Criação de modelo Rat reversível colestática

Summary

Colestase é uma condição clínica comumente encontradas pelos dois cirurgiões e gastroenterologistas. Criação de um modelo reversível colestática rato pode ser um desafio, em vista do pequeno tamanho e anatomia hepatopancreatobiliary única em ratos. Este artigo vídeo demonstra a criação de um modelo colestática reversível.

Abstract

Colestase é uma condição clínica comumente encontradas pelos dois cirurgiões e gastroenterologistas. Colestase pode causar várias alterações fisiológicas e afetam o estado nutricional e os resultados cirúrgicos. Estudo das alterações fisiopatológicas que ocorrem no fígado e outros órgãos é importante. Vários estudos foram feitos em modelos de ratos colestática.

Nós usamos um modelo de rato reversível colestática em nosso recente estudo examinando o papel da metilprednisolona na lesão de reperfusão de isquemia. Várias técnicas para a criação de um modelo reversível colestática têm sido descritas. Criação de um modelo reversível colestática rato pode ser um desafio, em vista do pequeno tamanho e anatomia hepatopancreatobiliary única em ratos. Este artigo vídeo demonstra a criação de um modelo colestática reversível.

Este modelo pode ser usado em vários estudos, como olhar para as mudanças na nutricionais, fisiológicos, patológicos, alterações histológicas e imunológicas do trato gastrointestinal. Este modelo também pode ser usado para ver os efeitos da colestase e várias intervenções terapêuticas em cirurgias hepáticas graves.

Protocol

1. Anatomia biliar de ratos

O diâmetro do duto biliar e comprimento médio foi de 1 mm e 29 mm, respectivamente. A distância média entre o piloro e da papila duodenal foi de 28 mm. Há dois ductos pancreáticos principal, que se abrem para o ducto biliar - o duto anterior abre no lado esquerdo eo ducto posterior abre no lado direito. Além desses dutos principais, uma série de dutos menores que drenam as três porções do pâncreas aberto diretamente para o ducto biliar ^6.

2. Técnica

Todos os experimentos com animais foram realizados de acordo com os Institutos Nacionais de Saúde diretrizes para a pesquisa ética e foram aprovados pelo Comitê de Pesquisa da Instituição e do Comitê Animal Care. Masculino Sprague-Dawley com 8 semanas foram utilizadas para esta demonstração. Os ratos foram obtidos a partir de Charles River Laboratories, em Wilmington, MA e todos foram mais de 300 gramas. Ratos tiveram acesso a dieta padrão de laboratório e foi mantido em condições de laboratório padrão.

Os ratos foram inicialmente anestesiados com isofluorano e mantidas sob anestesia durante a cirurgia com isofluorano por meio de uma máscara. A incisão mediana de 2 cm foi feita a partir do processo xifóide. Uma vez que a fáscia foi aberto, os lobos do fígado foram retraídos cranialmente com retractor uma Sen, e do duodeno foi recolhido caudalmente usando Q-dicas. O ducto biliar foi identificado como uma estrutura tubular de entrar no duodeno. O ducto biliar foi colocado sob tensão e parcialmente cortada. A estéril cinco centímetros tubo de polietileno de comprimento com um diâmetro interno de 0,6 mm e um diâmetro externo de 0,9 mm foi utilizada. Uma extremidade deste tubo foi selado calor ea outra extremidade foi gentilmente chanfrados. O fim chanfrado foi então passado para o ducto biliar. Este foi garantido no local usando 8-0 suturas Nylon proximal e distal à abertura do ducto biliar. O tubo restantes junto com o fim selado foi colocado na cavidade peritoneal. O local da operação foi irrigada com solução salina normal. O abdômen foi então fechado em 2 camadas, com sutura de poliglactina 4-0. A linha alba foi fechada com sutura contínua ea sutura interrompida dérmica foram colocados. Cola de pele foi então aplicado sobre a pele. Os ratos foram autorizados a se recuperar em condições de laboratório padrão com acompanhamento diário do peso corporal para assegurar a hidratação adequada.

Para a operação de inversão de colestase, os ratos foram anestesiados com isofluorano como descrito anteriormente. O abdômen foi aberto sobre o local da incisão anterior. O tubo foi identificado e levado para fora da cavidade peritoneal. Aderências omental ao redor do tubo são libertados usando dissecção romba e aguda. Um site no duodeno foi então identificado para o posicionamento confortável do tubo duodenostomy. A sutura em bolsa, 2-3 mm de diâmetro, foi então colocado usando 8-0 Nylon. O duodeno foi aberto dentro desta sutura em bolsa. O fim selada do tubo foi, então, cortados em tamanhos adequados. Livre fluxo de bile foi assegurada. Esta extremidade do tubo foi então colocado para o duodeno ea sutura em bolsa foi apertada. O abdômen foi irrigada e fechou em camadas.

Em um estudo anterior, onde coledocoduodenostomia foi realizada utilizando uma técnica diferente, os ratos foram sobreviveu por 12 semanas e os ratos eram saudáveis ​​durante esse período. Além disso, este estudo confirmou a reversão de alterações bioquímicas e histológicas após coledocoduodenostomia em ratos submetidos à obstrução do ducto biliar por um período de duas semanas. ⁷

Discussion

Colestase leva a uma miríade de mudanças no sistema gastrointestinal. Estudos têm sido feitos procurando as mudanças no sistema imunológico e estado nutricional. Colestase ^1-3 pode afetar os resultados das cirurgias hepáticas. Estudos têm sido realizados para melhorar os resultados de cirurgias hepáticas, na presença de colestase. ^05/04 Com as melhorias na medicina e na pesquisa, mais estudos serão feitos em colestase. Por isso, é necessário ter um modelo colestática bom. O rato é o preferido como animal experimental, pois é facilmente disponível, de fácil manuseio, baixo custo e um modelo robusto para estudar o sistema hepatopancreatobiliary. ⁶ Através deste artigo vídeo que demonstram a criação de um modelo colestática reversível que pode ser utilizado em estudos futuros.