Summary
استخدام وسيفيراز ونظم التصوير في الجسم الحي (IVIS) كوسيلة جديدة لتحديد النقاط النهائية السريرية التطورات المرض قبل أن يحدث. وقد سمح لنا IVIS لتصور في الوقت الحقيقي غزو الفيروسات بالتهاب الدماغ خلال الأيام متعددة، وتوفير نموذج المرض أكثر دقة للدراسة في المستقبل. وقد سمح ذلك لنا أيضا لتحديد ملامح المحتملة واقية من الأدوية المضادة للفيروسات واللقاحات أسرع من النماذج الحيوانية المستخدمة حاليا. القدرة على الاستفادة من الحيوانات الفردية على نقطة زمنية متعددة يضمن متطلبات الحيوانات خفضت، والتكاليف، والاعتلال الكلي للحيوانات تستخدم وسيلة ضمان أكثر إنسانية وأكثر من دراسة علمية المرض.
Abstract
التطورات الحديثة في تكنولوجيا التصوير تشجيع مواصلة تطوير وصقل في الطريق ويتم إنجاز البحوث الفيروسية. اقترح في البداية من قبل رسل وبورش في 3Rs هيوم (استبدال، والحد، والصقل)، واستخدام نماذج حيوانية في البحث العلمي تحت ضغط مستمر لتحديد منهجيات جديدة للحد من استخدام الحيوان مع تحسين الدقة العلمية والسرعة. ومن التحديات الرئيسية لمديري هيوم ومع ذلك، هو كيفية ضمان دراسات إحصائية دقيقة مع تقليل المراضة الحيوانية من الأمراض والعدد الإجمالي. الدراسات نجاعة اللقاح تتطلب حاليا عدد كبير من الحيوانات من أجل أن تعتبر ذات دلالة إحصائية وغالبا ما تؤدي إلى ارتفاع معدلات المراضة والوفيات النهاية لتحديد الحماية المناعية. نحن تستخدم في الجسم الحي التصوير أنظمة (IVIS) بالتزامن مع انزيم bioluminescent اليراع لتتبع تدريجيا غزو الجهاز العصبي المركزي (CNS) من قبل سينعقدphalitic الفيروس في نموذج الفئران. عادة، يتطور المرض ببطء نسبيا، ولكن تكاثر الفيروس سريعا، وخاصة داخل الجهاز العصبي المركزي، ويمكن أن يؤدي إلى نتيجة، وغالبا مميتة. بعد العدوى داخل الأنف من الفئران مع TC83 لوك، وهو الموهن الفنزويلي فيروس التهاب الدماغ الخيلي سلالة معدلة ليعبر عن الجين وسيفيراز، ونحن قادرون على تصور تكاثر الفيروس داخل الدماغ على الأقل قبل ثلاثة أيام من ظهور أعراض المرض السريري. استخدام CNS الغزو كمفتاح بالتهاب الدماغ مرض نقطة النهاية التنمية ونحن قادرون على التعرف بسرعة العلاجية وحماية قاح ضد TC83 لوك العدوى قبل ظهور الأعراض السريرية تطوير. مع التكنولوجيا IVIS ونحن قادرون على إظهار اختبار سريع ودقيق من العلاجات واللقاحات المخدرات مع تقليل أعداد الحيوانات والاعتلال.
Protocol
1. إعداد الحيوان
- وصول الحيوان: ولدى وصوله إلى مستوى السلامة الأحيائية الحيوانية 2 (ABSL2) المرافق، والسماح الحيوانات ما لا يقل عن 2 يوما ليتأقلم مع بيئته الجديدة. بعد هذه الفترة بقية، وفحص الحيوانات لتقييم صحتهم والمظهر الخارجي بشكل عام.
- عند استخدام صحفيين الفلورسنت من المهم أن تضع جميع المواد الحيوانية على نظام غذائي البرسيم مجانا للحد من كمية من تألق ذاتي وGI إشارة الخلفية.
- حلاقة الحيوانات: تحسين الكشف عن إشارة bioluminescent من منطقة الجمجمة أثناء التصوير؛ يحلق رؤوس جميع الحيوانات. تخدير الحيوانات مع خليط من غاز الأكسجين وتبخيرها isoflurane. مرة واحدة في تخدير الحيوانات بشكل كامل، استخدم كليبرز الكهربائية لحلاقة رؤوسهم. بعد الانتهاء من الحلاقة مع، والعودة إلى أقفاص الحيوانات ومراقبة للشفاء التام من آثار التخدير.
- بيانات الطبيب الحيوينظم الإدراج باقة (BMDS) (بحيث تنعقد بعد الحلاقة من الفئران في حين أن الحيوانات هي تخدير كامل): للحصول على وسيلة أقل الغازية لتتبع زرع درجة حرارة مبرمج مسبقا باقة اللاسلكية BMDS تحت الجلد في المنطقة الظهرية من كل الماوس. هذه المجاوبة تسمح لتحديد اللاسلكية وتسجيل درجات الحرارة. بعد زرع باقة، وتطبيق لاصقة الأنسجة البيطرية الصف على الجرح.
- جمع المعطيات الأساسية: قبل الإصابة، تسجيل درجة حرارة خط الأساس والوزن لجميع الحيوانات. جمع الدم للتحليل البلاك تحييد التخفيض (PRNT) من خلال اختبار تنزف (RO) خلف الحجاج في حين أن الفئران هي تحت التخدير. بعد جمع الدم، وتطبيق مرهم العين المضادات الحيوية البيطرية للحد من إمكانية العدوى البكتيرية الثانوية. وينبغي استكمال هذه المجموعة خط الأساس مع مراعاة عدد المرات يتم وضع الحيوانات تحت التخدير بسبب الضغط على الفئران. المستقبل مجموعات RO قhould معها يكتمل بعد التصوير، في حين لا يزال الماوس تحت تأثير مخدر. ينبغي أن الدم التي تم جمعها من أقصى RO يكون حوالي 200 ميكرولتر.
- العدوى: الفئران مكان تحت التخدير كما هو موضح سابقا. التخزين المؤقت من خلال تطعيم الطريق داخل الأنف باستخدام جرعة من PFU 6 إلى 7 5x10 5x10-TC83 وسيفيراز في حجم ما مجموعه 40 ميكرولتر من الفوسفات المالحة المخفف (PBS) من خلال العدوى داخل الأنف. بعد العدوى، ضع داخل قفص الفئران السكن ومراقبة الانتعاش.
2. الحيوان التصوير
تنويه: حافظ على الفئران داخل الوحدة السكنية الخاصة بهم، ومجلس الوزراء للسلامة الأحيائية (BSC)، أو مربع الاحتواء XIC في جميع الأوقات. وBSCS المعتمدة لهذا البروتوكول هي نوع II B1 B2 أو فئة.
- حقن جميع الحيوانات مع 10 ميكرولتر لكل غرام من وزن الجسم من وسيفيرين (IP) داخل الصفاق بتركيز 15 ملغ / مل.
- الفئران تلقي Ampligen أن تكون injecteد IP بجرعة قدرها 12.5 وزن الجسم ملغ / كغ في -4 ساعة عدوى أو آخر العدوى +48 آخر ساعة بناء على جماعتهم.
- قبل الحقن مع وسيفيرين، فصل الفئران إلى مجموعات من ثلاثة لضمان تناسب المناسبة ضمن مربع الاحتواء XIC-3.
- لجميع والتصوير، واستخدام مرهم العين / زيوت التشحيم لمنع جفاف القرنية في جميع أنحاء الداخلي.
- فتح البرنامج واضغط على LivingImage تهيئة لإعداد مربع التصوير؛ مجموعة إنقاذ السيارات، والتعرض لوقت السيارات (زمن التعرض على السيارات هي ميزة جديدة للبرنامج LivingImage 3.2 و أحدث)، عرض الحقل لC، ومرشح لفتح؛ الميدانية ويستند نظر على عدد من الفئران كنت التصوير، ويمكن أن يكون الأمثل تصفية حسب الحاجة لمشاريع التصوير الأخرى.
- تأكد من أن الهواء مرشحات الفحم لم منتهية الصلاحية، خزان الأوكسجين ممتلئة، ويتم تعبئة الخزان isoflurane. وضع شرائط صغيرة من الشريط الكهربائي في الاول XIC-3 للمربع تحلول الذي يساعد في تقليل حركة الحيوانات خلال التصوير.
- حقن الفئران مع وسيفيرين IP كما هو موضح في القسم 2.1 ومكان داخل غرفة تحريض Isoflurane (مع غطاء فتح) لمدة 3-5 دقيقة.
- بعد 5 دقائق، أغلق غطاء للغرفة تحريض وبدء تدفق isoflurane. التي يتم فيها تشغيل مخدر في حوالي 3-5٪ مع معدل تدفق الأوكسجين مجموعة في حوالي 2.0 L / دقيقة. مرة واحدة بشكل كامل وعيه الانتظار 30 ثانية إضافية ونقل الفئران إلى مربع العزلة XIC-3. ضمان سلامة الأحيائية مجلس الوزراء يجري استخدامها يسمح لمسح آمنة من isoflurane كما سيشمل هذا الإجراء فقدان isoflurane من غرفة التحريض (وحدة IVIS يحتوي على قنابل خاصة بها العادلة سلبية واحتواء مربع XIC-3 يربط مباشرة إلى داخل / خارج مآخذ لضمان تدفق الواردة مخدر).
- نقل الفئران على أساس رقاقة / المجموعة رقم في خانة العزلة XIC-3 مع موصل إرفاق isofluraneد فتح. وضع الفئران بحيث يتم وضع هذه الطائرات في الاستلقاء القصية مع رؤساء يستريح بلطف على شرائط الشريط.
- مسح أسفل مربع الاحتواء XIC بأيد الإيثانول رذاذ، والجزء السفلي من 3-XIC مع cavicide، ونقل إلى غرفة التصوير IVIS. أعد توصيل التخدير إلى مربع الاحتواء مرة واحدة داخل وحدة التصوير.
- بعد 10 دقيقة بعد حقن وسيفيرين، صورة الفئران من خلال البرنامج الصورة الحية.
- بعد التصوير الأولي مع مرشح فتح، بدء DLIT الأبعاد 3-التصوير باستخدام تحليل تسلسل وصورة لمعالج إعداد وسيفيراز اليراع bioluminescent. هذه العملية سوف تأخذ دقيقة التصوير 4-5 وينبغي أن تستكمل في مجال الرؤية ذات الصلة لعدد من الفئران المطلوب.
- فيفو السابقين التحليل التشريح الممكنة التالية وجمع من الدماغ. وضع الدماغ على طبق بتري معقمة، بالتنقيط 50-100 ميكرولتر من وسيفيرين الأسهم على أعلى، ويتم في معهد العالم العربيجينج مربع.
- وضع اللمسات الأخيرة في الثانية صورة مرشح مفتوحة في 15-17 دقيقة الإصابة آخر عند الانتهاء من التصوير DLIT. ضمان تحليل تسلسل إيقاف ويتم إرجاع مجال الرؤية وضبط مرشح لالإعدادات السابقة.
3. الفئران العودة وتحليل البيانات
- إيقاف المرذاذ isoflurane ونقل مربع الاحتواء XIC العودة الى مجلس الوزراء للسلامة الأحيائية.
- وضع الفئران مرة أخرى داخل الوحدة السكنية الخاصة بهم، أغلق الأعلى، رش السطح الخارجي مع مطهر والمكان المناسبين مرة أخرى على الرف الإسكان.
- وانتعشت ضمان الفئران تماما من التخدير.
- كرر الإجراء أعلاه والتجربة يتطلب التصوير حتى اكتمال.
- تطهير BSC، إيقاف تشغيل المعدات، ونقل جميع البيانات إلى موقع مختبر خارج لمزيد من التحليل.
- تحليل البيانات وتوليد الأبعاد 3-الصور استنادا إلى نتائج IVIS التهاب المسالك البوليةlizing البرنامج LivingImage.
- الصورة ضمان موجه بشكل صحيح والإضاءة / تم تعيين لون التوازن. داخل لوحة الأداة الخيارات ادراج صورة ضبط والإصلاحيات ومعلومات الصورة، وأدوات ROI.
- استخدام الأشكال ROI لتحديد نقاط القوة إشارة محددة على أساس الموقع.
- إعادة بناء تضاريس سطح الجسم لتسليط الضوء على الماوس، 3D تهيئة DLIT إعادة الإعمار، واستخدام مناسبا خطية لضبط الجهاز الخريطة الطبوغرافية لإعادة إعمار.
- يمكن أن تكتمل بمزيد من التحليل، من خلال المعايرة الفيروسية جمع الدم والأعضاء. تم الانتهاء المعايرة في هذه الدراسة من خلال تجانس أنسجة المخ في تعديل النسور المتوسطة (MEM). تم تخفيفه بشكل متسلسل في جناسة ونحن المصابة لوحة 6 جيدا من الخلايا فيرو لمدة 1 ساعة. تمت تغطية الخلايا مع تراكب agarose/2xMEM 1.5٪ وحضنت لمدة 2 أيام في 37 درجة. تم إصلاح الخلايا مع الفورمالين 10٪ لمدة 30 دقيقة وملطخةالكريستال البنفسجي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
مع فيروس معدل وراثيا، TC83-وسيفيراز، رأينا زيادة في قوة الإشارة bioluminescent كما تكاثر الفيروس ينتقل من منطقة الأنف في CNS المركزية (الشكل 1). نظرا لمعدل تكاثر الفيروس عالية، ونحن نتوقع أن نرى مستويات عالية من إشارة bioluminescent (الشكل 2A) تعتمد على ناقلات الأمراض والاستجابة الحيوانية في مأمن من النواقل. نتوقع هذه الزيادة إشارة إلى مواصلة ذروة، بين العدوى أيام آخر 5-7 و بالاشتراك مع ذروة تكاثر الفيروس داخل الجهاز العصبي المركزي (الشكل 2B). بعد الإشارة وذروة الفيروسية، ونحن نتوقع أن نرى انخفاضا في إشارة على حد سواء بسبب انخفاض في تكاثر الفيروس ونتيجة لفقدان الجين وسيفيراز. مع هذه القيم إشارة نتوقع أن تكون قادرة على تحديد الحمل الفيروسي على أساس قوة الإشارة، وتوفير في طريقة الجسم الحي لحساب بدقة الحمل الفيروسي زيادة تدريجية في specif حيوان واحد IC-TC83 لوسيفيراز.
استخدام هذا النموذج باعتباره وسيلة لتحليل اللقاحات والعلاجات المضادة للفيروسات، ونحن نتوقع أن تكون قادرة على الكشف عن علاجات فعالة الفرق بين استنادا إلى انخفاض في إشارة bioluminescent. في حالتنا، ضد وسيفيراز-TC83، يمكننا الاستفادة من Ampligen IP (أ تول مثل مستقبلات ناهض 3) أو التطعيم قبل ثلاثة أسابيع العدوى، لخفض كبير في العدوى الفيروسية وإشارة bioluminescent طوال فترة الدراسة (الشكل 3). يمكن هذا الانخفاض يرتبط بشكل مباشر إلى انخفاض الحمل الفيروسي في الجهاز العصبي المركزي (المعطيات غير معروضة). باعتبارها وسيلة لتطوير كامل ووضع تصور لهذه التكنولوجيا، IVIS البرمجيات LivingImage هو قادر على صنع الأبعاد 3-صورا للإشارة bioluminescent (الشكل 4) الذي يتيح لنا التعرف بسهولة على مواقع تكاثر الفيروس عالية استنادا إلى عمق الأنسجة وتكوينها.
/ 4429/4429fig1.jpg "بديل =" الشكل 1 "FO: المحتوى العرض =" 5in "FO: SRC =" / files/ftp_upload/4429/4429fig1highres.jpg "/>
الشكل 1. أصيب IVIS التصوير من TC83-وسيفيراز الفئران C57BL / 6 الثلاث من خلال الأنف مع التحدي وسيفيراز-TC83 والمصورة في 2، 4، 6، و 8 أيام آخر عدوى (DPI). وأدلى الصور بعد حقن وسيفيرين IP مع طول autoexposure وفلتر مفتوح. اضغط هنا لمشاهدتها بشكل اكبر شخصية .
الشكل 2. وكان كل سلالات من الفئران مماثلة قوة الإشارة bioluminescent بعد الحقن IP من وسيفيرين مع تأخير من 10 دقيقة قبل الحقن آخر اكتمل التصوير (A). الحمل الفيروسي في الدماغ (PFU / غرام الأنسجة) يبين وجود علاقة قوية في جميع أنحاء العدوى إلى إشارة biolumiescent (B).
الشكل 3. مقارنة العلاج باستخدام IVIS. comarison العلاج بعد TC83-وسيفيراز العدوى في الفئران C3H/HeN. الفئران تحت الجلد مع تحصين TC83 23 يوما قبل التحدي مع وسيفيراز-TC83 قدم مع عدم وجود إشارة bioluminescent (A). وأظهرت الفئران تلقي Ampligen IP في -4 و +48 ساعة عدوى آخر (B) انخفاض مستويات مقارنة الفئران تلقي أي علاج (C).
الشكل 4. الأبعاد 3-التصوير إعادة الإعمار. الاستفادة من الأبعاد 3-التعمير تصور لنا مكان ذروة TC83-وسيفيراز العدوى باستخدام أداة LivingImage لإعادة الإعمار DLIT. ونحن قادرون على ترجمة عمق وموقع الإشارة الأولية في الاستفادة من هذه CNS الشركة المصرية للاتصالاتchnique.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
في حين أن هذا البروتوكول يغطي جوانب التصوير لفي تحليل الجسم الحي، فمن المهم التعرف على ناقلات bioluminescent كعامل أساسي للدراسات المستقبلية. استخدام لدينا من TC83، وهي سلالة اللقاح الموهن من VEEV، كناقل للتعبير عن وسيفيراز يضمن أن يجري انتاج كميات كبيرة من انزيم بسبب معدل تكرار عالية من الفيروس في الجهاز العصبي المركزي كما هو موضح سابقا 1-4. في حين أن إضافة المروج لsubgenomic الثاني ونتائج الجينات وسيفيراز في تخفيف المزيد من فيروس المؤتلف مقارنة نوع البرية TC83، وهذا توهين لا يبدو أن تغيير مسار السريرية للمرض خلال 6 أيام الأولى من الإصابة 5. نتوقع لمعرفة فقدان الجين وسيفيراز من خلال تكرار الفيروس مع مرور الوقت ولكن مرة أخرى هذا لا ينظر إليه حتى وقت لاحق في تطوير المرض. تطوير نواقل الإمراض الأخرى، الفيروسية والبكتيرية، يؤكد إمكانية وكفاءةمن IVIS ووسيفيراز عبر حقول متعددة من البحث الممرض 6-9.
عملية التصوير نفسها على بعد خطوات قليلة الحرجة التي يجب أن تكتمل قبل أن يتم تنفيذ دراسة كاملة. وينبغي الانتهاء من تحليل أولي لقوة bioluminescent من ناقلات في دراسة تجريبية تحتوي على الحد الأدنى من مجموعة من الحيوانات. ينبغي أن يكون معروفا مكان في الجسم الحي من المتوقع تراكم وسيفيراز مسبقا نظرا لاستخدام ناقلات ولكن قوة الإشارة المتوقع ينبغي أن تحدد قبل بدء دراسة كبيرة. ومع البرنامج الجديد تحليلا طول التعرض ليست ضرورية نظرا لميزة الكشف التلقائي التعرض بنيت الآن في البرنامج ولكن فترة زمنية استنادا إلى حقن وسيفيرين لا تزال بحاجة إلى تحديد. حتى مع كل هذه الحسابات يمكن الإشارة، لا يزال الكشف bioluminescent تكون محدودة بسبب عمق ناقلات وعموما الصباغ الحيوان والفراء. نوصي بشدة حلق بفور] الحيواناته يبدأ التصوير للحصول على أقوى إشارة ممكنة.
حتى اخذ بالاعتبار تخفيف النواقل وإنتاج الإنزيم، ونحن نعتقد أننا قد صممت نموذج دقة وكفاءة استخدام أكثر وسيفيراز ثم يمكن أن تتولد مع نظام جزيء الفلورسنت القياسية لتحليل في الجسم الحي. لا يقتصر تلألؤ بيولوجي من خلال وجود مصدر ضوء بدء، والتي في البداية يجب أن تمر عبر الأنسجة مما يؤدي إلى فقدان الإشارة. كما أنه لم يكن لديك خلفية مشاكل السيارات الفلورية العالية ينظر مع الفئران على فرائها وحتى من نظامهم الغذائي. يتم التحكم بسهولة من خطر السمية من خلال الركيزة وسيفيرين الترشيح الصحيح والجرعة، مما يجعل bioluminescent آمنة تماما كما للحيوان. كلا النظامين يمكن الفلورية واستخدام bioluminescent خفض كبير في الحيوانات نظرا لتحليل الجسم الحي والتي سوف يكون من المهم للبحث في المستقبل بسبب تغير الموقف السياسي تجاه البحوث الحيوانية وزيادة الانضمام إلى همهمةه في 3Rs (استبدال، والحد، والصقل) نحو استخدام الحيوانات 10.
لطلبنا من إمراض الفيروسية وتحليل فعالية المضادة للفيروسات، في الجسم الحي النمذجة هو أكثر كفاءة من النظم الحالية 11،12 لأسباب متعددة. ونحن قادرون على كشف الخطوات الرئيسية المحددة لتطور المرض، CNS الغزو 1 في حالة TC83، قبل أي مرض السريرية يتطور. من الكشف الأولي الغزو، ونحن قادرون على تصور مرارا وتكرارا في حيوان واحد من انتشار وتكرار الفيروس توفير وسيلة أكثر دقة من دراسة تطور المرض 5. نموذج قمنا بتصميم هو أيضا أكثر أمانا للباحثين نظرا لانخفاض شرط التضحية وجمع الجهاز، القدرة على اكتشاف نقاط رئيسية تطور المرض قبل المرض السريري يمكن أن يؤدي إلى التهيج الحيوانية، وخاصة نظامنا، يمكننا استكمال هذه الدراسات في ناقلات فيروسية والموهن في ABSL2 بدلا من ABSL3الاستفادة من وجود وكيل تحديد.
والدراسات المستقبلية استغلال المرض على نحو متزايد bioluminescent IVIS النمذجة. التقدم في تقنيات البيولوجيا الجزيئية الحديثة والاستنساخ تسمح إدخال جين وسيفيراز بسرعة وبتكاليف زهيدة في كل من النواقل الفيروسية والبكتيرية. القدرة على تطوير الفئران المعدلة وراثيا معربا عن الجين المروج وسيفيراز تعتمد كما يوفر نظام آخر للدراسة bioluminescent. وأخيرا، وضعت حديثا تحقيقات bioluminescent مثل التهاب التحقيق الفرجار RediJect يتفاعل مع الميلوبيروكسيداز السماح لفي التصور الجسم الحي من رد فعل التهاب بلعمية. هذه التكنولوجيات الجديدة جنبا إلى جنب مع زيادة الكفاءة من الكاميرات والبرمجيات يجعل bioluminescent IVIS نظام قابل للحياة للبحث في المستقبل في مجالات عديدة ومختلفة من الدراسة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
Acknowledgments
منحة معهد NIH-بالحركة UTMB العلوم 1UL1RR029876-01 وبراثير اليشا لمساعدتها مع تحرير الفيديو لهذه المخطوطة.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| D-Luciferin | |||
| Isoflurane | |||
| Xenogen IVIS System (Spectrum) | Caliper Life Sciences | ||
| XGI-8-gas Anesthesia System | Caliper Life Sciences | ||
| XIC-3 Containment Box | Caliper Life Sciences | ||
| LivingImage 4.0 Software | Caliper Life Sciences | ||
| Telemetry/identification chips | Bio Medic Data Systems | IPTT-300 | Animal ID and Temperature |
| BD Integra 1ml TB syringe with 26 g x 3/8” needle | Fisher Scientific | 305279 | |
| Vet Bond tissue adhesive | Fisher Scientific | NC9259532 | |
| Vetropolycin Ophthalmic Ointment | Webster Veterinary Products | 78444656 | |
| Dulbecco's Phosphate Buffered Saline 1X | Invitrogen | 14190-144 | |
| BMDS Chip Reader | Bio Medic Data Systems | DAS-7007S | |
| DAS-HOST Software | Bio Medic Data Systems | Used to download probe information |
References
- Steele, K. E., et al. Comparative Neurovirulence and Tissue Tropism of Wild-type and Attenuated Strains of Venezuelan Equine Encephalitis Virus Administered by Aerosol in C3H/HeN and BALB/c Mice. Veterinary Pathology Online. 35, 386-397 (1998).
- Ludwig, G. V., et al. Comparative neurovirulence of attenuated and non-attenuated strains of Venezuelan equine encephalitis virus in mice. Am. J. Trop. Med. Hyg. 64, 49-55 (2001).
- Charles, P. C., Walters, E., Margolis, F., Johnston, R. E. Mechanism of Neuroinvasion of Venezuelan Equine Encephalitis Virus in the Mouse. Virology. , 208-662 (1995).
- Volkova, E., Gorchakov, R., Frolov, I. The efficient packaging of Venezuelan equine encephalitis virus-specific RNAs into viral particles is determined by nsP1-3 synthesis. Virology. 344, 315-327 (2006).
- Patterson, M., et al. Rapid, non-invasive imaging of alphaviral brain infection: Reducing animal numbers and morbidity to identify efficacy of potential vaccines and antivirals. Vaccine. 29, 9345-9351 (2011).
- Cook, S. H., Griffin, D. E. Luciferase Imaging of a Neurotropic Viral Infection in Intact Animals. J. Virol. 77, 5333-5338 (2003).
- Contag, P. R., Olomu, I. N., Stevenson, D. K., Contag, C. H.
- Osorio, J. E., Iams, K. P., Meteyer, C. U., Rocke, T. E. Comparison of Monkeypox Viruses Pathogenesis in Mice by In Vivo Imaging. PLoS ONE. 4, e6592 (2009).
- Luker, G. D., Prior, J. L., Song, J., Pica, C. M., Leib, D. A. Bioluminescence Imaging Reveals Systemic Dissemination of Herpes Simplex Virus Type 1 in the Absence of Interferon Receptors. J. Virol. 77, 11082-11093 (2003).
- Russell, W. M. S., Burch, R. L. The Principles of Humane Experimental Technique. , (1959).
- Kuehne, R. W., Pannier, W. L., Stephen, E. L. Indirect mouse model for the evaluation of potential antiviral compounds: results with Venezuelan equine encephalomyelitis virus. Antimicrob. Agents Chemother. 11, (1977).
- Lukaszewski, R. A., Brooks, T. J. G. Pegylated Alpha Interferon Is an Effective Treatment for Virulent Venezuelan Equine Encephalitis Virus and Has Profound Effects on the Host Immune Response to Infection. J. Virol. 74, 5006-5015 (2000).
