逃生反应分析：研究斑马鱼幼虫触摸刺激反应的方法

Overview

此视频描述了触摸唤起响应检测，该检测测量斑马鱼幼虫触摸刺激的反应。

Protocol

1. 触摸唤起响应分析

1. 为触摸唤起响应分析准备 2 个 dpf 胚胎
   1. 确保进行测试的一天中的时间在实验之间是一致的，因为活动可能在一天中发生巨大变化。
      注意：实验应进行盲目和随机测试的顺序，以尽量减少实验文物。
   2. 分配鱼株的数量，这是未知的个人进行实验。在此之后，使用免费在线工具生成随机列表，决定测试顺序。
   3. 在测试前至少一小时，通过在胆汁中撕开一个洞，然后用一对细钳子轻轻地将胆汁拉开，来去除胚胎。在返回 28 °C 孵化器之前，先从培养皿中取出任何碎屑。
2. 执行触摸唤起响应分析
   1. 在开始测试前至少 15 分钟将热级加热到 28 °C。
      注意：此阶段受温度控制，在测试期间将保持在 28 °C。温度会影响活动，因此保持恒定温度很重要。如果没有加热阶段，则应监测水的温度，所有实验应在同一温度下进行。
   2. 将充满胚胎介质（5m NaCl， 0.17m KCl， 0.33 mM CaCl_2，0.33 mM MgSO_4）的培养皿放在一个发光的舞台上，并在培养皿上安装高速摄像头。
   3. 启动摄像机录制软件（如流 Pix 5，如此处描述），并在"工作区"选项卡下选择每秒 1，000 帧（1，000 fps）作为捕获速度，以确保记录鱼的快速游泳动作。
   4. 一次处理一个胚胎，将胚胎放在培养皿中间，斑马鱼在视野中清晰可见。
      注意：如果胚胎在实验开始前游走，取而代之的是另一个胚胎，因为胚胎的重新捕获和定位可能导致它对刺激失去敏感性，反复的爆裂反应可能会促进某些疾病模型的肌肉无力。
   5. 开始录制时点击"记录"按钮，然后用头部顶部的钝针轻轻触摸胚胎，将机械感官刺激传递给胚胎。
   6. 胚胎从视野中游出或恢复休息后停止录音。
      注意：在机械刺激后，加速在爆裂逃生响应的前0.2秒内达到峰值。因此，确保至少在前0.2秒的逃生反应记录鱼是在视野中。使用软件 Stream Pix 5，数据将自动保存为.avi视频文件。也可以使用其他视频捕获软件，如免费视频捕获或 Softonic，这两种软件都可以免费下载。
   7. 将胚胎返回到新的培养皿中，并选择另一个胚胎进行测试。对至少15条鱼进行测试。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
90 mm Petri Dishes	Pacific Laboratory Products	PT S90001
Tweezers, style 8	ProSciTech	T04-821
Incubator	Thermoline Scientific	TEI-43L
High Speed Camera	Baumer	HXC20
StreamPix5	NorPix		Step 1.2.3
Temperature Control Unit	Viewpoint
http://www.randomization.com	N/A		Steps 1.1.2