Summary
אנו מתארים assay אבחון יקר שעלולים לשמש כדי להחליט הנסיגה של דיכוי חיסוני לאחר השתלה ללא סיכון מוגבר לדחיית שתל. Assay משתמש בעקרונות של רגישות יתר מושהה סוג ומספק הערכה מדויקת של שתי התגובות רכובים על ידי מקבלי חיסון מפעיל ורגולציה הספציפיות תורמות.
Abstract
תגובת רגישות יתר מושהה מסוג (DTH) היא מהירה בביטוי vivo של תגובה החיסונית של תאים תלויות T לאנטיגן זר (Ag) שהמערכת החיסונית של המארח שחוותה בתקופה האחרונה. תגובות DTH לעתים קרובות נחלקות לשלב רגישות, בהתייחסו לניסיון הראשוני אנטיגן, ושלב אתגר, אשר בדרך כלל עוקב אחר כמה ימים לאחר רגישות. חוסר תגובת רגישות יתר מאוחר מסוג להוכיח על ידי בדיקת עור Ag זוכרים נתפש לעתים קרובות כעדות לanergy. Assay DTH המסורתי נעשה שימוש יעיל באבחון זיהומי חיידקים רבים.
למרות שיתוף תכונות דומות חיסוניות כגון חדירה לימפוציטים, בצקת, ונימקו ברקמות, DTH הישיר אינו טכניקת אבחון אפשרית בחולים שעבר השתלה בשל האפשרות של הזרקה הישירה וכתוצאה מכך הרגישות לאנטיגנים תורמים ואובדן שתל. כדי להימנע מבעיה זו, הזמזוםלעכבר "טרנס vivo" assay DTH פותח 1,2. מבחן זה הוא במהותו assay DTH העברה, שבו תאי דם היקפי אדם mononuclear (PBMCs) ואנטיגנים ספציפיים הוזרקו מתחת לעור לתוך הנוצות או שודדים דרכים של עכבר נאיבי ונפיחות דמוית DTH נמדדים לאחר 18-24 שעות 3. מצגת אנטיגן על ידי תאי מציגי אנטיגן אנושיים כמו מקרופאגים או DCs לתאי T ברקמת כלי דם עכבר מאוד מעוררת את המפל הדלקתי ומושכת אליו תאים של מערכת חיסון וכתוצאה מעכבר תגובות נפיחות. התגובה היא אנטיגן ספציפי ודורשת רגישות אנטיגן מוקדמת. תגובת DTH תורם תגובה חיובית בטלביזית assay-DTH משקפת כי מטופל ההשתלה פיתחה נטייה הפרו דלקתית חיסונית כלפי alloantigens שתל.
התכונה החשובה ביותר של assay זה היא שזה גם יכול לשמש כדי לזהות תאי T רגולטוריים, הגורמים לדיכוי עובר אורח. דיכוי של עובר אורחהתגובה זוכרת DTH בנוכחות של אנטיגן התורם היא אופיינית למושתלים עם allografts המקובל 2,4-14. הניטור של מושתלים לalloreactivity ורגולציה על ידי TV-DTH עשוי לזהות תת קבוצה של חולים שיכולים ליהנות מן ההפחתה של דיכוי חיסוני בלי סיכון גבוה של דחייה או תפקוד כליות הולכים ומתדרדר.
אזור מבטיח הוא היישום של assay TV-DTH בניטור של אוטואימוניות 15,16 וגם באימונולוגיה גידול 17.
Protocol
1. הכנה של לימפוציטים מהסוג
- איסוף דם לתוך ACD (חומצת ציטראט דקסטרוז) צינורות.
- לבודד PBMC מהדם היקפי אנושי טרי באמצעות הפרדה לימפוציטים בינוני על פי שיטות סטנדרטיות.
- לשטוף שלוש פעמים עם PBS PBMC להסיר טסיות מזהמות. טסיות דם נמצאו להפריע assay DTH טרנס vivo. זיהום טסיות דם המותר מקסימאלי של הכנת PBMC הוא ≤ 1x10 7 / הזרקה.
- אם יש זיהום של תאי דם אדום בולט, לבצע תמוגה של תא אדום באמצעות מאגר תמוגה ACK לאחר הכביסה ראשונה. הסר חיץ ACK על ידי שטיפת 2 פעמים עם PBS.
2. הכנת Alloantigen
- לבודד PBMC מתורם הדם ההיקפי באמצעות ההליך המתואר לעיל.
- Resuspend התורם PBMC ב PBS בריכוז של 120x10 6 תאים / מ"ל (4x10 6 תאים / μl 30).
- הוסף 1 מיקרומטר PMSF לתערובת כדי למנוע חלבוןהשפלה.
- Sonicate ההשעיה התא באמצעות פולסים שבע 1 שני עם sonicator מ"מ-בדיקה 2. (שים לב: שמור על קור החומר ולמנוע בועות קצף מוגזמות אם מתרחש, בואו ההשעיה התא לשבת על קרח למשך 2-3 דקות.).
- ודא שיבוש> 90% של התאים באמצעות hemocytometer.
- צנטריפוגה את התערובת בסל"ד 14,000 ב 4 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות בmicrofuge בקירור.
- העבר את supernatant לצינור בטוח נעילת 2.0 מ"ל חדש ולקבוע את ריכוז חלבון.
3. הכנת תא לזריקות
- לכל aliquot הזרקת 7x10 6 PBMC לתוך צינורות בטוחים נעילת 2.0 מ"ל.
- צנטריפוגה ב 6000 סל"ד במשך דקה בmicrofuge ולהסיר את supernatant.
- Resuspend תאי PBS עם או בלי אנטיגנים. התאם את עוצמת הזריקה ל35 μl עם PBS. התכנית הבאה משמשת לזריקות:
ביקורת שלילית: PBMC + PBS
ביקורת חיובית: PBMC + TT / DT (25 & mu, G / הזרקה)
תגובת אנטיגן ספציפית ניסויית: PBMC + בדיקת Ag (מיקרוגרם / הזרקת 4-8)
תקנת אנטיגן ספציפית ניסויית: PBMC + בדיקת Ag + TT / DT
4. טרום מדידה, הזרקה, ולאחר המדידה
- הרדימי CB17 עכבר SCID עם isoflurane. מדידת עובי שודד אחורי באמצעות קליפר קפיץ. שים קליפר במרכזו של השודד, עם קצה אחד נוגע במשטח ההליכה האחרון של כף הרגל, כדי לספק ביצועים כדי לשמור על אתר המדידה עקבי. עובי שודד נרשם כאשר קריאת מד התייצבה.
- לאט לאט להזריק השעיות תא מתחת לעור לתוך לכפות ההרגלים של העכברים באמצעות ½ מזרקים אינסולין סמ"ק עם מחט 28 מד. לבצע הזרקה עם המחט מצביעה לעבר אצבעות הרגליים, והשיפוע כלפי מעלה. (שים לב: לוודא שאין דליפה).
- 18-24 שעות לאחר הזרקה, להרדים עכבר עם מדידת isoflurane והחוזרת של נפיחות שודד דרכים.
- Subtrלפעול עובי של כל שודד לפני הזריקה מהערך לאחר ההזרקה כדי לקבל את ערך הנפיחות שודד דרכים, מבטא את הנתונים ביחידות של 10 סנטימטרים -4. חישוב אנטיגן ספציפית לנפיחות הנקי על ידי הפחתת שליטה שודד נפיחות (PBMC + PBS) מערכי הנפיחות שודדים הדרכים המתקבלים מהטיפולים (PBMC + תורם alloantigen, TT / DT, או התורם alloantigen + TT / DT). תגובת ביקורת חיובית להיזכר TT / DT של אנטיגן ≥ 25x10 סנטימטר מעל -4 תגובת רקע לPBS נדרש לבדיקה כדי להיחשב חוקי.
- לקבוע את העיכוב של תגובות להיזכר בנוכחות של אנטיגנים תורמים ידי השוואת הנפיחות הנקי של כל הזרקה תוך שימוש בנוסחה הבאה:
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
1. הערכה של מושתלי כליה לתגובת אנטיגן ספציפית לתורם באמצעות assay TV-DTH
כדי לבדוק את תגובתי תורם-החסינות הסלולר במושתלי כליה שהזרקנו PBMC מחולים אלה עם אנטיגנים תורמים לבד או עם אנטיגן זוכר טטנוס toxoid (TT). כתאי בקרה חיוביים הוזרקו TT לבד. אנו רואים שלושה דפוסים עיקריים של סוג רגישות יתר מושהה במושתלים (איור 1). כל החולים הגיבו בחריפות ליזכירו Ag (TT). חולה # 62 מציג את דפוס הרגולציה, המתאפיין בתגובה לאנטיגן חלשה תורם ודיכוי ניכר צמוד (67%) להיזכר תגובת אנטיגן בנוכחות של אנטיגן התורם. זהו הדפוס שכבר נמצא קשורים בסובלנות שתל איברים. מטופל # 48 מוצגי דפוס nonregulatory, שבו יש את התכונה של תגובה חלשה לתורם אך לא דיכוי צמוד (או דיכוי קשור <50%). זהדפוס נצפה לעתים קרובות בחולים שנטלו תרופות לדיכוי מערכת חיסוניות. עם זאת, חלק מהחולים שקיבלו תרופה לדיכוי המערכת החיסונית עדיין השתלת הודעה עשויים להציג תורם דיכוי אנטיגן צמוד של DTH התגובה שלהם. מטופל # 8 מוצגי דפוס תורם רגיש, מאופיינים בתגובה גבוהה לאנטיגן תורם ולא דיכוי מקושר. תגובה זו קשורה עם דחיית שתל במקרה מחקרים קליניים 8.
2. תפקידה של רגולציה תורם ספציפית בניטור קליני בהשתלת הכליה
PBMC מנבדקים שהשתתפו במחקר תצפיתי ITN507ST, ("זיהוי וחקירות מכניסטית של מושתלי כליה סובלניים") נבדק לתגובות תורם ספציפי למסלול עקיף T ו-T מפעיל רגולטוריים באמצעות assay TV-DTH והתורם (או תורם HLA- הפונדקאי מתאים) אנטיגן. כפי שמוצג באיור 2 א, מסלול תגובות מפעיל עקיף T לאנטיגנים תורמים מגלהספקטרום ברור על פני קבוצות הלמידה; עליות נפיחות שודדות כטווחי מצב הקליניים של חולים מאלה שהם סובלניים לאלה הדוחים כרוניים. PBMCs מנמענים סובלניים מושרה מופחת או ללא תגובת DTH ואילו PBMCs מאנשים דוחים עוררה תגובות נפיחות חזקות.
המדידה של אנטי תורם תגובה עקיפה מסלול T רגולטורים מצד assay הדיכוי המקושר הוכיח כי רגולציה חיסונית הייתה מנגנון חשוב לקבלת שתל כליה. האיור 2 מראה ירידה בתגובות רגולטוריות על פני הטווח של רוב (טול), דרך ביניים (מונו ו SI) ל( CR) 14 חולים סובלניים פחות.
3. ניטור של אוטואימוניות באמצעות assay TV-DTH
אזור מבטיח הוא היישום של assay TV-DTH בניטור של אוטואימוניות. BOS, תהליך של fibro-סותם חסימה של דרכי הנשימה הקטנה במושתל ריאות, הוא הסיבה השכיחה ביותר לכישלון השתלת ריאות.
על ידי בדיקת תפקידה של חסינות תא בתיווך לV סוג קולגן בתהליך זה, מצאנו כי הסיכון היחסי הגבוה ביותר של דלקת סימפונות obliterans תסמונת (BOS) פיתוח נצפה בחולים שפיתחו תגובת TV-DTH חיובי לקולגן סוג V בהם דם היקפי.
איור 3 הראה כי PBMCs ממושתלי ריאה, אך לא מביקורת בריאה או החולים בתסמונת של קולגן Goodpasture IV-reactive לאחר השתלת כליה, היו לעתים קרובות קולגן V תגובתי 15.
4. יישום באימונולוגיה גידול
חוצה vivo DTH הוא פתיחת אפשרויות חדשות בחקר הסרטן לתעדף חולי סרטן ערמונית לטיפול בחיסון. מאחר ותאי T רגולטוריים ממלאים תפקידים חשובים בהתפתחות והתקדמות סרטן, השתמשנו TV-DTH כדי לבדוק את התגובה של PBMCים מחולי הסרטן שטופלו בחיסון ה-DNA phosphatase קידוד של הערמונית חומצה (PAP). אנחנו השתמשנו בדיכוי של עובר אורח תגובה לזוכרים אנטיגן כדי לקבוע אם פעילות הרגולטורית ספציפית אנטיגן נמצאים שהושרו בתגובה לחיסון. מצאנו שתאי T רגולטוריים PAP ספציפיים מתעוררים באופן ספונטני בחלק מהחולים בסרטן הערמונית, להתמיד בחיסון ולמנוע זיהוי של PAP-ספציפיים מפעיל תגובות שלאחר החיסון. בחלק מהחולים זיהינו תגובות תא T-PAP ספציפיים מוסדרים שקדמו לחיסון. תאי T רגולטוריים קיימים ספציפיים לPAP עשויים להיות קשורים לחוסר היכולת לפתח תגובה חיסונית אנטיגן ספציפי מסוג Th1 בעקבות חיסון. לחלופין תגובות תא T רגולטורים קיימים לדייסה תזהה חולי סיכוי לפתח תגובות לאחר חיסון מפעיל מרובה. כך או כך, זה assay מספק תצפית חשובה, כפי שהוא מציע אמצעי כדי לתעדף או להוציא indivחולי idual מאנטיגן ספציפית להערכת חיסון 17.
איור 1. דוגמאות לשלושה הדפוסים העיקריים של סוג רגישות יתר מאוחר (DTH) נמצאו במושתלי כליה. PBMCs החולה הוזרקו לכפות ההרגלים של CB17 עכברי SCID עם או אנטיגן זוכרים (TT), אנטיגנים תורמים או עם שניהם תורם + זוכרים אנטיגן. תכנית היא תגובת הנפיחות הנקי על רקע.
איור 2. . ניתוח תא T מסלול עקיף נבדקים נרשמו לחמש קבוצות: תאום זהה, מבחינה קלינית סובלני (טול), יחידני סטרואידים(מונו), דיכוי חיסוני סטנדרטי (SI) ודחייה כרונית (CR) נחקרו לתגובות מפעיל T () ותגובות רגולטוריות T (ב ') על ידי assay TV-DTH. כל הלוחות: תוצאות בודדות מכל נושא (סמלים בודדים) וקבוצה החציונית (קו אופקי) עם רבעונים מוצגים. הבדלים משמעותיים בין קבוצות מוצגים; * p <0.05, ** p <0.01 ו*** p <0.001; # p = 0.04, # # p = 0.03, # # # p = 0.008.
איור 3. מדידה של סוג מסוים-V אוטואימוניות קולגן על ידי assay TV-DTH. Tv-DTH תשובות לפי PBMCs מתקבל מנבדקים בריאים נורמלים, מושתלי כליה עם GPS או מושתלי ריאה. היו כל 3 קבוצות תגובות חיוביות (≥ 25x10 סנטימטר -4 נפיחות נטו) להיזכר אנטיגן, קול (אני אני), קולגן fibrilar ספציפי לסחוס במפרק, לא לעורר תגובת TV-DTH בחולים או פקדים. מושתלי כליה עם GPS היו גבוהים מתכוונים נפיחות תגובות לCol (IV). מושתלי ריאות לא הגיבו לקול (הרביעי), אבל לא מגיבים לקול (V).
איור 4. השתמש של assay TV-DTH להעריך immunoregulation מושרה הגידול. PBMC מחולים בסרטן הערמונית הוזרקו phosphatase חומצת ערמונית (PAP) לבד או עם החזרת אנטיגן TT / DT וכביקורת אנטיגן הספציפי לערמונית (PSA) הוזרק עם או בלי זוכר אנטיגן TT / DT. הזרקה של PAP + TT / DT זיהה תאים הרגולטוריים אנטיגן ספציפי פאפ, כשותף מנהל של PSA לא היה מסוגל לדכא תגובת DTH לאנטיגן זוכר TT / DT.
= עבור "jove_content": לשמור-together.within עמודים = "תמיד"> 
איור 5. שחזור של assay TV-DTH. תאי cryopreserved להשיג על ידי leukapheresis ב2007/01/15 היו מופשר, נשטף עם PBS, מעורבב עם PBS או EBV או P37-TE + EBV (פפטיד העצמי) או P37-MA + EBV (תורם פפטיד) ו מוזרק לתוך לכפות הרגלים. תאים נבדקו בנקודות הבאות: זמן 2008/07/29, 2010/02/23, 2011/09/01, 10/11/2011, 2011/12/15.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Assay DTH טרנס vivo הוא בדיקת אבחון רומן עם יישום קליני פוטנציאלי בהערכת תגובות מתווכות תאים בהשתלה, חולי סרטן ואוטואימוניות. זה הוא בעל ערך משום שהוא שימושי לא רק בניטור תגובות מפעיל לא זוכר, אבל גם זה יכול לזהות תגובות T רגולטוריים. דרך אמינה לגילוי הרגולציה DTH אדם עשויה לנבא בטיחות של נסיגת דיכוי חיסוני בחולים שאינם מועמדים לניסויים טיפול יחידני או סובלנות.
TV-DTH הוא רגיש מאוד לאיתור המסלול העקיף של allorecognition של MHC. עם זאת יכול להיות שונה TV-DTH לזהות alloresponse הישירה נגד מולקולות MHC תורמות ללא פגע. כדי לאתר תורם דיכוי אנטיגן צמוד של DTH, ניתן coinjected תאי EBV-LCL להביע אחת תורם HLA כיתה אני או בכיתה השנייה עם PBMC מטופל. כאשר EBV-LCL שמשו כמקור של אנטיגן בassay DTH, תאים היו גמא מוקרנים עם 10,000 רד, ו200,000 תאים היו שיתוףהוזרק לתוך PBMC שודד של עכברי SCID.
במהלך פיתוח TV-DTH אנו מוצאים כי מספר תנאים יכולים להשפיע על assay זה. אחד החשוב ביותר היא דרישה לגילוי של דיכוי עובר אורח. אנחנו סיפק ראיות לכך שעל מנת לזהות עיכוב של DTH זוכר בתגובה לאנטיגן תורם שיתוף מקומי, הן באתר והאתגר immunocompetence של מארח מאמצת העכבר הם גורמים קריטיים המגבילים את הרגישות של בדיקת TV-DTH. PBMC ממושתלים סובלניים מתווך דיכוי רק כאשר עובר אורח PBMC הוזרקו לכפות ההרגלים, ולא האוזניים, ורק בעכברי immunodeficient, לא immunocompetent 3.
כמו כל מבחני הבדיקה TV-DTH יש כוח וחולשות. היתרונות העצומים של assay TV-DTH כוללים את הפעולות הבאות: 1) הוא מאוד רגיש ואמין יכול לזהות תאים אנושיים T רגולטוריים, 2) שהוא מזהה תאי T רגולטוריים על ידי הפונקציה שלהם לא על ידי tהפנוטיפ יורש, 3) שהוא מזהה גם תגובות מפעיל ה-17 4 Th-1 ו) lysates תא הגולמי יכול לשמש כדי לזהות רגולציה בלי רגישות החולים לאנטיגן התורם 5) assay זה מציג שחזור / יציבות (איור 5) גבוה. החסרונות הם: 1) זה דורש מספר גדול יחסית של PBMC לכל זריקה, 2) הטכניקה דורשת הכשרה נרחבת, בעיקר בassay הדיכוי עובר אורח.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים של כתב היד הזה אין להם ניגודי עניינים לחשוף.
Acknowledgments
המחברים רוצים להכיר בתרומתו של עם VanBuskirk לפיתוח ההבנה של תגובת DTH המוסדרת במושתלים שלנו. עבודה זו נתמכה NIH מענקי PO1AI084853 וR01AI066219-06, ועל ידי מחקר אחד בחסות איחוד אירופי.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ACD tube for blood collection | BD | 02-684-26 | |
| Lymphocyte Separation Medium | Cellgro | 25-072-CV | |
| Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline | Cellgro | 21-031-CM | Without calcium & magnesium |
| ACK Lysis Buffer | BioWhittaker | 10-548E | |
| TT/DT or EBV | Sanofi Pasteur Inc./ Meridian Life Science, Inc. | TT/DT 25 μg/injection EBV 8 μg/injection | |
| Protease inhibitor PMSF | Sigma-Aldrich | 78830 | |
| Eosine for cell count | Sigma-Aldrich | E-6003 | |
| Alloantigen | Purified HLA antigens, synthetic allopeptides can be used instead of donor cell-free lysates | ||
| 50 ml sterile centrifuge tubes | Fisher Scientific | 06-443-18 | |
| 10 ml pipettes and pipettor | BD Falcon | 13-675-20 | |
| 2 ml safe-lock tubes | Costar | 3213 | |
| 1000 μl, 100 μl , 10 μl pipettes with sterile tips | |||
| Hemocytometer | Fisher | 02-671-10 | |
| Full size centrifuge and microfuge | Beckman Coulter/Eppendorf | ||
| 1/2cc or 1cc insulin syringes | Becton Dickinson | 14-826-79 | 28 gauge |
| Vibracell sonicator | Divtech Equipment Co. Sonocs Materials Inc | 2 mm probe | |
| Dial thickness gauge | Mitutoyo, Japan | ||
| SCID mice | Harlan | ||
| Isoflurane | Piramal Healthcare | Inhalant anesthesia |
References
- Carrodeguas, L., et al. Trans vivo analysis of human delayed-type hypersensitivity reactivity. Hum. Immunol. 60, 640-651 (1999).
- VanBuskirk, A. M., et al. Human allograft acceptance is associated with immune regulation. J. Clin. Invest. 106, 145-155 (2000).
- Burlingham, W. J., Jankowska-Gan, E. Mouse strain and injection site are crucial for detecting linked suppression in transplant recipients by trans-vivo DTH assay. Am. J. Transplant. 7, 466-470 (2007).
- Burlingham, W. J., et al. Loss of tolerance to a maternal kidney transplant is selective for HLA class II: Evidence from trans-vivo DTH and alloantibody analysis. Human Immunology. 61, 1395-1402 (2000).
- Geissler, F., et al. Human liver allograft acceptance and the 'tolerance assay': In vitro anti-donor T cell assays show hyporeactivity to donor cells but, unlike DTH, fail to detect linked suppression. Transplantation. 72, 571-580 (2001).
- Jankowska-Gan, E., et al. Human liver allograft acceptance and the 'tolerance assay'. II. donor HLA-A, -B but not DR antigens are able to trigger regulation of DTH. Hum. Immunol. 63, 862 (2002).
- Minor H Antigen HA-1-specific Regulator and Effector CD8+ T Cells, and HA-1 Microchimerism, in Allograft Tolerance. J. Exp. Med. Cai, J., et al. 199, 1017-1023 (2004).
- Rodriguez, D. S., et al. Immune regulation and graft survival in kidney transplant recipients are both enhanced by human leukocyte antigen matching. Am. J. Transplant. 4, 537-543 (2004).
- Xu, Q., et al. Human CD4+CD25low adaptive T regulatory cells suppress delayed-type hypersensitivity during transplant tolerance. J. Immunol. 178, 3983-3995 (2007).
- Derks, R. A., Jankowska-Gan, E., Xu, Q., Burlingham, W. J. Dendritic cell type determines the mechanism of bystander suppression by adaptive T regulatory cells specific for the minor antigen HA-1. J. Immunol. 179, 3443-3451 (2007).
- Jankowska-Gan, E., et al. Successful reduction of immunosuppression in older renal transplant recipients who exhibit donor-specific regulation. Transplantation. 88, 533-541 (2009).
- Jankowska-Gan, E., et al. Pretransplant immune regulation predicts allograft outcome: bidirectional regulation correlates with excellent renal transplant function in living-related donor-recipient pairs. Transplantation. 93, 283-290 (2012).
- Knechtle, S. J., et al. Early and limited use of tacrolimus to avoid rejection in an alemtuzumab and sirolimus regimen for kidney transplantation: clinical results and immune monitoring. Am. J. Transplant. 9, 1087-1098 (2009).
- Haynes, L. D., et al. Donor-specific indirect pathway analysis reveals a B-cell-independent signature which reflects outcomes in kidney transplant recipients. Am. J. Transplant. 12, 640-648 (2012).
- Burlingham, W. J., et al. IL-17-dependent cellular immunity to collagen type V predisposes to obliterative bronchiolitis in human lung transplants. J. Clin. Invest. 117, 3498-3506 (2007).
- Bobadilla, J. L., et al. TH-17, Monokines, Collagen Type V, and Primary Graft Dysfunction in Lung Transplantation. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 177 (6), (2008).
- Olson, B. M., et al. Human prostate tumor antigen-specific CD8+ regulatory T cells are inhibited by CTLA-4 or IL-35 blockade. J. Immunol. 189, 5590-5601 (2012).
