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Articles by Travis D. Baughan in JoVE
JoVE Neuroscience
Un semplice composito Sistema di punteggio per la valutazione Fenotipo modelli murini di atassia cerebellare
1Department of Biochemistry, University of Washington, 2Department of Neurology, University of Washington, 3Division of Genetics, Departments of Pediatrics and Cellular and Molecular Medicine, and the Institute for Genomic Medicine, University of California, San Diego - Rady Children’s Hospital
Abbiamo descritto un protocollo per la quantificazione rapida e sensibile della gravità della malattia in modelli murini di atassia cerebellare. Le misure includono dell'arto posteriore stringendo, sporgenza di prova, andatura e cifosi. Questo protocollo discrimina in modo efficace tra individui affetti e non affetti, e rileva la progressione delle persone colpite nel corso del tempo.
Other articles by Travis D. Baughan on PubMed
Epitopo Funzionale Su B558 Flavocytochrome Neutrofili Umani
mAb NL7 è stata sollevata contro b(558) flavocytochrome purificata, importanti per l'infiammazione e la difesa ospite. NL7 riconosciuto la subunità gp91(phox) flavocytochrome b(558) da immunoblot e associati a membrane dei neutrofili e permeabilized neutrofili. Epitope mapping da analisi di phage display indicato che NL7 associa (regione 498)EKDVITGLK(506) di gp91(phox). In un saggio senza cellula, NL7 inibito in vitro attivazione della NADPH ossidasi in modo concentrazione-dipendente e aveva effetti marginali sulla costante di Michaelis substrato ossidasi (K(m)). mAb NL7 non inibire la traslocazione di p47(phox), p67(phox) o Rac per la membrana plasmatica e associato suo epitopo su gp91(phox) indipendentemente dalla traslocazione Fattore citosolico. Tuttavia, dopo il montaggio del complesso NADPH ossidasi, mAb NL7 associato l'epitopo ma non inibiscono la generazione del superossido. Tridimensionale modellazione del dominio C-terminale del gp91(phox) su un modello di mais nitrato reduttasi nelle immediate vicinanze dell'epitopo NL7 suggerisce il sito dell'associazione NADPH proposto, ma significativa separazione dai siti di legame p47(phox) proposto. Concludiamo che il (498)EKDVITGLK(506) segmento risiede sulla superficie citosolica della gp91(phox) e rappresenta una regione importante per la funzione ossidasi, ma non il substrato o associazione componente citosolico.
Sviluppo Di Un Sistema Singolo Vettore Che Migliora La Trans-splicing Delle Trascrizioni SMN2
Modalità di RNA sono in via di sviluppo come un potente mezzo per re-indirizzare gli eventi di splicing pre-mRNA patogeni. Migliorare l'efficienza di queste molecole in vivo è fondamentale come si muovono verso le applicazioni cliniche. Atrofia muscolare spinale (SMA) è causata dalla perdita di SMN1. Un gene copia quasi identica denominato SMN2 produce bassi livelli di proteina funzionale a causa di splicing alternativo. Abbiamo segnalato in precedenza un RNA trans-splicing (tsRNA) che re-indirizzato SMN2 splicing. Ora mostriamo che riducendo la concorrenza tra i siti di impiombature endogeno migliorato l'efficienza del trans-splicing. Un sistema unico vettore è stato sviluppato che ha espresso il tsRNA SMN e un antisenso blocco splice-sito (ASO-tsRNA). Il vettore di ASO-tsRNA significativamente elevati livelli di SMN in primari fibroblasti di pazienti SMA, all'interno del sistema nervoso centrale dei topi SMA e aumentato SMN-dipendente in vitro snRNP assieme. Questi risultati dimostrano che la strategia di ASO-tsRNA fornisce la comprensione del meccanismo trans-splicing e un mezzo per migliorare significativamente la trans-splicing attività in vivo.
Consegna Della RNAs Bifunzionale Che Target Un Repressore Intronic E Aumentare I Livelli Di SMN in Un Modello Animale Di Atrofia Muscolare Spinale
Atrofia muscolare spinale (SMA) è una malattia del motoneurone causata dalla perdita di survival motor neuron-1 (SMN1). Un gene copia quasi identica, SMN2, è presente in tutti i pazienti SMA, che produce bassi livelli di proteina funzionale. Sebbene la sequenza codifica SMN2 ha il potenziale per produrre normale, full-length SMN, circa il 90% delle trascrizioni SMN2-derivati sono splicing e codificare una proteina tronca manca l'esone codifica finale (esone 7). SMN2, tuttavia, è un eccellente obiettivo terapeutico. In precedenza, abbiamo sviluppato RNAs bifunzionale che associato esone SMN 7 e modulata SMN2 splicing. Per ottimizzare l'efficienza del RNAs bifunzionale, era necessaria una diversa destinazione antisenso. A tal fine, abbiamo verificata l'identità di un repressore intronic putativo e geneticamente sviluppato RNAs bifunzionale che questa sequenza di destinazione. Di conseguenza, c'è un meccanismo di induzione di SMN 2 volte: inibizione del repressor intronic e reclutamento delle proteine SR tramite la sequenza di reclutamento SR del RNA bifunzionale. Il RNAs bifunzionale aumentato efficacemente SMN in fibroblasti umani primari di SMA. I candidati di piombo sono stati sintetizzati come 2'--O metil RNAs e sono stati iniettati direttamente nel sistema nervoso centrale dei topi SMA. Singolo-RNA iniezioni erano in grado di illecito una robusta induzione della proteina SMN nel cervello e in tutta la colonna spinale di topi SMA neonatale. In un modello grave di SMA, durata media della vita è stata estesa la consegna del RNAs bifunzionale. Questa tecnologia ha implicazioni dirette per lo sviluppo di una terapia di SMA, ma si presta anche a una moltitudine di malattie causate da splicing pre-mRNA aberrante.
