Introduction
एचआईवी / एड्स दुनिया भर में और नव 2011 में संक्रमित एक अनुमान के अनुसार 25 लाख लोगों को दुनिया भर में एचआईवी की महामारी को रोकने के लिए एक प्रभावी एचआईवी टीके के लिए जरूरत के साथ रहने वाले 34 से अधिक मिलियन व्यक्तियों के साथ सर्वोपरि रहता है. हालांकि, गहन अनुसंधान के प्रयासों के तीन दशकों के बावजूद, आज तक एचआईवी -1 वैक्सीन प्रभावकारिता परीक्षणों केवल मामूली संरक्षण 1-3 में हुई है और सुरक्षात्मक प्रतिरक्षा की संबद्ध बुरा समझा रहते हैं. सुरक्षा के लिए आवश्यक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की प्रकृति elucidating एक प्रभावी एचआईवी -1 वैक्सीन और एचआईवी -1 संक्रमण को लक्षित अन्य immunotherapeutic रणनीतियों के रणनीतिक डिजाइन के लिए आवश्यक है.
प्राकृतिक सीडी 4 + विनियामक टी कोशिकाओं (Tregs) इस प्रकार प्रतिरक्षा की मध्यस्थता ऊतकों को नुकसान को सीमित करने, अत्यधिक प्रतिरक्षा सक्रियण को नियंत्रित करने से प्रतिरक्षा सेल homeostasis के रखरखाव के लिए महत्वपूर्ण हैं. हालांकि, वे भी रोगजनकों के खिलाफ प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को दबाने और उनकी मंजूरी रोक सकते हैं. कैंसर और HEPAtitis बी टीका पढ़ाई Tregs की गतिविधि कम टीका प्रतिक्रिया और वायरस 4-7 खिलाफ प्रतिजन विशेष प्रतिरोधक क्षमता में वृद्धि कर सकते हैं कि प्रदर्शन किया है. हालांकि, एचआईवी -1 संक्रमण के संदर्भ में, विनियामक टी कोशिकाओं की सटीक प्रभाव अधूरे समझ बनी हुई है. Tregs सक्रिय टी कोशिकाओं 8 में वायरस प्रतिकृति कम होती है और संभवतः प्रतिरक्षा सक्रियण 9 प्रभाव को दिखाया गया. उन्होंने यह भी रोग प्रगति 10,11 के लिए नकारात्मक परिणाम हो सकता है, जो एचआईवी -1 से विशिष्ट प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को दबाने के लिए दिखाया गया. इस प्रकार, एक एचआईवी -1 वैक्सीन की प्रभावकारिता बढ़ाने के लिए Treg गतिविधि मिलाना करने में सक्षम होने से पहले, यह इस बीमारी के संदर्भ में उनके कार्य में और अधिक जानकारी हासिल करने के लिए महत्वपूर्ण है.
मानव सीडी 4 + विनियामक टी कोशिकाओं के बारे में 5 सीडी 4 +% परिधीय रक्त में टी कोशिकाओं, और आगे उनके निरपेक्ष संख्या एचआईवी से जुड़े सीडी 4 + टी सेल रिक्तीकरण 12 से कमी का प्रतिनिधित्व, एक अपेक्षाकृत दुर्लभ सेल आबादी हैं </> समर्थन. सह संस्कृति Treg साथ इस तरह के टी सेल प्रसार assays के रूप में Treg समारोह का आकलन करने के लिए वर्तमान में assays, अपेक्षाकृत बड़े सेल नंबर 12 का उपयोग करें. इसलिए, उन्नत के साथ व्यक्तियों में विनियामक टी कोशिकाओं के समारोह और विशिष्टता निस्र्पक एचआईवी -1 रोग एचआईवी रोगजनन के लिए उनके महत्व के बावजूद, एक चुनौती रहा है.
एचआईवी -1 रोगियों से Tregs के पूर्व vivo अलगाव और विस्तार इन सीमाओं के कुछ काबू पाने के लिए एक समाधान का प्रतिनिधित्व करेगा. यहाँ हम इन विट्रो में एचआईवी -1 से संक्रमित व्यक्तियों से व्युत्पन्न कार्यात्मक Tregs के विस्तार के लिए एक आसान और मजबूत प्रोटोकॉल का वर्णन है, हम आगे कैसे फेनोटाइप उन्हें समझाने और प्रवाह cytometric assays का उपयोग अपने दमनकारी समारोह का परीक्षण. हम इस प्रोटोकॉल Tregs के लिए उपयोग की सुविधा और एचआईवी -1 रोग प्रगति में उनकी भूमिका को समझने में मदद मिलेगी.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| RosetteSep Human CD4+ T Cell Enrichment Cocktail | Stemcells technologies | 15062 | |
| PBS | Sigma | D8537 | |
| FBS | Sigma | F4135 | |
| Histopaque | Sigma | H8889 | |
| Anti-CD3-PECy7 | BD Pharmingen | 557851 | |
| Anti-CD4-FITC | eBioscience | 11-0049-42 | |
| Anti-CD25-APC | eBioscience | 17-0259-42 | |
| Anti-CD127-PE | BD Pharmingen | 557938 | |
| Round-Bottom tube with 35 μm a nylon mesh | BD Falcon | 352235 | |
| X-VIVO 15 | Lonza | 04-418Q | |
| Penicillin/Streptomycin | Mediatech | 30-001-Cl | |
| Human Serum | Gemini Bio-Products | 100-512 | |
| Human T-activator CD3/CD28 | Life Technologies | 111.31D | |
| IL-2 | NIH Aids Research Reference Reagent Program | 136 | |
| LIVE/DEAD Fixable Violet Dead Cell Stain Kit | Life technologies | L34955 | |
| Anti-CD4-qdot-655 | Life Technologies | Q10007 | |
| Anti-CD25-PECy5 | eBiosciences | 15-0259-42 | |
| Foxp3 / Transcription Factor Staining Buffer Set | eBiosciences | 00-5523-00 | |
| Anti-FOXP3-PE | eBiosciences | 12-4776-42 | |
| Anti-HELIOS-FITC | Biolegend | 137204 | |
| Anti-CTLA4-APC | BD Pharmingen | 555855 | |
| CellTrace Violet Cell Proliferation Kit | Life Technologies | C34557 | |
| Vybrant CFDA SE Cell Tracer Kit | Life Technologies | V12883 | |
| HEPES | Mediatech | 25-060-Cl | |
| Treg Suppression inspector | Miltenyi Biotec | 130-092-909 | |
| Anti-CD4-APC | BD Pharmingen | 340443 | |
| Anti-CD8-AF700 | BD Pharmingen | 557945 | |
| RPMI 1640 | Sigma | R0883 | |
| Glutamine | Mediatech | 25-002-Cl | |
| Materials | |||
| BD Vacutainer Blood Collection Tube w/ ACID CITRATE DEXTROSE (ACD) | Becton, Dickinson and Company (BD) | 364606 | |
| FACSAria IIu Cell Sorter | BD Biosciences | - | |
| LSR II Flow Cytometer | BD Biosciences | - | |
| FlowJo | Tree Star | v887 | |
References
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