Summary
Periprostetisk leddinfeksjon (PJI) forårsaket av farlige patogener er vanlig i klinisk ortopedi. Eksisterende dyremodeller kan ikke nøyaktig simulere den faktiske situasjonen til PJI. Her etablerte vi en Candida albicans biofilm-assosiert PJI-musemodell for å forske på og utvikle nye terapier for PJI.
Abstract
Periprostetisk leddinfeksjon (PJI) er en av de vanligste infeksjonene forårsaket av Candida albicans (C. albicans), som i økende grad bekymrer kirurger og forskere. Vanligvis dannes biofilmer som kan skjerme C. albicans fra antibiotika og immunclearance på infeksjonsstedet. Kirurgi som involverer fjerning av det infiserte implantatet, revisjon, antimikrobiell behandling og tilbakeføring er gullstandarden for behandling av PJI. Dermed er etablering av PJI-modeller for dyr av stor betydning for forskning og utvikling av nye legemidler eller terapeutiske midler for PJI. I denne studien ble en glatt nikkel-titanlegeringstråd, et mye brukt implantat i ortopediske klinikker, satt inn i lårleddet til en C57BL/6-mus før C. albicans ble inokulert i leddhulen langs ledningen. Etter 14 dager ble modne og tykke biofilmer observert på overflaten av implantater under et skanning elektronisk mikroskop (SEM). Det ble funnet signifikant redusert bentrabekel i H&E-fargingen av de infiserte leddprøvene. For å oppsummere ble det etablert en mus PJI-modell med fordelene ved enkel betjening, høy vellykket hastighet, høy repeterbarhet og høy klinisk korrelasjon. Dette forventes å være en viktig modell for kliniske studier av C. albicans biofilmrelaterte PJI-forebygging.
Introduction
Candida albicans (C. albicans) lever i mange deler av menneskekroppen1, som også er det vanligste opportunistiske patogenet som forårsaker livstruende invasive soppinfeksjoner, spesielt hos immunkompromitterte pasienter 2,3. C. albicans kan transformere mellom gjær og mycelium tilstander som en polymorf sopp. Myceliumtilstanden utviser høyere virulens, sterkere vedheft og invasjon av celler og vev 4,5. Dessuten kan C. albicans danne biofilmer på overflatene av biomedisinske materialer som proteser, katetre og stenter 1,6,7. Den tette tredimensjonale strukturen av biofilmer begrenser infiltrasjonen av antifungale stoffer, uttrykker stoffresistente gener og nedregulerer metabolismen av soppceller for å motstå immunsystemclearance 6,7. Derfor er biofilmrelaterte infeksjoner ganske utfordrende i klinikker8.
Staphylococcus aureus, koagulase-negativ stafylokokker og enterobacter er de viktigste patogenene som forårsaker PJI9. Selv om forekomsten av sopp-PJI er relativt lav (ca. 1%)10, er behandlingskostnaden for sopp-PJI høyere11, behandlingssyklusen er lengre11, og behandlingssuksessraten er lavere10 enn bakteriell PJI. De siste årene har forekomsten av sopp-PJI økt år for år10. Candida PJI står for 77% -84% av sopp PJI10,12, og C. albicans er den vanligste i Candida (54%). Derfor må sopp-PJI studeres.
For tiden behandles PJI via revisjonskirurgi ved å (1) fjerne det infiserte implantatet, (2) debridement, (3) antimikrobiell behandling og (4) reimplantering. Etter grundig revisjon plasseres et antibiotikum som inneholder bensement, og pasienten behandles med antibiotika systemisk i mer enn 6 uker for effektivt å kontrollere infeksjonen før et nytt implantat plasseres13. Denne metoden kan imidlertid ikke fullstendig eliminere patogener i vev, og tilbakevendende infeksjoner behandlet med langvarig antimikrobiell terapi vil høyst sannsynlig utvikle seg i stoffresistente stammer 14,15,16.
Etablering av dyremodeller av PJI er viktig for forskning og utvikling av nye legemidler eller terapeutiske midler for PJI. I utviklingen av PJI dannes store døde mellomrom rundt protesen, noe som fører til dannelse av hematomer, som ytterligere blokkerer blodtilførselen til det omkringliggende vevet og svekker effekten av antibiotika11,15. På grunn av vanskeligheten med å etterligne protesens omgivelser, kan tradisjonelle dyremodeller ikke nøyaktig simulere den faktiske situasjonen til PJI17,18.
I dette papiret ble en C. albicans biofilm-assosiert PJI-modell hos mus konstruert ved å bruke en klinisk mye brukt titan-nikkeltråd for å simulere leddimplantater19,20. Denne PJI-modellen viser fordelene med enkel betjening, høy vellykket hastighet, høy repeterbarhet og høy klinisk korrelasjon. Det forventes å være en viktig modell for å studere forebygging og behandling av C. albicans biofilmrelaterte PJI.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dyrene ble kjøpt fra Xi'an Jiaotong University. Alle prosedyrer for dyreforsøk ble godkjent av Institutional Animal Ethical Committee ved Xi'an Jiaotong University (godkjenningsnummer: SCXK [Shaanxi] 2021-103). Musene ble holdt i en uke med 5 mus per bur. De fikk fri tilgang til mat og vann. Dyrene ble holdt ved romtemperatur (RT; 24 °C ± 1 °C) og lys/mørk syklus (12 t/12 timer) før studien ble utført.
1. Buffer og klargjøring av utstyr
- C. albicans cellekultur
- Inokuler en monoklonal koloni av C. albicans (SC5314) fra et gjærekstrakt pepton dextrose (YPD) platemedium med en inokulerende sløyfe i 5 ml YPD flytende medium (YPD + 50 μg / ml karbenicillin).
- Rist C. albicans celler deretter med en hastighet på 220 o / min ved 30 ° C over natten.
- Sentrifuger suspensjonen ved 400 x g i 5 minutter ved RT. Resuspender C. albicans-cellene i normalt saltvann og fortynn konsentrasjonen av celler til 1 x 106 celler/ml via visuell justering av turbiditeten til å være den samme som en 0,5 McFarland.
- Fremstilling av normal saltoppløsning
- Vei 0,9 g natriumklorid og oppløs i 100 ml avionisert vann for å forberede 0,9% vanlig saltvann.
- Kirurgiske instrumenter forberedelse
- Autoklav (121 °C, 30 min) kirurgiske instrumenter (saks, tang, hemostatisk tang, nåleholdere, suturnåler) og titan-nikkellegeringstråd (ca. 0,5 mm i diameter) før bruk.
2. Mus PJI modell etablering
- Del tilfeldig 30 C57BL/6 mus (hann, 15-20 g) inn i 3 grupper (10 mus/gruppe), nemlig kontrollgruppe, blank implantatgruppe (titan-nikkeltrådimplantasjon uten C. albicans-infeksjon ) og PJI-gruppe (titan-nikkeltrådimplantasjon med C. albicans-infeksjon ).
- Bedøv musene med 1-4% isofluran innånding før du fjerner håret på venstre baklem og desinfiserer det med jod. Tapet av høyrerefleksen og ingen respons på tåstimuleringen bekrefter anestesidybden. Mens du bedøver, bruk oftalmisk salve på begge øynene for å forhindre tørrhet i hornhinnen og for å fylle opp varmen under operasjon og gjenoppretting.
- For musene i kontrollgruppen, ikke gi noen behandling. Gi dem fri tilgang til vann og mat.
- For musene i den tomme implantatgruppen og PJI-gruppen, gjør et 5 mm langsgående snitt på kneet på hver venstre baklem med et #10-blad eller en steril barberhøvel for å avsløre leddene.
- Lag et hull på 5 mm i lårbenets intramedullære kanal ved å sette inn en steril sprøyte (26 G) nål.
- Sett inn en glatt nikkel-titanlegeringstråd (0,5 mm i diameter, 5 mm i lengde) i hullet før den kuttes med saks (figur 1).
- For musene i den tomme implantatgruppen, tilsett 2 μL YPD-medium langs nikkel-titanlegeringstråden dråpe for dråpe før du lukker såret lag for lag ved hjelp av en nylonsutur (0,15 mm diameter).
- For musene i PJI-gruppen, inokuler 2 μL C. albicans-celler (1 × 106 celler / ml) i leddrommet til mus langs nikkel-titanlegeringstråden dråpe for dråpe før du lukker såret lag for lag ved hjelp av en nylonsutur.
- Hus musene med fri tilgang til vann og mat i 14 dager. Administrer meloksikam ved subkutan injeksjon (4 mg/kg) hver 24. time i opptil 3 dager.
- Etter 14 dager, bedøv musene med 3% isofluran før du avliver musene ved cervikal dislokasjon.
3. Evaluering av PJI-modellen
- Evaluering av infeksjoner i store organer
- Samle nyrene, leveren og milten fra musene etter avlivning.
- Tilsett 500 μL sterilt normalt saltvann i hvert organ og slip vevet på en homogenisator ved 4 °C.
- Tilsett 100 μL av homogenatet fremstilt i trinn 3.1.2 til en YPD-plate før det spres jevnt med en bøyd stang.
- Plasser YPD-platene invertert i en 37 ° C inkubator i 48 timer.
- Observer og telle antall kolonier visuelt.
- Observasjon av C. albicans og biofilm på implantatene
- Klipp forsiktig huden over musens ledd med saks før du samler implantatet med pinsett.
- Hold implantatene nedsenket i en 2,5% glutaraldehydoppløsning for fiksering ved 4 °C i 48 timer.
- Skyll implantatene med steril PBS tre ganger før du senker dem i 1% osmiumsyreoppløsning i 3 timer.
- Skyll implantatene med steril PBS tre ganger før du senker dem i 50%, 70%, 80%, 90% og 100% etanolløsninger i 15 minutter for dehydrering.
- Hold implantatene nedsenket i tert-butanol i 30 min tre ganger før frysetørking implantatene.
- Fest implantatprøvene til prøvestadiet, sputter belegg implantatet med gull (10 nm belegg), og observer det under et skanning elektronisk mikroskop (SEM) under et høyt vakuum og 1,5 kV.
- Patologisk analyse av lårvevet
- Samle lårvevet med saks etter avliving av musene.
- Senk lårvevet i 4% paraformaldehydoppløsning for fiksering ved 4 °C i 48 timer.
- Legg lårvevet i 10% formalin i 1 uke.
- Dehydrer lårvevet ved å senke dem i henholdsvis 50%, 70%, 80%, 90% og 100% etanolløsninger i 15 minutter.
- Legg det dehydrerte lårvevet i parafin før du seksjonerer vevet i 4 μm prøver ved hjelp av en mikrotom.
- Flekk lårbenseksjonene med hematoksylin og eosin ved å følge en standardprotokoll før patologisk analyse21.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Overføring av prøvene til et platemedium og tellekolonier etter inkubasjon over natten brukes ofte til å vurdere den lokale patogenbelastningen nær lesjonen22,23. I vår studie var den mikrobielle kulturen av lever-, nyre- og miltprøver negativ, noe som indikerer at modellen i denne studien bare førte til lokal infeksjon i stedet for systemisk infeksjon hos musene23.
SEM-bildene av implantatene er vist i figur 2. Ingen C. albicans festet seg eller koloniserte på overflaten av nikkel-titanlegeringstråden i den tomme implantatgruppen. Imidlertid ble moden og tykk biofilm observert på overflaten av nikkel-titanlegeringstråd i PJI-gruppen, noe som indikerer vellykket konstruksjon av C. albicans biofilmrelaterte PJI-modell hos mus 14 dager etter operasjonen23.
H&E-farging av lårvev er vist i figur 3. I kontrollgruppen ble det observert en klar og fullstendig trabekulær benstruktur, mens noen få bindtrabekulære vevsdefekter i lårvevet kunne ses i gruppen med blank implantat (figur 3, gule piler). I PJI-gruppen reduserte antall bein trabeculae signifikant23. Disse resultatene indikerer at C. albicans biofilm-assosierte PJI-modell hos mus ble vellykket etablert med en signifikant patologisk skade på lårvevet.
Figur 1: Implantasjonsprosedyre. Den røde firkanten i venstre panel viser operasjonsstedet der den glatte nikkel-titanlegeringstråden er satt inn. Panelet til høyre viser en del av lårbenet (rød sirkel) med nikkeltråden. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: SEM-bilder av implantatets overflate i blank- og PJI-gruppene. Forstørrelser 1000x (skalalinje = 500 μm) og 5000x (skalalinje = 100 μm) vises som representative bilder. Denne figuren er modifisert med tillatelse fra Mo et al.23. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3 H&E-farging av lårvev. Representative H&E-bilder av implantatet, PJI-modellen og kontrollgruppene er vist på figuren. Kontrollgruppen viser en klar og fullstendig bentrabekulær struktur. Den blanke implantatgruppen viste noen få bentrabekulære vevsdefekter i lårvevet (gule piler). Imidlertid ble antall bentrabeculae redusert i PJI-gruppen. Forstørrelsene som vises er 200x (skala bar = 150 μm) og 400x (skala bar = 75 μm). Denne figuren er modifisert med tillatelse fra Mo et al.23. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Infeksjonen forårsaket av forurensning av kirurgiske instrumenter eller det kirurgiske miljøet under operasjonen er hovedårsaken til de fleste implantatinfeksjoner 24,25,26,27. Derfor ble en mus C. albicans biofilmrelatert PJI-modell konstruert i denne studien. Sammenlignet med den tradisjonelle PJI-modellen der sterile rustfrie stålpartikler suspendert i saltvann ble brukt som implantat, ble en nikkel-titanlegeringstråd, et vanlig implantatmateriale, brukt i denne studien for å simulere kontakten mellom C. albicans, implantatmaterialer og beinet, som ligner mer på situasjonen i klinikker.
PJI-modellen beskrevet i denne artikkelen kan perfekt simulere det fysiologiske miljøet til PJI i klinikker. Denne modellen kan bare brukes til å studere infeksjonen under implantasjon i stedet for senere blodbåren infeksjon.
C. albicans kan inokuleres på to måter. Den ene inokulerer C . albicans direkte på implantatstedet under operasjon28, og den andre dyrker implantatene med C. albicans i en periode slik at modne biofilmer dannes på overflaten av implantatet før kirurgisk implantasjon29. Den førstnevnte metoden ble valgt i denne studien på grunn av det nøyaktige inokulasjonsantallet patogener, noe som resulterte i minimale forskjeller mellom grupper og en mer objektiv evaluering av påfølgende behandlinger. Videre er den tidligere metoden mer konsistent med den kliniske situasjonen.
I denne protokollen er innsetting av implantatet vanskelig å utføre. Operatøren må øve flere ganger for å sikre at implantatet settes inn i leddet i stedet for subkutant eller intramuskulært. Dessuten er inokulasjonsnummeret til C. albicans avgjørende for repeterbarheten av PJI-modellen. C. albicans skal blandes grundig via virvel for å sikre nøyaktigheten av inokulasjonsnummeret. I tillegg bør C. albicans legges langs legeringstråden for å simulere infeksjonsruten i den kliniske situasjonen.
Biofilmer kunne detekteres 7 dager etter bakteriell infeksjon, hvoretter biofilm gradvis økte og nådde et platå den 14. dag30. Derfor ble suksessen til den etablerte PJI-modellen inspisert den 14. Koloniseringen av C. albicans og dannelsen av biofilm på overflaten av implantatet ble inspisert av SEM. Vevslesjonene rundt implantatet forårsaket av lokal infeksjon ble evaluert ved patologisk analyse etter H&E-farging. Studier har vist at periprostetisk osteolyse er en viktig funksjon på grunn av PJI31. Dermed er disse indikatorene også viktige for å evaluere terapeutiske metoder for forebygging og behandling av PJI32.
Mikrobiell kultur brukes ofte til å oppdage mikrobiell infeksjon i klinikker og laboratorier. Derfor ble den mikrobielle kulturen av implantatet, vev rundt implantater, lever og andre vitale organer utført i denne studien. For implantatet ble ultralydbehandling påført for å fjerne C. albicans festet til overflaten av titan-nikkellegeringstråden. Deretter ble C. albicans beriket ved sentrifugering før mikrobiell kultur. Det ble imidlertid funnet et negativt resultat, ikke i samsvar med SEM-resultatet (figur 2). SEM-resultatet viste at C. albicans festet seg til overflaten av titan-nikkellegeringstråd. Derfor var resultatet av mikrobiell kultur et falskt negativt, noe som kan tilskrives den tette adhesjonen av C. albicans til titan-nikkellegeringstråd; ultralyd kunne ikke lykkes med å eksfoliere C. albicans fra implantatet. På samme måte var den mikrobielle kulturen av vevene rundt implantater og vitale organer også negativ. Det er to mulige årsaker: (1) Antallet C. albicans inokulert i denne studien var bare 2000 CFU, noe som kan være for lite til å invadere det omkringliggende vevet og systemet i den eksperimentelle perioden; (2) Følsomheten til metoden for å ekstrahere og separere patogener fra vev er lav. En tidligere publisert rapport antyder at mikrobiell kultur lett kan vise falske negative resultater og forsinkede behandlinger33. Grocott-Gomori farging kan brukes til å bestemme dannelsen av hyfer i bein og ledd32. Det kan også være nyttig å øke inokulummengden, forlenge den eksperimentelle varigheten eller holde musene i en immunsupprimert tilstand før kirurgi32. Det skal imidlertid bemerkes at langvarig infeksjon kan føre til dyp infeksjon eller til og med systemisk infeksjon. Dermed bør eksperimentperioden utformes i henhold til det spesifikke formålet.
Oppsummert skapte denne studien en vellykket musemodell av C. albicans biofilm-assosierte PJI, som kan være av stor betydning for å forske på forebygging og behandling av C. albicans biofilm-assosierte PIJ.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer at de ikke har noen kjente konkurrerende økonomiske interesser eller personlige forhold som kunne ha syntes å påvirke arbeidet rapportert i denne artikkelen.
Acknowledgments
Vi er takknemlige for den økonomiske støtten fra Natural Science Foundation of Shaanxi Province (tilskuddsnummer 2021SF-118) og National Natural Science Foundation of China (tilskuddsnummer 81973409, 82204631).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.5 Mactutrius turbidibris | Shanghai Lujing Technology Co., Ltd | 5106063 | |
| 4 °C refrigerator | Electrolux (China) Electric Co., Ltd | ESE6539TA | |
| Agar | Beijing Aoboxing Bio-tech Co., Ltd | 01-023 | |
| Analytical balances | Shimadzu | ATX124 | |
| Autoclaves Sterilizer | SANYO | MLS-3750 | |
| Carbenicillin | Amresco | C0885 | |
| Eclipse Ci Nikon upright optical microscope | Nikon | Eclipse Ts2-FL | |
| Glucose | Macklin | D823520 | |
| Inoculation ring | Thermo Scientific | 251586 | |
| Isoflurane | RWD | 20210103 | |
| NaCl | Xi'an Jingxi Shuanghe Pharmaceutical Co., Ltd | 20180108 | |
| Paraformaldehyde | Beyotime Biotechnology | P0099 | |
| Peptone | Beijing Aoboxing Bio-tech Co., Ltd | 01-001 | |
| RWD R550 multi-channel small animal anesthesia machine | RWD | R550 | |
| SEM | Hitachi | TM-1000 | |
| Temperature incubator | Shanghai Zhichu Instrument Co., Ltd | ZQTY-50N | |
| Ultrapure water water generator | Heal Force | NW20VF | |
| Ultrasound machine | Do-Chrom | DS10260D | |
| Yeast extract | Thermo Scientific Oxoid | LP0021B |
References
- Mayer, F. L., Wilson, D., Hube, B.
- Fan, F., et al. Candida albicans biofilms: antifungal resistance, immune evasion, and emerging therapeutic strategies. International Journal of Antimicrobial Agents. 60 (5-6), 106673 (2022).
- Tong, Y., Tang, J. Candida albicans infection and intestinal immunity. Microbiological Research. 198, 27-35 (2017).
- Kanaguchi, N., et al. Effects of salivary protein flow and indigenous microorganisms on initial colonization of Candida albicans in an in vivo model. Bmc Oral Health. 12, 36 (2012).
- Gulati, M., Nobile, C. J. Candida albicans biofilms: development, regulation, and molecular mechanisms. Microbes and Infection. 18 (5), 310-321 (2016).
- Douglas, L. J. Candida biofilms and their role in infection. Trends in Microbiology. 11 (1), 30-36 (2003).
- Nobile, C. J., Johnson, A. D. Candida albicans biofilms and human disease. Annual Review of Microbiology. 69, 71-92 (2015).
- Mack, D., et al. Biofilm formation in medical device-related infection. The International Journal of Artificial Organs. 29 (4), 343-359 (2006).
- Miller, R., et al. Periprosthetic joint infection: A review of antibiotic treatment. JBJS Reviews. 8 (7), e1900224 (2020).
- Brown, T. S., et al. Periprosthetic joint infection with fungal pathogens. The Journal of Arthroplasty. 33 (8), 2605-2612 (2018).
- Kojic, E. M., Darouiche, R. O.
- Schoof, B., et al. Fungal periprosthetic joint infection of the hip: a systematic review. Orthopedic Reviews (Pavia). 7 (1), 5748 (2015).
- Izakovicova, P., Borens, O., Trampuz, A. Periprosthetic joint infection: current concepts and outlook. EFORT Open Reviews. 4 (7), 482-494 (2019).
- Tande, A. J., Patel, R.
- Stocks, G., Janssen, H. F. Infection in patients after implantation of an orthopedic device. ASAIO Journal. 46 (6), S41-S46 (2000).
- Shahi, A., Tan, T. L., Chen, A. F., Maltenfort, M. G., Parvizi, J. In-hospital mortality in patients with periprosthetic joint infection. The Journal of Arthroplasty. 32 (3), 948-952 (2017).
- Carli, A. V., Ross, F. P., Bhimani, S. J., Nodzo, S. R., Bostrom, M. P. Developing a clinically representative model of periprosthetic joint infection. The Journal of Bone and Joint Surgery. American Volume. 98 (19), 1666-1676 (2016).
- Stavrakis, A. I., Niska, J. A., Loftin, A. H., Billi, F., Bernthal, N. M. Understanding infection: A primer on animal models of periprosthetic joint infection. The Scientific World Journal. 2013, 925906 (2013).
- Qiao, B., Lv, T. Electrochemical investigation of interaction of candida albicans with titanium-nickel implant in human saliva. International Journal of Electrochemical Science. 17 (2), 22028 (2022).
- Oh, Y. R., Ku, H. M., Kim, D., Shin, S. J., Jung, I. Y. Efficacy of a Nickel-titanium ultrasonic instrument for biofilm removal in a simulated complex root canal. Materials. 13 (21), 4914 (2020).
- Feldman, A. T., Wolfe, D. Tissue Processing and Hematoxylin and Eosin Staining. Histopathology: Methods and Protocols. Christina E, D. ay , Springer, New York. 31-43 (2014).
- Sinclair, K. D., et al. Model development for determining the efficacy of a combination coating for the prevention of perioperative device related infections: A pilot study. Journal of Biomedical Materials Research - Part B Applied Biomaterials. 101 (7), 1143-1153 (2013).
- Mo, F., et al. In vitro and in vivo effects of the combination of myricetin and miconazole nitrate incorporated to thermosensitive hydrogels, on C. albicans biofilms. Phytomedicine. 71, 153223 (2020).
- Zahar, A., Sarungi, M. Diagnosis and management of the infected total knee replacement: a practical surgical guide. Journal of Experimental Orthopaedics. 8 (1), 14 (2021).
- Parvizi, J., Jacovides, C., Zmistowski, B., Jung, K. A. Definition of periprosthetic joint infection: Is there a consensus. Clinical Orthopaedics and Related Research. 469 (11), 3022-3030 (2011).
- Karczewski, D., et al. Candida periprosthetic joint infections - risk factors and outcome between albicans and non-albicans strains. International Orthopaedics. 46 (3), 449-456 (2022).
- Cobo, F., Rodriguez-Granger, J., Sampedro, A., Aliaga-Martinez, L., Navarro-Mari, J. M. Candida prosthetic joint infection. A review of treatment methods. Journal of Bone and Joint Infection. 2 (2), 114-121 (2017).
- Cobrado, L., Silva-Dias, A., Azevedo, M. M., Pina-Vaz, C., Rodrigues, A. G. In vivo antibiofilm effect of cerium, chitosan and hamamelitannin against usual agents of catheter-related bloodstream infections. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 68 (1), 126-130 (2013).
- Vila, T., et al. Therapeutic implications of C. albicans-S. aureus mixed biofilm in a murine subcutaneous catheter model of polymicrobial infection. Virulence. 12 (1), 835-851 (2021).
- Nishitani, K., et al. Quantifying the natural history of biofilm formation in vivo during the establishment of chronic implant-associated Staphylococcus aureus osteomyelitis in mice to identify critical pathogen and host factors. Journal of Orthopaedic Research. 33 (9), 1311-1319 (2015).
- Ormsby, R. T., et al. Evidence for osteocyte-media ted bone-matrix degradation associated with periprosthetic joint infection (PJI). European Cells & Materials. 42, 264-280 (2021).
- Garlito-Díaz, H., et al. A new antifungal-loaded sol-gel can prevent candida albicans prosthetic joint infection. Antibiotics (Basel). 10 (6), 711 (2021).
- Harro, J. M., et al. Development of a novel and rapid antibody-based diagnostic for chronic staphylococcus aureus infections based on biofilm antigens. Journal of Clinical Microbiology. 58 (5), e01414-e01419 (2020).
