraison des ARN bifonctionnels. Cette technologie a des implications directes pour le développement d'une thérapie SMA, mais aussi se prête à une multitude de maladies causées par aberrante pré-ARNm épissage.
