초기 배아를 형성 morphogenetic 프로세스를 이해하는 데 핵심 고해상도로 이미지 세포 수있는 능력입니다. 우리는 여기서 세포막 타겟 그린 형광 단백질로 전체 zebrafish의 배아에서 세포의 단일 세포 또는 작은 클러스터를 라벨에 대한 기술을 설명합니다.
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이 논문에서
정오 공지
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요약
초록
초기 척추의 배아를 형성 morphogenetic 프로세스를 이해하는 데 핵심 고해상도로 이미지 세포 수있는 능력입니다. zebrafish 배아, 모자이크 표현의 플라스미드 DNA 결과의 주입이 단일 세포 또는 세포의 작은 클러스터의 시각화에 대한 허용에
프로토콜
1.Microinjection
- 희석 플라스미드 인코딩 막 타겟 그린 형광 단백질 (mGFP, 리차드 할랜드의 호의) 40 NG / ML의 농도. DNA는 Qiagen의 맥시 준비 키트를 사용하여 정화 플라스미드 (리차드 할랜드의 mGFP/PCS2 +, 호의)를 linearizing으로 준비가되어 있습니다. 솔루션에 페놀 레드 (10분의 1 총 볼륨을 희석)의 추가는 솔루션을 시각화하는 것이 좋습니다. 얼음 DNA 솔루션을 유지.
- 졸업 슬라이드에 바늘을 정렬하고 부드럽게 깨끗한 레이저를 사용하여 직경이 1μm는 바늘의 일부를 도청하여, stereomicroscope에서 주사 바늘을 (CAT 번호 NA - GD - 1 Narishinge 과학에서 90mm 유리 모세관) 보정 블레이드 (적절한 크기의 팁을 얻기 위해).
- 알려진 볼륨 (2nl)을 삽입하기 위해 바늘을 보정하기 위해 microinjection 장치에 바늘을 연결 (PCI 100 Microinjector, 하버드 장치)와 앞에는 조각에 위치 페놀 레드와 물이 들어있는 솔루션 0.5μl으로 바늘을 기입 파라핀니다. 솔루션은 발을 페달을 사용하여 적절하게 사용하실 수 있습니다. 7 KPa로 압력을 설정하고 그것이 솔루션의 0.5μl 특면 250 페달 소요 있도록 (10msec 30m....
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토론
결론적으로, 분류 기술은 zebrafish 배아에 morphogenetic 프로세스의 단일 세포 분석을위한 수 있도록 여기에 설명되어 있습니다. 이 프로토콜의 주요 강조는 유비 쿼터스 모터의 제어하에 mGFP을 사용하여 신경 튜브의 영상 표시 전지 방식에 있습니다. 이 과도 표현 분석 독자의 추가 어플 리케이션을위한 안데르센 외의 최근 논문을 참조해야합니다. 3.
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
이 작품은 R. 브루 스터 (1R01GM085290 - 01A1)에게 수여 NIH 교부금에 의해 지원되었다.
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재료
솔루션
- 행크의 주식 # 1 : 8.0 g NaCl, 100 ML DD H 2 O에서 0.4 g KCl
- 행크의 주식 # 2 : 0.358 g 나 2 HPO 4 무수, 100 ML ddH 2 O에서 0.60 g KH 2 PO 4
- 행크의 주식 # 4 : 50 ML ddH 2 O에서 0.72 g CaCl 2
- 행크의 주식 # 5 : 50 ML DD H 2 O에서 1.23 g MgSO 4 x7H 2 O
- 1 X 인산 버퍼 : 0.8 % NaCl, 0.02 %의 KCl, 0.02 M PO4, 산도 7.3
- 차단 솔루션 : 2퍼센트 정상 염소 혈청, 1 % 소 혈청 알부민 (BSA), 1 %의 dimethysulfoxide (DMSO)
참고문헌
- Nüsslein-Volhard, C., Dahm, R. Zebrafish Practical approach series. , Oxford University press. (2002).
- Hong, E., Brewster, R. N-cadherin is required for the polarized cell behaviors that drive neurulation in the zebrafish. Development. 133, 3895-3905 (2006).
- Andersen, E., Asuri, N., Clay, M., Halloran, M.
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재인쇄 및 허가
정오
Formal Correction: Erratum: Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain
Posted by JoVE Editors on 9/16/2010. Citeable Link.
A correction was made to Labeling and Imaging Cells in the Zebrafish Hindbrain. There was an error in the authors affiliations. The authors have been corrected to:
Pradeepa Jayachandran1, Elim Hong2, Rachel Brewster1
1Department of Biological Sciences, University of Maryland, Baltimore County
2Center for Neuroscience, Children's National Medical Center
instead of:
Pradeepa Jayachandran1, Elim Hong2, Rachel Brewster2
1Center for Neuroscience, Children's National Medical Center
2Department of Biological Sciences, University of Maryland Baltimore County
