Overview
此视频描述了触摸唤起响应检测,该检测测量斑马鱼幼虫触摸刺激的反应。
Protocol
1. 触摸唤起响应分析
- 为触摸唤起响应分析准备 2 个 dpf 胚胎
- 确保进行测试的一天中的时间在实验之间是一致的,因为活动可能在一天中发生巨大变化。
注意:实验应进行盲目和随机测试的顺序,以尽量减少实验文物。 - 分配鱼株的数量,这是未知的个人进行实验。在此之后,使用免费在线工具生成随机列表,决定测试顺序。
- 在测试前至少一小时,通过在胆汁中撕开一个洞,然后用一对细钳子轻轻地将胆汁拉开,来去除胚胎。在返回 28 °C 孵化器之前,先从培养皿中取出任何碎屑。
- 确保进行测试的一天中的时间在实验之间是一致的,因为活动可能在一天中发生巨大变化。
- 执行触摸唤起响应分析
- 在开始测试前至少 15 分钟将热级加热到 28 °C。
注意:此阶段受温度控制,在测试期间将保持在 28 °C。温度会影响活动,因此保持恒定温度很重要。如果没有加热阶段,则应监测水的温度,所有实验应在同一温度下进行。 - 将充满胚胎介质(5m NaCl, 0.17m KCl, 0.33 mM CaCl2,0.33 mM MgSO4)的培养皿放在一个发光的舞台上,并在培养皿上安装高速摄像头。
- 启动摄像机录制软件(如流 Pix 5,如此处描述),并在"工作区"选项卡下选择每秒 1,000 帧(1,000 fps)作为捕获速度,以确保记录鱼的快速游泳动作。
- 一次处理一个胚胎,将胚胎放在培养皿中间,斑马鱼在视野中清晰可见。
注意:如果胚胎在实验开始前游走,取而代之的是另一个胚胎,因为胚胎的重新捕获和定位可能导致它对刺激失去敏感性,反复的爆裂反应可能会促进某些疾病模型的肌肉无力。 - 开始录制时点击"记录"按钮,然后用头部顶部的钝针轻轻触摸胚胎,将机械感官刺激传递给胚胎。
- 胚胎从视野中游出或恢复休息后停止录音。
注意:在机械刺激后,加速在爆裂逃生响应的前0.2秒内达到峰值。因此,确保至少在前0.2秒的逃生反应记录鱼是在视野中。使用软件 Stream Pix 5,数据将自动保存为.avi视频文件。也可以使用其他视频捕获软件,如免费视频捕获或 Softonic,这两种软件都可以免费下载。 - 将胚胎返回到新的培养皿中,并选择另一个胚胎进行测试。对至少15条鱼进行测试。
- 在开始测试前至少 15 分钟将热级加热到 28 °C。
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Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
90 mm Petri Dishes | Pacific Laboratory Products | PT S90001 | |
Tweezers, style 8 | ProSciTech | T04-821 | |
Incubator | Thermoline Scientific | TEI-43L | |
High Speed Camera | Baumer | HXC20 | |
StreamPix5 | NorPix | Step 1.2.3 | |
Temperature Control Unit | Viewpoint | ||
http://www.randomization.com | N/A | Steps 1.1.2 |