CZK3, Ein MAP-Kinase-Kinase-Kinase-Homolog in Cercospora Zeae-maydis, Regelt Cercosporin Biosynthese-, Pilz-Entwicklung, Und Pathogenese

Molecular Plant-microbe Interactions : MPMI. Sep, 2003  |  Pubmed ID: 12971599

Vergleich Von Fumonisin B1-Biosynthese in Maiskeimöl Und Entkeimtes Kernel, Die Von Fusarium Verticillioides

Journal of Food Protection. Nov, 2003  |  Pubmed ID: 14627291

Nachweis Von Aflatoxin-Herstellung Von Formen in Der Koreanischen Fermentierten Lebensmitteln Und Körner Durch Multiplex-PCR

Journal of Food Protection. Nov, 2004  |  Pubmed ID: 15553652

Malazy, Ein Degenerierter, Artspezifische übertragbar Element in Cercospora Zeae-Maydis

Mycologia. Mar-Apr, 2005  |  Pubmed ID: 16396343

Zwei pilzartigen Krankheitserreger, Cercospora Zeae-Maydis Gruppen I und II, verursachen graue Leaf Spot von Mais. Während der Sequenzierung einer Cosmid-Bibliothek von C. Zeae-Maydis Gruppe I, entdeckten wir eine Sequenz mit hoher Ähnlichkeit zu Maggy, ein übertragbar-Element von Magnaporthe Grisea. Das Element von C. Zeae-Maydis, benannt Malazy, enthalten 194-Base-paar terminal Wiederholungen und Sequenzen mit hoher Ähnlichkeit mit Reverse Transkriptase und Integrase, Komponenten der POL-gen in der "Zigeuner"-wie Retrotransposons in Pilzen. Sequenzen mit Ähnlichkeit mit anderen POL-gen Komponenten, Protease und Ribonuklease, wurden nicht erkannt, in Malazy. Eine einzelne Kopie des Elements wurde durch PCR und Southern Analysen in allen sechs erkannt, nordamerikanische isoliert C. Zeae-Maydis Gruppe ich wurde jedoch nicht gefunden in den vier Isolaten von C. Zeae-Maydis Gruppe II aus drei Kontinenten oder in phylogenetisch Verwandte Arten. Fragmente von den Kern-Bereichen der Reverse Transkriptase und Integrase enthalten eine hohe Frequenz des Stop-Codons, die in allen sechs Isolate der Gruppe I. zusätzliche C:G zu T:A konserviert wurden Übergänge in gelegentlichen Isolate wurden in der Regel Stille Mutationen, während zwei führte Isolat-spezifischen Stop-Codons. Die Abwesenheit des Malazy von verwandten Arten impliziert, dass es erworben wurde, nachdem die Divergenz der C. Zeae-Maydis Gruppen I und II. Die hohe Frequenz der Stop-Codons und die Anwesenheit einer einzigen Kopie des Elements nahe, dass es inaktiviert wurde, kurz nachdem es erworben wurde. Da das Element inaktiv ist und lesen, dass Frames für andere Gene in Sequenzen, die flankierenden des Elements nicht gefunden wurden, scheint Malazy nicht die Unterschiede, was zu einem Speziation oder genetische Vielfalt zwischen C. Zeae-Maydis Gruppen I und II verursachen.

Entwicklung Von Monoklonalen Antikörpern Gegen Pirimiphos-Methyl Und Deren Anwendung Auf IC-ELISA

Journal of Agricultural and Food Chemistry. Jun, 2006  |  Pubmed ID: 16786997

Um die PHOSPHORORGANISCHER (OP)-Pestizid Pirimiphos-Methyl in Getreide Proben, eine monospezifische indirekte wettbewerbsfähige Enzym-Immunassay zu erkennen (IC-ELISA) entwickelt und optimiert. Von der aktiven Ester-Methode wurde Pirimiphos-Methyl-Hapten, die A auf Keyhole Limpet Hämocyanin als das Immunogen verwendet werden, für die Produktion von monoklonalen Antikörpern konjugiert wurde und Pirimiphos-Methyl Hapten B für Eieralbumin als Beschichtung Antigen verwendet werden konjugierte. Der monoklonale Antikörper und Antigen Beschichtung verwenden, wurde ein IC-ELISA entwickelt. Unter den etablierten optimiert die Bedingungen, die IC-ELISA zeigte eine IC50 von 4,2 ng/mL mit einer Nachweisgrenze von 0,07 ng/mL. Die IC-ELISA zeigte vernachlässigbare Kreuzreaktivität mit anderen OP-Pestizide außer mit Pirimiphos-Ethyl. Wiederherstellungen der Pirimiphos-Methyl von Spike Korn-Proben reichten von 83 bis 96 %.

FSR1 Unbedingt Virulenz Und Weibliche Fruchtbarkeit in Fusarium Verticillioides Und F. Graminearum

Molecular Plant-microbe Interactions : MPMI. Jul, 2006  |  Pubmed ID: 16838785

Fusarium Verticillioides (Teleomorph Gibberella clandestina) und F. Graminearum (Teleomorph G. Zeae) sind bekannt, verheerende Krankheiten auf Getreide zu verursachen. Trotz ihrer Bedeutung beschränkt sich unser Verständnis der molekularen Mechanismen dieser Host-Pathogen Interaktionen beteiligt. Der FSR1-Locus in F. Verticillioides war durch screening REMI Mutanten für Verlust der Virulenz in Mais Stiel Rot Inokulation Studien identifiziert. FSR1 codiert eine offene Leseraster durch zwei Introns unterbrochen 823-Codon. Das Fsr1-Protein teilt 60 % Sequenz Identität mit der Sordaria Macrospora Pro11, ein multimodular Protein mit vier vermeintlichen Protein-Protein-Bindung-Domains (Caveolin-bindende Domäne, aufgerollte Spule Struktur, Calmodulin-verbindlichem Motiv und sieben-WD40 Wiederholungen), die eine regulatorische Rolle in Zell-Differenzierung und Apothecium Entwicklung spielt. Unsere Daten zeigen, dass FSR1 für weibliche Fruchtbarkeit und Virulenz in F. Verticillioides wichtig. Erheblich, gezielte Störung der FSR1 Ortholog in F. Graminearum (FgFSR1) reduziert Virulenz auf Gerste und Fruchtkörper Bildung abgeschreckt. Cross-Komplementation Experimente zeigten, dass die Genfunktion in den beiden Fusarium-Arten konserviert wird. FSR1 wird konstitutiv exprimiert, und wir vermuten, dass Fsr1 Virulenz agieren als ein Gerüst für eine Signal-Transduktion-Signalweg reguliert. Ein Überblick über verfügbare Genom Datenbanken gibt an, dass Fsr1 UCP1 in eine Reihe von filamentösen Pilzen und tierischen Systeme aber nicht in Knospen Hefe oder Pflanzen vorhanden sind. Eine maximum-Likelihood-Analyse dieser gen-Familie zeigt Hochleistungssystem monophyletische Schwestergruppen, Pilzen und Tieren zugeordnet.

Direkter KOMPETITIVER ELISA Basierend Auf Ein Monoklonaler Antikörper Für Den Nachweis Von Aflatoxin B1. Stabilisierung Von ELISA Kit-Komponenten Und Korn-Beispiele-Anwendung

Analytical and Bioanalytical Chemistry. Jan, 2006  |  Pubmed ID: 16254721

Eine direkte wettbewerbsfähig Enzym-Immunoassay (ELISA) basierend auf einen monoklonalen Antikörper entwickelt und optimiert für den Nachweis von Aflatoxin B1 (AFB1) wurde, und eine ELISA-Kit wurde entwickelt. Diese Immunoassay war hoch spezifische, sensible schnelle, einfache und für Aflatoxin Überwachung geeignet. AFB1 Konzentrationen bestimmbaren ELISA reichten von 0,1 bis 10 µg L(-1). Der IC50-Wert war 0,62 Microg L(-1). Wiederherstellung von Spike Reis-Proben im Durchschnitt zwischen 94 und 113 %. Die Wirkung der verschiedenen Reagenzien auf die Stabilität des HRP-AFB1 konjugierte Lösung wurde untersucht. Die Leistung der ein stabilisierter Enzym-Tracer in ELISA war bestimmt und im Vergleich zu einer frisch zubereiteten Steuerelement-Lösung von HRP-AFB(1) konjugiert. Die Ergebnisse zeigten, dass die Stabilisierung Datenträger mit 0,02 % BSA, 0,1 % Kathon CG und 0,05 Mol L(-1) Calciumchlorid in 0,05 Mol L(-1) Tris-HCl-Puffer (pH 7,2) die Tätigkeit der HRP-AFB1 in einer Serumverdünnung von 1 für einen Zeitraum von mindestens 12 Monaten bei Raumtemperatur beibehalten, während konjugierte Referenzlösung ohne Zusatzstoffe ihre Tätigkeit innerhalb von ein paar Tagen verloren. Getestet wurden mehrere Additive für ihre stabilisierende Wirkung ein monoklonaler Antikörper (MAb) auf der Oberfläche von Polystyrol Mikrotiterplatten immobilisiert. Es wurde gezeigt, dass immobilisierte MAb, behandelt mit post-coating Lösungen, PVA, BSA und Kombinationen dieser Stoffe mit Trehalose, seine Tätigkeit für mindestens 4 Monate bei 4 Grad C, beibehalten, während die unbehandelte MAb-beschichtete Platte ihre Tätigkeit innerhalb von 2 Tagen verloren.

Die Vermeintliche Monomer G-Protein-GBP1 Ist Fumonisin B Produktion in Fusarium Verticillioides Negativ Zugeordnet

Molecular Plant Pathology. Sep, 2006  |  Pubmed ID: 20507454

Zusammenfassung Fumonisin herabgewürdigt (FB(1)) ist ein Mykotoxin, produziert von Fusarium Verticillioides, die Mais Verunreinigungen. FB(1) wurde zu einer Anzahl von menschlichen und tierischen Mycotoxicoses weltweit verbunden. Trotz seiner Bedeutung ist unser Verständnis von der FB(1)-Biosynthese Regelungsmechanismen beschränkt. Hier beschreiben wir F. Verticillioides GBP1, Codierung ein Monomer G-Protein und seine Rolle bei der Biosynthese von FB(1). GBP1 wurde entdeckt, als ausdrückliche Sequenz-Tag (EST) oben-geregelt in der F. Verticillioides fcc1 Mutant, der reduzierte Conidiation und keine FB(1)-Biosynthese, wenn auf Mais-Kernels gewachsen zeigte. Sequenzanalyse zeigte, dass GBP1 ein mutmaßliches 368-Aminosäuren-Protein mit Ähnlichkeit zu DRG und Obg Unterklassen von G-Proteinen kodiert, die in Entwicklung und Stress-Reaktionen beteiligt sind. GBP1 k.o. Mutanten (Deltagbp1) ausgestellt normales Wachstum, aber erhöht FB(1) Produktion (> 58 %) im Vergleich zu den Wildtyp wenn auf Maiskörner angebaut. Ergänzung des Deltagbp1 mit dem Wildtyp GBP1 gen wiederhergestellt FB(1) Produktionsmengen mit derjenigen der Wildtyp. Unsere Daten zeigen, dass GBP1 negativ verknüpft ist mit FB(1)-Biosynthese, aber nicht mit Conidiation in F. Verticillioides. Die Streichung der GBP1 führte zur bis-Regelung der FB(1) biosynthetischen Schlüsselgenen, FUM1 und FUM8, darauf hindeutet, dass die erhöhte Produktion von FB(1) in Deltagbp1 durch Überexpression von FUM-Genen.

Immunochromatography Mit Kolloidales Gold-Antikörper-Sonde Für Die Erkennung Von Atrazin in Wasserproben

Journal of Agricultural and Food Chemistry. Dec, 2006  |  Pubmed ID: 17177493

Ein Immunochromatography (ICG) Streifen Test für die schnelle Erkennung von Atrazin in Wasserproben wurde entwickelt. Ein monoklonaler Antikörper (MAb)-speziell für Atrazin wurde produziert von der geklonten Hybridoma-Zelle (AT-1-M3) und verwendet einen direkten Wettbewerb Enzym-Immunassay (DC-ELISA) und ICG-Streifen zu entwickeln. MAb Konjugation mit kolloidales Gold, und war auf das konjugierte Pad Strip ICG angewendet. Die visuelle Nachweisgrenze für die ICG-Strip war 3 ng/mL. Dieser Test benötigt nur 10 min um Ergebnisse und einen Schritt der Probe Tests durchführen. Die Ergebnisse der Wasserproben, gespickt mit 5, 10, 20 und 50 ng/mL von Atrazin ICG Streifen wurden in guter Übereinstimmung mit jenen von DC-ELISA erzielt. Der ICG-Streifen war ausreichend sensibel und präzise, nützlich für schnell-Screening von Atrazin in verschiedenen Wasserproben.

Unterbrechung Von Einem Mais 9-Lipoxygenase Führt Zu Erhöhten Widerstand Gegen Pilzartigen Krankheitserreger Und Verminderter Häufigkeit Einer Kontamination Mit Mykotoxin Fumonisin

Molecular Plant-microbe Interactions : MPMI. Aug, 2007  |  Pubmed ID: 17722696

Pflanze Oxylipins, produziert über die Bahn Lipoxygenase (LOX) fungieren als Signale in Verteidigung und Entwicklung. In Pilzen sind Oxylipins potente Regulatoren der Mykotoxin-Biosynthese und Sporenbildung. Frühere Studien zeigten, dass die Anlage 9-LOX-abgeleitete Fettsäure Peroxide Conidiation und Mykotoxin-Produktion veranlassen. Hier haben wir die Hypothese, dass Oxylipins, produziert von der Mais 9-LOX-Pathway Krankheitserreger, Sporen und Mykotoxine zu produzieren und den Host erfolgreich zu kolonisieren vorgeschrieben sind, getestet. Maize Mutanten wurden generiert, die die Funktion eines 9-LOX-Gens, ZmLOX3, durch eine Einfügung einer Mutator Transposon in seiner kodierende Sequenz abgeschafft wurde, die reduzierten Maß an mehreren 9-LOX-abgeleitete Peroxide geführt. Unsere Hypothese zu unterstützen, wurden Conidiation und Produktion von der Mykotoxin-Fumonisin B1 durch Fusarium Verticillioides drastisch Kerne des lox3 Mutanten gegenüber nahe isogene Wild-Typen reduziert. Ebenso Blatt Konidien Produktion und Krankheit schwere Blattbräunepilz Knollenfäule verursacht durch Glomerella Graminicola wurden deutlich reduziert, in die lox3-Mutanten. Darüber hinaus lox3 Mutanten erhöhte Widerstandsfähigkeit, die südlichen Blatt Knollenfäule verursacht durch Cochliobolus Heterostrophus und Stiel verrottet, verursacht durch F. Verticillioides und C. Graminicola angezeigt. Diese Daten empfehle dieses Oxylipin Stoffwechsel vermittelt durch eine spezielle Anlage 9-LOX-Isoform für pilzartige Pathogenese, einschließlich Krankheit-Entwicklung und Produktion von Sporen und Mykotoxine erforderlich ist.

Fusarium Verticillioides GAP1, Ein Gen Für Ein Mutmaßliches Glycolipide Verankert Oberflächen-Protein, Beteiligt Sich an Conidiation Und Zellwand Struktur Aber Nicht Virulenz

Microbiology (Reading, England). Sep, 2007  |  Pubmed ID: 17768230

Fusarium Verticillioides ist ein wichtiger Erreger von Mais, der bewirkt, dass Ohr Rot und produziert die Mykotoxine bekannt als Fumonisine. Bis heute wissen der Pathogenität und der Regulierung der Fumonisin ist Biosynthese in F. Verticillioides beschränkt. Hier ist die molekulare Charakterisierung der GAP1, ein Gen, das für ein mutmaßliches 540-aa-Protein, das gehört zu einem Glycolipide verankert Oberfläche (GAS) Proteinfamilie, präsentiert. F. Verticillioides GAP1 wurde identifiziert als eine ausdrückliche Sequenz Tag (EST) herraufreguliert in eine Kultur-Bedingung, die Conidiation und Fumonisin herabgewürdigt (FB(1)) Produktion. GAP1 null Mutanten GAM126 (Deltagap1:: HYG) und GAG8 (Deltagap1:: GEN) eingeschränkten Wachstum mit mehr Luft Hyphen als ihre Wildtyp-Vorläuferzellen auf festen Medien ausgestellt. Kein Mangel in mycelial Masse oder filamentöse Wachstum wurde beobachtet, wenn die GAM126 und GAG8 Stämme in flüssigen Medien unter Schütteln Bedingungen angebaut wurden. Wenn angehaltene Bedingungen gewachsen, GAM126 und GAG8 Stämme hergestellten deutlich weniger Konidien und vergleichsweise dicht verzweigte Hyphen. Concanavalin A Färbung angedeutet, dass die GAP1 Löschung der Zellwand Kohlenhydrat-Zusammensetzung/Abscheidung-Vorgang geändert. Löschen von GAP1 hatte keine Auswirkungen auf die Produktionsebene FB(1) oder F. Verticillioides Virulenz auf Mais Sämlinge und Stiele. Ergänzung des GAM126 mit dem Wildtyp GAP1 gen wiederhergestellt, Wachstum, Conidiation und Zellwand Anomalie Phänotypen. Die Ergebnisse legen nahe, dass GAP1 Wachstum, Entwicklung und Conidiation in F. Verticillioides, aber nicht mit Pathogenität oder Regulierung der FB(1) zugeordnet ist.

Herstellung Und Charakterisierung Von Monoclonal Und Rekombinante Antikörper Gegen Antimikrobielle Sulfamethazine

Journal of Microbiology and Biotechnology. Apr, 2007  |  Pubmed ID: 18051266

Ein monoklonaler Antikörper (Mab) gegen die antimikrobielle Sulfamethazine war bereit und zeichnet sich durch eine indirekte wettbewerbsfähige Enzym-Immunassay (IC-ELISA). Sulfamethazine im Bereich von 0,2 bis 45 ng/ml konnte mit der Mab IC-ELISA bestimmt werden. cDNA Kodierung eine Variable schwere Kette und Variable leichte Kette von der Mab wurden geklont, um rekombinante Antikörper mit Phagen-Display-Technologie zu produzieren. Nach Phage Rettungs- und drei Runden schwenken war ein Einzel-Kette Variable Fragment (ScFv) Antikörper mit hoher Sulfamethazine-Bindungsaffinität erlangt. ELISA-Analyse ergab, dass ScFv-Antikörper und übergeordneten Mab zeigte ähnliche, aber nicht identische Merkmale. Der IC50 Wert von IC-ELISA ScFv-Antikörper war 4,8 ng/ml, verglichen mit 1,6 ng/ml mit der übergeordneten Mab. Aufführungen der Tests in Anwesenheit von Milch Matrix wurden verglichen; die Mab-gegründeten Probe war weniger betroffen als die ScFv-gegründeten Probe. Sechzig Milchproben von Mab-basierte IC-ELISA analysiert wurden, und vier Proben waren positiv Sulfamethazine; Diese Ergebnisse wurden mit denjenigen von HPLC positiv korreliert.

Herstellung Von Monoklonalen Antikörpern Gegen Listeria Monocytogenes Und Ihre Anwendung Auf Immunochromatography Streifen Test

Journal of Microbiology and Biotechnology. Jul, 2007  |  Pubmed ID: 18051327

Ein Immunochromatography (ICG) Streifen-Test basiert auf ein monoklonaler Antikörper für die schnelle Erkennung von L. Monocytogenes in Fleisch und verarbeitet-Fleisch Proben entwickelte sich in dieser Studie. Ein monoklonaler Antikörper (MAb)-speziell für L. Monocytogenes wurde aus geklonten Hybridomazellen (FKLM-3B12-37) und verwendet einen ICG-Streifen-Test zu entwickeln. Der Antikörper zeigte eine stärkere Bindung an L. Monocytogenes als andere Arten von Listeria und eine schwache Kreuzreaktionen auf S. Aureus basierend auf einem ELISA. Die Nachweisgrenze des Tests Streifen ICG war 10 Absatz 5 Zellen/ml. Insgesamt 116 Fleisch und verarbeitet Proben wurden gesammelt und mit der ICG-Streifen-Test und eine PCR analysiert. Die ICG Streifen Test und PCR erklärt L. Monocytogenes Kontamination in 34 und 27 Fleisch Proben, beziehungsweise. Die 7 Fleisch-Beispiele nicht erkannt, wie L. Monocytogenes positiv durch die PCR auch getestet wurden mit eine API-Kit und festgestellt, dass durch Listeria Arten verunreinigt werden. Abschließend die ICG Streifen Test vereinbarten Ergebnisse gut mit denjenigen mit dem PCR und API-Kit. So hat die entwickelte ICG mögliche Verwendung als eine primäre Screening-Tool für L. Monocytogenes in verschiedenen Lebensmitteln und landwirtschaftlichen Erzeugnissen, direkte Ergebnisse innerhalb von 20 min ohne komplizierte Schritte.

Natürliches Vorkommen Von Aflatoxin B1 Im Handel Befindlichen Lebensmittel Und Risiko-Schätzungen Der Ernährungsbedingten in Koreaner

Journal of Food Protection. Dec, 2007  |  Pubmed ID: 18095437

Aflatoxin B1 (AFB1) ist eine unvermeidbare Lebensmittel-Verunreinigung. Um die Gesundheit Bewertung möglicher Risiken von AFB1, Koreaner, die durch Verzehr von Lebensmitteln, wir bestimmt die natürliche Vorkommen des AFB1 in Essen und das überschüssige Risiko für Leberkrebs durch ernährungsbedingte Exposition gegenüber AFB1 geschätzt. Insgesamt 694 Lebensmittelproben aus sechs verschiedenen Regionen Südkoreas gesammelt wurden für ihre AFB, Inhalt analysiert. Ein hundert vier der 694 Proben wurden gefunden, um positive Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) Lesungen für AFB1 geben und weiter mit Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie untersucht wurden. Zweiunddreißig Proben, einschließlich 2 Mais Proben, 3 Soja-Produkte, 20 Erdnuss Proben, Nut Proben, und ihre Produkte und 7 Gewürze, wurden gefunden, um mit AFB1 kontaminiert sein (4,6 % Inzidenz), bis zu 48.6 Microg kg(-1). AFB1 Verschmutzungsgrad 28 der 32 Lebensmittel lag unter 10 µg kg(-1), d.h. der gesetzlichen Toleranzgrenze in Korea. Aus Daten auf täglichen Verzehr von Lebensmitteln schätzte die Exposition-Dosis von AFB1 6,42 x 10(-7) mg kg(-1) Körper Gewicht (bw) day(-1) werden. Die Hauptverursacher der Nahrungsaufnahme von AFB1 wurden Sojabohnen-Paste und Sojasauce, die 91 % der gesamten Exposition gegenüber AFB1 komponiert. Das überschüssige Risiko von Leberkrebs für diejenigen AFB1 über die Nahrungsaufnahme ausgesetzt wurden schätzungsweise 5,78 x 10(-6) für Hepatitis-B-Negative Einzelpersonen und 1,48 x 10(-4) für Hepatitis-B-positiven Personen. Diese Ergebnisse legen nahe, dass besondere Aufmerksamkeit erforderlich ist, um die Aufnahme von AFB1 bei Hepatitis-B-positiven Personen reduzieren.

Entwicklung Der Immunochromatography Streifen-Test Mit Nanocolloidal Gold-Antikörper Sonde Zum Schnellen Nachweis Von Aflatoxin B1 in Getreide Und Futtermittel Proben

Journal of Microbiology and Biotechnology. Oct, 2007  |  Pubmed ID: 18156778

Ein Immunochromatography (ICG)-Streifen-Test mit eine Nanocolloidal-Gold-Antikörper-Sonde entwickelt und optimiert für den schnellen Nachweis von Aflatoxin B1 (AFB1). Eine spezifische monoklonale Antikörper AFB1 wurde produziert von der geklonten Hybridoma-Zelle (AF78), gepaart mit Nanocolloidal Gold und verteilt auf die konjugierte Pad der ICG-Streifen-Test. Die visuelle Nachweisgrenze des Tests Streifen ICG war 0,5 ng/ml, und diese Methode zeigte eine Kreuzreaktionen zu Aflatoxin B2, G1 und G2. Insgesamt 172 Getreide und Futtermittel Proben gesammelt und durch die ICG Streifen Test- und HPLC analysiert. Die Ergebnisse der ICG Streifen Test zeigte eine gute Übereinstimmung mit denjenigen von HPLC. Diese Ergebnisse darauf hingewiesen, dass der ICG-Streifen-Test eine mögliche Verwendung als ein schneller und kostengünstiger Screening-Tool zur Bestimmung der AFB1 in realen Beispielen hat und konnte das vorläufige Screening von Mykotoxin in Nahrungsmitteln und landwirtschaftlichen Erzeugnissen, die Resultate innerhalb von 15 min ohne komplizierte Schritte angewendet werden.

Fusarium Verticillioides GBB1, Ein Heterotrimeres G-Protein-Beta-Untereinheit, Codierung Gen Ist Verbunden Mit Fumonisin B Biosynthese Und Geflochtenen Entwicklung Aber Nicht Mit Pilzen Virulenz

Molecular Plant Pathology. Jul, 2007  |  Pubmed ID: 20507507

Zusammenfassung: Fusarium Verticillioides (Sacc.) Nirenberg (Teleomorph Gibberella clandestina Weinland) ist ein Mais Erreger, dass Ursachen Ohr verrottet und Stiel verrottet. Der Pilz produziert auch eine Gruppe von Mykotoxinen, Fumonisine, auf infizierten Ohren, die erheblichen gesundheitlichen und wirtschaftlichen Belange für Menschen und Tiere weltweit verursachen. Bis heute beschränkt sich unser Verständnis der molekularen Mechanismen pilzartige Virulenz und Fumonisin Biosynthese in F. Verticillioides zugeordnet. In dieser Studie GBB1, ein Gen Kodierung eine vermeintliche Beta-Untereinheit des ein Heterotrimeres G-Protein, kam zum Erliegen und die Auswirkungen auf Fumonisin Biosynthese und Virulenz wurden ausgewertet. Eine GBB1-Löschung-Mutante (Deltagbb1) zeigte keine signifikanten Unterschiede in radial Wachstum und mycelial Masse, aber produziert deutlich weniger Fumonisin B (1) (FB(1)) als ihre Wildtyp-Vorläuferzellen. HPLC-Analyse zeigte, dass Deltagbb1 produziert weniger als 10 p.p.m. FB(1) während der Wildtyp über 140 p.p.m. produziert, wenn Belastungen auf gebrochene Maiskörner angebaut wurden. Reduzierte Ausdruck der wichtigsten FB (1) biosynthetischen Gene, FUM1 und FUM8, in Deltagbb1 liefert ein weiterer Beweis, dass GBB1 FB(1) Verordnung beteiligt ist. Stiel Rot Virulenz, war gemessen durch mittlere Läsion Länge und Fläche, nicht signifikant verschieden in Deltagbb1 gegenüber dem Wildtyp, was darauf hindeutet, dass die GBB1 Regeln nicht Virulenz in F. Verticillioides. Entwicklungspolitisch, abweichen Hyphen von Deltagbb1 nicht von der ursprünglichen Achse der Polarität gegründet auf Keim Rohr entstehen im Gegensatz zu Wildtyp-Hyphen, die ein- und Ausschalten der Achse zu schlängeln, wie sie wachsen. Ergänzung des Deltagbb1 mit GBB1 wiederhergestellt FB(1) Produktion und geflochtenen Wachstum in Wildtyp. Die Ergebnisse dieser Studie zeigen, dass Heterotrimeres G-Protein-Beta-Untereinheit spielt eine wichtige Rolle in der Regulierung der FB(1)-Biosynthese und geflochtenen Wachstum, aber nicht die Virulenz in F. Verticillioides.

Funktionelle Charakterisierung Der Acetylglutamat-Synthase Und Phosphoribosylamine-Glycin-Ligase-Gene in Gibberella Zeae

Current Genetics. Feb, 2007  |  Pubmed ID: 17146619

Gibberella Zeae (Anamorph, Fusarium Graminearum) ist ein wichtiger Erreger von Getreide, die in vielen Regionen der Welt gefunden. In dieser Studie wir haben zwei auxotrophe Belastungen geprägt, benannt S4B1279 und S4B3008, die aus einer Sammlung von muss Mutanten von G. Zeae entdeckt wurden durch Beschränkung Enzym-vermittelte Integration (REMI) generiert. Beide mutierte Stämme ausgestellt pleiotropen phänotypische Veränderungen, die Abbau von mycelial Wachstum und Virulenz und Generativität abgeschafft. Molekulare Analyse der REMI-Mutanten ergab, dass die Auxotrophie des S4B1279 wird durch eine Mutation des Gens ARG2 Codierung eine Acetylglutamat-Synthase und Auxotrophie des S4B3008 wird durch eine Mutation des Gens ADE5 ein Phosphoribosylamine-Glycin-Ligase-Codierung. Nachfolgende gen Störung und Ergänzung Studien haben die Funktionen für ARG2 und ADE5, bzw., in G. Zeae bestätigt. Unsere Studie zeigte die Machbarkeit der Verwendung der REMI-Technik G. Zeae Virulenz Mechanismen, zusätzlich zwei neue wählbare Marker, so dass genetische Transformation des Pilzes zu studieren.

Funktionelle Charakterisierung Von Fusarium Verticillioides CPP1, Ein Gen, Das Für Eine Vermeintliche Protein Phosphatase 2A Katalytische Untereinheit

Microbiology (Reading, England). Jan, 2008  |  Pubmed ID: 18174151

Fusarium Verticillioides produziert die Mykotoxin-Fumonisin herabgewürdigt (FB(1)) auf Mais-Kernels. In dieser Studie wir ein mutmaßliches Protein Phosphatase gen CPP1 in F. Verticillioides identifiziert und untersucht ihre Rolle bei der FB(1) Verordnung. Bisherige Arbeit ergab, dass CPP1 Ausdruck einer FB 1-unterdrücken genetischen Hintergrund erhoben wird. Damit wir die Hypothese, dass CPP1 FB(1) Produktion negativ zugeordnet ist. Um diese Hypothese zu testen, wir generiert einen CPP1 k.o. Mutant, PP179, und untersucht die Auswirkungen von Gen-Löschung auf FB(1)-Biosynthese und pilzartige Entwicklung. PP179 zeigte erhöhte Expression von FUM-Genen, und wiederum produziert höhere FB(1) als der Wildtyp-Vorläuferzellen. Andere bedeutenden Mutanten Phänotypen enthalten reduziert radial Wachstum auf Agarplatten, reduzierte Konidien Keimung Preise, deutlich erhöhte Macroconidia Bildung und geflochtenen Schwellung. Um sicherzustellen, dass diese Phänotypen direkt durch CPP1 Deletion wurden, ergänzt wir PP179 mit dem Wildtyp CPP1 gen. Die ergänzten Belastung PPC4 zeigte FUM1 Ausdruck und FB(1) Produktion ähnlich der Wildtyp, den Nachweis, dass CPP1 ist negativ mit FB(1)-Biosynthese. Andere PP179-Phänotypen, wie Macroconidiation und geflochtenen wurden Schwellungen, auch der Wildtyp Vorläuferzellen wiederhergestellt. Darüber hinaus ergänzt wir F. Verticillioides PP179-Sorte mit Neurospora Crassa Wildtyp-Ppe-1-Gen, demonstrieren, dass Cpp1 und PPE-1 Proteine funktionell konserviert werden. Pleiotropen Effekte der CPP1 Löschung führte uns zu vermuten, dass CPP1 mehrere nachgeschaltete Signalwege in F. Verticillioides zugeordnet ist. Identifizierung und Funktionelle Charakterisierung von nachgeschalteten Cpp1-Interaktion Proteine sind notwendig, um besser zu verstehen, die komplexen Regulationsmechanismen Cpp1 zugeordnet.

Funktionsanalysen Heterotrimeres G-Protein G-Alpha Und Beta-Untereinheiten G in Gibberella Zeae

Microbiology (Reading, England). Feb, 2008  |  Pubmed ID: 18227243

Die Homothallismus Schlauchpilze Pilz Gibberella Zeae (Anamorph: Fusarium Graminearum) ist eine große toxigenen Pflanze-Pathogen, das Kopf verursacht Krankheit in klein-Korn Getreide verschandeln. Der Pilz produziert die Mykotoxine Deoxynivalenol (DON) und Zearalenon (ZEA) in infizierten Wirten, eine Gefahr für die Gesundheit von Mensch und Tier. Trotz der landwirtschaftlichen und toxikologischer Bedeutung bleiben die molekularen Mechanismen sein Wachstum, Entwicklung und Virulenz weitgehend unbekannt. Zum besseren Verständnis dieser Mechanismen studierte wir die trimeren G-Proteine von G. Zeae, die bekannt sind, entscheidende Signalwege zu steuern, die verschiedene Zell- und Entwicklungsbiologie Antworten in Pilzen zu regulieren. Im F. Graminearum Genom wurden drei vermeintliche Galpha Untereinheiten, GzGPA1, GzGPA2 und GzGPA3 und ein Gbeta-Untereinheit, GzGPB1, identifiziert. Löschen von GzGPA1, ein Homolog von der Aspergillus Nidulans Galpha gen FadA, resultierte in weiblicher Sterilität und verbesserte DON und ZEA-Produktion, die darauf hindeutet, dass GzGPA1 für normalen geschlechtlichen Fortpflanzung und Unterdrückung der Toxin-Biosynthese erforderlich ist. Die Produktion von DON und ZEA wurde auch verbessert, in der GzGPB1-Mutant, was darauf hindeutet, dass Galpha GzGPA1 und Gbeta GzGPB1 negativ Mykotoxin kontrollieren Produktion. Streichung des GzGPA2, das ein ähnlich A. Nidulans GanB Galpha-Protein kodiert, verursacht geringere Pathogenität und erhöhte Anhäufung von Chitin in der Zellwand, was bedeutet, dass GzGPA2 mehrere Funktionen hat. Unsere Studie zeigt, dass G. Zeae Heterotrimeres G-Protein-Untereinheiten vegetatives Wachstum, sexuelle Entwicklung, Toxinproduktion und Pathogenität regulieren können.

Identifizierung Von Genen Zugeordnet Fumonisin Biosynthese in Fusarium Verticillioides über Proteomik Und Quantitative Echtzeit-PCR

Journal of Microbiology and Biotechnology. Apr, 2008  |  Pubmed ID: 18467856

In dieser Studie verwendeten wir funktionale genomische Strategien, Proteomics und quantitative Real-Time (qRT)-PCR, unser Verständnis von Genen zugeordnet Fumonisin-Produktion in der Pilz Fusarium Verticillioides voraus. Frühere Studien haben bewiesen, dass die Löschung im FCC1-gen, das eine C-förmige cyclin codiert, eine drastische Reduktion der Fumonisin Produktions-und Conidiation in der mutant-Stamm (FT536) führt. Die Prämisse unserer Forschung war die vergleichende Analyse der F. Verticillioides Wildtyp und FT536 Proteome wird offenbaren, vermeintliche Proteine und letztlich entsprechenden Gene, die für Fumonisin Biosynthese wichtig sind. Wir isoliert die Proteine, die waren wesentlich herraufreguliert im Wildtyp oder FT536 über zweidimensionale Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese, und erhielt Sequenzen per Massenspektrometrie. UCP1 identifizierte Proteine, z.B. Carboxypeptidase Laccase und Stickstoff Metabolit Repression Protein, sind bekanntermaßen Funktionen pilzartige sekundären Stoffwechsel und Entwicklung beteiligt haben. Wir auch entsprechend der ausgewählten Proteine Gensequenzen identifiziert und untersucht ihre transkriptionelle Profile über quantitative Real-Time (qRT)-PCR zur Identifizierung von Genen, die damit einhergehende Ausdrucksmuster während Fumonisin Biosynthese zeigen. Diese Gene können als Ziele für Funktionalanalysis weiter ihre Rollen im FB1 Biosynthese überprüfen ausgewählt werden.

Verbesserte Schnelligkeit Qualitativen Nachweis Von Listeria Monocytogenes Mithilfe Eines Enzyme-linked Immunosorbent Assay Und Immunochromatography Streifen Tests Kombiniert Mit Immunomagnetic Perlen Trennung

Journal of Food Protection. Apr, 2008  |  Pubmed ID: 18468033

Ein Enzyme-linked Immunosorbent assay (ELISA), Immunochromatography (ICG) Streifen Test und Immunomagnetic Perlen Trennung (IMBS) System auf der Grundlage eines monoklonalen Antikörpers wurden einzeln zum Nachweis und zur Isolierung von Listeria Monocytogenes in Fleisch Proben entwickelt. Die drei Methoden zeigte eine starke Reaktion mit Listeria-Arten und eine schwache Reaktion mit Staphylococcus Aureus. Um die Schnelligkeit des L. Monocytogenes Erkennung zu erhöhen, wurden die Kombinationen von ELISA und ICG Streifen-Test mit dem IMBS-System (ELISA-IMBS und ICG-IMBS) untersucht. In vergleichenden Analysen künstlich beimpften Fleisch und Proben von Fleischwaren, die ELISA und ICG Streifen Test benötigt 24 h Bereicherung Zeit aufdecken die beimpften Fleisch-Proben mit > oder = 1 X 10 Absatz 2 KBE/10 g, während die ELISA-IMBS und ICG-IMBS nur 14 h Anreicherung erforderlich. Analysen natürlich kontaminiertes Fleisch Proben (30 Schweinefleisch-Proben, 20 Rindfleisch Proben, 26 Huhn Proben 20 Fisch-Beispiele und 20 Fleischwaren Proben) gesungen von ELISA-IMBS, ICG-IMBS und API Kit ergab ähnliche Ergebnisse. Die ELISA-IMBS und ICG-IMBS bieten eine raschere Assay als Individuum ELISA und der ICG-Streifen-Test und eignen sich zum schnellen und qualitativen Nachweis von L. Monocytogenes (oder Listeria-Arten), in Fleisch-Proben. Mit der ICG-IMBS L. Monocytogenes in Beispiele für Fleisch in 15 h nachgewiesen werden konnte, und die Methode hat Potenzial als eine schnelle, kostengünstige vor Ort Screening-Tool für die Erkennung von L. Monocytogenes in Lebensmittelproben und Agrarprodukte Ebene Mindeststandards für die Detektion von etwa 100 KBE/10 g.

Das Aufgerollte Spule Proteinbindung Motiv in Fusarium Verticillioides Fsr1 Unbedingt Mais Stiel Rot Virulenz

Microbiology (Reading, England). Jun, 2008  |  Pubmed ID: 18524918

Fusarium Verticillioides (Sacc.) Nirenberg (Teleomorph Gibberella clandestina Weinland) ist einer der wichtigsten Erreger der Mais Stiel Rot-Krankheit. Allerdings fehlt ein klares Verständnis der Stiel Rot Pathogenese. Zuvor haben wir festgestellt, das F. Verticillioides FSR1 gen, das eine Schlüsselrolle in der pilzartigen Virulenz und sexuellen Paarung spielt. Das vorhergesagte Fsr1 Protein enthält mehrere Proteinbindung Domänen, nämlich eine Caveolin-bindende Domäne, eine aufgerollte Spule-Struktur und ein Calmodulin-Bindung-Motiv im N-Terminus und ein WD40 Wiederholungsgebiet im C-Terminus. Fsr1 Aktien erhebliche Ähnlichkeit zu einer Familie von striatin Proteine, die eine entscheidende Rolle im zellulären Mechanismen zu spielen, die eine Vielzahl von Entwicklungsprozesse zu regulieren. Bezeichnenderweise ist FSR1 Funktion in Fusarium Graminearum, konserviert, wo es auch eine direkte Rolle in der Pathogenese spielt. In dieser Studie wurde unser Ziel bestimmen die Motif(s) in Fsr1, die direkt sind Pilz-Virulenz zugeordnet. Wir ergänzt die FSR1-ko (Deltafsr1)-Sorte mit mutierten Versionen des FSR1-Gens und festgestellt, dass die Fsr1 der C-terminalen WD40 Wiederholungsgebiet für vegetatives Wachstum und Mais Stiel Rot Virulenz entbehrlich ist. Wir untersuchen auch die mögliche Verbindung zwischen FSR1-vermittelte Virulenz und Zellwand-erniedrigende Enzym (Alpha-Amylase, Pektinase und Cellulase) Aktivitäten. Weitere Charakterisierung der N-terminalen Region ergab, dass die aufgerollte Spule-Struktur für Virulenz in F. Verticillioides wichtig. Die aufgerollte-umwickeltes engagiert sich in einer Vielzahl von Protein-Protein Interaktionen in eukaryotic Systeme und somit vermuten wir, dass die Interaktion zwischen Fsr1 und der vermeintliche Fsr1-verbindliches Protein löst nachgeschaltete gen signalisieren, die F. Verticillioides Virulenz zugeordnet ist.

GAC1, Ein Gen Für Ein Mutmaßliches GTPase-Aktivierung-Protein Reguliert Bikaverin Biosynthese in Fusarium Verticillioides

Mycologia. Sep-Oct, 2008  |  Pubmed ID: 18959154

Fusarium Verticillioides (Teleomorph Gibberella clandestina) ist ein Schlauchpilze bekannt, eine Vielzahl von Sekundärmetaboliten, Fumonisine, FUSARINSÄURE und Bikaverin zu produzieren. Wenn der Pilz Belastung, insbesondere Nährstoff Einschränkungen ist diese Metaboliten synthetisiert. Bis heute haben wir Verständnis für die komplexen regulatorischen Prozess, der mit Pilz-sekundären Stoffwechsel begrenzt. In dieser Studie, die wir mit REMI (Beschränkung Enzym-vermittelte Integration) Mutagenese erzeugt eine Auflistung von F. Verticillioides Mutanten und im Prozess identifiziert eine Belastung, R647, das eine Mutation in einem Gen benannten GAC1 trägt. Mutation in der GACI-Locus, die eine vermeintliche GTPase aktivierendes Protein codiert, führte die gestiegene Produktion von Bikaverin, was darauf hindeutet, dass GAC1 Bikaverin Biosynthese negativ zugeordnet ist. Ergänzung der R647 mit dem Wildtyp GAC1 gen restauriert die Produktionsebene Bikaverin der Wildtyp Stammvater belegen, daß gac1 Mutation direkt verantwortlich für die Überproduktion von Bikaverin war. Wir zeigten auch, dass AREA, Codierung, globale Stickstoff-Regler und PKS4, Codierung Polyketide Synthase, nachgeschalteter Gene, die jeweils positiv und negativ GAC1 geregelt sind. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass GAC1 spielt eine wichtige Rolle in der Signaltransduktion, die Regulierung der Bikaverin Produktion in F. Verticillioides.

Entwicklung Der Fluoreszenz-Polarisation-Immunoassay Für Den Schnellen Nachweis Von 6-Chloronicotinic-Säure: Hauptmetabolit Neonicotinoide Insektizide

Journal of Agricultural and Food Chemistry. Feb, 2009  |  Pubmed ID: 19140717

Es entwickelte sich ein Fluoreszenz-Polarisation-Immunoassay (FPIA) zur quantitativen Bestimmung der 6-Chloronicotinic Säure (6-CNA) mit polyklonalen Antikörpern. Die 6-CNA-Protein (bovine Serum Albumin und Soja Trypsin Inhibitor) konjugiert und Fluoreszein-markierten 6-CNA-Derivat (Tracer) wurden vorbereitet und jeweils als Immunogenen und Tracer, verwendet. Der synthetisierte Tracer wurde gereinigt durch Dünnschichtchromatographie (TLC) und zeigte eine gute Bindung an Antiserum (73/5) die von der immunisierten Kaninchen (Nr. 73) mit 6-CNA-BSA-Konjugat erreicht wurde. Die Nachweisgrenze (10 % Hemmung) von FPIA wurde 4 µg/mL und den IC (50) Wert 32 Microg/mL. Die FPIA zeigte eine Kreuzreaktionen für 5-amino-2-Chloropyridine (60 %), aber keine Kreuzreaktionen für sonstige Pestizide wurde beobachtet. Wiederherstellungen für Spike Apfel, Urin, Boden- und samples (5, 50 und 500 ppm) durchschnittlich zwischen 78,6 +/-8,8 und 114 +/-18 % waren angemessen und in guter Übereinstimmung mit den Beträgen Pfennigabsatz. Obwohl die entwickelten FPIA niedrige Empfindlichkeit besitzt, ist dieser Assay einfacher und schneller als andere analytischen Methoden wie Hochleistungsflüssigkeitschromatographie und Gaschromatographie. Daher konnten die entwickelte FPIA-Methode ein nützliches Werkzeug für Express screening 6-CNA in Landwirtschaft, ökologische und biologische Proben sein.

Einstufige Gleichzeitige Immunchromatographischer Streifen Test Für Multianalysis Ochratoxin a Und Zearalenon

Journal of Microbiology and Biotechnology. Jan, 2009  |  Pubmed ID: 19190413

Individuelle immunchromatographischer Assays (ICG) für Ochratoxin A (OTA) und Zearalenon (ZEA) wurden optimiert und für die schnelle Multianalysis von zwei Mykotoxine in Mais-Proben bei der Entwicklung einer einstufigen gleichzeitige immunchromatographischer Assay (OS-ICG) verwendet. Die Nitrozellulose-Membran von der OS-ICG wurde mit OTA-Rinder Rinderserumalbumin (BSA), ZEA-Eieralbumin (OVA) und Anti-Maus IgG in der OTA-Test, ZEA Test und Kontrolle Zonen, behandelt. Monoklonale Antikörper-Gold-Konjugate (OTA3 MAb-Gold und ZEA2C5 MAb-Gold) wurden auf das konjugierte Pad aufgesprüht. Die visuelle Nachweisgrenzen waren 2,5 und 5 ng/ml für OTA und ZEA, Resepectively, und die Ergebnisse wurden innerhalb von 15 Minuten nach dem Start der Analysis. Eine effiziente, einfache und schnelle Extraktionsmethode mit 30 % MeOH/PBS wurde gegründet und validiert durch die Analyse der Mais-Proben, gespickt mit OTA/ZEA Mischungen (0/0, 5/10, 10/20 und 20/30 µg/kg). Die Cut-Off-Werte von der OS-ICG für die Spike-Mais waren 5 und 10 µg/kg für OTA und ZEA, beziehungsweise. Natürlichen Mais-Proben waren von OS-ICG, direkten Wettbewerb Enzym-Immunassay (DC-ELISA) und HPLC analysiert. Ergebnisse der OS-ICG waren in guter Übereinstimmung mit denjenigen von DC-ELISA und HPLC. Die entwickelte OS-ICG bietet eine schnelle und einfach zu bedienende tragbare Analysesystem und kann als ein praktisches Werkzeug zum qualitativen zur vor-Ort-gleichzeitige Bestimmung von OTA und ZEA in Getreide, Lebensmitteln und landwirtschaftlichen Erzeugnissen in einem analytischen Zyklus verwendet werden.

Entwicklung Und Validierung Eines Gold-Nanopartikel Immunchromatographischer Assay (ICG) Zum Nachweis Von Zearalenon

Journal of Agricultural and Food Chemistry. May, 2009  |  Pubmed ID: 19348422

Ein monoklonaler Antikörper (mAb)-Basis gold-Nanopartikel immunchromatographischer Assay (ICG) für Zearalenon Erkennung entwickelt, optimiert und validiert. Die Nachweisgrenzen der ICG mit entsprechenden Mengen Zearalenon-Rinder-Serum-Albumin und gold-Nanopartikel-mAb, Zearalenon optimiert waren 2,5 ng/mL und 30 μg/kg für die Standardlösung und Spike-Beispiel, beziehungsweise, und eine schwache Kreuzreaktionen für α-Zearalenol und β-Zearalenol wurde beobachtet. Der Test benötigt nur 15 min, Ergebnisse und einen Schritt zum Ausführen von Tests zu erhalten. Bei der Validierung erhaltenen Ergebnisse Spike Mais (10, 20, 30, 50 und 100 μg/kg), und natürlich kontaminierte Mais-Proben durch die ICG waren in guter Übereinstimmung mit denjenigen von direkten Wettbewerb Enzym-Immunassay (DC-ELISA) und Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie (HPLC). Daher könnte die Ergebnisse dieser Studie könnte als Grundlagenforschung für die Entwicklung von Zearalenon-ICG verwendet werden, und die ICG entwickelt eine nützliche vor Ort Screening-Tool für die schnelle Erkennung von Zearalenon in Mais ohne besondere Instrumentierung.

Fumonisins B1 Und B2 Mit Landwirtschaftlichen Erzeugnissen, Die in Südkorea Konsumiert: Exposition

Journal of Food Protection. Feb, 2009  |  Pubmed ID: 19350995

Fumonisine B1 zu vermessen (FB1) und B2 (FB2) in landwirtschaftliche Erzeugnisse in Südkorea konsumiert und bieten Exposition, Boden Proben wurden extrahiert (80 % MeOH), gefiltert (0,2 Microm) und aufgeräumt. Nach Verdampfung, trockene Rückstände rekonstituiert wurden in 50 % MeOH und eine 50-micro1 Aliquote dieses Beispiels wurde gemischt mit 200 micro1 von o-Phthaldialdehyd für Derivatisierung. Die Derivate wurden mit einem Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie-System ausgestattet mit einem Fluoreszenz-Detektor analysiert. Für die Validierung des Verfahrens Erkennung wurden Linearität, Genauigkeit, Präzision und Nachweisgrenze Quantifizierung Grenzwert bestimmt. Validierte Nachweismethode diente dann Fumonisine in weißem Reis, brauner Reis, Gerste, Gerste Tee, Bier, Weizenmehl, Hirse, getrockneter Mais, Maismehl, Mais Tee, Dose Mais, Popcorn und Frühstücksflocken zu vermessen. Retentionszeiten für FB1 und FB2 Standards waren 7 und 18 min, beziehungsweise. Linearität (R2 = 0.99995, 0.99998), Genauigkeit (81.47 zu 108.83 %), Genauigkeit (2,35 auf 5,77), Nachweisgrenze (25 ng/g oder ng/ml) und Quantifizierung Limit (37 ng/g oder ng/ml) angegeben, dass diese Prozedur Fumonisine landwirtschaftlichen Erzeugnissen zu quantifizieren kann. Nur FB1-positiven Proben (5,12 %, drei getrockneten Mais und fünf Proben in Maismehl) wurden bei 90.89-439.67 ng/g gefunden. Nach die Ergebnissen der Umfrage, war eine geschätzte Tagesdosis FB1 und FB2 in Korea 0,087 ng/kg Körpergewicht pro Tag. Diese Ergebnisse zeigen, dass kontinuierliche Überwachung dieser Mykotoxine angemessene Risikobewertung zu schaffen, und die maximal tolerierbare tägliche Aufnahmemenge von Fumonisine in Korea niedriger als die 2 µg/kg festgelegt von der gemeinsamen Food and Agriculture Organisation-World Health Organisation Expert Committee ist.

Gibberella Zeae Chitin Synthase Gene, GzCHS5 Und GzCHS7, Sind Für Die Geflochtenen Wachstum, Bildung Der Fruchtkörper Und Pathogenität Erforderlich

Current Genetics. Aug, 2009  |  Pubmed ID: 19547974

Gibberella Zeae verursacht Ährenfusariose Getreideumschlag und sexuellen Sporen der Pilze spielen eine wichtige Rolle als primäre Inokula. Wir isoliert eine Beschränkung Enzym-vermittelte Integration (REMI) Transformant, ZH431, von G. Zeae mit defekten im Fruchtkörper Bildung und Virulenz. Integration des Vektors REMI ergab Unterbrechung des GzCHS7-Gens, das eine vermeintliche Klasse VII Chitin-Synthase mit hoher Ähnlichkeit mit Fusarium Oxysporum ChsVb codiert. Eine zweite Chitin-Synthase, GzCHS5, befindet sich nebeneinander in einer Kopf an Kopf-Konfiguration mit GzCHS7 und seiner deduzierten Proteinsequenz zeigte Ähnlichkeit mit einer Klasse V-Chitin-Synthase in F. Oxysporum. Weder DeltaGzChs5 noch DeltaGzChs7 Mutanten produzierten Fruchtkörper oder Krankheit auf Gerste Kopf verursacht. Mikroskopische Beobachtung ergab, dass beide Mutanten Ballon-förmigen Hyphen und Intrahyphal Hyphen und die Zellwand-Steifigkeit der Mutanten war schwächer als die der Wildtyp-Stamm. Transkription-Portraits von GzCHS5 und GzCHS7 wurden nicht DeltaGzChs7 und DeltaGzChs5, bzw. verändert darauf hindeutet, dass die Transkription der Gene unabhängig voneinander sind. Unsere Ergebnisse zeigen, dass GzCHS5 und GzCHS7 in G. Zeae für Fruchtkörper Bildung und Pathogenität als auch normale Septen Bildung und geflochtenen Wachstum unverzichtbar sind.

Vergleichende Genomik Zeigt Mobile Pathogenität Chromosomen in Fusarium

Nature. Mar, 2010  |  Pubmed ID: 20237561

Fusarium-Arten gehören zu den wichtigsten phytopathogenen und toxischen Pilzen. Um zu verstehen, die molekularen Grundlagen der Pathogenität der Gattung Fusarium, verglichen wir die Genome der drei phänotypisch vielfältige Arten: Fusarium Graminearum, Fusarium Verticillioides und Fusarium Oxysporum F. SP. Lycopersici. Unsere Analyse ergab Herkunfts-spezifische (LS) genomische Regionen in F. Oxysporum, die vier ganze Chromosomen und Konto für mehr als ein Viertel des Genoms enthalten. LS-Regionen sind reich an Transposonen und Gene mit unterschiedlichen evolutionären Profile, aber mit Bezug zu Pathogenität, bezeichnend für horizontale Akquisition. Experimentell, zeigen wir die Übertragung von zwei LS Chromosomen zwischen Stämmen von F. Oxysporum, Umwandlung von einen nicht-pathogenen Stamm in ein Erreger. Übertragung von LS Chromosomen zwischen sonst genetisch isolierten Stämme erklärt den polyphyletic Ursprung der Wirtsspezifität und die Entstehung von neuen pathogenen Übertragungslinien in F. Oxysporum. Diese Ergebnisse stellen die Entwicklung der pilzartigen Pathogenität in eine neue Perspektive.

Schnellerkennung Von Enterotoxigenic Clostridium Perfringens in Fleisch-Proben Mit Immunomagnetic Trennung Polymerase-Kettenreaktion (IMS-PCR)

Journal of Agricultural and Food Chemistry. Jun, 2010  |  Pubmed ID: 20507064

Schnellerkennung von Enterotoxigenic Clostridium Perfringens in Fleisch Proben wurde mit einer Immunomagnetic Trennung Polymerase-Kettenreaktion (IMS-PCR) erreicht. Zunächst wurde eine spezifische monoklonale Antikörper (mAb), C. Perfringens generiert. Der Antikörper zeigte starke Bindung an C. Perfringens und keine Bindung zu nicht-Clostridien Bakterien, außer eine schwache Kreuzreaktionen auf Staphylococcus Aureus auf der Grundlage der Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA). Dann magnetische Perlen wurden mit der mAb überzogen, und das IMS-PCR-System wurde entwickelt. Mit der optimierten Bedingungen war der IMS-PCR-Assay Aufspüren von so wenig wie 10 Kolonie bilden Einheiten (KBE) / g C. Perfringens Zellen in der Fleisch-Probe innerhalb von 10 Stunden. Der 116 gesammelten Proben (26 Huhn Proben, 20 Rindfleisch Proben, 30 Schweinefleisch Proben 20 Fisch-Proben und 20 Fleischwaren Proben) mit IMS-PCR untersucht, 36 (31 %) waren C. Perfringens-positive Proben und 2 (1,7 %) waren Enterotoxigenic C. Perfringens-positiven Proben. Die IMS-PCR-Ergebnisse gab ein gutes Abkommen mit den Ergebnissen, die durch konventionelle Kultur-Methoden. Im Vergleich zu konventionellen Anzuchtverfahren der IMS-PCR ist eine schnelle und spezifische Methode und mögliche Verwendung als ein Screening-Tool für Enterotoxigenic C. Perfringens in Lebensmittelproben hat.

Kolbenschimmel Nidulans Striatin (StrA) Vermittelt Der Sexuellen Entwicklung Und Lokalisiert, Dem Endoplasmatischen Retikulum

Fungal Genetics and Biology : FG & B. Oct, 2010  |  Pubmed ID: 20601045

Striatin Familie Proteine wurden in Tieren und Pilzen und gelten als Gerüstbau-Proteine. In Pilzen wurden striatin Orthologen sexuelle Entwicklung und Virulenz zu Pflanzen zugeordnet. In dieser Studie gekennzeichnet wir die Funktionen und die Lokalisierung von den striatin Ortholog, StrA, in Aspergillus Nidulans. DeltastrA Stämme zeigte mehrere Mängel in Konidie Keimen, mycelial radial Wachstum, Herstellung von diffusible rote Pigment und Conidiation reduziert. Der auffälligste Phänotyp ist die Produktion von abnorm kleine Kleistothekien, die in Ascosporogenesis defekt sind. Überexpression von StrA Cleistothecium Entwicklung verbessert und erhöht die Produktion von Hülle Zellen in flüssige Kulturen schütteln. Darüber hinaus erzielten wir Stämme, die StrA::eGFP unter der endogenen Projektträger zum Ausdruck zu bringen. Von co-labeling mit FM4-64 und Doppelhybridisierung mit nuklearen lokalisierte StuA (NLS):: DsRed oder CxnA (ein Endoplasmatisches Reticulum-Markierung), wir festgestellt, dass StrA hauptsächlich Endoplasmatisches Reticulum und die Kernhülle lokalisiert.

Mikrobiologische Bewertung Erdbeere Produktion Und Empfehlungen Zur Einrichtung Eines Systems Der Guten Landwirtschaftlichen Praxis

Foodborne Pathogens and Disease. Dec, 2010  |  Pubmed ID: 21121865

Diese Studie mikrobiologische Bewertung im Tunnel Stil Erdbeere Gewächshäuser und Verpackung-Zentren und vorgeschlagenen Empfehlungen für eine gute landwirtschaftliche Praxis für Erdbeer-Produktion zu etablieren. Die Beispiele von Bewässerungswasser, Arbeitnehmer Handschuhe, Ernte Lagerplätze, Boden, Erdbeerblätter und Erdbeeren in Gewächshäusern, Verpacker Handschuhe, Förderbänder, Verpackung Tabellen und Türgriffe Eingänge in Verpackung Zentren wurden gesammelt. Bakterielle Zellzahlen aerobe Platte zählt, coliforme Keime, Escherichia coli, E. Coli O157: H7, Salmonellen, Staphylococcus Aureus, und Bacillus Cereus wurden dann auf entsprechende selektive Medien aufgelistet. Im allgemeinen waren die bakterielle Bevölkerungen ähnliche (p ≥ 0,05) Erdbeere Gewächshäuser sondern nicht Verpacken Häuser. E. Coli und E. Coli O157: H7 waren bei allen Proben negativ und niedrige Salmonellen und B. Cereus erkannt wurden. Hohe Bakterienzelle Grafen von aeroben Platte zählt, coliforme Keime und S. Aureus wurden jedoch in den meisten Proben gefunden. Diese Ergebnisse legen nahe, dass Lebensmittel Sicherheitspraxis in Erdbeere Gewächshäuser und Verpackungen Centers verbessert werden, und die Ergebnisse möglicherweise nützlich, die Einrichtung eines Systems der guten landwirtschaftlichen Praxis für Erdbeer-Produktion.

Bestimmung Von Ochratoxin A in Körnern Von Immuno-Ultrafiltration Und HPLC-Fluoreszenz-Detektion Nach Postcolumn Derivatisierung in Einer Elektrochemischen Zelle

Analytical and Bioanalytical Chemistry. Jun, 2011  |  Pubmed ID: 21461614

Das Papier stellt eine neue Beispielmethode und Bereinigung auf der Grundlage von Immuno-Ultrafiltration für die Analyse von Ochratoxin A in Getreide. Im Gegensatz zu Immunoaffinity Chromatographie, in Immuno-Ultrafiltration sind die Antikörper nicht ruhiggestellt Form verwendet. Ochratoxin A mit ACN/Wasser extrahiert wurde (60/40, V/V), und der Auszug auf die Ultrafiltration Gerät geladen wurde. Nach einem Schritt waschen mit Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung, 0,05 in dem % Tween 20, Ochratoxin A mit MeOH/Essigsäure (99/1, V/V) eluiert wurde. Die Erkennung von Ochratoxin A wurde mit Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie und einem Fluoreszenz-Detektor, gekoppelt mit einer elektrochemischen Zelle (Zelle Coring) durchgeführt. Die elektrochemische Zelle wurde zur Matrix Interferenzen zu beseitigen, indem die brandfördernde Matrix-Verbindungen. Die Methode wurde von wiederholt Analyse Spike Gerste und Roggen Proben sowie einen zertifizierten Weizen-Referenzmaterial überprüft. Einziehungen und Standardabweichungen (1 SD) wurden gefunden, um 71 ± 9 %, 77 ± 12 % bzw. 77 ± 8 % in Weizen, Gerste und Roggen, erforderlich. Nachweisgrenze (S/N = 3) und Quantisierung (S/N = 10) waren entschlossen, 0,4 μg kg(-1) und 1 μg kg(-1) sein. Die Analyse von zertifizierten Referenzmaterialien führte Ochratoxin A Konzentrationen, die im Bereich des Herstellers zugeordnet wurden. Darüber hinaus den Einfluss der elektrochemischen Zelle auf andere weithin verwendete Bereinigung Techniken, nämlich die Immunoaffinity Reinigung und multifunktionale Spalten (Mycosep #229), wurde ausgewertet. Alle Methoden der Sanierung war eine Verbesserung der Qualität Chromatogramm registriert.

Beteiligung Eines Vermeintlichen Antwort-Regulators FgRrg-1 in Osmotischer Stress-Reaktion, Fungizid Widerstand Und Virulenz in Fusarium Graminearum

Molecular Plant Pathology. Jun, 2011  |  Pubmed ID: 21535349

Antwort Regler (RR) Proteine sind Kernelemente des Signalweges hoch-Osmolarität Glycerin (HOG), das spielt eine wichtige Rolle in der Verfilmung von Pilzen auf verschiedenste Umwelteinflüsse. In dieser Studie errichteten wir löschen Mutanten von zwei vermeintliche RR-Genen, FgRRG-1 und FgRRG-2, die Orthologues von Neurospora Crassa RRG-1 und RRG-2, bzw. sind. Der FgRRG-1-Löschung-Mutant (ΔFgRrg1-6) zeigte erhöhten Empfindlichkeit zu Osmotischer Druck von NaCl, KCl, Sorbit oder Glukose vermittelt und Metallkationen, Li(+), Ca(2+) und Mg(2+). Der Mutant war jedoch widerstandsfähiger als übergeordnete Isolat, Dicarboximide und Phenylpyrrole Fungizide. Inokulation Tests zeigten, dass der Mutant ausgestellt Virulenz auf Weizen Kopf abgenommen. Quantitative Real-Time Polymerase Kettenreaktion Proben ergaben, dass die Expression des FgOS-2, die vermeintliche nachgeschaltete gen FgRRG-1, ΔFgRrg1-6 deutlich zurückgegangen war. Alle Mängel wurden durch genetische Ergänzung ΔFgRrg1-6 mit dem Wildtyp-FgRRG-1-Gen wiederhergestellt. Anders als bei der FgRRG-1-Löschung-Mutant, FgRRG-2-Löschung-Mutanten waren morphologisch nicht von Wildtyp Stammvater in Virulenz und Empfindlichkeit der Dicarboximide Fungizide Iprodion und osmotische betont. Diese Ergebnisse zeigen, dass die RR-FgRrg-1 von F. Graminearum den osmotischen Stress-Reaktion, Pathogenität und Empfindlichkeit gegenüber Dicarboximide und Phenylpyrrole Fungiziden und Metallkationen beteiligt ist.

Die Regler Der G-Protein-Signalisierung in Fusarium Verticillioides Vermitteln Differenzielle Host-Erreger Antworten Auf Nicht Lebensfähiges Gegenüber Lebensfähigen Mais-Kernel

Molecular Plant Pathology. Jun, 2011  |  Pubmed ID: 21535353

GBB1, ein Heterotrimeres G-Protein β-Untereinheit gen, wurde ein wichtiger Regulator der Fumonisin herabgewürdigt (FB(1))-Biosynthese in der Mais Erreger Fusarium Verticillioides werden gezeigt. In dieser Studie führten wir Funktionsanalysen von Genen, die vermeintliche RGS (Regler der G-Protein-Signalisierung) Proteine und PhLPs (Phosducin-ähnliche Proteine) in F. Verticillioides codieren. Diese Proteine sind bekanntermaßen Heterotrimeres G-Protein-Aktivität durch die Veränderung der systeminternen Guanosin Adenosintriphosphatase (GTPase) Aktivität, die wiederum die Signalgebung Mechanismen, die Steuern beeinflusst, Pilzbefall, Virulenz und sekundären Stoffwechsel zu regulieren. Unser Ziel war es, zu isolieren und zu charakterisieren gehäuft, die von GBB1 transkriptionelle kontrolliert werden und die Hypothese zu testen, die diese Gene sind direkt FB(1) Verordnung und pilzartige Entwicklung in F. Verticillioides auf Mais-Kernels zugeordnet. Wir zunächst acht Gene (zwei PhLPs und sechs RGSs) im Genom F. Verticillioides identifiziert und eine nachfolgenden transkriptionelle Ausdruck-Studie ergab, dass drei RGS-Gene oben-geregelt in der gbb1-Löschung (Δgbb1)-Mutant wurden und ein RGS-gen oben-geregelt in der Wildtyp wurde. Um ihre Funktion zu charakterisieren, erzielten wir im Knockout-Mutanten mit einer übereinstimmenden Rekombination-Strategie. Wenn auf autoklaviert nicht lebensfähiges Kernels gewachsen, produziert zwei Mutanten (ΔflbA2 und ΔrgsB) deutlich höhere FB(1) im Vergleich zu Wildtyp Stammvater darauf hindeutet, dass die zwei mutierte Gene negative Regler FB(1) Biosynthese sind. ΔflbA2 zeigte auch eine schwere geschweiften Konidien Keimung Muster, Widerspruch zu, die in der Δgbb1-Stamm zu beobachten war. Auffällig ist, wenn diese Mutanten Leben Mais-Kernels gewachsen waren, beobachteten wir kontrastierende FB(1) und Conidiation Phänotypen in Pilz-Mutanten, was stark darauf hindeutet, dass diese G-Protein-Regler haben Einfluss auf die wie F. Verticillioides auf Host/Umweltfaktoren reagiert. Unsere Daten belegen auch, dass pilzartige G-Protein-Signalisierung für die Modulierung der biosynthetischen Ethylen-Stoffwechselweg Mais-Kernels wichtig.

Sol-Gel Immunoaffinity Chromatographie Für Das Bereinigen Von Ochratoxin A Kontaminiert Körner

Journal of Chromatography. A. Oct, 2011  |  Pubmed ID: 21831391

Dieses Papier beschreibt die Anwendung von Sol-Gel Immunoaffinity Spalten für Bereinigen von Ochratoxin ein verunreinigtes Getreide zu ernten. Monoklonale Antikörper für OTA selektive haben in die Poren ein Sol-Gel-Matrix gefangen wurden, um Immunoaffinity Spalten vorzubereiten. Verschiedene Parameter wie Größe des eingeschlossenen Antikörper und Belastungsbedingungen wurden optimiert, um höchste mögliche Wiederherstellungen der OTA zu erhalten. Die Methode ist gefunden worden, ein geeignetes Instrument in Vorbereitung der Probe vor der HPLC-FLD Bestimmung und so selektiv wie herkömmlichen handelsüblichen Immunoaffinity Spalten sein. In die Sanierung der verschiedenen Getreide bedeuten wurden Wiederherstellungen der 82±5 % und 90±6 % 91±3 %, erzielt für Weizen, Gerste und Roggen, jeweils mit Sol-Gel-Spalten mit 1 mg Anti-OTA-Antikörper. Die Nachweisgrenze (Signal-Rausch-Verhältnis, 3) war 0,5 μg/kg und die Grenze der Quantifizierung (Signal-Rausch-Verhältnis, 10) entschlossen, 1 μg/kg betragen. Sol-Gel-Spalten können ohne einen erheblichen Verlust von Recovery 7 mal wiederverwendet werden. Nach 10 Anwendungen die Erholung auf ca. 50 % gesunken.

Ein Typ 2 C-Protein-Phosphatase FgPtc3 Ist Zellwand Integrität, Fettstoffwechsel Und Virulenz in Fusarium Graminearum Beteiligt

PloS One. 2011  |  Pubmed ID: 21980420

Typ 2 C-Protein-Phosphatasen (PP2Cs) spielen eine wichtige Rolle bei der Regulierung von vielen biologischer Prozessen in den Eukaryotes. Derzeit ist wenig bekannt über die Funktionen des PP2Cs in filamentösen Pilzen. Erreger der Weizen Kopf Fäulnis, Fusarium Graminearum, enthält sieben vermeintliche PP2C Gene, FgPTC1,-3, 5,-5R,-6,-7 und -7R. Um die Rollen von diesen PP2Cs zu untersuchen, errichteten wir löschen Mutanten für alle sieben PP2C Gene in dieser Studie. Die FgPTC3 Löschung mutant (ΔFgPtc3-8) ausgestellten reduzierte Antenne Hyphen Bildung und Deoxynivalenol (DON) Produktion, sondern erhöhte Produktion von Konidien. Der Mutant zeigte erhöhte Resistenz gegen osmotischen Stress und Zellwand-schädigenden Arbeitsstoffe auf Kartoffel-Dextrose-Agarplatten. Pathogencity Proben zeigten, dass ΔFgPtc3-8 Blüte Weizen Kopf infizieren kann. Alle Mängel wurden wiederhergestellt, wenn ΔFgPtc3-8 mit dem Wildtyp FgPTC3 gen ergänzt wurde. Außerdem rettete die FgPTC3 teilweise Wachstum Defekt der Hefe PTC1 Löschung Mutanten unter verschiedenen Stressbedingungen. Ultrastrukturelle und histochemische Untersuchungen zeigten, dass die Konidien ΔFgPtc3-8-eine ungewöhnlich hohe Anzahl von großen Lipid Tröpfchen enthalten. Darüber hinaus angesammelt der Mutant eine basale höhere Glycerin als Wildtyp Stammvater. Quantitative Echtzeit-PCR-Assays zeigte, dass basale Ausdruck des FgOS2, FgSLT2 und FgMKK1 in der Mutant war deutlich höher als in der Wildtyp-Stamm. Serielle Analyse der Genexpression in ΔFgPtc3-8 ergab, dass FgPTC3 mit verschiedenen Stoffwechselwegen verknüpft ist. Im Gegensatz zu den FgPTC3-Mutanten die Löschung-Mutanten von FgPTC1, FgPTC5, FgPTC5R, FgPTC6, FgPTC7 oder FgPTC7R nicht aberrante phänotypische Merkmale Wenn auf PDA Medium gewachsen zeigen oder auf Weizen Kopf geimpft. Diese Ergebnisse zeigen, dass FgPtc3 der Schlüssel PP2C ist, die eine wichtige Rolle in einer Vielzahl von zellulären und biologische Funktionen, einschließlich Zellwand Integrität, Lipid und sekundären Stoffwechsel und Virulenz in F. Graminearum spielt.