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Articles by Wah Chin Boon in JoVE
JoVE Bioengineering
增加从单细胞的数量标准实验室逆转录反应的mRNA的cDNA产量，使用声Microstreaming
1Florey Neuroscience Institutes and Centre for Neuroscience, University of Melbourne, 2Fluid Dynamics Group, CSIRO Materials Science and Engineering, 3Swinburne University of Technology, Faculty of Engineering and Industrial Sciences
我们描述了一个从单细胞的mRNA数量增加在其他标准的实验室逆转录反应的cDNA产量的新方法。求新驻留在一个微混合器的使用，它采用的声学microstreaming现象，微升尺度混合流体比摇晃，震荡或trituration更有效。
Other articles by Wah Chin Boon on PubMed
芳香化酶 — — 简要概述。
有雄激素和雌激素有没有直接参与生殖过程的一般代谢角色日益认识。这些包括男女对血管功能、 脂肪和碳水化合物的代谢，以及骨骼矿化和骨骺闭合的操作。绝经后的妇女，男子，如雌激素不再是纯粹的一个内分泌因素但相反性腺外站点总数在生产和旁分泌和 intracrine 的时装在这些站点本地行为。这些网站包括乳腺癌、 骨、 血管、 大脑。在这些站点内芳香化酶操作可以生成高雌二醇水平的本地而不会显著影响循环水平。循环 C19 类固醇激素前体是性腺外雌激素合成的重要基质。这些雄激素前体的水平随着年龄的妇女，可能从中期至后期生育年龄明显下降。这可能是为什么妇女处于风险增加骨矿丢失和骨折，和可能的认知功能，与男性相比下降的根本原因。这些不同的站点中的芳香化酶表达是受不同组群的转录因子的组织特异性助剂的控制之下。因此原则上，应可能制定选择性芳香化酶调制器 (SAMs) 阻止芳香化酶表达，例如，在乳腺癌，但允许损害的雌激素合成其他骨组织中。
电压门控的食欲 A 补充 Ca2 + 电流和协同与生长激素释放激素的主要养殖绵羊 Somatotropes 增加生长激素 （GH） 分泌。
食欲的激素分泌的调控中发挥重要作用的最近发现神经肽和其受体有最近表明垂体。电压门控 Ca2 + 电流及生长激素释放的主要养殖绵羊 somatotropes 对食欲 A 的影响进行了审查。逆转录-聚合酶链反应在绵羊 somatotropes，从哪个 Ca2 + 电流也是 L、 T 和 N 电流作为孤立表现食欲素-1 受体的表达。食欲 A 的应用 (100 nM） 显著地及可逆增加只有 L 当前和食欲 A 合用和生长激素释放激素 (10 nM） 表明添加剂的效果，这一潮流，但不影响食欲 A 观察到 T 或 N 电流。此外，L 当前诱发食欲 A 增加完全废除了使用 calphostin C 蛋白激酶 C (PKC) 活性的抑制作用 (100 nM），phorbal 12,13 dibutyrate 预处理 (0.5 微 M) 16 h 或特定 PKC 抑制肽 PKC(19-36) （1 mM）。然而，在当前的食欲 A L 增加持续当单元格被 preincubated 与特定蛋白激酶阻断剂 H89 (1 微 M) 或特定的细胞内 Ca2 + 存储消耗试剂 thapsigargin (1 微 M)。最后，食欲 A 独自并未显著增加生长激素释放，但食欲 A 合用和生长激素释放激素表明对 GH 分泌的协同作用体外。因此，我们的研究结果建议食欲 A 可能发挥重要调节作用的 L 型 Ca2 + 电流和 PKC 介导的信号转导通路在绵羊 somatotropes 通过增强生长激素释放激素刺激生长激素分泌。
脂肪表型的芳香化酶缺陷小鼠的细胞和分子的表征。
芳香化酶挖空 （· 阿尔科 ·） 鼠标中的雌激素缺乏导致的肥胖发展由早在 3 个月的年龄，特点是的性腺重量显著增加和下腹脂肪垫。人类与自然的芳香化酶基因的突变还制定代谢综合征。本研究报告在细胞和分子的参数从 10 岁 wk 野生型 (WT) 及 17beta-雌二醇或安慰剂，以确定增加的基础中腹部肥胖治疗 · 阿尔科 · 雌性小鼠性腺脂肪组织中进行了调查。体视学检查发现脂肪细胞分离 · 阿尔科 · 小鼠被更大和更丰富比脂肪细胞分离 WT 小鼠。经处理后与雌激素，这些脂肪细胞的数量是大大减少，而脂肪细胞的数量减少宣判少得多。使用实时荧光定量 PCR 的转录分析显示水平的成绩单编码瘦素和脂蛋白脂肪酶脂肪细胞体积随之变化而过氧化物酶体增殖物激活受体 γ 水平遵循一种模式更接近，脂肪细胞数量。变化不大有人成绩单因素的水平参与 de novo 脂肪酸合成、 beta-oxidation 和脂肪细胞，建议从流通脂类吸收的变化主要机制的雌激素调节这些小鼠脂质代谢。
芳香化酶基因剔除小鼠呈现对胆固醇稳态性干扰。
芳香化酶基因 (· 阿尔科 ·） 剔除小鼠不能合成内源性雌激素 Cyp19 基因的中断。以前，我们已表明 · 阿尔科 · 小鼠目前年龄逐渐肥胖与脂肪肝，和由年龄 1 年两个男性和女性 · 阿尔科 · 小鼠开发高胆固醇血症。在这本研究报告 10-12 wk 旧 · 阿尔科 · 小鼠被挑战 90 d 与高胆固醇饮食。我们的结果显示在肝脏中的胆固醇稳态雌激素缺乏性回应。· 阿尔科 · 女性提出与升高的血清胆固醇 ；相反，· 阿尔科 · 男性升高，肝胆固醇水平。在响应膳食胆固醇，3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-coenzyme 还原酶谈话内容水平大大降低了女性，而男性显示较小的更改。既不低密度脂蛋白也固醇调节元件结合蛋白表达水平已大大改变饮食或基因型。Cyp7a，它将编码胆固醇 7 α-羟化酶，表达 · 阿尔科 · 女性与野生型女性相比大大减少，并增加了胆固醇喂养。Cyp7a 表达式是大大提高野生型男性对高胆固醇饮食，虽然没有差异被认为控制饮食的基因型之间。三磷酸腺苷结合盒 G8 转运蛋白与 ATP 结合盒式 G5 不显示受雌激素。酰辅酶 A:cholesterol 酰基转移酶 2 的表达显示性的反应，其中雌激素似乎在女性，但不是男性的刺激作用。这项研究揭示了鼠标肝胆固醇稳态和调节胆固醇吸收、 生物合成和分解代谢的女性，但不是在男性中的雌激素的作用性差异。
雌激素缺乏导致的内侧视前区和弓状核神经元的雄性小鼠多巴胺能神经元凋亡。
芳香化酶基因 (· 阿尔科 ·） 剔除小鼠不能合成雌激素。积极的半胱氨酸蛋白酶-3 和酪氨酸羟化酶 (TH) 免疫组化研究揭示的内侧视前区 (MPO) 和 1 岁的下丘脑弓状核 (Arc) 多巴胺能神经元凋亡的 (1yo) 男性 · 阿尔科 · 小鼠虽然没有积极的半胱氨酸蛋白酶-3 在野生型 (WT) 中检测到。此外，MPO 和骶管弧 TH 阳性细胞的数量大幅度减少在 1yo · 阿尔科 · 相比 wt.核糖核酸酶保护检测支持 1yo · 阿尔科 · 下丘脑，揭示的 pro 凋亡基因调控细胞凋亡的存在： FASL、 FADD、 和半胱氨酸蛋白酶-8。与此同时，1yo · 阿尔科 · 小鼠下丘脑中促凋亡基因 bcl-2 相关抗凋亡基因的比例已大幅下调。以前，我们曾报道女性 · 阿尔科 · 小鼠下丘脑中观察到没有这种变化。因此，我们提供了直接证据表明雌激素是需要保持生存和功能完整性的 MPO 和弧的男性，但没有女性的小鼠多巴胺能神经元。
脂肪芳香化酶基因表达是老年妇女更多地和不受绝经后雌激素疗法。
虽然自然绝经的卵巢雌激素生产损失与关联，则此生命阶段后跟与雌激素有关的癌症，即乳腺癌和子宫内膜癌显著增加。这些组织，以及如脂肪、 骨骼、 血管和脑是绝经后雌激素生产的重要地点。循环 C19 类固醇激素前体是基本底物性腺外雌激素合成 ；然而，这些雄激素前体水平显著下降随着年龄的增长。这意味着要增加在性腺外组织产生雌激素与年龄的能力。
与年龄和绝经过渡期所涉及的脂肪代谢因素的差异表达。
在更年期激素环境的变化与程序关联增加总肥胖和脂肪的分布，更多 android 模式与后者与代谢综合征的风险增加有关。这项研究的目的是探索与绝经过渡期相关机构组成的变化可能作出贡献的潜在机制。
海马 NMDA 受体亚单位表达和学习的雌激素不足的雌性小鼠的 Watermaze。
芳香化酶挖空 （· 阿尔科 ·） 鼠标是雌激素不足。我们使用反向转录和实时聚合酶链反应，表明 N-甲基-d-天冬氨酸 (NMDA) 受体亚型 NR2B 谈话内容水平明显高于野生型 (WT) littermates 相比女性 · 阿尔科 · 小鼠海马。表达水平的 NR1、 NR2A，但不是 NR2C，也往往要高于 · 阿尔科 · 小鼠。在空间记忆的莫里斯 watermaze 测试，这两种基因型中不可见的平台定位在 5 天的培训期间的滞后时间显示平等的重大改进。这些研究结果表明雌激素合成的选择性损失是关联海马 NMDA 受体亚单位表达但空间学习能力变化不大的变化。
小鼠和男子： 不断变化表型的芳香化酶缺乏症。
我们正在迅速地成为了解雌激素在维护男性健康的几乎所有方面的重要性。为了使以步之遥合成的雌激素，负责从雄激素，芳香化酶，其合成的酶必须是功能。芳香化酶的人是无法正常工作的所有已知七名男子在 V 或九 CYP19 基因，它将编码芳香化酶的基因突变。这些人集体，据报有不可探测雌激素 ；正常到高水平的睾丸激素和促性腺激素;高身材与延迟骨骼成熟及骨骺闭合 ；骨质疏松症 ；受损的血脂及胰岛素代谢 ；和生殖功能障碍。芳香化酶基因剔除小鼠呈现与表型，是在很多方面类似，并提供了一个宝贵的工具，用来检查和操作的雌激素行动。通过研究自然发生的芳香化酶缺陷人类，以及研究报告的芳香化酶基因敲除小鼠，我们正在扩大我们对雌激素对男性生理方面具有重要作用的理解。
雌激素缺乏雄性小鼠制定强迫行为。
芳香化酶将转换为雌激素的雄激素。因此，芳香化酶挖空 （· 阿尔科 ·） 鼠标是雌激素不足。我们调查了这些动物的冲动行为和儿茶酚-O-甲基转移酶 (拒交) 额叶皮层、 下丘脑和肝脏中的蛋白质水平。
认识到罕见疾病： 芳香化酶缺乏症。
芳香化酶缺乏症是罕见的人类。受影响的个人不能合成内源性雌激素。芳香化酶是酶催化转化为雌激素，雄激素和雌激素合成芳香化酶无法正常工作，这是灭活的突变的如果不能发生。如果胎儿缺乏芳香化酶活性，产生的胎儿肾上腺脱氢表雄酮硫酸盐不能通过胎盘，因此静脉被转换为睾酮和胎儿和母亲的男性化的结果转换雌激素。男性化清单作为假两性畸形患儿女，多毛症及痤疮的母亲 ；交货后解决产妇的指标。到目前为止，只有七名男子及七名女性与芳香化酶缺乏症已被报告。受影响的女性通常是出生时由于假两性畸形诊断的。卵巢囊肿和延迟的骨成熟可以发生在儿童和青少年中这些女孩青春期与原发性闭经、 乳房发育、 男性化和 hypergonadotrophic 性腺未出席。受影响的男性，另一方面，没有明显的缺陷，在出生时患很多年以后的生活，所以呈现临床症状，其中包括高身材、 延迟骨骼成熟、 延迟骨骺闭合、 骨痛、 eunuchoid 身体比例和过度肥胖。雌激素替代疗法反转的男性和女性患者的症状。
Fas/FasL 介导细胞凋亡弓状核及内侧视前区 · 阿尔科 · 雄性小鼠的选择性雌激素受体和雌激素受体 β 激动剂治疗，分别得到改善。
(· 阿尔科 ·) 芳香化酶基因剔除小鼠是雌激素不足。我们以前的分析揭示的弓状核神经元 (弧) 和内侧视前区 (MPO) 的 1 岁男性 · 阿尔科 · 小鼠多巴胺能神经元凋亡。我们设法确定哪些雌激素受体 (ER) 参与抗凋亡作用的雌激素。· 阿尔科 · (9.5-月-老) 雄性小鼠治疗 16alpha-LE(2) (ERalpha-特定激动剂) 或 8beta-VE(2) (ERbeta-特定激动剂)。每天注射 (6 周) 与 16alpha-LE(2) 阻止多巴胺能细胞死亡中的 8beta-VE(2) 治疗无显著影响的男性 · 阿尔科 · 小鼠，圆弧。相比之下，8beta-VE(2) 阻止多巴胺能细胞死亡的 MPO，虽然 16alpha-LE(2) 并没有明显影响。伴随跌幅 Fas 和 FasL 蛋白水平弧和 MPO，16alpha-LE(2) 和 8beta-VE(2) 治疗后分别有发现。我们的研究结果表明抗凋亡作用的雌激素雌激素受体介导的，具体子参与调控细胞凋亡的 ER 类型取决于特定的脑核问题。
雌激素缺乏导致的成年女性芳香化酶基因敲除小鼠额叶皮层的细胞凋亡。
芳香化酶挖空 （· 阿尔科 ·） 鼠标完全是雌激素不足。我们以前在 1 岁雄性 · 阿尔科 · 小鼠下丘脑中检测到凋亡。这项研究表明，12 周龄女性 · 阿尔科 · 小鼠额叶皮层显示自发性凋亡的锥体神经元，而野生型 (WT) littermates 显示没有细胞凋亡的迹象。与此同时，bcl-2 相关的抗凋亡基因的下调而 pro 凋亡基因 TRADD 是女性 · 阿尔科 · 额叶皮层的上调。此表型可以由 17beta-雌二醇 3 周更换救出。12-15 个月此外，加剧了细胞凋亡表型-旧女性 · 阿尔科 · 小鼠，有减少神经元的额叶皮层和 WT 相比低脑重量的 30%。这些数据表明雌激素是女性甚至病理条件或外部攻击的缺席的皮层神经元的生存所必需的。我们观察也表明对雌激素缺乏性敏感性的神经元。
产后发展牵连到青春期发病雌二醇 Kisspeptin 积极的反馈机制。
由 kisspeptin GnRH 神经元的监管问题是哺乳动物正常青春期发病的关键。在鼠类 kisspeptin 神经元的分布 GnRH 神经元被认为 （RP3V） 第三脑室的侧脑室周围地区居住。使用我们显示该 kisspeptin 肽的表达中的雌性小鼠 RP3V kisspeptin 免疫细胞化学周围产后 d 15 (P15) 开始，并迅速上升，以实现类似于成人的水平由 P30，青春期发病时间。P15 在女性 pup 卵巢导致的 70-90%减少 (P < 0.01） 内 RP3V P30 或 P60 小鼠 kisspeptin 肽表达式中。17-Β-雌二醇 (E2) 从 P15 30 或 P22 30 P15 去势小鼠更换导致 RP3V kisspeptin 肽表达完整恢复 (P < 0.01）。Kisspeptin 神经纤维在下丘脑，包括弓状核，整个遵循同一模式，依赖于雌激素的表达式。若要在 RP3V 测试 kisspeptin 表达的雌激素的绝对必要性，审查了芳香化酶基因敲除小鼠。Kisspeptin 阳性细胞时，发现弓状核，但有 kisspeptin 肽 RP3V 神经元的芳香化酶敲除成年女性完全没有。这些结果表明 E2 kisspeptin 肽 RP3V 神经元内的青春期前的发展至关重要，并建议 E2 kisspeptin 积极反馈机制存在在青春期之前。这意味着 RP3V kisspeptin 神经元在青春期前的时期都依赖 E2 的放大器的 GnRH 神经元活动。
雌激素、 大脑和行为： 敲除小鼠模型的经验教训。
动物模型进行有效复制问题，如激素缺陷、 神经系统疾病和脑损伤、 中风当然取得了巨大的贡献，有助于理解神经保护作用的雌激素在大脑中的使用。研究使用 17beta-雌二醇更换所遵循的睾丸程序有效地表明雌激素在认知的性能和内存性能任务提供了积极的作用。与这种研究的一个主要问题是，（雌激素合成的酶) 局部脑芳香化酶可能仍会转换本地生产的雄激素与雌激素。因此，这种"雌激素缺乏"模式不可能完全无效的雌激素。代芳香化酶挖空 （· 阿尔科 ·） 及雌激素受体挖空 （叶尔科) 小鼠模型已使研究人员能够在大脑中完成雌激素缺乏的影响的特点，因此行为。这次审查的目的是进行比较和对比这些各种鼠标模型的结果。
替代 5' 非翻译第一次用的鼠标 Cyp19A1 (芳香化酶) 基因。
人类芳香化酶基因 (CYP19A1) 有 11 个组织特异性未翻译的第一次用，而只有三述 Cyp19A1 鼠标即脑、 卵巢和睾丸特定用 1。本研究旨在澄清完整小鼠 Cyp19A1 基因的结构。我们检测到鼠标骨、 主动脉、 下丘脑、 脂肪、 生殖腺和胎盘，但不是产程潜伏期乳腺脂肪垫芳香化酶誊本。针对人类的 CYP19A1 BestFit 算法分析确定了十个假定第一次用上游的鼠标 Cyp19A1。基于这些假定序列，我们得以逆转录-聚合酶链反应的特异性引物设计和小鼠脂肪和生殖腺，用一.4 和一.3 的存在首次检测到。这些都是鼠标的小说 5' 异常 Cyp19A1。我们使用逆转录-聚合酶链反应和 5' 种族，证实外显子 1f 下丘脑和近端外显子 P2 的卵巢中的表达。1 睾丸特定的外显子上游比以前报道开始进一步 217bp。假定用 2a、 一.5、 一.7、 一.6 一.2 在小鼠组织中检测不到。因此，我们表明该鼠标 Cyp19A1 包含更多的组织特异性第一次用比以前想象和对人类 CYP19A1 显示一个类似的基因组组织。
行为表型的 APPC100。V717F 转基因小鼠过量突变 Abeta 轴承片段是减少 NMDA 受体密度与相关联。
这项研究的目的是描述 APPC100。V717F (TgC100.V717F) 小鼠，而淀粉样前体蛋白突变 C100 片段。老鼠被比作 TgC100 野生型小鼠 （TgC100.WT） 和非转基因控制在 4-9 和 16-22 个月的年龄。TgC100.V717F 小鼠表明行为多动，特别是在年轻的年龄，如图所示的高架加迷宫臂条目和 Y 迷宫臂条目，人数增加增强基线自发活动在打开字段，并加强安非他明致 hyperlocomotion。此多动是较不明显在 TgC100.WT，只在较年轻的 Y 迷宫臂条目和基线在打开字段中的自发活动数显示非转基因的控件的显著差异。此外，TgC100.V717F 小鼠，但不是 TgC100.WT，表现出认知功能障碍，按 Y 迷宫中的减少自发性变更和显著减少的保留被动回避测试中所示。在年龄较大，TgC100.V717F 小鼠显示增强的惊愕和增加在强迫的游泳测试中的静止时间。TgC100.V717F 小鼠，但不是 TgC100.WT，在改变行为被伴随海马 NMDA 受体亚基类型 1 的表达式中的大量减少和 2A。同时，我们发现轴突中断和细胞凋亡 TgC100.V717F 小鼠海马。最后，这些数据表明突变 C100 片段的生化效应和认知与非认知行为。这些转基因小鼠可能为与早期阿尔茨海默病的关联中的精神病患者功能的模型。
雌激素和酶芳香化酶的多个角色。
芳香化酶是酶催化合成雌激素的最后一步。它表示在许多组织如性腺、 脑和脂肪组织中。水平的规管和芳香化酶的活动确定了对组织的内分泌、 自分泌和旁分泌作用的雌激素水平。雌激素在正文中，调整繁殖、 代谢、 行为的许多作用。在大脑中，细胞存活和神经元的活动受雌激素和因此芳香化酶。
安非他明对女性芳香化酶基因敲除 （· 阿尔科 ·） 小鼠相比 Tn 野毒控件 C Fos 表达的差别影响。
雌激素可能参与的互动与中枢多巴胺活动的精神病。芳香化酶基因敲除小鼠不能产生雌激素和已显示出显示改变行为的反应和影响的多巴胺释放器，安非他明。这项研究调查了对苯丙胺诱导 c-fos 表达大脑中的女性芳香化酶敲除和 tn 野毒小鼠性腺状态的影响。六组小鼠的腹腔治疗生理盐水或 5 毫克/千克安非他明。扣带皮层、 尾壳和伏隔核 Fos 免疫反应进行了评估。芳香化酶基因敲除小鼠显示显著减少苯丙胺诱导 Fos 免疫与 tn 野毒小鼠相比。不过，在芳香化酶基因敲除小鼠后卵巢切除，从而减少此效果在 tn 野毒控件中的恢复是安非他明的反应。雌激素补充扭转 tn 野毒小鼠卵巢切除术的疗效，但芳香化酶基因敲除小鼠中并没有额外的明显影响。这些结果表明在芳香化酶基因敲除小鼠发生改变机制所涉及的苯丙胺诱导 c-fos 表达和主要的激素参与这种效果不是雌激素，但可能会从卵巢，如雄激素释放的另一个因素。这些结果对苯丙胺诱导 c-fos 表达在此鼠标模型中的雌激素缺乏新洞察性腺激素的影响。这些结果可能是重要的是我们在精神病类固醇激素的作用的理解。
芳香化酶及抑制作用在行为、 强迫症和帕金森综合征。
雌激素能正常行为规范和调节强迫症和神经系统疾病如帕金森综合征等病理行为有牵连。因此，通过调节雌激素合成的酶，芳香化酶，表达我们可能确定哪些行为受雌激素。芳香化酶抑制基因或药理学据报诱使性行为障碍、 强迫症行为和神经变性易感性。
声学 Microstreaming 提高组成单个单元格数量的 RNA 逆转录反应的效率。
相关基因表达与行为在单个单元格级别是困难的很大程度上是因为少量的可用 mRNA （< 1 pg) 会降低之前它可以反向转录成一个更稳定的 cDNA 副本。这项研究测试微升尺度在搅液，方法新型声学 microstreaming ("微观混合") 的能力，以改善 cDNA 国债收益率从组成单个单元格数量的 RNA 逆转录 (RT) 反应。微观混合大大下降 qPCR 周期来检测基因 mRNA 次黄嘌呤磷酸核糖转移酶 （Hprt） 和核受体相关 1 (相关因子 1) 由 ~ 9 和 ~ 15 周期，分别代表的数。有相当于 10 到 100 倍多个基因中的微观混合没有执行 RT 的改善。微观混合启用可靠的否则为无法探测、 低丰度谈话记录，相关因子 1 的检测。当 RNA 浓度很低，这是最有效 （0.1-1 pg / µ L、"单个单元格相当于"） 却较少影响 RNA 含量较高 (~ 1 吴 / µ L)。支持这一观点成像显示该微观混合的实验改进混合的低浓度 µ (20 pg/L） 的荧光标记 RNA 但不是高的浓度 （1 吴 / µ L)。我们得出的结论，微观混合大大增加 RT 产量索取单个单元格数量的 RNA。
多西环素诱导、 特定组织的芳香化酶表达转基因小鼠。
芳香化酶将雄激素转换为雌激素和它表示在生殖腺和非生殖组织 (如脑和脂肪组织)。由于循环中男性雌激素水平低，我们推测本地雌激素生产是重要的调节生理功能 (如代谢） 和病理发展 （例如乳腺癌和前列腺癌） 的旁分泌和/或 intracrine 的方式行事。我们生成组织特异性多西环素诱导芳香化酶转基因小鼠来测试这项假设。转基因构件 (pTetOAROM) 包括全长人类芳香化酶基因 （hAROM） 和双向四环素敏感剂 （pTetO），是由 transactivators （rtTA 或 tTA） 和多西环素监管控制下的荧光素酶基因。我们稳定使用 MBA-MB-231tet 细胞的体外研究表示 rtTA，表明多西环素治疗 17-fold 诱导转基因表达的 hAROM 誊本 (P = 0.01），芳香化酶活性相差，（P = 0.0008) 和荧光素酶活性的 9.6-fold (P = 流量范围为 0.0006）。原核注射转基因生成四个 pTetOAROM 创始人小鼠。男性的创始人是女性乳腺特异 rtTA 鼠标 （MMTVrtTA） 生产 MMTVrtTA pTetOAROM 双转基因小鼠繁殖的。后经饮水多西环素治疗，逆转录-聚合酶链反应，特别是在乳腺、 涎腺和双 stransgenic 小鼠精囊检测人类芳香化酶表达。荧光素酶表达及活性是由体内生物发光成像、 体外荧光素酶和逆转录-聚合酶链反应检测在这些组织中。总之，我们生成一个表示在时间和空间的方式，这将是一个有用的模式，研究本地雌激素生产的生理重要性人类芳香化酶转基因的转基因小鼠模型。
选择性雌激素受体 α 激动剂改善男性芳香化酶敲除小鼠的肝脂肪。
男性芳香化酶基因敲除小鼠 （· 阿尔科 · ； 雌激素缺乏模型） 呈现是可逆 17 β-雌二醇更换后的特定于男性的脂肪肝。这项研究的目的是澄清的雌激素受体 (ER) 子类型，ERα 或 ERβ，参与的肝脏甘油三酯 (TG) 稳态调节。九个月大男 · 阿尔科 · 小鼠治疗车，ERα 或 ERβ 特定受体激动剂通过 s.c.注射，每日为 6 周。ERα 激动剂治疗的男性 · 阿尔科 · 小鼠已正常肝脏组织学和 TG 内容相比车辆对待 · 阿尔科 · ；大网膜 （性腺） 和下文肾 （内脏） 脂肪垫重量被规范化为那些车辆对待野生型 （WT）。相比之下，ERβ 激动剂治疗并没有导致在同样的这些 · 阿尔科 · 表型的逆转。在车辆 · 阿尔科 · 小鼠，肝谈话内容表达的脂肪酸合成酶 (Fasn) 和硬脂酰辅酶 A 去饱和酶 1 (de novo FA 合成中的关键酶) 被大大提升相比车辆对待 WT，但只有 Fasn 表达下调至 WT 水平 ERα 激动剂治疗后。没有重大变化中肉毒碱棕榈转移酶 1 的谈话内容水平 （所需的 β-氧化线粒体 FA 残留转入） 和甾醇规管元素绑定因素 1 c (de novo FA 合成上游调节器）。我们也证实了逆转录-聚合酶链反应在小鼠肝脏中表示只有 ERα。跨所有治疗组在肝的雄激素受体转录水平有无变化。我们的数据表明雌激素行动通过 ERα 来规管 · 阿尔科 · 肝脏 TG 稳态。因为肝脏、 脂肪组织和弓状核表示主要是 ERα，雌激素可调节肝功能通过周围及中枢神经通路。
松弛素和去势雄性小鼠保护免受，但睾酮加剧，与年龄有关的心脏和肾脏纤维，而雌激素的器官大小的一个独立的决定因素。
这项研究已确定对年龄相关心脏和肾脏病理基因敲除男性松弛素 (RlnKO) 和年龄匹配的野生型 (RlnWT) 小鼠及老年男性芳香化酶基因 (· 阿尔科 ·) 敲除小鼠，缺乏雌激素，并有 5-10 倍雄性野生型小鼠的雄激素水平的阉割和激素替代疗法的影响。长达一个月的 RlnWT 和 RlnKO 小鼠双边 gonadectomized 或深水直到 12 个月的运营和维护。子群的去势的动物收到睾酮或 17 β-雌二醇治疗从 9 到 12 个月。· 阿尔科 · 雄性小鼠和芳香化酶野生型小鼠被年龄为 12 个月。收集到的心脏和肾脏组织器官大小和纤维化中的更改进行了评估。阉割减少身体，心，左心室，和在 RlnKO 和 RlnWT 小鼠肾重量和心/肾纤维化中见到深水 RlnKO 动物 （所有 P < 与各自深水 0.05）。睾酮规范化器官重量和身体重量比去势动物的脏器重量和增加的心/肾胶原浓度水平来衡量在或以后，深水 RlnKO 小鼠 （所有 P < 与各自的去势小鼠 0.05）。此外，表达 TGF-β1，decapentaplegic 同源 2 (Smad2），对母亲和肌纤维母细胞分化的同时，上述变化 （所有 P < 与各自的去势小鼠 0.05），而降低睾酮治疗 RlnKO 小鼠基质金属蛋白酶-13。相反，17 β-雌二醇才恢复器官大小的变化。符合上述结论，完好 · 阿尔科 · 小鼠表现出增加的心/肾纤维化缺乏器官大小的变化。这些研究结果表明松弛素和阉割保护，而雄激素会加剧，期间老龄、 心脏和肾纤维而中与松弛，协同作用的雌激素调节器官大小与年龄有关的变化。
