Новые методы для расширения регуляторных Т-клеток от ВИЧ-1-инфицированных

Mathieu Angin; Melanie King; Marylyn Martina Addo

doi:10.3791/50244

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Новые методы для расширения регуляторных Т-клеток от ВИЧ-1-инфицированных

10.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/50244

⸱

30 мая 2013 г.

Mathieu Angin¹ , Melanie King¹ , Marylyn Martina Addo¹^,²

¹Ragon Institute of MGH, MIT, and Harvard, ²Division of Infectious Diseases, Massachusetts General Hospital

В этой статье

Краткое содержание

CD4+ Регуляторные Т-клетки являются мощными иммуномодуляторами и выполняют важные функции в иммунном гомеостазе. Нехватка этих клеток в периферической крови затрудняет функциональные исследования, особенно в контексте ВИЧ-1-инфекции. В данной работе мы описываем метод выделения и расширения функциональных CD4+ Tregs из периферической крови ВИЧ-1-инфицированных лиц.

Аннотация

CD4 + регуляторных Т-клеток (Tregs) являются мощными иммуномодуляторами и играют важную функцию в человеческом иммунного гомеостаза. Истощение Tregs привело к заметному увеличению антиген-специфических Т-клеточные ответы на вакцину настройки для рака и инфекционных возбудителей. Тем не менее, их роль в ВИЧ-1 иммуно-патогенеза остается спорным, так как они могут служить либо для подавления вредных ВИЧ-1 связанных иммунную активацию и тем самым замедлить ВИЧ-1 прогрессирования заболевания или же подавлять ВИЧ-1-специфический иммунитет и тем самым стимулировать вируса распространяться. Понимание и модулирующей функции Treg в контексте ВИЧ-1 может привести к потенциальным новым стратегиям для иммунотерапии или вакцин против ВИЧ. Тем не менее, важные вопросы остаются открытыми на их роль в контексте ВИЧ-1 инфекции, которая должна быть тщательно изучена.

Представляя примерно 5% от человеческих CD4 + Т-клеток в периферической крови, изучая Treg населения оказалось трудно, ESглавным образом у ВИЧ-1-инфицированных, где ВИЧ-1-связанного CD4 Т-клеток и с этим происходит истощение Treg. Характеристика регуляторных Т-клеток у пациентов с продвинутой стадией ВИЧ-1 заболевания или тканей, для которых только очень малые биологические образцы могут быть получены, поэтому чрезвычайно сложной задачей. Мы предлагаем технические решения для преодоления этих ограничений использованием изоляции и расширения Tregs от ВИЧ-1-инфицированных.

Здесь мы опишем простой и надежный метод успешно расширять Tregs изолированы от ВИЧ-1-инфицированных в пробирке. Поток отсортированных CD3 ⁺ CD4 ⁺ CD25 ⁺ CD127 ^низкий Tregs были стимулированы anti-CD3/anti-CD28 покрытые гранулы и культивировали в присутствии ИЛ-2. Расширенное Tregs выразили высокие уровни FOXP3, CTLA4 и ГЕЛИОС по сравнению с обычным Т-клетки и были показаны весьма подавляющим. Более легкий доступ к большому количеству Tregs позволит исследователям адрес, который яmportant вопросы, касающиеся их роли в ВИЧ-1 иммунопатогенеза. Мы считаем, что ответы на эти вопросы опыт может оказаться полезным для развития эффективной профилактики ВИЧ-1 вакцины.

Введение

Обладая более чем 34 миллионов людей, живущих с ВИЧ / СПИДом во всем мире и, по оценкам, 2,5 миллиона человек были впервые инфицированы в 2011 году потребность в эффективной вакцины против ВИЧ, чтобы обуздать всемирную эпидемию ВИЧ остается первостепенной. Однако, несмотря на три десятилетия интенсивных научных исследований, ВИЧ-1 испытаний эффективность вакцины на сегодняшний день привели лишь скромные защиту ^1-3 и коррелирует защитного иммунитета остаются плохо изученными. Выяснения природы иммунного ответа, необходимые для защиты имеет важное значение для стратегической разработки эффективного ВИЧ-1 вакцины и другие иммунотерапевтическую стратегий, наце....