Summary
Periprostetisk ledinfektion (PJI) forårsaget af farlige patogener er almindelig i klinisk ortopædi. Eksisterende dyremodeller kan ikke nøjagtigt simulere den faktiske situation for PJI. Her etablerede vi en Candida albicans biofilmassocieret PJI-musemodel for at forske og udvikle nye lægemidler til PJI.
Abstract
Periprostetisk ledinfektion (PJI) er en af de almindelige infektioner forårsaget af Candida albicans (C. albicans), som i stigende grad vedrører kirurger og forskere. Generelt dannes biofilm, der kan beskytte C. albicans mod antibiotika og immunclearance på infektionsstedet. Kirurgi, der involverer fjernelse af det inficerede implantat, debridering, antimikrobiel behandling og reimplantation er guldstandarden til behandling af PJI. Etablering af PJI-modeller for dyr har således stor betydning for forskning og udvikling af nye lægemidler eller lægemidler til PJI. I denne undersøgelse blev en glat nikkel-titaniumlegeringstråd, et meget anvendt implantat i ortopædiske klinikker, indsat i lårbensleddet på en C57BL/6-mus, før C. albicans blev podet i ledhulen langs ledningen. Efter 14 dage blev modne og tykke biofilm observeret på overfladen af implantater under et scanningselektronisk mikroskop (SEM). En signifikant reduceret knogletrabecula blev fundet i H&E-farvningen af de inficerede ledprøver. For at opsummere blev der etableret en mus PJI-model med fordelene ved nem betjening, høj succesrate, høj repeterbarhed og høj klinisk korrelation. Dette forventes at være en vigtig model for kliniske studier af C. albicans biofilmrelaterede PJI-forebyggelse.
Introduction
Candida albicans (C. albicans) bor kommensalt i mange dele af menneskekroppen1, som også er det mest almindelige opportunistiske patogen, der forårsager livstruende invasive svampeinfektioner, især hos immunkompromitterede patienter 2,3. C. albicans kan transformere mellem gær og mycelium stater som en polymorf svamp. Myceliumtilstanden udviser højere virulens, stærkere vedhæftning og invasion af celler og væv 4,5. Desuden kan C. albicans danne biofilm på overfladerne af biomedicinske materialer såsom proteser, katetre og stents 1,6,7. Den tætte tredimensionelle struktur af biofilm begrænser infiltrationen af svampedræbende stoffer, udtrykker lægemiddelresistente gener og nedregulerer svampecellernes metabolisme for at modstå immunsystemets clearance 6,7. Derfor er biofilmrelaterede infektioner ret udfordrende i klinikker8.
Staphylococcus aureus, koagulase-negative stafylokokker og enterobacter er de vigtigste patogener, der forårsager PJI9. Selvom forekomsten af svampe-PJI er relativt lav (ca. 1%)10, er behandlingsomkostningerne for svampe-PJI højere11, behandlingscyklussen er længere11, og behandlingssuccesraten er lavere10 end bakteriel PJI. I de senere år har forekomsten af svampe PJI været stigende år for år10. Candida PJI tegner sig for 77% -84% af svampe PJI10,12, og C. albicans er den mest almindelige i Candida (54%). Derfor skal svampe PJI undersøges.
I øjeblikket behandles PJI via revisionskirurgi ved (1) at fjerne det inficerede implantat, (2) debridering, (3) antimikrobiel behandling og (4) reimplantation. Efter grundig debridering placeres et antibiotikum, der indeholder knoglecement, og patienten behandles systematisk med antibiotika i mere end 6 uger for effektivt at kontrollere infektionen, før et nyt implantat placeres13. Denne metode kan imidlertid ikke fuldt ud eliminere patogener i væv, og tilbagevendende infektioner behandlet med langvarig antimikrobiel terapi er højst sandsynligt at udvikle sig i lægemiddelresistente stammer 14,15,16.
Etablering af dyremodeller af PJI er vigtig for forskning og udvikling af nye lægemidler eller terapi til PJI. I udviklingen af PJI dannes store døde rum omkring protesen, hvilket fører til dannelse af hæmatomer, som yderligere blokerer blodforsyningen til det omgivende væv og forringer virkningen af antibiotika11,15. På grund af vanskeligheden ved at efterligne protesens omgivende miljø kan traditionelle dyremodeller ikke nøjagtigt simulere den faktiske situation for PJI17,18.
I dette papir blev en C. albicans biofilmassocieret PJI-model i mus konstrueret ved hjælp af en klinisk udbredt titanium-nikkeltråd til at simulere ledimplantater19,20. Denne PJI-model udviser fordelene ved nem betjening, høj succesrate, høj repeterbarhed og høj klinisk korrelation. Det forventes at være en vigtig model for undersøgelse af forebyggelse og behandling af C. albicans biofilmrelaterede PJI.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dyrene blev købt fra Xi'an Jiaotong University. Alle dyreforsøgsprocedurer blev godkendt af Institutional Animal Ethical Committee ved Xi'an Jiaotong University (godkendelsesnummer: SCXK [Shaanxi] 2021-103). Musene blev holdt i en uge med 5 mus pr. bur. De fik fri adgang til mad og vand. Dyrene blev opretholdt ved stuetemperatur (RT; 24 °C ± 1 °C) og lys/mørk cyklus (12 t/12 timer), før undersøgelsen blev udført.
1. Forberedelse af buffer og udstyr
- C. albicans cellekultur
- Inokulere en monoklonal koloni af C. albicans (SC5314) fra et gærekstrakt peptondextrose (YPD) plademedium med en podningssløjfe i 5 ml YPD flydende medium (YPD + 50 μg / ml carbenicillin).
- C. albicans celler rystes efterfølgende med en hastighed på 220 o/min ved 30 °C natten over.
- Centrifuger suspensionen ved 400 x g i 5 minutter ved RT. Resuspender C. albicans-cellerne i normalt saltvand og fortynd koncentrationen af celler til 1 x 106 celler/ml via visuel justering af turbiditeten til at være den samme som en 0,5 McFarland.
- Fremstilling af normalt saltvand
- Væg 0,9 g natriumchlorid og opløs i 100 ml deioniseret vand for at forberede 0,9% normalt saltvand.
- Forberedelse af kirurgiske instrumenter
- Autoklave (121 °C, 30 min) de kirurgiske instrumenter (saks, tang, hæmostatisk tang, nåleholdere, suturnåle) og titanium-nikkellegeringstråd (ca. 0,5 mm i diameter) før brug.
2. Mus PJI model etablering
- Opdel tilfældigt 30 C57BL/6 mus (han, 15-20 g) i 3 grupper (10 mus / gruppe), nemlig kontrolgruppe, tom implantatgruppe (titanium-nikkeltrådimplantation uden C. albicans-infektion ) og PJI-gruppe (titanium-nikkeltrådimplantation med C. albicans-infektion ).
- Bedøv musene med 1-4% isofluran indånding, før du fjerner håret på venstre bagben og desinficerer det med jod. Tabet af den oprettende refleks og intet svar på tåstimuleringen bekræfter dybden af anæstesi. Under bedøvelse skal du anvende oftalmisk salve på begge øjne for at forhindre hornhinde tørhed og for at genopbygge varmen under operation og genopretning.
- For musene i kontrolgruppen må der ikke gives nogen behandling. Giv dem fri adgang til vand og mad.
- For musene i den tomme implantatgruppe og PJI-gruppen skal du lave et 5 mm langsgående snit på knæet på hvert venstre bagben med et # 10-blad eller en steril barbermaskine for at udsætte leddene.
- Lav et hul på 5 mm i længden i lårbenets intramedullære kanal ved at indsætte en steril sprøjte (26 G) nål.
- Indsæt en glat nikkel-titaniumlegeringstråd (0,5 mm i diameter, 5 mm i længden) i hullet, inden du skæres med en saks (figur 1).
- Til musene i den tomme implantatgruppe tilsættes 2 μL YPD-medium langs nikkel-titaniumlegeringstråden dråbe for dråbe, før sårlaget lukkes lag for lag ved hjælp af en nylonsutur (0,15 mm diameter).
- For musene i PJI-gruppen podes 2 μL C. albicans-celler (1 × 106 celler / ml) i musenes ledrum langs nikkel-titaniumlegeringstråden dråbe for dråbe, før såret lukkes lag for lag ved hjælp af en nylonsutur.
- Opstald musene med fri adgang til vand og mad i 14 dage. Meloxicam administreres ved subkutan injektion (4 mg/kg) hver 24. time i op til 3 dage.
- Efter 14 dage bedøves musene med 3% isofluran, før musene aflives ved cervikal dislokation.
3. Evaluering af PJI-model
- Evaluering af infektioner i større organer
- Saml nyrer, lever og milt fra musene efter aflivning.
- Der tilsættes 500 μL sterilt normalt saltvand i hvert organ, og vævene males på en homogenisator ved 4 °C.
- Der tilsættes 100 μL homogenat, der er fremstillet i trin 3.1.2, til en YPD-plade, inden det fordeles jævnt med en bøjet stang.
- YPD-pladerne anbringes omvendt i en 37 °C inkubator i 48 timer.
- Overhold og tæl antallet af kolonier visuelt.
- Observation af C. albicans og biofilm på implantaterne
- Skær forsigtigt huden over musens led med en saks, før du opsamler implantatet med pincet.
- Opbevar implantaterne nedsænket i en 2,5% glutaraldehydopløsning til fiksering ved 4 °C i 48 timer.
- Skyl implantaterne med steril PBS tre gange, før du nedsænker dem i 1% osmiumsyreopløsning i 3 timer.
- Skyl implantaterne med steril PBS tre gange, før du nedsænker dem i 50%, 70%, 80%, 90% og 100% ethanolopløsninger i 15 minutter til dehydrering.
- Hold implantaterne nedsænket i tert-butanol i 30 minutter tre gange, før du frysetørrer implantaterne.
- Fastgør implantatprøverne til prøvetrinnet, sputter belæg implantatet med guld (10 nm belægning), og observer det under et scanning elektronisk mikroskop (SEM) under et højt vakuum og 1,5 kV.
- Patologisk analyse af lårbensvævene
- Saml lårbensvævene med en saks efter aflivning af musene.
- Lårbensvævet nedsænkes i 4% paraformaldehydopløsning til fiksering ved 4 °C i 48 timer.
- Placer lårbensvævene i 10% formalin i 1 uge.
- Dehydrer lårbensvævene ved at nedsænke dem i henholdsvis 50%, 70%, 80%, 90% og 100% ethanolopløsninger i 15 minutter.
- Integrer det dehydrerede lårbenvæv i paraffin, før vævene sektioneres i 4 μm prøver ved hjælp af et mikrotom.
- Plet lårbenssektionerne med hæmatoxylin og eosin ved at følge en standardprotokol før patologisk analyse21.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Overførsel af prøverne til et plademedium og tælling af kolonier efter inkubation natten over anvendes almindeligvis til at vurdere den lokale patogenbelastning nær læsionen22,23. I vores undersøgelse var den mikrobielle kultur af lever-, nyre- og miltprøver negativ, hvilket indikerer, at modellen i denne undersøgelse kun førte til lokal infektion i stedet for systemisk infektion hos musene23.
SEM-billederne af implantaterne er vist i figur 2. Ingen C. albicans klæbede eller koloniserede på overfladen af nikkel-titaniumlegeringstråden i den tomme implantatgruppe. Imidlertid blev moden og tyk biofilm observeret på overfladen af nikkel-titaniumlegeringstråd i PJI-gruppen, hvilket indikerer den vellykkede konstruktion af C. albicans biofilmrelaterede PJI-model i mus 14 dage efter operationen23.
H&E-farvningen af lårbensvæv er vist i figur 3. En klar og komplet knogletrabekulær struktur blev observeret i kontrolgruppen, mens nogle få knogletrabekulære vævsdefekter i lårbensvævet kunne ses i den tomme implantatgruppe (figur 3, gule pile). I PJI-gruppen faldt antallet af knogletrabeculae signifikant23. Disse resultater indikerer, at C. albicans biofilmassocierede PJI-model i mus med succes blev etableret med en signifikant patologisk skade på lårbensvævet.
Figur 1: Implantationsprocedure. Den røde firkant i venstre panel viser det kirurgiske sted, hvor den glatte nikkel-titaniumlegeringstråd er indsat. Panelet til højre viser en del af lårbenet (rød cirkel) med nikkeltråden. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: SEM-billeder af implantatets overflade i blind- og PJI-grupperne. Forstørrelserne 1000x (skalalinje = 500 μm) og 5000x (skalalinje = 100 μm) vises som repræsentative billeder. Dette tal er blevet ændret med tilladelse fra Mo et al.23. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 3: H&E-farvning af lårbensvæv. Repræsentative H&E-billeder af implantatet, PJI-modellen og kontrolgrupperne er vist i figuren. Kontrolgruppen viser en klar og komplet knogletrabekulær struktur. Den blanke implantatgruppe viste nogle få knogletrabekulære vævsdefekter i lårbensvævet (gule pile). Antallet af knogletrabeculae faldt imidlertid i PJI-gruppen. De viste forstørrelser er 200x (skalabjælke = 150 μm) og 400x (skalabjælke = 75 μm). Dette tal er blevet ændret med tilladelse fra Mo et al.23. Klik her for at se en større version af denne figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Infektionen forårsaget af forurening af kirurgiske instrumenter eller det kirurgiske miljø under operationen er hovedårsagen til de fleste implantatinfektioner 24,25,26,27. Derfor blev en mus C. albicans biofilmrelateret PJI-model konstrueret i denne undersøgelse. Sammenlignet med den traditionelle PJI-model, hvor sterile rustfrie stålpartikler suspenderet i saltvand blev anvendt som implantat, blev en nikkel-titaniumlegeringstråd, et almindeligt anvendt implantatmateriale, anvendt i denne undersøgelse til at simulere kontakten mellem C. albicans, implantatmaterialer og knoglen, hvilket ligner mere situationen i klinikker.
PJI-modellen beskrevet i denne artikel kan perfekt simulere det fysiologiske miljø af PJI i klinikker. Denne model kan kun bruges til at studere infektionen under implantation i stedet for senere blodbåren infektion.
C. albicans kan podes på to måder. Den ene inokulerer direkte C. albicans på implantatstedet under operation28, og den anden dyrker implantaterne med C. albicans i en periode, så modne biofilm dannes på implantatets overflade før kirurgisk implantation29. Den førstnævnte metode blev valgt i denne undersøgelse på grund af dens nøjagtige inokulationsantal patogener, hvilket resulterede i minimale forskelle mellem grupper og en mere objektiv evaluering af efterfølgende behandlinger. Desuden er den førstnævnte metode mere i overensstemmelse med den kliniske situation.
I denne protokol er indsættelsen af implantatet vanskelig at udføre. Operatøren skal øve flere gange for at sikre, at implantatet indsættes i leddet i stedet for subkutant eller intramuskulært. Desuden er podningsantallet af C. albicans afgørende for repeterbarheden af PJI-modellen. C. albicans bør blandes grundigt via hvirvel for at sikre nøjagtigheden af podningsnummeret. Derudover bør C. albicans tilsættes langs legeringstråden for at simulere infektionsvejen i den kliniske situation.
Biofilm kunne påvises 7 dage efter bakteriel infektion, hvorefter biofilm gradvist steg og nåede et plateau den 14. dag30. Derfor blev succesen med den etablerede PJI-model inspiceret den 14. dag. Koloniseringen af C. albicans og dannelsen af biofilm på implantatets overflade blev inspiceret af SEM. Vævslæsionerne omkring implantatet forårsaget af lokal infektion blev evalueret ved patologisk analyse efter H&E-farvning. Undersøgelser har vist, at periprostetisk osteolyse er et vigtigt træk på grund af PJI31. Disse indikatorer er således også afgørende for evaluering af terapeutiske metoder til forebyggelse og behandling af PJI32.
Mikrobiel kultur anvendes almindeligvis til påvisning af mikrobiel infektion i klinikker og laboratorier. Derfor blev den mikrobielle kultur af implantatet, væv omkring implantater, lever og andre vitale organer udført i denne undersøgelse. Til implantatet blev ultralydbehandling påført for at fjerne C. albicans klæbet til overfladen af titanium-nikkellegeringstråden. Dernæst blev C. albicans beriget ved centrifugering før mikrobiel kultur. Der blev imidlertid fundet et negativt resultat, der ikke stemte overens med SEM-resultatet (figur 2). SEM-resultatet viste, at C. albicans klæbede til overfladen af titanium-nikkellegeringstråd. Derfor var resultatet af mikrobiel kultur et falsk negativt, hvilket kan tilskrives den tætte vedhæftning af C. albicans til titanium-nikkellegeringstråd; ultralyd kunne ikke med succes eksfoliere C. albicans fra implantatet. På samme måde var den mikrobielle kultur af vævene omkring implantater og vitale organer også negativ. Der er to mulige årsager: (1) Antallet af C. albicans podet i denne undersøgelse var kun 2000 CFU, hvilket kan være for lille til at invadere det omgivende væv og systemet i forsøgsperioden; (2) Metoden til ekstraktion og adskillelse af patogener fra væv er lav. En tidligere offentliggjort rapport antyder, at mikrobiel kultur let kunne vise falske negative resultater og forsinkede behandlinger33. Grocott-Gomori farvning kan bruges til at bestemme dannelsen af hyfer i knoglen og leddet32. Det kan også være nyttigt at øge podemængden, forlænge forsøgsvarigheden eller holde musene i en immunsupprimeret tilstand før operation32. Det skal dog bemærkes, at langvarig infektion kan føre til dyb infektion eller endda systemisk infektion. Således bør forsøgsperioden udformes i overensstemmelse med det specifikke formål.
Sammenfattende skabte denne undersøgelse en vellykket musemodel af C. albicans biofilmassocierede PJI, som kan være af stor betydning for forskning i forebyggelse og behandling af C. albicans biofilmassocierede PIJ.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen kendte konkurrerende økonomiske interesser eller personlige forhold, der kunne have syntes at påvirke det arbejde, der er rapporteret i dette papir.
Acknowledgments
Vi er taknemmelige for den økonomiske støtte fra Natural Science Foundation of Shaanxi-provinsen (bevillingsnummer 2021SF-118) og National Natural Science Foundation of China (bevillingsnummer 81973409, 82204631).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.5 Mactutrius turbidibris | Shanghai Lujing Technology Co., Ltd | 5106063 | |
| 4 °C refrigerator | Electrolux (China) Electric Co., Ltd | ESE6539TA | |
| Agar | Beijing Aoboxing Bio-tech Co., Ltd | 01-023 | |
| Analytical balances | Shimadzu | ATX124 | |
| Autoclaves Sterilizer | SANYO | MLS-3750 | |
| Carbenicillin | Amresco | C0885 | |
| Eclipse Ci Nikon upright optical microscope | Nikon | Eclipse Ts2-FL | |
| Glucose | Macklin | D823520 | |
| Inoculation ring | Thermo Scientific | 251586 | |
| Isoflurane | RWD | 20210103 | |
| NaCl | Xi'an Jingxi Shuanghe Pharmaceutical Co., Ltd | 20180108 | |
| Paraformaldehyde | Beyotime Biotechnology | P0099 | |
| Peptone | Beijing Aoboxing Bio-tech Co., Ltd | 01-001 | |
| RWD R550 multi-channel small animal anesthesia machine | RWD | R550 | |
| SEM | Hitachi | TM-1000 | |
| Temperature incubator | Shanghai Zhichu Instrument Co., Ltd | ZQTY-50N | |
| Ultrapure water water generator | Heal Force | NW20VF | |
| Ultrasound machine | Do-Chrom | DS10260D | |
| Yeast extract | Thermo Scientific Oxoid | LP0021B |
References
- Mayer, F. L., Wilson, D., Hube, B.
- Fan, F., et al. Candida albicans biofilms: antifungal resistance, immune evasion, and emerging therapeutic strategies. International Journal of Antimicrobial Agents. 60 (5-6), 106673 (2022).
- Tong, Y., Tang, J. Candida albicans infection and intestinal immunity. Microbiological Research. 198, 27-35 (2017).
- Kanaguchi, N., et al. Effects of salivary protein flow and indigenous microorganisms on initial colonization of Candida albicans in an in vivo model. Bmc Oral Health. 12, 36 (2012).
- Gulati, M., Nobile, C. J. Candida albicans biofilms: development, regulation, and molecular mechanisms. Microbes and Infection. 18 (5), 310-321 (2016).
- Douglas, L. J. Candida biofilms and their role in infection. Trends in Microbiology. 11 (1), 30-36 (2003).
- Nobile, C. J., Johnson, A. D. Candida albicans biofilms and human disease. Annual Review of Microbiology. 69, 71-92 (2015).
- Mack, D., et al. Biofilm formation in medical device-related infection. The International Journal of Artificial Organs. 29 (4), 343-359 (2006).
- Miller, R., et al. Periprosthetic joint infection: A review of antibiotic treatment. JBJS Reviews. 8 (7), e1900224 (2020).
- Brown, T. S., et al. Periprosthetic joint infection with fungal pathogens. The Journal of Arthroplasty. 33 (8), 2605-2612 (2018).
- Kojic, E. M., Darouiche, R. O.
- Schoof, B., et al. Fungal periprosthetic joint infection of the hip: a systematic review. Orthopedic Reviews (Pavia). 7 (1), 5748 (2015).
- Izakovicova, P., Borens, O., Trampuz, A. Periprosthetic joint infection: current concepts and outlook. EFORT Open Reviews. 4 (7), 482-494 (2019).
- Tande, A. J., Patel, R.
- Stocks, G., Janssen, H. F. Infection in patients after implantation of an orthopedic device. ASAIO Journal. 46 (6), S41-S46 (2000).
- Shahi, A., Tan, T. L., Chen, A. F., Maltenfort, M. G., Parvizi, J. In-hospital mortality in patients with periprosthetic joint infection. The Journal of Arthroplasty. 32 (3), 948-952 (2017).
- Carli, A. V., Ross, F. P., Bhimani, S. J., Nodzo, S. R., Bostrom, M. P. Developing a clinically representative model of periprosthetic joint infection. The Journal of Bone and Joint Surgery. American Volume. 98 (19), 1666-1676 (2016).
- Stavrakis, A. I., Niska, J. A., Loftin, A. H., Billi, F., Bernthal, N. M. Understanding infection: A primer on animal models of periprosthetic joint infection. The Scientific World Journal. 2013, 925906 (2013).
- Qiao, B., Lv, T. Electrochemical investigation of interaction of candida albicans with titanium-nickel implant in human saliva. International Journal of Electrochemical Science. 17 (2), 22028 (2022).
- Oh, Y. R., Ku, H. M., Kim, D., Shin, S. J., Jung, I. Y. Efficacy of a Nickel-titanium ultrasonic instrument for biofilm removal in a simulated complex root canal. Materials. 13 (21), 4914 (2020).
- Feldman, A. T., Wolfe, D. Tissue Processing and Hematoxylin and Eosin Staining. Histopathology: Methods and Protocols. Christina E, D. ay , Springer, New York. 31-43 (2014).
- Sinclair, K. D., et al. Model development for determining the efficacy of a combination coating for the prevention of perioperative device related infections: A pilot study. Journal of Biomedical Materials Research - Part B Applied Biomaterials. 101 (7), 1143-1153 (2013).
- Mo, F., et al. In vitro and in vivo effects of the combination of myricetin and miconazole nitrate incorporated to thermosensitive hydrogels, on C. albicans biofilms. Phytomedicine. 71, 153223 (2020).
- Zahar, A., Sarungi, M. Diagnosis and management of the infected total knee replacement: a practical surgical guide. Journal of Experimental Orthopaedics. 8 (1), 14 (2021).
- Parvizi, J., Jacovides, C., Zmistowski, B., Jung, K. A. Definition of periprosthetic joint infection: Is there a consensus. Clinical Orthopaedics and Related Research. 469 (11), 3022-3030 (2011).
- Karczewski, D., et al. Candida periprosthetic joint infections - risk factors and outcome between albicans and non-albicans strains. International Orthopaedics. 46 (3), 449-456 (2022).
- Cobo, F., Rodriguez-Granger, J., Sampedro, A., Aliaga-Martinez, L., Navarro-Mari, J. M. Candida prosthetic joint infection. A review of treatment methods. Journal of Bone and Joint Infection. 2 (2), 114-121 (2017).
- Cobrado, L., Silva-Dias, A., Azevedo, M. M., Pina-Vaz, C., Rodrigues, A. G. In vivo antibiofilm effect of cerium, chitosan and hamamelitannin against usual agents of catheter-related bloodstream infections. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 68 (1), 126-130 (2013).
- Vila, T., et al. Therapeutic implications of C. albicans-S. aureus mixed biofilm in a murine subcutaneous catheter model of polymicrobial infection. Virulence. 12 (1), 835-851 (2021).
- Nishitani, K., et al. Quantifying the natural history of biofilm formation in vivo during the establishment of chronic implant-associated Staphylococcus aureus osteomyelitis in mice to identify critical pathogen and host factors. Journal of Orthopaedic Research. 33 (9), 1311-1319 (2015).
- Ormsby, R. T., et al. Evidence for osteocyte-media ted bone-matrix degradation associated with periprosthetic joint infection (PJI). European Cells & Materials. 42, 264-280 (2021).
- Garlito-Díaz, H., et al. A new antifungal-loaded sol-gel can prevent candida albicans prosthetic joint infection. Antibiotics (Basel). 10 (6), 711 (2021).
- Harro, J. M., et al. Development of a novel and rapid antibody-based diagnostic for chronic staphylococcus aureus infections based on biofilm antigens. Journal of Clinical Microbiology. 58 (5), e01414-e01419 (2020).
