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Articles by Won-Bo Shim in JoVE
JoVE Immunology and Infection
커널 Bioassays를 사용하여 곰팡이 콜로니, Sporogenesis 및 Mycotoxins 생산의 부량
Plant Pathology and Microbiology, Texas A&M University
종자 - 감염 곰팡이에 의한 시리얼 작물의 참화 더 나은 식물 병원체 상호 작용을 이해하기 위해 많은 연구 노력을하라는 메시지가있다. 실험실 환경에서 씨앗 - 곰팡이 상호 작용을 연구하기 위해, 우리는 곰팡이 복제, 바이오 매스, 그리고 커널 bioassays를 사용하여 진균 독소 오염의 부량위한 강력한 방법을 개발했다.
Other articles by Won-Bo Shim on PubMed
Fusarium Verticillioides에 의해 세균 및 Degermed 옥수수 커널에서 Fumonisin B1 생 합성의 비교
Fusarium verticillioides mycotoxins 옥수수 커널에 fumonisins로 알려진 그룹을 생성 합니다. Fumonisins 다양 한 인간과 동물;에서 mycotoxicoses와 관련 된 따라서, 음식에 그들의 존재는 상당한 안전 문제 이다. 이 해결 하는 연구 fumonisin B1 즉 세균 조직 및 degermed 커널 옥수수 알갱이의 두 가지 구성 요소 (FB1) 생산. F. verticillioides의 성장 식민지 세균 조직과 degermed 커널에 유사 했지만 FB1 생산은 세균 조직에서 보다 degermed 옥수수 커널에 적어도 5 배 더 높은. FUM1, fumonisin polyketide synthase 유전자 표현의 베타-glucuronidase (거 스)와 북부 오 점 분석에 의해 측정 된 FB1 생산으로 동일한 패턴에 따라. FB1 상관 관계 또한 식민지 degermed 커널의 산도에 수 반하는 드롭이 했다. 과정 실험 나타났다 점 조직을 식민지 화 하는 반면 degermed 커널 F. verticillioides와 주사 (pH 4.7 6.4 외피의 10 일 후)에서 시간이 지남에 산성화 되었다 시간 된 (pH 6.5-8.5)에서 같은 기간에 비해 알칼리 성. 산 성 pH 조건 FB1 생산에 도움이 되는 알칼리 성 Ph는 억압 때문에 degermed 커널 산성화 fb1의 증가 사이 관찰 된 상관 관계 FB1 수준에서 관찰 된 차이 대 한 설명을 제공 합니다.
CZK3, Cercospora Zeae Maydis에 지도 키 니 아 제 키 니 아 제 키 니 아 제 체 조절 Cercosporin 생 합성, 곰 팡이 개발 및 병 인
균 Cercospora zeae maydis 옥수수의 회색 잎 반점 원인과 cercosporin, 광범위 한 유기 체에 대 한 독성 활동 photosensitizing perylenequinone을 생성 합니다. 그러나, 약간의 생 합성 통로 또는 cercosporin 생산을 조절 하는 요인에 대 한 알려져 있다. Cercosporin 합성 하는 동안 위로 유전자로 구성 된 cDNA 빼기 라이브러리의 분석 공개 시퀀스 물질 활성화 단백질 (지도) kinases 다른 곰 팡이에 매우 비슷합니다. 전체 길이 게놈 시퀀스의 시퀀싱 및 개념적 번역 표시 우리 CZK3 지정, 유전자, introns 없는 4,119 bp 열려있는 독서 프레임 포함 하 고 매우 유사한 Wis4, Schizosaccharomyces pombe에서 지도 키 니 아 제 키 니 아 제 키 1,373 아미노 산 시퀀스 인코딩합니다. 유전자의 억제 CZK3 표현의 대상된 장애 예측 cercosporin 생 합성에 참여 하 고 cercosporin 생산 폐지. 교란된 돌연변이 agar 미디어 야생 타입 보다 더 빠르게 성장 하지만 conidiation 부족 했다 고 야생 유형별로 선동 직사각형 괴 사 성 병 변 비해 접종된 옥수수 잎에만 작은 chlorotic 반점 elicited. Czk3와 disruptants의 보완성 열 독서 프레임 및 conidiation, 성장 속도, 및 독성 뿐만 아니라 cercosporin를 생산 하는 능력의 야생-타입 레벨 복원 시퀀스 측면. 결과 cercosporin 옥수수 pathogenesis 동안 C. zeae maydis에 독성 요소 이다 하지만 CZK3 장애의 다 면 발현 성 효과 확실 한 결론을 배제 것이 좋습니다.
Aflatoxin 생성의 검출 한국에서 금형 음식과 멀티플렉스 PCR에 의해 곡물 발효
멀티플렉스 PCR 잠재력의 검출에 대 한 적용을 기반으로 분석 결과 한국에서 금형 aflatoxin 생성 발효 식품 및 곡물. 3 유전자, avfA, omtA, 및 버전-1, aflatoxin 생 합성의 주요 효소에 대 한 코딩 aflatoxin 감지 대상 유전자 멀티플렉스 PCR에 사용 했다. Aspergillus flavus, 누 parasiticus, Aspergillus oryzae, Aspergillus 니제르, 누 terreus, 푸른 곰 팡이 expansum, 그리고 Fusarium verticillioides에서 추출 된 DNA는 PCR 템플릿으로 멀티플렉스 PCR 분석 결과의 특이성을 테스트에 사용 됩니다. Aflatoxigenic 금형 A. flavus 및 모든 3 개의 뇌관 쌍 A. parasiticus에서 추출 된 DNA 만으로 긍정적인 결과 달성 했다. 이 결과 직접 경쟁 효소 연결 된 immunosorbent 분석 결과 (DC-애 란)와 aflatoxin 감지 지원 했다. PCR 분석 결과 단지 몇 시간, 저렴 한 비용에 많은 샘플의 신속 하 고 동시 검색을 사용 하면 필요 합니다. 총 22 Meju 샘플, 샘플, 끓인 24 및 상업적으로 한국에서 얻은 10 보 리 샘플을 분석 했다. PCR에 기초를 둔 방법 22 Meju 샘플 1과 10 보 리 샘플 2에 대 한 긍정적인 결과 준 반면 aflatoxin 검출을 위한 DC ELISA 분석 결과 모든 샘플에 대 한 부정적인 결과 했다. 맥 아 추출 물 한 천으로 긍정적인 샘플의 부 화, 후 DC ELISA는 또한 aflatoxin 탐지에 대 한 긍정적인 결과 했다. 모든 끓인 샘플 멀티플렉스 PCR에 의해 부정 되었고 aflatoxin 오염 및 aflatoxin 생성의 존재에 끓인 금형 제안 DC ELISA 분석 결과 아마 낮은.
Malazy, Cercospora Zeae Maydis에 중복 제거, 종의 Transposable 요소
2 곰 팡이 병원 균 Cercospora zeae maydis 그룹 I 및 II, 옥수수의 회색 잎 반점 발생. C. zeae maydis에서 cosmid 라이브러리의 시퀀싱 하는 동안 I 조, 우리 Maggy Magnaporthe grisea에서 transposable 요소를 높은 유사성으로 시퀀스를 발견 했습니다. C. zeae maydis, Malazy, 명명 된 요소 194-기지-쌍 터미널 반복 및 시퀀스 높은 유사성 역전사 및 integrase, 곰 팡이에 집시 같은 retrotransposons에 POL 유전자의 구성 요소에 포함 된. 시퀀스를 다른 POL 유전자 구성 요소, protease와 ribonuclease, 유사성은 Malazy에서 검색 되지 않습니다. 요소의 단일 복사본 북미 나 C. zeae maydis 그룹의 분리 하지만 C. zeae maydis 그룹 2 차 3 개 대륙에서 4 개의 격리 또는 phylogenetically 관련된 종 검색 되지 않았습니다. PCR 및 모든 6 남부 분석에 의해 발견 되었습니다. 역전사 효소 및 integrase의 핵심 도메인의 조각을 포함 된 높은 주파수 그룹 I. t:a에 추가 c:g의 모든 6 개의 격리에 보존 된 정지 codons 전환 가끔 격리에서 보통 두 결과 분리 관련 정지 codons는 동안 침묵 돌연변이 했다. 관련된 종에서 Malazy의 부재 제안 I 및 II C. zeae maydis의 분기를 그룹화 한 후 인수 됐다. 정지 codons 고주파와 요소의 단일 복사본의 존재는 후에 곧 비활성화는 그것 하는 것이 좋습니다. 요소는 액티브 하 고 시퀀스 요소 측면에서 다른 유전자에 대 한 프레임을 찾을 수 없습니다 읽기 때문에 Malazy I 및 II C. zeae maydis 그룹 간의 speciation 또는 유전적 다양성을 선도 하는 차이의 원인이 표시 되지 않습니다.
Pirimiphos-메 틸 및 IC ELISA를 그들의 응용에 대하여 단일 클론 항 체의 개발
곡물 표본, 단일 클론 항 체 기반 간접 경쟁 효소 연결 된 immunosorbent 분석 실험에서에서 메는 organophosphorus (OP) 살충제 pirimiphos-틸 감지 (IC-일 라) 개발 및 최적화. 활성 에스테 르 메서드에서 pirimiphos-메 틸 hapten A는 단일 클론 항 체의 생산을 위한 고 immunogen로 사용할 limpet hemocyanin 열쇠 구멍을 활용 하 고 pirimiphos-메 틸 hapten B ovalbumin 코팅 항 원으로 사용할 활용 했다. 단일 클론 항 체 및 코팅 항 원을 사용 하 여 IC ELISA 개발 되었습니다. 아래는 설립 조건, IC ELISA 보여준 0.07 ng/Ml의 검출 한계와 4.2 ng/Ml의 IC50 최적화. IC 애 란 pirimiphos-에틸을 제외 하 고 다른 OP 농약 무시할 수 분으로 나타났다. 96 %83에서 원거리 아군된 곡물 샘플에서 pirimiphos-메 틸의 복구.
FSR1 Fusarium Verticillioides F. Graminearum에 독성 및 여성 불 임에 대 한 필수적입니다
Fusarium verticillioides (teleomorph Gibberella moniliformis)와 F. graminearum (teleomorph G. zeae) 시리얼 작물에 치명적인 질병을 잘 알려져 있습니다. 그들의 중요성에도 불구 하 고 이러한 호스트 병원 체 상호 작용에 관여 하는 분자 메커니즘에 대 한 우리의 이해는 제한 됩니다. F. verticillioides에 FSR1 로커 스는 옥수수 줄기 썩 어 접종 연구에서 독성의 손실에 대 한 레미 돌연변이 검사에 의해 확인 되었다. FSR1 두 introns 중단 823 codon 열려있는 독서 프레임을 인코딩합니다. Fsr1 단백질 세포 분화 및 ascocarp 개발에서 규제 역할 하는 4 개의 상 단백질-단백질 바인딩 도메인 (caveolin 바인딩 도메인, 코일 코일 구조, calmodulin 바인딩 모티브와 7 WD40 반복) Sordaria macrospora Pro11, multimodular 단백질을 60% 시퀀스 정체성을 공유 합니다. 우리의 데이터 FSR1 F. verticillioides에 독성에 대 한 여성 불 임이 필수적입니다 보여줍니다. 크게, F. graminearum (FgFSR1)에서 FSR1 ortholog 대상된 중단 보 리에는 독성을 감소 및 perithecia 형성 저지. 상호 보완성 실험 유전자 기능 두 Fusarium 종의 보존을 시연 했다. Fsr1은 constitutively, 표현 되 고 우리 Fsr1 신호 전달 경로 위한 발판으로 하 여 독성을 조절 가설. 사용 가능한 게놈 데이터베이스 조사 Fsr1 homologs filamentous 곰 팡이 및 동물 시스템만 신진 효 모 또는 식물에 없는 수에 존재 하는 나타냅니다. 이 유전자 가족의 최대 가능성 분석 잘된 monophyletic clades 곰 팡이 및 동물 관련 된 표시 됩니다.
상 Monomeric G-단백질 GBP1 부정적인 Fumonisin B 생산 Fusarium Verticillioides에 연결 됩니다
요약 Fumonisin B(1) (FB(1))는 mycotoxin 옥수수를 오염 하는 Fusarium verticillioides에 의해 제작. FB(1)은 다양 한 인간과 동물 mycotoxicoses 전세계에 연결 되었습니다. 그 중요성에도 불구 하 고 FB(1) 생 합성 규제 메커니즘에 대 한 우리의 이해는 제한 됩니다. 여기, 우리가 설명 F. verticillioides GBP1, 인코딩 monomeric G 단백질 및 FB(1) 생 합성 하는 역할. GBP1 감소 conidiation와 아무 FB(1) 생 합성 성장 옥수수 커널에서 F. verticillioides fcc1 돌연변이에 업 규제 표현된 시퀀스 태그 (EST)으로 발견 됐다. 시퀀스 분석이 했다 GBP1 개발 및 스트레스 반응에 참여 하는 G 단백질의 DRG와 Obg 서브 클래스로 유사성과 상 368 아미노 산 성 단백질을 인코딩합니다. GBP1 녹아웃 돌연변이 (Deltagbp1) 전시 하 고 정상적인 성장을 하지만 야생-타입 옥수수 커널에 성장 하는 때에 비해 FB(1) 생산 (> 58%) 증가 했다. 야생-타입 GBP1 유전자와 deltagbp1의 보완성 야생-타입의 FB(1) 생산 수준을 복원. 우리의 데이터 표시 GBP1 부정적인 관련 F. verticillioides에 conidiation 하지 FB(1) 생 합성 하지만. GBP1 삭제 업 레 귤 레이 션 키 FB(1) 생 합성 유전자, FUM1 및 FUM8, FB(1)의 생산 Deltagbp1 증가 FUM 유전자의 over-expression 예정 이다 제안 이끌어 냈다.
직접 경쟁 ELISA Aflatoxin B1의 검출을 위한 단일 클론 항 체 기반으로 합니다. ELISA 키트 구성 요소 및 곡물 샘플 응용 프로그램의 안정화
단일 클론 항 체에 따라 직접 경쟁 효소 연결 된 immunosorbent 시험 (ELISA)를 개발 하 고 탐지 aflatoxin B1 (AFB1)에 대 한 최적화와 ELISA 키트는 설계 되었습니다. 이 immunoassay 되었고 매우 특정, 민감한, 급속 한, 간단한, aflatoxin 모니터링에 적합. 일 라에 의해 결정할 수 있는 AFB1 농도 0.1에서 10 microg L(-1)에 배열 했다. IC50 값은 0.62 microg L(-1). 아군된 쌀 샘플에서 평균 94, 113% 사이. HRP-AFB1 어원이 솔루션의 안정성에 다른 시 약의 효과 연구 했다. ELISA에 안정화 효소 추적 프로그램의 성능은 결정 되었고 HRP-AFB(1) 공액의 신선 하 게 준비 된 제어 솔루션의 비교. 결과 0.02 %bsa, 0.1%를 포함 한 미디어 안정화 Kathon CG를 고 0.05 mol L(-1) Tris HCl 버퍼 (pH 7.2)에 0.05 mol L(-1) 칼슘 염화 유지 실내 온도에서 최소 12 개월의 기간에 대 한 1:1000의 희석에 HRP afb1의 활동 첨가물 없이 참조 어원이 솔루션 몇 일 이내에 그 활동 잃은 반면 나타났다. 여러 첨가제는 단일 클론 항 체 (MAb) 폴리스 티 렌 microtitre 접시의 표면에 움직일 수에 미치는 영향에 안정화 테스트 했다. 반면 치료 MAb 코팅 판 2 일 이내에 그 활동 손실 움직이지 MAb, PVA, BSA와 함께 트 레 할 로스, 이러한 물질의 조합을 포함 하는 솔루션 post-coating을 다룰 때는 4도 C에서 최소 4 개월의 활동을 유지 것이 보였다.
Immunochromatography 물 샘플에서 Atrazine의 검출을 위한 콜 로이드 골드-항 체 검사를 사용 하 여
물 샘플에서 atrazine의 신속한 검출을 위한 immunochromatography (ICG) 스트립 테스트 개발 되었다. Atrazine 단일 클론 항 체 (MAb) 특정 복제 hybridoma 세포 (AT 1 m 3)에서 생산 되었고 직접 경쟁 효소 연결 된 immunosorbent 분석 실험 (DC-애 란) 및 ICG 스트립을 개발 하는 데 사용 합니다. MAb 콜 로이드 금 활용 하 고 있는 ICG 스트립의 어원이 패드에 적용 된. ICG 스트립에 대 한 시각적 검출 한계는 3 ng/mL. 이 테스트 결과 및 분석 결과 수행 하는 샘플의 한 단계에 불과 10 분 필요 합니다. 물 샘플 5로 아군의 결과, 10, 20, 및 50 ng/mL/atrazine ICG 스트립에 의해 그와 좋은 계약에 가져온 DC-일 라 하 여. ICG 스트립 충분히 민감하고 다양 한 물 샘플에서 atrazine의 급속 한 검열을 위해 유용 하 게 정확 했다.
곰 팡이 병원 균과 Mycotoxin Fumonisin와 오염의 감소 수준을 증가 저항에 옥수수 9 Lipoxygenase 결과의 중단
국방 및 개발 신호 lipoxygenase (LOX) 통로 통해 생산 공장 oxylipins 기능. 곰 팡이, oxylipins mycotoxin 생 합성 및 sporogenesis의 강력한 레 귤 레이 터는. 이전 연구 공장 9 LOX 파생 지방산 hydroperoxides conidiation와 mycotoxin 생산을 유도 했다. 여기, 포자 및 mycotoxins를 생산 하 고 성공적으로 호스트를 식민지로 옥수수 9 LOX 통로 제작한 oxylipins 병원 체에 필요한 가설을 테스트 했습니다. 옥수수 돌연변이 ZmLOX3, 9 LOX 유전자의 기능 여러 9 LOX 파생 된 hydroperoxides의 감소 수준을 발생의 코딩 시퀀스에 변경자 (mutator) transposon의 삽입에 의해 폐지 되었다 생성 되었습니다. 우리의 가설을 지 원하는 conidiation와 mycotoxin fumonisin B1 Fusarium verticillioides에 의해 생산 대폭 감소 했다 근처 isogenic 와일드 종류에 비해 lox3 돌연변이의 커널에. 마찬가지로 conidia 생산 및 anthracnose의 질병 심각도 Colletotrichum graminicola lox3 돌연변이에 크게 감소 했다으로 인 한 황폐 잎. 또한, lox3 돌연변이 Cochliobolus heterostrophus 및 스토킹 시드는 F. verticillioides와 C. graminicola에 의해 발생으로 인 한 남부 잎 마 름 병에 증가 저항을 표시. 이러한 데이터 강력 하 게 특정 식물 9 LOX isoform 중재 oxylipin 대사는 포자와 mycotoxins의 질병 개발 및 생산을 포함 하 여 곰 팡이 병에 대 한 필요는 것이 좋습니다.
Fusarium Verticillioides GAP1, 인코딩 Putative Glycolipid 고정 표면 단백질, 유전자 Conidiation과 세포 벽 구조 하지만 없습니다 독성에 참여 합니다
Fusarium verticillioides 귀 썩 고 fumonisins로 알려진 mycotoxins를 생산 하는 옥수수의 중요 한 병원 체 이다. 까지, pathogenicity 지식과 fumonisin 규제 F. verticillioides에서 생 합성은 제한 됩니다. 여기, GAP1, 인코딩 glycolipid 고정 표면 (가스) 단백질 가족, 속한 putative 540 aa 단백질 유전자의 분자 특성 표시 됩니다. F. verticillioides GAP1 conidiation 및 B(1) (FB(1)) 생산 fumonisin 문화 조건에 표현된 시퀀스 태그 (EST) upregulated로 확인 되었습니다. GAP1 null 돌연변이 GAM126 (Deltagap1:: HYG) 및 GAG8 (Deltagap1:: 겐) 전시 하 고 제한 된 성장을, 단단한 매체에 그들의 야생-타입 조상 보다 더 많은 공중 균. 아무 결함 사체 질량 또는 filamentous 성장 때 GAM126 및 GAG8 변종 액체 미디어 떨고 조건 아래에서 성장 했다 관찰 했다. 일시 중단 된 조건에서 재배, GAM126 및 GAG8 변종 상당히 적은 conidia 생산과 비교적 밀도가 분기 균 생산. 얼룩 Concanavalin A는 GAP1 삭제 세포 벽 탄수화물 조성/증 착 프로세스 변경 표시. GAP1 삭제 옥수수 모 종 줄기에 FB(1) 또는 F. verticillioides 독성의 생산 수준에는 영향을 주지 않았다. 야생-타입 GAP1 유전자와 gam126의 보완성 복원 conidiation 성장과 세포 벽 이상 고기. 결과 gap1는 성장, 개발 및 conidiation F. verticillioides, 하지만 하지 pathogenicity 또는 FB(1)의 규제와 관련 된 것이 좋습니다.
생산 및 항균 성 Sulfamethazine에 대 한 단일 클로 널과 재조합 항 체의 특성 분석
항균 성 sulfamethazine에 대하여 단일 클론 항 체 (mab)는 준비 하 고 간접 경쟁 효소 연결 된 immunosorbent 분석 결과 (IC-일 라)에 의해 특징입니다. 0.2와 45 ng/ml 범위에서 Sulfamethazine는 mab IC-일 라에 의해 결정할 수 수 있습니다. 인코딩 변수 무거운 체인 및 변수 빛 체인에서 mab cDNAs 파지 디스플레이 기술을 사용 하 여 재조합 항 체 생산 복제 된. 다음 살 균 소 구조와 팬의 3 라운드, sulfamethazine 바인딩 선호도 높은 단일 체인 변수 조각 (scFv) 항 체를 얻은. ELISA 분석 밝혀 그 scFv 항 체 및 부모 mab 비슷하지만 동일 하지는 않습니다 특성을 보였다. ScFv 항 체와 IC-일 라에 의해 IC50 값 4.8 ng/ml, 부모 mab와 1.6 ng/ml와 비교 했다. 존재 우유 매트릭스 분석 실험의 성과 비교 했다; mab 기반 분석 결과 scFv 기반 분석 결과 보다 영향을 적게 했다. Mab 기반 IC-일 라, 여 60 우유 샘플 분석 및 4 개의 샘플 했다 sulfamethazine 긍정적인; 이러한 결과 호의 HPLC에 의해 얻은 그와 상관 했다.
Listeria Monocytogenes와 Immunochromatography 스트립 테스트에의 응용에 대하여 단일 클론 항 체의 생산
L. monocytogenes 고기에서의 신속한 검출을 위한 단일 클론 항 체를 기반으로 immunochromatography (ICG) 스트립 테스트 및 처리 고기 샘플 본이 연구에서 개발 되었다. L. monocytogenes 단일 클론 항 체 (MAb) 특정 복제 hybridoma 세포 (FKLM-3B12-37)에서 생산 되었고 ICG 스트립 테스트를 개발 하는 데 사용 합니다. 항 체 L. monocytogenes 다른 Listeria 종 보다 더 강한 바인딩을 보여 주며 S. 구 균에 약한 cross-reaction는 ELISA에 기반 합니다. ICG 스트립 테스트의 검출 한계는 10(5) 셀/ml. 총에서 116 고기와 고기 처리 샘플 수집 및 ICG 스트립 테스트 및 PCR를 사용 하 여 분석. ICG 스트립 테스트 및 PCR 각각 34와 27 고기 샘플에서 L. monocytogenes 오염 표시. 7 고기 샘플 하지 PCR에 의해 긍정적인 L. monocytogenes 또한 API 키트를 사용 하 여 테스트로 확인 및 Listeria 종에 의해 오염 될 수 발견. 끝으로, ICG는 스트립 테스트 결과 잘 PCR 및 API 키트를 사용 하 여 얻은 그와 함께 동의. 따라서, 개발된 ICG는 L. monocytogenes 다양 한 음식과 농업 제품에 대 한 기본 심사 도구로 사용 가능성 복잡 한 단계 없이 20 분 이내 결과 생성 합니다.
Aflatoxin B1 시판된 식품 및 한국인의 식이 노출의 위험 예측에서의 자연 발생
Aflatoxin B1 (AFB1)은 피할 수 없는 식품 오염 물질. 식품 소비로 인 한 한국인에 afb1의 잠재적인 건강 위험을 평가 하려면 음식에 afb1의 자연 발생을 결정 하 고 식이 노출 AFB1 통해 간 암에 대 한 초과 위험을 추정. 대한민국의 6 개의 다른 지역에서 수집 된 694 음식 샘플 총 자신의 AFB, 내용에 대 한 분석 했다. 694 샘플 1 백 4 주고 긍정적인 효소 연결 된 immunosorbent 분석 결과 (ELISA) 판독 afb1에 대 한 발견 및 고성능 액체 크로마토그래피와 추가 조사 했다. 2 옥수수 샘플, 3 콩 제품, 20 땅콩 샘플, 너트 예제 및 그들의 제품 및 7 향신료를 포함 한 32 개의 샘플 AFB1 오염 될 수 발견 했다 (발병 률 4.6%), 최대 48.6 microg kg(-1). AFB1 28 32 식품의 오염 수준입니다 한국에서 법적 공차 한계 10 microg kg(-1) 아래는. 매일 음식 소비에 데이터에서 afb1의 노출 복용량 6.42 x 10(-7) mg kg(-1) 몸 무게 (bw) day(-1) 추정 했다. Afb1의 식이 섭취의 주요 참여자 장 및 간장, afb1에 총 노출의 91%를 구성 했다. 음식 섭취를 통해 afb1에 노출 된 사람들에 대 한 간 암의 초과 위험이 B 형 간염 음수가 개인에 대 한 10(-6) 및 B 형 간염 양성 개인 1.48 x 10(-4) x 5.78 추정 했다. 이러한 결과 특별 한 배려는 B 형 간염 양성 개인에 afb1의 섭취를 줄일 필요가 좋습니다.
Immunochromatography 스트립 테스트 Aflatoxin B1 곡물에서의 신속 검출을 위한 Nanocolloidal 골드-항 체 프로브를 사용 하 고 피드 샘플의 개발
Nanocolloidal 골드-항 체 검사를 사용 하 여 immunochromatography (ICG) 스트립 테스트 개발 및 aflatoxin b1의 신속한 감지 (AFB1)에 대 한 최적화 된. AFB1 단일 클론 항 체 관련 복제 hybridoma 세포 (AF78)에서 제작, nanocolloidal 골드와 결합 되었고 ICG 스트립 테스트의 어원이 패드에 분산. ICG 스트립 테스트의 시각적 검출 한계는 0.5 ng/ml, 그리고이 방법을 보여준 aflatoxin B2, G1, g 2에 cross-reaction. 총에서 172 곡 식과 급 식된 샘플 수집 했다 고 ICG 스트립 테스트 및 HPLC 분석. 결과 ICG의 스트립 테스트 HPLC에 의해 얻은 그와 좋은 계약을 보였다. 이 결과 ICG 스트립 테스트는 실제 샘플에서 afb1의 결정에 대 한 신속 하 고 비용 효율적인 심사 도구로 사용 가능성 및 식품 및 농산물, 복잡 한 단계 없이 15 분 이내 결과 생성에서 mycotoxin의 예비 심사에 적용 될 수 표시.
Fusarium Verticillioides GBB1, Heterotrimeric G 단백질 베타 소 단위, 인코딩 하는 유전자가 관련 Fumonisin B 생 합성 및 개발 Hyphal 아니지만 곰 팡이 독성
요약: Fusarium verticillioides (Sacc) Nirenberg (teleomorph Gibberella moniliformis Wineland) 원인이 귀에 시드는 고 스토킹 시드는 옥수수 병원 체 이다. 곰 팡이 또한 mycotoxins, fumonisins, 상당한 건강 및 인간과 동물 세계에 대 한 경제 문제가 발생 하는 감염 된 귀에 그룹을 생성 합니다. 날짜 하려면, F. verticillioides에 곰 팡이 독성 및 fumonisin 생 합성 연관 분자 메커니즘에 대 한 우리의 이해는 제한 됩니다. 이 연구에서는 GBB1, heterotrimeric G 단백질의 putative 베타 소 단위 인코딩 유전자 중단 되었다 고 fumonisin 생 합성 및 독성에 미치는 영향 평가 했다. GBB1 삭제 돌연변이 (Deltagbb1) 방사형 성장과 사체 질량에 상당한 차이가 보여주지만, 생산 훨씬 적은 fumonisin B (1) (FB(1))의 야생-타입 조상 보다. HPLC 분석을 Deltagbb1 생산 10 p.p.m. FB(1) 야생-타입 생산 140 p.p.m. 종자 깨지는 옥수수 커널에 성장 했다 하는 동안 보여주었다. 키 플 라 잉 블루 (1) 생 합성 유전자, FUM1 및 deltagbb1에서 fum8의 감소 식 GBB1 FB(1) 규정에 관여 하는 추가 증거를 제공 합니다. 스토킹 부패 독성으로 말은 병 변 길이 의해 측정 가능한 지역으로, Deltagbb1 와일드 타입에 비해 GBB1 F. verticillioides에 독성을 규제 하지 않는 제안에 크게 다른 했다. 발달, deltagbb1의 균 그들이 성장 축 끄고 meander 야생 형 균 달리 세균 튜브 출현에 따라 설립 된 극성의 원래의 축에서 이탈 하지 않습니다. Gbb1와 deltagbb1의 보완성 야생-타입 FB(1) 생산 및 hyphal 성장 복원. 이 연구 결과 heterotrimeric G 단백질 베타 소 단위 FB(1) 생 합성 및 hyphal 성장 하지만 F. verticillioides에 독성 하지의 규칙에 있는 중요 한 역할을 하는 방법을 보여 줍니다.
Gibberella Zeae에서 Acetylglutamate Synthase와 Phosphoribosylamine 글리신 리가 유전자의 기능적 특성 분석
Gibberella zeae (anamorph, Fusarium graminearum)은 세계의 많은 지역에서 곡물 작물의 중요 한 병원 체 이다. 이 연구에서 우리 두 auxotrophic 변종 특징, S4B1279 지정 하 고 S4B3008, G. zeae의 insertional 돌연변이의 컬렉션에서 발견 된 제한 효소 중재 통합 (레미)에 의해 생성 된. 두 돌연변이 종자 전시 사체 성장과 독성의 감소 등이 유성 생식을 폐지 하는 다 면 발현 성 phenotypic 변경. 레미 돌연변이의 분자 분석 S4B1279 auxotrophy acetylglutamate synthase 인코딩 ARG2 유전자의 돌연변이 때문 이다 그리고 s4b3008의 auxotrophy은 phosphoribosylamine 글리신 리가 인코딩 ADE5 유전자의 돌연변이 때문 것으로 나타났습니다. 이후 유전자 장애 및 보완성 연구 확인 기능 a r g 2와 ADE5, 각각, G. zeae에서. 우리의 연구는 공부 뿐 아니라 곰 팡이의 유전적 변화를 수 있도록 두 개의 새로운 선택 가능한 마커 G. zeae 독성 메커니즘에 레미 기술을 사용 하 여의 타당성을 설명 했다.
Fusarium Verticillioides CPP1, 상 단백질 인산 가수분해 효소 2A 촉매 소 단위를 인코딩 하는 유전자의 기능 특성 분석
Fusarium verticillioides 생산 mycotoxin fumonisin B(1) (FB(1)) 옥수수 커널에. 본이 연구에서는 상 단백질 인산 가수분해 효소 유전자 CPP1 F. verticillioides에서 확인 하 고 FB(1) 레 귤 레이 션의 역할을 조사. 이전 작업 CPP1 식 플 라 잉 블루 (1)-억제 유전자 배경에서 높은 것으로 나타났습니다. 따라서, 우리는 CPP1 FB(1) 생산에 부정적인 연관 된 가설을 세웠다. 이 가설을 테스트 하려면 우리 CPP1 녹아웃 돌연변이, PP179, 생성 하 고 FB(1) 생 합성 및 곰 팡이 개발에 대 한 유전자 삭제의 효과 공부 했습니다. PP179 FUM 유전자의 상승 된 표정을 보여 주며 차례로 야생-타입 시 조 보다 더 높은 수준의 FB(1) 생산. 포함 된 다른 중요 한 돌연변이 고기 한 접시, 감소 conidia 발 아 율, 크게 증가 macroconidia 형성과 hyphal 붓기에 방사형 성장 감소. 이러한 고기 CPP1 삭제 인해 직접 했다 확인 우리 야생-타입 CPP1 유전자 PP179 보완. 보충된 스트레인 PPC4 FUM1 식을 보여 주며 야생-타입, 증거를 제공 하 고 그 cpp1와 비슷한 FB(1) 생산은 FB(1) 생 합성에 부정적인 연관. Hyphal 및 macroconidiation 같은 다른 PP179 고기는 야생-타입 시 조 또한 복원 했다 붓기. 또한, 우리 Cpp1 및 보호구 1 단백질은 기능적으로 보존 시연 Neurospora crassa 야생-타입 보호구 1 유전자, F. verticillioides PP179 스트레인 보완. CPP1 삭제의 다 면 발현 성 효과 CPP1 F. verticillioides에 여러 다운스트림 신호 경로와 관련 된 가설을 우리를 이끌었다. 식별 및 다운스트림 Cpp1 상호 작용 단백질의 기능적 특성은 cpp1와 관련 된 복잡 한 규제 메커니즘을 이해 하는 데 필요한.
Heterotrimeric G 단백질 G 알파 및 G 베타 하위 단위 Gibberella Zeae에서의 기능 분석
Homothallic ascomycete 균 Gibberella zeae (anamorph: Fusarium graminearum) 머리를 일으키는 주요 toxigenic 식물 병원 체는 질병 작은 곡물 곡물에 황폐. Mycotoxins deoxynivalenol (돈)와 포즈를 취하는 인간과 동물의 건강을 위협 하는 감염 된 호스트에서 zearalenone (ZEA)를 생산 하는 곰 팡이. 농업 및 독성에 관한 중요성에도 불구 하 고 자사의 성장 기본 분자 메커니즘 개발 및 독성 남아 크게 알려지지 않은. 이러한 메커니즘을 더 잘 이해 하려면 우리는 곰 팡이에 다양 한 세포 발달 반응을 조절 하는 중요 한 신호 경로 제어 알려져 있습니다 G. zeae의 heterotrimeric G 단백질 공부 했다. 3 상 Galpha 소 단위, GzGPA1, GzGPA2 및 GzGPA3, 및 소 단위 Gbeta 1, GzGPB1, F. graminearum 게놈에서 발견 했다. GzGPA1, 누 nidulans Galpha 유전자 fadA homologue 삭제 귀착되 었 다 여성 불 임 및 향상 된 돈과 ZEA 생산, Gzgpa1은 정상적인 성적 재생산 및 독 소 생 합성의 억제에 필요한 제안. 돈 및 ZEA 생산은 또한 Galpha GzGPA1 및 Gbeta GzGPB1 부정적인에 mycotoxin 제어 제안 GzGPB1 돌연변이에 향상 된 생산. GzGPA2, A. nidulans Ganb와 비슷한 Galpha 단백질을 인코딩하는 삭제 감소 pathogenicity 발생 하 고 Gzgpa2는 여러 기능을 암시 하 고 세포 벽에 틴 축적을 증가. 우리의 연구는 식물 성장, 성적 개발, 독 소 생산 및 pathogenicity G. zeae heterotrimeric G 단백질 소 단위 조절 수 있습니다 보여줍니다.
Proteomics와 실시간 양이 많은 PCR을 통해 Fusarium Verticillioides에 Fumonisin 생 합성 관련 유전자의 식별
이 연구에서 우리는 기능 게놈 전략, proteomics 및 양적 실시간 (qRT) 사용-PCR, fumonisin 생산과 균 Fusarium verticillioides에에서 관련 된 유전자에 대 한 우리의 이해를. 이전 학문은 C 타입 인코딩하는 FCC1 유전자의 삭제 fumonisin 생산의 급격 한 감소와 돌연변이 스트레인 (FT536)에서 conidiation를 리드 설명 했다. 우리 연구의 전제는 F. verticillioides 야생-타입의 비교 분석을 하 고 FT536 proteomes 상 단백질과 fumonisin 생 합성에 대 한 중요 한 궁극적으로 해당 유전자를 발표할 예정 이다. 우리는 크게 2 차원 polyacrylamide 젤 전기 이동 법을 통해 야생 형식 또는 ft536에서 upregulated 그리고 이후에 시퀀스 질량 분석을 통해 얻은 단백질 격리. 확인 된 단백질, 예를 들어, carboxypeptidase, laccase, 및 질소 대사 산물 억제 단백질의 homologs 곰 팡이 2 차 대사 및 개발에 관련 된 기능을가지고 알려져 있습니다. 또한 선택 된 단백질에 해당 하는 유전자 시퀀스를 식별 하 고 양적 실시간 (qRT)를 통해 그들의 transcriptional 프로필 조사-PCR 유전자 fumonisin 생 합성 중에 수 반하는 식 패턴을 표시를 식별 합니다. 추가로 FB1 생 합성에서 그들의 역할을 확인 기능 분석의 대상으로이 유전자를 선택할 수 있습니다.
Listeria Monocytogenes는 효소 연결 된 Immunosorbent 분석 실험 및 Immunochromatography 스트립 테스트 사용 하 여 Immunomagnetic 비드 분리와 결합의 질적 검출을 위한 향상 된 인텔리
효소 연결 된 immunosorbent 분석 결과 (ELISA), immunochromatography (ICG) 테스트, 벗기고 immunomagnetic 비드 분리 (IMBS) 시스템을 기반으로 단일 클론 항 체 탐지 및 Listeria monocytogenes 고기 샘플에서의 절연에 개별적으로 개발 되었습니다. 세 가지 방법 Listeria 종 강한 반응과 포도 상 구 균과 약한 반응을 보였다. L. monocytogenes 검색의 신속성을 높이기 위해 IMBS 시스템 (ELISA IMBS와 ICG IMBS)와 일 라와 ICG 스트립 테스트 조합은 조사 했다. 인위적으로 접종 고기의 비교 분석 및 가공된 육류의 샘플, ELISA와 ICG 스트립 농축 시간 24 h 접종된 고기 샘플을 검색 해야 테스트 > 또는 ELISA IMBS와 ICG IMBS 필요한 농축 14 h만 하는 반면 10(2) CFU/10 g X 1 =. 애 란 IMBS, ICG IMBS 및 API 키트에서 수행 하는 자연스럽 게 오염 된 고기 샘플 (30 돼지고기 샘플, 20 쇠고기 샘플, 26 닭 샘플, 20 물고기 샘플 및 20 처리 고기 샘플)의 분석 비슷한 결과 생산. 애 란 IMBS 및 ICG IMBS ELISA 개인과 ICG 스트립 테스트 보다 더 빠른 분석 결과 제공 하 고 고기 샘플 L. monocytogenes (또는 Listeria 종)의 신속 하 고 질적 검출에 적합 한. ICG IMBS L. monocytogenes 고기 샘플 15 h 이내에서 감지 수와 메서드가 약 100 CFU/10 g의 최소 감지 수준 L. monocytogenes 식품 샘플 및 농산물에서 검출을 위한 신속 하 고 비용 효율적인 현장 심사 도구로 가능성이 있다.
Fusarium Verticillioides Fsr1에서에서 코일 코일 단백질 바인딩 모티브 옥수수 줄기 썩 어 독성에 대 한 필수적입니다
Fusarium verticillioides (Sacc) Nirenberg (teleomorph Gibberella moniliformis Wineland) 옥수수 줄기 썩 음 병의 주요 병원 체 중 하나입니다. 그러나, 줄기 썩 음 병의 명확한 이해가 여전히 부족 한. 이전에, 곰 팡이 독성 및 성적 짝짓기에 핵심적인 역할을 하고있다 F. verticillioides FSR1 유전자를 파악. 예측된 Fsr1 단백질에는 여러 단백질 바인딩 도메인, 즉 caveolin 바인딩 도메인, 코일 코일 구조와 N 종점에 calmodulin 바인딩 모티브 C 종점에 WD40 반복 도메인 포함 되어 있습니다. Fsr1 striatin 다양 한 발달 과정을 조절 하는 세포 메커니즘에서 중요 한 역할을 하는 단백질의 가족에 게 상당한 유사성을 공유 합니다. 크게, FSR1 함수 어디 그것 또한 병에 직접적인 역할을 한다 하는 Fusarium graminearum에 보존 됩니다. 이 연구에서 우리의 목표는 직접적으로 fsr1에서 motif(s)를 확인 곰 팡이 독성과 관련 된. 우리는 FSR1 유전자의 돌연변이 버전 FSR1 녹아웃 (Deltafsr1) 변형 보완 하 고 Fsr1 C 터미널 WD40 반복 도메인은 필수 식물 성장 및 옥수수 줄기 썩 어 독성에 대 한 결정. 우리는 또한 FSR1 중재 독성 및 세포 벽 저하 효소 (알파 아 밀라 제, pectinase와 cellulase) 활동 사이의 잠재적인 링크를 조사 했다. N-터미널 지역의 더 특성화 코일 코일 구조 F. verticillioides에 독성을 위해 필수적 이라고 밝혔다. 진 핵 시스템, 단백질 단백질 상호 작용의 다양 한 코일 코일 도메인 관련 하 고 따라서 우리가 가설을 Fsr1 상 Fsr1 바인딩 단백질의 상호작용 다운스트림 유전자 F. verticillioides 독성에 연관 된 신호를 트리거합니다.
GAC1, 인코딩 Putative GTPase 활성화 단백질 유전자 Fusarium Verticillioides에 Bikaverin 생 합성을 조절
Fusarium verticillioides (teleomorph Gibberella moniliformis)는 2 차 대사 산물, fumonisins, bikaverin, fusaric 산 등의 다양 한 생산으로 알려져 있는 ascomycete. 때 곰 팡이 스트레스, 영양 제한 특히 이러한 대사 산물 합성 됩니다. 지금까지 우리 곰 팡이 2 차 대사와 관련 된 복잡 한 규제 프로세스의 이해를 제한 했다. 이 연구에서 우리 레미 (제한 효소 중재 통합) mutagenesis를 사용 하 여 F. verticillioides 돌연변이의 컬렉션을 생성 하 고 확인 된 스트레인, R647, gac1를 지정 하는 유전자에 돌연변이 운반 하는 과정에서. 돌연변이 단백질을 활성화 putative GTPase 인코딩하는 GACI 로커 스에서 bikaverin, gac1는 bikaverin 생 합성 연관 된 부정적인 제안 생산 증가 귀착되 었 다. Wildtype GAC1 유전자와 r647의 보완성의 gac1 돌연변이 bikaverin의 과잉에 대 한 직접 책임을 보여주는 야생-타입 시 조 bikaverin 생산 수준을 복원. 우리는 또한 지역, 글로벌 질소 레 귤 레이 터, 그리고 PKS4, polyketide synthase 인코딩을 인코딩 규제 각각 gac1에 의해 긍정적 그리고 부정적으로 다운스트림 유전자는 설명 했다. 우리의 결과 GAC1 F. verticillioides에 bikaverin 생산을 규제 하는 신호 전달에 중요 한 역할을 한다 것이 좋습니다.
6-Chloronicotinic 산의 신속한 검출을 위한 형광 편광 Immunoassay 개발: Neonicotinoid 살충제의 주요 대사 산물
Polyclonal 항 체를 사용 하 여 6-chloronicotinic 산 (6 월 CNA)을 측정 하는 양적 형광 편광 immunoassay (FPIA) 개발 되었다. 6 CNA 단백질 (소 혈 청 알 부 민 및 콩 trypsin 억제제) conjugates과 파생 상품 6 CNA fluorescein 표시 (추적) 준비 하 고 각각 immunogens 및 추적, 사용 했다. 합성 된 추적 프로그램 얇은 층 크로마토그래피 (TLC)에 의해 정화는 고 원으로 하 좋은 바인딩 (73/5)는 6 CNA BSA 공액으로 면역된 토끼 (제 73)에서 얻은 했다. FPIA의 검출 한계 (10% 억제)는 4 microg/mL, 및 IC(50) 값이 32 microg/mL. FPIA 5-아미노-2-chloropyridine (60%)에 대 한 cross-reaction을 보여주지만, 다른 농약에 대 한 아무 cross-reaction 관찰 되었다. 아군된 애플, 소변, 토양과 물에 대 한 복구 샘플 (5, 50 및 500 ppm) 합당 했다 하 고 좋은 계약 금액에서 아군 평균 8.8 ± 78.6 사이 18% + 114. 개발 된 FPIA는 낮은 감도가지고, 하지만 더 간단 하 고 빠른 고성능 액체 크로마토그래피, 가스 크로마토그래피 등 다른 분석 방법에 비해이 분석 결과가 이다. 따라서, 개발 된 FPIA 메서드 익스프레스 상영 6-CNA, 농업, 환경, 및 생물 학적 샘플에 대 한 유용한 도구 수 있습니다.
1 단계 동시 Immunochromatographic 스트립 Ochratoxin의 Multianalysis에 대 한 테스트를 하 고 Zearalenone
개별 immunochromatographic 분석 실험 (ICG) ochratoxin A (OTA) 및 zearalenone (ZEA) 최적화 되었고 옥수수 샘플 두 mycotoxins의 급속 한 multianalysis에 대 한 1 단계 동시 immunochromatographic 분석 결과 (OS ICG)의 개발에 사용 되는. OS ICG의 니트로 막 오타 소 혈 청 알 부 민 (BSA), ZEA ovalbumin (OVA), 그리고 anti-mouse IgG OTA 테스트, ZEA 테스트 및 제어 영역에 각각 치료 했다. 단일 클론 항 체-골드 conjugates (OTA3 MAb 금색과 ZEA2C5 MAb 금) 어원이 패드에 흩뿌려져 있었다. 시각적 감지 한계 2.5 및 5 ng/ml 오타 및 ZEA, resepectively, 그리고 분석 시작 후 15 분 이내 결과 가져온. 30%를 사용 하 여, 간단 하 고, 효율적이 고 신속 하 게 추출 방법 MeOH/PBS는 설립 및 오타/ZEA 혼합물으로 아군 옥수수 샘플을 분석 하 여 유효성을 검사 (0/0, 5/10, 10/20, 20/30 microg/kg). 아군된 옥수수에 대 한 운영 체제 ICG의 컷오프 값 5와 10 microg/kg ZEA에 대 한 오타를 각각 기록 했다. 천연 옥수수 샘플 OS ICG, 직접 경쟁 효소 연결 된 immunosorbent 분석 실험 (DC-애 란) 및 HPLC로 분석 했다. OS ICG의 결과 DC ELISA와 HPLC에 의해 얻은 그와 좋은 계약에 있었다. 개발 된 OS ICG 급속 한, 사용이 간편 하 고 휴대용 분석 시스템을 제공 하 고 현장 동시 결정 OTA와 ZEA의 시리얼, 음식, 그리고 농산물에 한 분석 주기에서 편리한 질적 도구로 사용할 수 있습니다.
개발 및 Zearalenone의 검출을 위한 금 나노 입자 Immunochromatographic 시험 (ICG)의 유효성을 검사 합니다
단일 클론 항 체 (mAb)-골드 나노 입자 기반된 immunochromatographic 분석 결과 (ICG) zearalenone 검출 되었다 개발에 대 한 최적화, 및 유효성을 검사 합니다. ICG zearalenone 소 혈 청 알 부 민 및 zearalenone 하 금 나노 입자 mAb 적절 한 양의 최적화의 검출 한계는 2.5 ng/mL 그리고 표준 솔루션 및 스파이크 샘플 30 μg/kg 각각, 그리고 α-zearalenol 및 β-zearalenol에 대 한 약한 cross-reaction 관찰 되었다. 시험 결과 및 분석 결과 수행 하려면 1 단계에만 15 분 필요 합니다. 유효성 검사, 아군된 옥수수 (10, 20, 30, 50, 및 100 μg/kg)에서 얻은 결과는 ICG에 의해 자연스럽 게 오염 된 옥수수 샘플 좋은 계약에 직접 경쟁 효소 연결 된 immunosorbent 분석 실험 (DC-애 란)와 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 얻은 했다. 따라서,이 연구에서 얻은 결과 zearalenone ICG의 개발을 위한 기초 연구로 사용 될 수 및 개발 ICG zearalenone 특별 한 계기 없이 옥수수에서의 신속한 검출을 위한 유용한 현장 심사 도구 수 있습니다.
Fumonisins B 1과 B 2를 한국에서 소비 되는 농산물에: 노출 평가
Fumonisins B1 조사 (FB1)와 b 2 (f b 2)에 지상 샘플 추출 된, 농업 제품 한국에서 사용 하 고 노출 평가 제공 (80 %meoh), (0.2 microm), 필터링 및 청소. 후에 증발, 건조 잔류물 재구성 했다 50 %meoh에서, 및이 샘플의 50-micro1 혀 derivatization에 대 한 o-phthaldialdehyde 200 micro1와 함께 혼합 했다. 파생 상품 형광 검출기를 갖춘 고성능 액체 크로마토그래피 시스템으로 분석 했다. 탐지 절차의 유효성 검사, 선형성, 정확도, 정밀도, 검출 한계 및 부 량 한도 결정 했다. 유효성이 검사 된 검색 방법은 다음 흰 쌀, 현미, 보 리, 보 리 차, 맥주, 밀가루, 기장, 말린된 옥수수, 옥수수 가루, 옥수수 차, 통조림된 옥수수, 팝콘, 그리고 아침 시리얼에 fumonisins 조사에 사용 되었다. FB1 기준과 f b 2에 대 한 보존 시간 7과 18 분을 각각 기록 했다. 선형성 (R2 = 0.99995 0.99998), 정확도 (81.47 108.83%), 정밀도 (5.77을 2.35), 검출 한계 (25 ng/g 또는 ng/ml), 및 부 량 제한 (37 ng/g 또는 ng/ml) 나타난이 절차는 농산물에서 fumonisins를 측정 할 수 있습니다. FB1-긍정적인 샘플 (5.12%, 세 가지 말린된 옥수수 샘플 및 옥수수 가루 샘플 5 개)만 90.89 439.67 ng/g에서 발견 됐다. 설문 조사 결과 따르면, fb1와 f b 2 한국에서의 예상된 일일 섭취 0.087 ng/몸 무게 1 kg 이었다. 이러한 결과 적절 한 위험 평가 확립 해야 하는 이러한 mycotoxins를 지속적으로 모니터링 하 고 한국에서 fumonisins의 최대 쾌활 일일 섭취 량은 2 microg/kg 공동 식품 농업 기구 세계 보건 기구 전문가 위원회에 의해 설정 보다 낮은 나타냅니다.
Gibberella Zeae 틴 Synthase 유전자, GzCHS5 및 GzCHS7, Hyphal, Perithecia 형성, 성장과 Pathogenicity 필요 하다
Gibberella zeae Fusarium 머리 황폐 시리얼 작물의 원인과 성 포자 곰 팡이 연극의 기본 inocula로 서 중요 한 역할. 우리는 제한 효소 중재 통합 (레미) transformant, ZH431, perithecia 형성 및 독성에 결함을 가진 G. zeae의 고립. 레미 벡터의 통합 Fusarium oxysporum ChsVb 높은 유사성과 상 클래스 7 세 틴 synthase 인코딩하는 GzCHS7 유전자의 파괴 귀착되 었 다. 두 번째 틴 synthase, GzCHS5, adjacently GzCHS7와 함께 머리 대 머리 구성에 있는 및 추론된 단백질 시퀀스 F. oxysporum에 클래스 V 틴 synthase와 유사성을 보여주었다. Deltagzchs5도 DeltaGzChs7 돌연변이 perithecia 생산 또는 보 리 머리에 질병을 발생 합니다. 현미경 관찰 두 돌연변이 형성 풍선 모양의 균 intrahyphal 균 및 돌연변이 세포 벽 강성 야생-타입 스트레인의 그것 보다는 약한 했다 밝혔다. Gzchs5와 Gzchs7의 전사 프로필 변경 되지 않은 DeltaGzChs7 및 DeltaGzChs5, 각각, 제안 하는 유전자의 전사 규정은 서로 독립적입니다. 우리의 결과 GzCHS5 및 GzCHS7 불가결 perithecia 형성 및 pathogenicity 정상적인 septa 형성 및 hyphal 성장에 대 한 G. zeae에서 보여 줍니다.
비교 유전체학 Fusarium에 모바일 Pathogenicity 염색체를 보여준다
Fusarium 종의 가장 중요 한 phytopathogenic 및 toxigenic 균 류 중입니다. Fusarium 속에서 pathogenicity의 분자 토대를 이해 하려면 우리 세 phenotypically 다양 한 종족의 유전자 비교: Fusarium graminearum, Fusarium verticillioides 및 Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici. 우리의 분석 리니지 관련 (LS) 게놈 영역 F. oxysporum에 있는 4 개의 전체 염색체 그리고 게놈의 계정에 대 한 보다 1/4를 포함 하는 공개. LS 영역은 transposons 그리고 고유한 진화 프로필과 유전자에 풍부 하지만 pathogenicity, 수평 인수를 나타내는 관련 된입니다. 실험적으로, F. oxysporum, 비 병원 성 균 주 병원 체로 변환의 변종 간 두 LS 염색체 전송을 보여 줍니다. LS 염색체의 전송 사이 그렇지 않으면 유전적으로 격리 된 변종 설명 호스트 특이성의 polyphyletic 원점과 F. oxysporum에 새로운 병원 성 혈통의 출현. 이러한 연구 결과 새로운 관점으로 곰 팡이 pathogenicity의 진화를 넣어.
누 Nidulans Striatin (StrA) 성적인 개발을 중재 하 고 Endoplasmic 그물 Localizes
Striatin 가족 동물과 곰 팡이에서 발견 되었습니다 단백질과 비 계 단백질 간주 됩니다. 곰 팡이에서 striatin orthologs 성적 개발 및 식물에 독성을 연관 된. 이 연구에서 우리 기능 및 지역화 누 nidulans에서 striatin ortholog StrA의 특징입니다. deltastrA 변종 conidium 발 아, 사체 방사형 성장, diffusible 붉은 안료의 생산에 여러 오류를 주며 conidiation 감소. 가장 눈에 띄는 형 ascosporogenesis에 결함이 비정상적으로 작은 cleistothecia의 생산 이다.입니다. Stra의 over-expression cleistothecium 개발을 강화 하 고 떨고 액체 문화에서 Hülle 셀의 생산을 증가. 또한, 우리 생 발기인 아래 Stra::egfp을 표현 하는 변종 생성. FM4-64와 co-localization 핵 지역화 된 StuA (NLS)와 co-labeling에 의해:: DsRed 또는 CxnA (endoplasmic 그물 표식), 우리는 StrA 주로 endoplasmic 그물 및 핵 봉투 localizes 결정.
딸기 생산 및 농업 좋습니다 시스템 구축 권장 사항에 미생물 평가
이 연구는 터널 스타일 딸기 온실 및 포장 센터와 딸기 생산을 위한 농업 좋습니다 설립 제안된 권장 사항에서 미생물 평가. 관개 물, 노동자 들의 장갑, 수확 쓰레기통, 토양, 딸기 잎 및 온실에서 딸기, 티켓 장갑, 컨베이어 벨트, 포장 표 및 포장 센터에서 입구의 문 손잡이에서 샘플을 수집 했다. 에어로빅 접시 개수, coliforms, 대장균, 세균성 세포 개수 O157:H7 대장균, 황색 포도상구균, 살 모 넬 라 균 cereus에 적절 한 선택적 미디어 다음 열거 했다. 일반적으로, 세균성 인구 비슷한 (p ≥ 0.05) 딸기 온실 들만 아니라 집 포장 중 했다. 대장균 및 대장균 O157:H7 모든 샘플에서 부정 했다 및 살 모 넬 라 및 B. cereus의 낮은 수준을 발견 되었습니다. 그러나, 에어로빅 플레이트, coliforms, 및 S. 구 균의 높은 세균성 세포 수는 대부분의 샘플에서 발견 됐다. 이러한 결과 딸기 온실 및 포장 센터에서 식품 안전 연습 개선 되어야 결과 딸기 생산을 위한 좋은 농업 실천 시스템의 설립에 유용할 수 있습니다 좋습니다.
Enterotoxigenic Immunomagnetic 분리 중 합 효소 연쇄 반응 (PCR IMS)를 사용 하 여 고기 예제에서 Clostridium Perfringens의 신속한 검출
Enterotoxigenic에서 고기 샘플 Clostridium perfringens의 신속한 검출 immunomagnetic 분리 중 합 효소 연쇄 반응 (PCR IMS)와 함께 달성 했습니다. 첫째, 단일 클론 항 체 (mAb) 관련 C. perfringens에 생성 되었습니다. 항 체 C. perfringens에 강한 바인딩을 보여 주며 효소 연결 된 immunosorbent 분석 실험 (ELISA)을 기반으로 비 Clostridia 박테리아 포도 상 구 균에 약한 cross-reaction 제외 하 고 바인딩이 없습니다. 그리고 자기 구슬 mAb, 코팅 된 IMS PCR 시스템 개발 되었다. 최적화 된 조건으로 IMS PCR 분석 결과 10으로 감지 능력 콜로 니 형성 단위 (CFU) /g 10h 내 고기 샘플에서 C. perfringens 셀의. 116 수집 된 샘플 (26 닭 샘플, 20 쇠고기 샘플, 30 돼지고기 샘플, 20 물고기 샘플 및 20 처리 고기 샘플) IMS PCR 검사, 36 (31%) 했다 C. perfringens-샘플 2 (1.7%) 했다 enterotoxigenic C. perfringens 긍정적인-긍정적인 샘플. IMS PCR 결과 전통적인 문화의 방법으로 얻은 결과와 좋은 계약을 했다. 기존의 문화 방법에 비해 IMS PCR 신속 하 고 구체적인 방법 이며 음식 샘플에서 enterotoxigenic C. perfringens에 대 한 심사 도구로 사용 가능성을 했다.
Fusarium Verticillioides에 신호 전달 G 단백질의 레 귤 레이 터에 차동 호스트 병원 체 응답 중재 가능한 옥수수 커널 대 부실
GBB1, heterotrimeric G-단백질 β 소 단위 유전자 옥수수 병원 체 Fusarium verticillioides에에서 fumonisin B(1) (FB(1)) 생 합성의 주요 레 귤 레이 터로 표시 했다. 이 연구에서 우리는 putative RGS (G-단백질 신호 전달의 레 귤 레이 터) 단백질과 PhLPs (phosducin 같은 단백질) F. verticillioides에 인코딩 하는 유전자의 기능 분석을 수행. 이 단백질, 차례로, 곰 팡이 성장, 독성 및 2 차 대사 제어 신호 메커니즘을 좌우 하는 본질적인 guanosine triphosphatase (GTPase) 활동을 변경 하 여 heterotrimeric G-단백질 활동 규제 알려져 있습니다. 우리의 목표는 분리 하 여 GBB1의 transcriptional 통제는 gene(s) 특징 그리고 이러한 유전자가 직접 가설 테스트 FB(1) 레 귤 레이 션 및 곰 팡이 옥수수 커널에서 F. verticillioides와 관련 된. 우리가 먼저 F. verticillioides 게놈의 8 개의 유전자 (2 개의 PhLPs 및 6 RGSs)을 식별 하 고 후속 transcriptional 식 연구 밝혔다 3 개의 RGS 유전자 했다 최대 gbb1 삭제 (Δgbb1) 돌연변이에 레 귤 레이트 된 하나의 RGS 유전자는 야생 형에서 최대 규제. 그들의 기능 특성, 동종 재조합 전략을 사용 하 여 녹아웃 돌연변이 생성 했습니다. 생성물 미달 커널에 성장 될 때 두 명의 돌연변이 (ΔflbA2 및 ΔrgsB) FB(1) 두 돌연변이 유전자 FB(1) 생 합성의 부정적인 레 귤 레이 터는 제안 야생-타입 시 조에 비해 상당히 높은 수준의 생산. Δflba2는 또한 Δgbb1 긴장에서 관찰 하는 모순 된 심한 곱슬 conidia 발 아 패턴을 보였다. 기 막히게, 이러한 돌연변이 라이브 옥수수 커널에 성장 했다, 우리가 대비 FB(1) 및 conidiation 고기가 G-단백질 레 귤 레이 터 F. verticillioides 호스트/환경 요인에 응답 하는 방법에 영향을 미칠 강력 하 게 암시 하는 곰 팡이 돌연변이에 관찰. 우리의 데이터는 또한 곰 팡이 G-단백질 신호 변조 옥수수 커널에 에틸렌 생 합성 통로 대 한 중요 하다는 증거를 제공 합니다.
솔-젤 Immunoaffinity 착 색 인쇄기 Ochratoxin A의 정리에 대 한 오염 곡물
이 종이 ochratoxin 오염 된 곡물 작물의 청소 솔-젤 immunoaffinity 열에 대 한 응용 프로그램을 설명 합니다. 오타에 대 한 선택적 단일 클론 항 체 immunoaffinity 열 준비를 위해서는 솔-젤 매트릭스의 숨 구멍으로 속 되어 있다. 봉된 항 체 및 로딩 조건 등의 다른 매개 변수는 오타의 가장 높은 가능한 복구를 최적화 했다. 메서드 샘플 준비와 기존의 상용 immunoaffinity 열으로 선택적 HPLC FLD 결정 이전에 적합 한 도구가 될 발견 되었습니다. 다른 곡물의 정리에서 82±5%, 90±6%와 91±3%의 복구 가져온 밀, 보 리 및 호 밀, 각각 1mg 안티 OTA 항 체를 포함 하는 솔-젤 열. 검출 한계 (신호 대 잡음 비율, 3)는 0.5 μg/kg 및 정량화 (신호 대 잡음 비율, 10)의 제한 1 μg/kg으로 결정. 솔-젤 열 복구의 상당한 손실 없이 7 번 다시 사용할 수 있습니다. 10 응용 프로그램 후 회복 약 50% 감소.
인산 가수분해는 유형 2 C 단백질 효소 Fgptc3는 세포 벽 무결성, 지질 대사 및 독성 Fusarium Graminearum에 참여 하고있다
2 C 단백질 가수분해 (PP2Cs) 조절 진핵생물에서 많은 생물 학적 과정에 중요 한 역할을 합니다. 현재, 약간 filamentous 곰 팡이에 PP2Cs 함수에 대 한 알려져 있다. 밀 머리 황폐, Fusarium graminearum의 인과 에이전트 포함 7 상 PP2C 유전자, FgPTC1,-3,-5,-5R,-6,-7과-7R. 이러한 pp2cs의 역할을 조사 하기 위해 우리가이 연구에서 모든 7 개의 PP2C 유전자에 대 한 삭제 돌연변이 생성. FgPTC3 삭제 돌연변이 (ΔFgPtc3-8) 전시 감소 공중 균 형성 deoxynivalenol (돈) 생산 하지만 conidia의 생산을 증가 합니다. 돌연변이 감자 우선 당 한 접시에 삼 투 스트레스와 세포 벽 손상 에이전트에 저항 증가 보였다. Pathogencity 분석 실험 보였다 ΔFgPtc3-8 꽃 밀 머리를 감염 시킬 수 있다. 야생-타입 FgPTC3 유전자와 ΔFgPtc3 8는 보완 하면 복원 된 모든 결함. 또한, Fgptc3는 부분적으로 다양 한 스트레스 조건 하에서 효 모 PTC1 삭제 돌연변이 체의 결함 성장 구조. Ultrastructural 및 조직 분석 ΔFgPtc3 8 conidia 큰 지질 방울의 비정상적으로 높은 숫자를 포함 했다. 또한, 돌연변이 축적 야생-타입 시 조 보다 글리세롤의 높은 기저 수준. 실시간 양이 많은 PCR 분석 실험 FgSLT2 및 FgMKK1 돌연변이에 야생 형 스트레인에 그것 보다는 상당히 높은 FgOS2, 그 기저 표현 했다. ΔFgPtc3-8에서 유전자 발현의 직렬 분석 Fgptc3는 다양 한 대사 경로와 관련 된 공개. FgPTC3 돌연변이 달리 삭제 돌연변이 FgPTC1, FgPTC5, FgPTC5R, FgPTC6, FgPTC7 또는 Fgptc7r의 탈 선 phenotypic 기능 PDA 중간에 성장 될 때 보여주지 않았다 또는 밀 머리에 주사. 이 결과 FgPtc3 키 PP2C 셀룰러 및 생물 학적 기능, F. graminearum에 세포 벽 무결성, 지질 및 보조 신진 대사, 독성 등의 다양 한에서 중요 한 역할을 나타냅니다.
면역 한 및 화학적 셀에서 Postcolumn Derivatisation 후 HPLC 형광 검출에 의해 곡물에서 Ochratoxin A의 결정
종이 시리얼에 ochratoxin A의 분석을 위한 단백질-한에 따라 새로운 샘플 정리 방법을 선물 한다. Immunoaffinity 착 색 인쇄기, 단백질 한 달리 항 체는 비 immobilised 형태로 사용 됩니다. Ochratoxin A = 뉴스/물으로 추출한 (60/40, v/v) 및 추출 한 장치에 로드 된. 인산 염 버퍼 식 염 수로 세척 단계 후 포함 하는 0.05% 트윈 20, ochratoxin A는 MeOH/초의 산 (99/1, v/v)으로 eluted. 고성능 액체 착 색 인쇄기와 화학적 셀 (Coring 셀)에 결합 하는 형광 검출기 ochratoxin A의 검출 실시 됐다. 화학적 셀 매트릭스 화합물을 oxidising 하 여 매트릭스 간섭 제거 하는 데 사용한. 메서드는 인증된 밀 참고 자료로 반복 해 서 분석 아군된 보 리 및 호 밀 샘플에 의해 유효성이 검사 됩니다. 복구 및 표준 편차 (1 SD) 71 ± 9%, 77 ± 12%, 밀, 보 리, 호 밀, 77 ± 8%를 각각 된다는 것을 발견 했다. 검출 한계 (S/N = 3) 및 정량 한계 (S/N = 10) 0.4 μg kg(-1) 1 μg kg(-1) 수 결정 했다. 인증된 참고 자료의 분석 결과 ochratoxin 프로듀서에 의해 할당 된 범위에 있는 농도. 또한 다른 화학적 셀의 효과 널리 정리 기법, 즉 immunoaffinity 정리 하 고 다기능 열 (Mycosep #229)를 사용, 평가 되었다. 모든 정리 방법에 크로마 품질의 개선 등록 되었습니다.
상 응답 조정기 FgRrg-1 삼 투 스트레스 반응과 균 저항 Fusarium Graminearum에 독성에의 참여
응답 레 귤 레이 터 (RR) 단백질은 다양 한 환경 스트레스에 곰 팡이의 적응에 중요 한 역할을 높은 osmolarity 글리세롤 (돼지) 통로의 핵심 요소입니다. 이 연구에서 우리가 건설은 각각 Neurospora crassa RRG 1 orthologues 및 RRG-2 FgRRG-1 및 FgRRG-2, 상 두 RR 유전자의 돌연변이 삭제. FgRRG 1 삭제 돌연변이 (ΔFgRrg1-6) 삼 투 스트레스 NaCl, KCl, sorbitol 또는 포도 당, 중재 및 Li(+), Ca(2+) 및 Mg(2+) 금속 양이온 증가 감도 보였다. 그러나, 돌연변이, dicarboximide 및 phenylpyrrole fungicides를 부모 분리 보다는 저항 했다. 접종 시험 전시 돌연변이 밀 머리에 독성 감소 했다. 정량 실시간 중 합 효소 연쇄 반응 분석 실험 표시 ΔFgRrg1 6에서 FgOS-2, FgRRG-1의 상 하류 유전자의 표현을 크게 감소 했다. ΔFgRrg1-6 야생-타입 FgRRG-1 유전자의 유전 보완성으로 복원 된 모든 결함. 다른 FgRRG 1 삭제 돌연변이, FgRRG 2 삭제 돌연변이 하지 형태학 dicarboximide 균 iprodione 삼 투 스트레스를 독성 및 감도 야생-타입 조상에서 구별할 수 있었다. 이러한 결과 F. graminearum RR FgRrg 1 삼 투 스트레스 반응, pathogenicity 및 dicarboximide 및 phenylpyrrole fungicides과 금속 양이온에 감도에 관여를 나타냅니다.
