Summary
Periprotetisk ledinfektion (PJI) orsakad av farliga patogener är vanligt inom klinisk ortopedi. Befintliga djurmodeller kan inte exakt simulera den verkliga situationen för PJI. Här etablerade vi en Candida albicans biofilm-associerad PJI-musmodell för att forska och utveckla nya terapier för PJI.
Abstract
Periprotetisk ledinfektion (PJI) är en av de vanligaste infektionerna som orsakas av Candida albicans (C. albicans), vilket i allt högre grad oroar kirurger och forskare. I allmänhet bildas biofilmer som kan skydda C. albicans från antibiotika och immunclearance på infektionsstället. Kirurgi som involverar avlägsnande av det infekterade implantatet, debridering, antimikrobiell behandling och reimplantation är guldstandarden för behandling av PJI. Att etablera PJI-modeller för djur är därför av stor betydelse för forskning och utveckling av nya läkemedel eller terapier för PJI. I denna studie sattes en slät nickel-titanlegeringstråd, ett allmänt använt implantat på ortopediska kliniker, in i lårbensleden på en C57BL/6-mus innan C. albicans inokulerades i ledhålan längs tråden. Efter 14 dagar observerades mogna och tjocka biofilmer på ytan av implantat under ett svepande elektroniskt mikroskop (SEM). En signifikant reducerad bentrabekel hittades vid H&E-färgning av de infekterade ledproverna. Sammanfattningsvis etablerades en PJI-modell för möss med fördelarna med enkel användning, hög framgångsrik hastighet, hög repeterbarhet och hög klinisk korrelation. Detta förväntas bli en viktig modell för kliniska studier av C. albicans biofilmrelaterade PJI-prevention.
Introduction
Candida albicans (C. albicans) finns i många delar av människokroppen1, som också är den vanligaste opportunistiska patogenen som orsakar livshotande invasiva svampinfektioner, särskilt hos immunsupprimerade patienter 2,3. C. albicans kan transformeras mellan jäst- och myceltillstånd som en polymorf svamp. Myceltillståndet uppvisar högre virulens, starkare vidhäftning och invasion av celler och vävnader 4,5. Dessutom kan C. albicans bilda biofilmer på ytorna av biomedicinska material som proteser, katetrar och stentar 1,6,7. Den täta tredimensionella strukturen av biofilmer begränsar infiltrationen av svampdödande läkemedel, uttrycker läkemedelsresistenta gener och nedreglerar svampcellernas metabolism för att motstå immunsystemets eliminering 6,7. Därför är biofilmsrelaterade infektioner ganska utmanande på kliniker8.
Staphylococcus aureus, koagulasnegativa stafylokocker och enterobacter är de viktigaste patogenerna som orsakar PJI9. Även om incidensen av svamp-PJI är relativt låg (cirka 1 %)10, är behandlingskostnaden för svamp-PJI högre11, behandlingscykeln är längre11 och behandlingsframgången är lägre10 än bakteriell PJI. Under de senaste åren har förekomsten av svamp PJI ökat år för år10. Candida PJI står för 77%-84% av svamp PJI10,12, och C. albicans är den vanligaste i Candida (54%). Därför behöver svamp-PJI studeras.
För närvarande behandlas PJI via revisionskirurgi genom att (1) ta bort det infekterade implantatet, (2) debridering, (3) antimikrobiell behandling och (4) reimplantation. Efter noggrann debridering placeras ett antibiotikum innehållande bencement och patienten behandlas med antibiotika systemiskt i mer än 6 veckor för att effektivt kontrollera infektionen innan ett nytt implantat sätts in13. Denna metod kan dock inte helt eliminera patogener i vävnader, och återkommande infektioner som behandlas med långvarig antimikrobiell behandling kommer med stor sannolikhet att utvecklas i läkemedelsresistenta stammar 14,15,16.
Att etablera djurmodeller av PJI är viktigt för forskning och utveckling av nya läkemedel eller terapier för PJI. Vid utvecklingen av PJI bildas stora döda utrymmen runt protesen, vilket leder till bildandet av hematom, vilket ytterligare blockerar blodtillförseln till de omgivande vävnaderna och försämrar effekten av antibiotika11,15. På grund av svårigheten att efterlikna protesens omgivande miljö kan traditionella djurmodeller inte exakt simulera den faktiska situationen för PJI17,18.
I denna artikel konstruerades en C. albicans biofilm-associerad PJI-modell i möss genom att använda en kliniskt allmänt använd titan-nickeltråd för att simulera ledimplantat19,20. Denna PJI-modell uppvisar fördelarna med enkel användning, hög framgångsrik hastighet, hög repeterbarhet och hög klinisk korrelation. Det förväntas bli en viktig modell för att studera prevention och behandling av C. albicans biofilmrelaterade PJI.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Djuren köptes från Xi'an Jiaotong University. Alla djurförsöksprocedurer godkändes av Institutional Animal Ethical Committee vid Xi'an Jiaotong University (godkännandenummer: SCXK [Shaanxi] 2021-103). Mössen hölls i en vecka med 5 möss per bur. De fick fri tillgång till mat och vatten. Djuren hölls i rumstemperatur (RT; 24 °C ± 1 °C) och ljus/mörker (12 timmar/12 timmar) innan studien utfördes.
1. Förberedelse av buffert och utrustning
- C. albicans cellodling
- Inokulera en monoklonal koloni av C. albicans (SC5314) från ett plattmedium med jästextrakt peptondextros (YPD) med en inokuleringsslinga i 5 ml flytande YPD-medium (YPD + 50 μg/ml karbenicillin).
- Skaka därefter cellerna av C. albicans med en hastighet av 220 varv per minut vid 30 °C över natten.
- Centrifugera suspensionen vid 400 x g i 5 minuter vid RT. Återsuspendera C. albicans-cellerna i normal koksaltlösning och späd koncentrationen av celler till 1 x 106 celler/ml genom visuell justering av grumligheten så att den är densamma som en 0,5 McFarland.
- Beredning av normal koksaltlösning
- Väg upp 0,9 g natriumklorid och lös upp i 100 ml avjoniserat vatten för att bereda 0,9 % normal saltlösning.
- Förberedelse av kirurgiska instrument
- Autoklav (121 °C, 30 min) de kirurgiska instrumenten (sax, pincett, hemostatisk pincett, nålhållare, suturnålar) och titan-nickellegeringstråd (ca 0.5 mm i diameter) före användning.
2. Etablering av mus PJI-modell
- Dela slumpmässigt upp 30 C57BL/6-möss (hane, 15-20 g) i 3 grupper (10 möss/grupp), nämligen kontrollgrupp, blankimplantatgrupp (titan-nickeltrådimplantation utan C. albicans-infektion ) och PJI-grupp (titan-nickeltrådimplantation med C. albicans-infektion ).
- Bedöva mössen med 1-4% isofluraninhalation innan du tar bort håret på vänster bakben och desinficerar det med jod. Förlusten av den rätande reflexen och inget svar på tåstimuleringen bekräftar anestesidjupet. Under bedövning, applicera oftalmisk salva på båda ögonen för att förhindra torrhet i hornhinnan och för att fylla på värmen under operation och återhämtning.
- För mössen i kontrollgruppen ska ingen behandling ges. Ge dem fri tillgång till vatten och mat.
- För mössen i den tomma implantatgruppen och PJI-gruppen, gör ett 5 mm längsgående snitt på knäet på varje vänster bakben med ett #10-blad eller en steril rakhyvel för att exponera lederna.
- Gör ett 5 mm långt hål i lårbenskanalen genom att föra in en steril spruta (26 G) nål.
- Sätt in en slät nickel-titanlegeringstråd (0.5 mm i diameter, 5 mm i längd) i hålet innan du klipper med sax (Figur 1).
- För mössen i den tomma implantatgruppen, tillsätt 2 μl YPD-medium längs nickel-titanlegeringstråden droppe för droppe innan du stänger såret lager för lager med en nylonsutur (0,15 mm diameter).
- För mössen i PJI-gruppen, inokulera 2 μL C. albicans-celler (1 × 106 celler/ml) i mössens ledutrymme längs nickel-titanlegeringstråden droppe för droppe innan såret stängs lager för lager med en nylonsutur.
- Inhysa mössen med fri tillgång till vatten och mat i 14 dagar. Administrera meloxikam som subkutan injektion (4 mg/kg) var 24:e timme i upp till 3 dagar.
- Efter 14 dagar bedövas mössen med 3 % isofluran innan mössen avlivas genom cervikal luxation.
3. Utvärdering av PJI-modellen
- Utvärdering av infektioner i större organ
- Samla in njurar, lever och mjälte från mössen efter avlivning.
- Tillsätt 500 μl steril koksaltlösning i varje organ och mal vävnaderna på en homogenisator vid 4 °C.
- Tillsätt 100 μl av det homogenat som beretts i steg 3.1.2 till en YPD-platta innan du sprider ut det jämnt med en böjd stav.
- Placera YPD-plattorna upp och ner i en 37 °C inkubator i 48 timmar.
- Observera och räkna antalet kolonier visuellt.
- Observation av C. albicans och biofilmer på implantaten
- Klipp försiktigt huden över mössens led med en sax innan du samlar ihop implantatet med en pincett.
- Förvara implantaten nedsänkta i en 2,5 % glutaraldehydlösning för fixering vid 4 °C i 48 timmar.
- Skölj implantaten med steril PBS tre gånger innan du sänker ner dem i 1% osmiumsyralösning i 3 timmar.
- Skölj implantaten med steril PBS tre gånger innan du sänker ner dem i 50 %, 70 %, 80 %, 90 % och 100 % etanollösningar i 15 minuter för uttorkning.
- Håll implantaten nedsänkta i tert-butanol i 30 minuter tre gånger innan implantaten frystorkas.
- Fäst implantatproverna på provsteget, sputterbelägg implantatet med guld (10 nm beläggning) och observera det under ett svepande elektroniskt mikroskop (SEM) under högvakuum och 1.5 kV.
- Patologisk analys av lårbensvävnaden
- Samla in lårbensvävnaderna med en sax efter att ha avlivat mössen.
- Sänk ned lårbensvävnaden i 4 % paraformaldehydlösning för fixering vid 4 °C i 48 timmar.
- Placera lårbensvävnaderna i 10 % formalin i 1 vecka.
- Torka lårbensvävnaderna genom att sänka ner dem i 50 %, 70 %, 80 %, 90 % respektive 100 % etanollösningar i 15 minuter.
- Bädda in de uttorkade lårbensvävnaderna i paraffin innan vävnaderna delas upp i 4 μm-prover med hjälp av en mikrotom.
- Färga lårbenssnitten med hematoxylin och eosin genom att följa ett standardprotokoll före patologisk analys21.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Överföring av proverna till ett plattmedium och räkning av kolonier efter inkubation över natten används vanligtvis för att bedöma den lokala patogenbelastningen nära lesionen 22,23. I vår studie var den mikrobiella odlingen av lever-, njur- och mjältprover negativ, vilket tyder på att modellen i denna studie endast ledde till lokal infektion istället för systemisk infektion hos mössen23.
SEM-bilderna av implantaten visas i figur 2. Inga C. albicans fastnade eller koloniserades på ytan av nickel-titanlegeringstråden i den tomma implantatgruppen. Emellertid observerades mogen och tjock biofilm på ytan av nickel-titanlegeringstråd i PJI-gruppen, vilket indikerar den framgångsrika konstruktionen av C. albicans biofilmrelaterade PJI-modell hos möss 14 dagar efter operationen23.
H&E-färgningen av lårbensvävnader visas i figur 3. En tydlig och fullständig bentrabekulär struktur observerades i kontrollgruppen, medan ett fåtal bentrabekulära vävnadsdefekter i lårbensvävnaden kunde ses i gruppen med blankimplantat (Figur 3, gula pilar). I PJI-gruppen minskade antalet bentrabekler signifikant23. Dessa resultat indikerar att den biofilmassocierade PJI-modellen med C. albicans i möss framgångsrikt etablerades med en signifikant patologisk skada på lårbensvävnaden.
Figur 1: Implantationsprocedur. Den röda fyrkanten i den vänstra panelen visar operationsstället där den släta nickel-titanlegeringstråden sätts in. Panelen till höger visar en del av lårbenet (röd cirkel) med nickeltråden. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 2: SEM-bilder av implantatets yta i blank- och PJI-grupperna. Förstoringar 1000x (skalstreck = 500 μm) och 5000x (skalstreck = 100 μm) visas som representativa bilder. Denna siffra har modifierats med tillstånd från Mo et al.23. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 3: H&E-färgning av lårbensvävnad. Representativa H&E-bilder av implantatet, PJI-modellen och kontrollgrupperna visas i figuren. Kontrollgruppen uppvisar en tydlig och komplett bentrabekulär struktur. Den blanka implantatgruppen uppvisade några defekter i bentrabekulär vävnad i lårbensvävnaden (gula pilar). Antalet bentrabekler minskade dock i PJI-gruppen. Förstoringarna som visas är 200x (skalstreck = 150 μm) och 400x (skalstreck = 75 μm). Denna siffra har modifierats med tillstånd från Mo et al.23. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Infektionen som orsakas av kontaminering av kirurgiska instrument eller den kirurgiska miljön under operationen är den främsta orsaken till de flesta implantatinfektioner 24,25,26,27. Därför konstruerades en biofilm-relaterad PJI-modell från möss i denna studie. Jämfört med den traditionella PJI-modellen där sterila partiklar av rostfritt stål suspenderade i saltlösning användes som implantat, användes en nickel-titanlegeringstråd, ett vanligt använt implantatmaterial, i denna studie för att simulera kontakten mellan C. albicans, implantatmaterial och benet, vilket är mer likt situationen på kliniker.
PJI-modellen som beskrivs i den här artikeln kan perfekt simulera den fysiologiska miljön för PJI på kliniker. Denna modell kan endast användas för att studera infektionen under implantationen istället för senare blodburen infektion.
C. albicans kan inokuleras på två sätt. Den ena är att direkt inokulera C. albicans på implantatstället under operation28, och den andra är att odla implantaten med C. albicans under en tidsperiod så att mogna biofilmer bildas på implantatets yta före kirurgisk implantation29. Den förstnämnda metoden valdes i denna studie på grund av dess exakta inokuleringsantal patogener, vilket resulterade i minimala skillnader mellan grupperna och en mer objektiv utvärdering av efterföljande behandlingar. Dessutom är den förstnämnda metoden mer förenlig med den kliniska situationen.
I detta protokoll är insättningen av implantatet svår att utföra. Operatören måste öva flera gånger för att säkerställa att implantatet sätts in i leden istället för subkutant eller intramuskulärt. Dessutom är inokuleringsantalet av C. albicans avgörande för repeterbarheten av PJI-modellen. C. albicans bör blandas noggrant via virvel för att säkerställa att inokuleringsnumret är korrekt. Dessutom bör C. albicans tillsättas längs legeringstråden för att simulera infektionsvägen i den kliniska situationen.
Biofilmer kunde detekteras 7 dagar efter bakteriell infektion, varefter biofilmer gradvis ökade och nådde en platå den 14:e dagen30. Därför inspekterades framgången för den etablerade PJI-modellen den 14:e dagen. Koloniseringen av C. albicans och bildandet av biofilm på implantatets yta inspekterades med SEM. Vävnadsskadorna runt implantatet orsakade av lokal infektion utvärderades genom patologisk analys efter H&E-färgning. Studier har visat att periprotetisk osteolys är en viktig egenskap på grund av PJI31. Således är dessa indikatorer också viktiga vid utvärdering av terapeutiska metoder för förebyggande och behandling av PJI32.
Mikrobiell odling används ofta för att upptäcka mikrobiell infektion på kliniker och laboratorier. Därför utfördes i denna studie den mikrobiella odlingen av implantatet, vävnader runt implantat, lever och andra vitala organ. För implantatet tillämpades ultraljud för att ta bort C. albicans fäst vid ytan av titan-nickellegering tråd. Därefter berikades C. albicans genom centrifugering före mikrobiell odling. Ett negativt resultat hittades dock, vilket inte stämde överens med SEM-resultatet (figur 2). SEM-resultatet visade att C. albicans fäste på ytan av titan-nickellegeringstråd. Därför var resultatet av mikrobiell odling ett falskt negativt, vilket kan hänföras till den täta vidhäftningen av C. albicans till titan-nickellegeringstråd; ultraljud kunde inte framgångsrikt exfoliera C. albicans från implantatet. På samma sätt var den mikrobiella odlingen av vävnaderna runt implantat och vitala organ också negativ. Det finns två möjliga orsaker: (1) Antalet C. albicans som inokulerades i denna studie var endast 2000 CFU, vilket kan vara för litet för att invadera den omgivande vävnaden och systemet under experimentperioden; (2) Metoden för extraktion och avskiljning av patogener från vävnader är låg. En tidigare publicerad rapport tyder på att mikrobiell odling lätt kan visa falskt negativa resultat och fördröjda behandlingar33. Grocott-Gomori färgning kan användas för att bestämma bildandet av hyfer i ben och led32. Det kan också vara till hjälp att öka inokulummängden, förlänga experimentets varaktighet eller hålla mössen i ett immunsupprimerat tillståndföre operation. Det bör dock noteras att långvarig infektion kan leda till djup infektion eller till och med systemisk infektion. Försöksperioden bör därför utformas i enlighet med det specifika syftet.
Sammanfattningsvis skapade denna studie en framgångsrik musmodell av C. albicans biofilm-associerade PJI, vilket kan vara av stor betydelse för forskning om förebyggande och behandling av C. albicans biofilm-associerade PIJ.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna förklarar att de inte har några kända konkurrerande ekonomiska intressen eller personliga relationer som skulle kunna ha påverkat det arbete som redovisas i denna uppsats.
Acknowledgments
Vi är tacksamma för det ekonomiska stödet från Natural Science Foundation of Shaanxi Province (anslagsnummer 2021SF-118) och National Natural Science Foundation of China (anslagsnummer 81973409, 82204631).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.5 Mactutrius turbidibris | Shanghai Lujing Technology Co., Ltd | 5106063 | |
| 4 °C refrigerator | Electrolux (China) Electric Co., Ltd | ESE6539TA | |
| Agar | Beijing Aoboxing Bio-tech Co., Ltd | 01-023 | |
| Analytical balances | Shimadzu | ATX124 | |
| Autoclaves Sterilizer | SANYO | MLS-3750 | |
| Carbenicillin | Amresco | C0885 | |
| Eclipse Ci Nikon upright optical microscope | Nikon | Eclipse Ts2-FL | |
| Glucose | Macklin | D823520 | |
| Inoculation ring | Thermo Scientific | 251586 | |
| Isoflurane | RWD | 20210103 | |
| NaCl | Xi'an Jingxi Shuanghe Pharmaceutical Co., Ltd | 20180108 | |
| Paraformaldehyde | Beyotime Biotechnology | P0099 | |
| Peptone | Beijing Aoboxing Bio-tech Co., Ltd | 01-001 | |
| RWD R550 multi-channel small animal anesthesia machine | RWD | R550 | |
| SEM | Hitachi | TM-1000 | |
| Temperature incubator | Shanghai Zhichu Instrument Co., Ltd | ZQTY-50N | |
| Ultrapure water water generator | Heal Force | NW20VF | |
| Ultrasound machine | Do-Chrom | DS10260D | |
| Yeast extract | Thermo Scientific Oxoid | LP0021B |
References
- Mayer, F. L., Wilson, D., Hube, B.
- Fan, F., et al. Candida albicans biofilms: antifungal resistance, immune evasion, and emerging therapeutic strategies. International Journal of Antimicrobial Agents. 60 (5-6), 106673 (2022).
- Tong, Y., Tang, J. Candida albicans infection and intestinal immunity. Microbiological Research. 198, 27-35 (2017).
- Kanaguchi, N., et al. Effects of salivary protein flow and indigenous microorganisms on initial colonization of Candida albicans in an in vivo model. Bmc Oral Health. 12, 36 (2012).
- Gulati, M., Nobile, C. J. Candida albicans biofilms: development, regulation, and molecular mechanisms. Microbes and Infection. 18 (5), 310-321 (2016).
- Douglas, L. J. Candida biofilms and their role in infection. Trends in Microbiology. 11 (1), 30-36 (2003).
- Nobile, C. J., Johnson, A. D. Candida albicans biofilms and human disease. Annual Review of Microbiology. 69, 71-92 (2015).
- Mack, D., et al. Biofilm formation in medical device-related infection. The International Journal of Artificial Organs. 29 (4), 343-359 (2006).
- Miller, R., et al. Periprosthetic joint infection: A review of antibiotic treatment. JBJS Reviews. 8 (7), e1900224 (2020).
- Brown, T. S., et al. Periprosthetic joint infection with fungal pathogens. The Journal of Arthroplasty. 33 (8), 2605-2612 (2018).
- Kojic, E. M., Darouiche, R. O.
- Schoof, B., et al. Fungal periprosthetic joint infection of the hip: a systematic review. Orthopedic Reviews (Pavia). 7 (1), 5748 (2015).
- Izakovicova, P., Borens, O., Trampuz, A. Periprosthetic joint infection: current concepts and outlook. EFORT Open Reviews. 4 (7), 482-494 (2019).
- Tande, A. J., Patel, R.
- Stocks, G., Janssen, H. F. Infection in patients after implantation of an orthopedic device. ASAIO Journal. 46 (6), S41-S46 (2000).
- Shahi, A., Tan, T. L., Chen, A. F., Maltenfort, M. G., Parvizi, J. In-hospital mortality in patients with periprosthetic joint infection. The Journal of Arthroplasty. 32 (3), 948-952 (2017).
- Carli, A. V., Ross, F. P., Bhimani, S. J., Nodzo, S. R., Bostrom, M. P. Developing a clinically representative model of periprosthetic joint infection. The Journal of Bone and Joint Surgery. American Volume. 98 (19), 1666-1676 (2016).
- Stavrakis, A. I., Niska, J. A., Loftin, A. H., Billi, F., Bernthal, N. M. Understanding infection: A primer on animal models of periprosthetic joint infection. The Scientific World Journal. 2013, 925906 (2013).
- Qiao, B., Lv, T. Electrochemical investigation of interaction of candida albicans with titanium-nickel implant in human saliva. International Journal of Electrochemical Science. 17 (2), 22028 (2022).
- Oh, Y. R., Ku, H. M., Kim, D., Shin, S. J., Jung, I. Y. Efficacy of a Nickel-titanium ultrasonic instrument for biofilm removal in a simulated complex root canal. Materials. 13 (21), 4914 (2020).
- Feldman, A. T., Wolfe, D. Tissue Processing and Hematoxylin and Eosin Staining. Histopathology: Methods and Protocols. Christina E, D. ay , Springer, New York. 31-43 (2014).
- Sinclair, K. D., et al. Model development for determining the efficacy of a combination coating for the prevention of perioperative device related infections: A pilot study. Journal of Biomedical Materials Research - Part B Applied Biomaterials. 101 (7), 1143-1153 (2013).
- Mo, F., et al. In vitro and in vivo effects of the combination of myricetin and miconazole nitrate incorporated to thermosensitive hydrogels, on C. albicans biofilms. Phytomedicine. 71, 153223 (2020).
- Zahar, A., Sarungi, M. Diagnosis and management of the infected total knee replacement: a practical surgical guide. Journal of Experimental Orthopaedics. 8 (1), 14 (2021).
- Parvizi, J., Jacovides, C., Zmistowski, B., Jung, K. A. Definition of periprosthetic joint infection: Is there a consensus. Clinical Orthopaedics and Related Research. 469 (11), 3022-3030 (2011).
- Karczewski, D., et al. Candida periprosthetic joint infections - risk factors and outcome between albicans and non-albicans strains. International Orthopaedics. 46 (3), 449-456 (2022).
- Cobo, F., Rodriguez-Granger, J., Sampedro, A., Aliaga-Martinez, L., Navarro-Mari, J. M. Candida prosthetic joint infection. A review of treatment methods. Journal of Bone and Joint Infection. 2 (2), 114-121 (2017).
- Cobrado, L., Silva-Dias, A., Azevedo, M. M., Pina-Vaz, C., Rodrigues, A. G. In vivo antibiofilm effect of cerium, chitosan and hamamelitannin against usual agents of catheter-related bloodstream infections. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 68 (1), 126-130 (2013).
- Vila, T., et al. Therapeutic implications of C. albicans-S. aureus mixed biofilm in a murine subcutaneous catheter model of polymicrobial infection. Virulence. 12 (1), 835-851 (2021).
- Nishitani, K., et al. Quantifying the natural history of biofilm formation in vivo during the establishment of chronic implant-associated Staphylococcus aureus osteomyelitis in mice to identify critical pathogen and host factors. Journal of Orthopaedic Research. 33 (9), 1311-1319 (2015).
- Ormsby, R. T., et al. Evidence for osteocyte-media ted bone-matrix degradation associated with periprosthetic joint infection (PJI). European Cells & Materials. 42, 264-280 (2021).
- Garlito-Díaz, H., et al. A new antifungal-loaded sol-gel can prevent candida albicans prosthetic joint infection. Antibiotics (Basel). 10 (6), 711 (2021).
- Harro, J. M., et al. Development of a novel and rapid antibody-based diagnostic for chronic staphylococcus aureus infections based on biofilm antigens. Journal of Clinical Microbiology. 58 (5), e01414-e01419 (2020).
