탈출 응답 분석 : 자극을 터치 하는 제브라피시 애벌레의 응답을 연구 하는 방법

Overview

이 비디오는 자극을 만질 제브라피시 애벌레의 반응을 측정하는 터치 스워리 응답 분석법을 설명합니다.

Protocol

1. 터치 유발 응답 분석

1. 터치 유발 응답 분석에 대한 2 dpf 배아의 준비
   1. 활동이 하루 종일 극적으로 다를 수 있으므로 테스트가 수행되는 하루 중 시간이 실험 간에 일관성이 있는지 확인합니다.
      참고: 실험 아티팩트를 최소화하기 위해 실험이 눈멀게 되고 무작위 테스트 순서를 수행해야 합니다.
   2. 물고기를 할당하면 숫자를 변형, 이는 실험을 수행하는 개인에게 알 수없는. 이에 따라 자유롭게 사용할 수 있는 온라인 도구를 사용하면 테스트 순서를 지정하는 임의의 목록이 생성됩니다.
   3. 테스트 하기 전에 적어도 한 시간 전에, 초리온에 구멍을 찢 고 부드럽게 미세 핀셋의 쌍을 사용 하 여 초리온을 당기고 배아를 dechorionate. 28°C 인큐베이터로 돌아가기 전에 페트리 접시에서 이물질을 제거합니다.
2. 터치 에서 불러일으킨 응답 분석 기
   1. 테스트를 시작하기 전에 28°C까지 열을 가하여 최소 15분 이상 가열한다.
      참고: 이 단계는 온도 제어되며 테스트 기간 동안 28 °C로 유지됩니다. 온도는 활동에 영향을 미치므로 일정한 온도를 유지하는 것이 중요합니다. 가열 된 단계를 사용할 수없는 경우 다음 물의 온도를 모니터링하고 모든 실험은 동일한 온도에서 수행되어야한다.
   2. 배아 매체(5m NaCl, 0.17m M KCl, 0.33 mM CaCl_2,0.33 mM MgSO_4)로 채워진 페트리 접시를 조명된 스테이지에 놓고 페트리 접시 위에 고속 카메라를 장착한다.
   3. 비디오 카메라 레코딩 소프트웨어(예: Stream Pix 5, 여기에 설명됨)를 실행하고 "작업 공간" 탭 에서 물고기의 빠른 수영 동작을 기록할 수 있도록 캡처 속도로 초당 1,000프레임(1,000fps)을 선택합니다.
   4. 한 번에 하나의 배아와 함께 작업, 시야에서 명확하게 볼 수 있는 제브라피시와 함께 페트리 접시의 중간에 배아를 배치합니다.
      참고: 실험개시 전에 배아가 수영하는 경우 다른 배아로 대체하고, 배아의 재촬영 및 포지셔닝은 자극에 둔감해지고 반복된 버스트 반응이 일부 질병 모델의 근육 약화를 촉진할 수 있기 때문에 대체한다.
   5. "기록" 버튼을 클릭하여 녹음을 시작하고, 머리 위에 무딘 바늘로 부드럽게 만져서 배아에 메카노 감각 자극을 전달합니다.
   6. 배아가 시야에서 헤엄치지 않거나 휴식을 위해 돌아온 후 녹음을 중지하십시오.
      참고: 가속은 기계적 자극에 따라 버스트 탈출 응답의 첫 0.2 초 이내에 피크. 따라서 적어도 처음 0.2초 동안 물고기가 시야에 있는지 확인합니다. 소프트웨어 Stream Pix 5를 사용하면 데이터가 자동으로 .avi 비디오 파일로 저장됩니다. 무료 비디오 캡처 또는 소토닉과 같은 대체 비디오 캡처 소프트웨어도 무료로 다운로드할 수 있습니다.
   7. 배아를 새로운 페트리 접시에 반환하고 테스트를 위해 다른 배아를 선택합니다. 최소 15마리의 물고기에 대한 테스트를 수행합니다.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
90 mm Petri Dishes	Pacific Laboratory Products	PT S90001
Tweezers, style 8	ProSciTech	T04-821
Incubator	Thermoline Scientific	TEI-43L
High Speed Camera	Baumer	HXC20
StreamPix5	NorPix		Step 1.2.3
Temperature Control Unit	Viewpoint
http://www.randomization.com	N/A		Steps 1.1.2