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Articles by Travis D. Baughan in JoVE
JoVE Neuroscience
A simple fenotipo compuesto el sistema de puntaje para la evaluación de modelos de ratón de Ataxia cerebelosa
1Department of Biochemistry, University of Washington, 2Department of Neurology, University of Washington, 3Division of Genetics, Departments of Pediatrics and Cellular and Molecular Medicine, and the Institute for Genomic Medicine, University of California, San Diego - Rady Children’s Hospital
Se describe un protocolo para la cuantificación rápida y sensible de la gravedad de la enfermedad en modelos de ratón de la ataxia cerebelosa. Las medidas incluyen las extremidades posteriores juntando, la cornisa de la prueba, la marcha y la cifosis. Este protocolo efectivamente discrimina entre los individuos afectados y no afectados, y detecta la progresión de las personas afectadas con el tiempo.
Other articles by Travis D. Baughan on PubMed
Epítopo Funcional En B558 De Flavocytochrome De Neutrófilos Humanos
mAb NL7 fue levantado contra b(558) flavocytochrome purificada, importante en la inflamación y la defensa del huésped. NL7 reconoce la subunidad de b(558) de flavocytochrome de gp91(phox) por el immunoblot y obligados a permeabilized neutrófilos y membranas de neutrófilos. Mapeo epitopo por análisis de phage display indica que NL7 se une la (región 498)EKDVITGLK(506) de gp91(phox). En un ensayo acelulares, NL7 inhibe la activación in vitro de la NADPH oxidasa de manera dependiente de la concentración y tenía efectos marginales en la constante de Michaelis de sustrato de oxidasa (K(m)). mAb NL7 no inhiben la translocación de Rac, p67(phox) o p47(phox) a la membrana plasmática y consolidado su epitope a gp91(phox) independientemente de la translocación del factor citosólico. Sin embargo, después del montaje de la NADPH oxidasa complejo, mAb NL7 había obligado el epitopo pero no inhiben la generación de superóxido. Tridimensional de modelado del dominio c-terminal de gp91(phox) en una plantilla de maíz nitrato reductasa sugiere cerca del epitopo de NL7 para el sitio de unión de NADPH propuesto, pero separación importante de los sitios de unión de propuestas p47(phox). Concluimos que el (segmento 498)EKDVITGLK(506) reside en la superficie citosólica de gp91(phox) y representa una importante función de oxidasa, pero no sustrato o componente citosólico de la región.
Desarrollo De Un Sistema único Vector Que Mejora La Trans-empalme De SMN2 Transcripciones
Modalidades de ARN se están desarrollando como un medio poderoso para re-dirigir los eventos de splicing de pre-mRNA de patógenos. Mejorar la eficiencia de estas moléculas in vivo es fundamental, ya que se mueven hacia las aplicaciones clínicas. La atrofia muscular espinal (SMA) es causada por la pérdida de SMN1. Un gen copia casi idéntica llamada SMN2 produce bajos niveles de proteína funcional, debido a splicing alternativo. Hemos informado anteriormente de un empalme de trans-ARN (tsRNA) que re-dirigido SMN2 empalme. Ahora nos muestran que la reducción de la competencia entre los sitios de empalmes endógenos aumentó la eficiencia de trans-empalme. Un sistema único vector que se ha desarrollado expresó la tsRNA SMN y un sitio de empalme bloqueo antisentido (ASO-tsRNA). El vector de ASO-tsRNA significativamente elevados los niveles de SMN en la enseñanza primaria fibroblastos de pacientes con AME, en el sistema nervioso central de ratones SMA y el aumento de SMN dependiente de la in vitro snRNP asamblea. Estos resultados demuestran que la estrategia de ASO-tsRNA proporciona la penetración en el mecanismo de trans-empalme y un medio de mejorar significativamente trans-empalme actividad in vivo.
La Entrega De ARN Bifuncionales Que Un Objetivo Represor Intronic Y Aumentar Los Niveles De SMN En Un Modelo Animal De La Atrofia Muscular Espinal
La atrofia muscular espinal (AME) es una enfermedad de la neurona motora causada por la pérdida de la supervivencia de la neurona motora-1 (SMN1). Un gen copia casi idéntica, SMN2, está presente en todos los pacientes con SMA, lo que produce bajos niveles de proteína funcional. Aunque la secuencia de codificación de SMN2 tiene el potencial para producir lo normal, de cuerpo entero SMN, aproximadamente el 90% de SMN2 derivados de las transcripciones son empalmados alternativamente y codifican una proteína truncada que carece de la final del exón codificante (exón 7). SMN2, sin embargo, es un objetivo terapéutico excelente. Anteriormente, hemos desarrollado ARN bifuncionales que ataban SMN SMN2 empalme del exón 7 y modulada. Para optimizar la eficiencia de los RNAs bifuncionales, un objetivo diferente antisentido se requiere. Para ello, se verificó genéticamente la identidad de un supuesto ARN intrónicas bifuncionales represor y desarrollados que se dirigen a esta secuencia. Por consiguiente, existe un mecanismo de 2-pliegue de inducción SMN: inhibición del represor intrónica y el reclutamiento de proteínas SR a través de la secuencia de contratación de la SR bifuncional ARN. Los ARNs bifuncionales efectivamente aumentó SMN en los fibroblastos humanos primarios SMA. Candidatos de plomo se sintetizó como 2'-O-metil ARN y se inyectaron directamente en el sistema nervioso central de ratones SMA. Single-ARN inyecciones fueron capaces de inducción ilícita un sólido de proteína SMN en el cerebro y en toda la columna vertebral de ratones SMA neonatales. En un modelo de grave de SMA, la media de esperanza de vida se extendió después de la entrega de ARN bifuncionales. Esta tecnología tiene implicaciones directas para el desarrollo de una terapia de SMA, pero también se presta a una multitud de enfermedades causadas por el aberrante pre-mRNA de empalme.
