Tunntarmen Transplantation hos möss

Summary

Musen tunntarmen transplantation modell har erkänts som ett viktigt verktyg för att studera mechanismes med avstötning och skärmen nya immunosuppressiva läkemedel. Dock är denna modell begränsad att använda eftersom de inblandade teknikerna är en mycket teknisk utmaning. Nu introducerar vi den modifierade tekniken.

Abstract

Sedan 1990 har främjat utvecklingen av takrolimus-baserad immunosuppression och förbättrade kirurgiska tekniker, det ökade utbudet av potenta immunsuppressiva läkemedel, infektion profylax, och passar patienturval förbättra aktuariella transplantat och patientens överlevnad för alla typer av tarmen transplantation. Patienter med irreversibel intestinal misslyckande och komplikationer av parenteral nutrition bör nu rutinmässigt övervägas för tunntarmen transplantation. Dock har Överlevnaden för små tarmtransplantation varit långsamma med att förbättra jämför allt positivt med njur-, lever, hjärta och lungor. Tunntarmen transplantation är fortfarande otillfredsställande jämfört med andra organ. Ytterligare framsteg kan bero på bättre förståelse för immunologi och fysiologi av transplantat och kan underlättas avsevärt djurmodeller. En ökad användning av mus tunntarmen transplantation modell behövs i studiet av immunologi och fysiologi transplantation tarmen samt effektiva metoder för att diagnostisera tidigt avslag. Dock är denna modell begränsad att använda eftersom de inblandade teknikerna är en extremt tekniskt utmanande. Vi har utvecklat en modifierad teknik. När du gör anastomos av portalen ven och underlägsna vena cava, två bo suturer som gjordes vid den proximala spets och distala spets mottagarens s underlägsen vena cava med givaren s portal ven. Den vänstra väggen i sämre vena cava och givare s portvenen stängs med fortsatt suturer på insidan av den underlägsna vena cava efter, efter en knut med proximala spetsen stannar sutur rätt vägg sämre vena cava och givaren s portal ven är stängda med en fortsatt suturer utanför sämre Vena grotta med 10-0 suturer. Denna metod är enklare att utföra eftersom anastomos görs bara på ena sidan av sämre vena cava och 10-0 suturer är rätt storlek för att undvika blödning och blodpropp. I denna artikel ger vi information om tekniken för att komplettera videon.

Protocol

Donator beredning och tunntarmen skörd:

1. Musen är ansetheized med en intraperitoneal injektion av pentobarbital och placeras liggande på drift fältet.
2. En lång mittlinjen buksnitt görs. Den proximala av jejunum är identifierad och knyts ihop med 6-0 suturer. Bifogade mesenteriska fartyg distalt om jejunum slips är knyts ihop med 8-0 suturer.
3. Den distala av ileum identifieras och knyts ihop med 6-0 suturer. Den bifogade mesenteriska fartyg distalt om ileum är knyts ihop med 8-0 suturer.
4. Portalen är utsatt från omgivande fett och bifogade vävnader, knyts ihop och delade upp pancreaticoduodenal och mjälten ådror.
5. Den bukaorta är utsatt och utsatt den överlägsna mesenterica artär från omgivande vävnader.
6. 1 ml heparin (10u/ml) sprutas in i sämre hålvenen för heparin.
7. Portalen ven är uppdelad på hilum i levern, och överlägsen mesenteriska artär delas från kroppspulsådern, inklusive en Carrel fläck aorta.
8. Jejunum och ileum delas distalt banden. Hela tunntarmen tas bort, därefter lagras vid 4 ° C i saltlösning.

Mottagare förberedelse och transplantation:

1. Musen är ansetheized med en intraperitoneal injektion av pentobarbital och placeras liggande på drift fältet.
2. En lång mittlinjen buksnitt görs. Buken innehållet är tillbaka utanför buken med gasväv för att exponera bukaorta och sämre hålvenen.
3. Grenarna av bukaorta och sämre hålvenen är utsatta och knyts ihop med 10-0 suturer.
4. Den proximala och distala ligatur placeras runt kroppspulsådern och sämre hålvenen respektive.
5. Den venotomy görs i sämre hålvenen av mottagaren med en 30 gauge nål. Öppningen är då förlängas till som är lika med givarens portavenen med mikro-sax.
6. Den aortotomy görs i bukaorta av mottagare med en 30 gauge nål. Öppningen är då förlängas till som är lika med givarens överlägsna mesenterica artär Carrel patch med mikro-sax
7. I snitt av bukaorta och sämre hålvenen är perfusion med koksaltlösning.
8. Givarens tunntarmen är placerad på den vänstra sidan av mottagarens buken täcks med gasbinda.
9. Vistelsen suturer placeras i den proximala spets och distala spetsen av mottagaren bukaorta med donerade överlägsna mesenterica artär Carrel patch.
10. Den anastomos av den högra sidan av mottagarens bukaorta och givare överordnade mesenterica artär Carrel patch är färdig först med fortsatt suturer.
11. Två stannar suturer görs först på den proximala spets och distala spetsen av mottagarens sämre vena cava med givarens portal för anastomos av givarens portalen ven och mottagarens sämre hålvenen.
12. Den vänstra väggen i sämre vena cava och donatorns portvenen stängs med fortsatt suturer i inne i sämre hålvenen.
13. Efter en knut med proximala spetsen stannar sutur, rätt vägg sämre vena cava och givarens portavenen är stängd med en fortsatt suturer utanför sämre Vena grottan.
14. Givarens tunntarmen vänds över till den högra sidan av mottagarens buken. Den högra väggen i mottagarens bukaorta och givaren överordnade mesenterica artär anastomos stängs med fortsatt suturer.
15. Efter alla anastomos görs är den distala ligatur bort först för att kontrollera blödning från anastomos.
16. Om det finns liten eller ingen blödning från anastomos den proximala ligaturer tas bort. Givarens tunntarmen fylls med blod omedelbart, färgen av tunntarmen blir röd.
17. Den distala änden av transplantat ileum är anastomoseras end-to-sida till den proximala delen av mottagarens jejunum med en kontinuerlig sutur av 8-0 suturer.
18. Den proximala jejunum av givaren är exteriorized som en stomi, är fastsatt i huden på höger sida av bukväggen med fyra stygn på varje sida av 8-0 suturer.
19. Tarmen kommer tillbaka till bukhålan och stängs med 6-0 fortsätter suturer.
20. Mottagaren musen placeras på varma området. Efter en timme, återhämtar mottagaren.

Discussion

Den unika immunförsvaret efter tunntarmen transplantation har varit föremål för omfattande forskning med hjälp av liten modell tarm transplantation hos möss. Den grundläggande immunologiska reaktioner, såsom graft-versus-reaktioner har, host-versus-graft-reaktion, en kombination av båda reaktioner, kronisk avstötning och tolerans inblandade. Nästan alla immunsuppressiva medel av bevisad eller eventuella kliniska relevansen har testats för deras effekt i tunntarmen transplantation modell.

Vi ändrade musen lilla tekniken tarm transplantationen på flera sätt att förbättra effektiviteten och priser framgång:

1. Insidan av givarens tunntarmen bör hålla tydliga och ingen några kvar avföring.
2. Kanten på Carrel plåster i stora kroppspulsådern av högsta mesenterica artär bör delas smidig och lika stora med öppnandet av mottagarens bukaorta.
3. Vrid inte portalen ven med den överlägsna mesenterica artär när anastomoser portalen ven med mottagarens sämre hålvenen. Eftersom portalen är ven längre än den överlägsna mesenterica artär.
4. Tunntarmen bör placeras på mitten av magen och hålla den överlägsna mesenterica artär och portvenen i rätt spänning när ombyggnaden blodcirkulationen för att undvika blodpropp.
5. Den överlägsna mesenterica artär bör hålla rätt spänning när värden tunntarmen tillbaka in i buken hålighet för att undvika blodpropp efter stängning buken.
6. 0,1 ml cefuroxine (20mg/kg) finns kvar i buken hålighet att undvika infektion innan du stänger buken.
7. För att vara säker låt inte avföring flödet in i buken aktivitet när du utför tunntarmen anastomos för att undvika infektion efter operation.
8. Skada inte mesenteriala fartyg då skörd tunntarmen för att undvika tunntarmen nekros efter operation.

Materials

Name	Type	Company	Catalog Number	Comments
Sutures	10-0 and 11-0	MONOSOF
Microscope	Unversal S3	Carl Zeiss, Inc.