Summary
En enkel och tillförlitlig teknik för att visualisera och kvantifiera motilitet luftvägarna cilier och flimmerhår genererade flödet med mus luftstrupen beskrivs. Denna teknik kan modifieras för att avgöra hur ett stort antal faktorer påverkar cilia motilitet, inklusive farmakologiska medel, genetiska faktorer, miljömässiga exponeringar och / eller mekaniska faktorer såsom slem belastning.
Abstract
En ex vivo teknik för avbildning mus luftvägsepitel för kvantitativ analys av rörliga flimmerhår funktion viktigt för insikt mucociliary clearance funktion har fastställts. Nyskördade mus luftstrupen skärs i längdriktningen genom trachealis muskler och monterad i en grund muromgärdad kammare på ett glas botten maträtt. Luftstrupen Provet är placerad utmed dess längdaxel för att dra nytta av den trachealis muskeln att krypa longitudinellt. Detta tillåter avbildning av ciliär rörelse i profilvyn längs hela trakeal längd. Videoklipp på 200 bilder / sek erhålles med differential mikroskopi interferens kontrast och en hög hastighet digitalkamera för att möjliggöra kvantitativ analys av cilia svävningsfrekvensen och ciliary vågform. Med tillägg av fluorescerande pärlor under avbildning, även flimmerhår genererade vätskeflöde kan bestämmas. Protokollet tidsperioderna ca 30 min, med 5 min för kammare beredning, 5-10 min för provmontering, och 10-15 min för videomikroskopi.
Introduction
Analys av rörliga flimmerhår funktion i luftvägsepitel är experimentellt betydelse för undersökningen av de genetiska och miljömässiga faktorer som kan påverka mucociliary clearance och pulmonell hälsa 1. Den enkla protokoll som utvecklats för avbildning musen luftvägsepitel ger en effektiv metod för att förhöra motilitet luftvägarna flimmerhår i mutant och knockout musmodeller och kräver endast grundläggande kunskaper i mus trakeal vävnad dissektion och ex vivo avbildning av luftvägarna cilier motilitet med hög upplösning videomikroskopi. Detta protokoll upprättas och förfinats under en storskalig mus mutagenesis skärmen för att möjliggöra snabb utvärdering av rörliga flimmerhår funktion (flimmerhår svävningsfrekvensen, flimmerhår slå form, cilier genererade flöde) i mutanter med medfödd hjärtsjukdom förknippad med heterotaxy 2-5.
Aktuella tekniker som används för att studera motilitet luftvägarna cilier kan grupperas i antingen akut ex vivo typ eller lonGer term in vitro experimentella metoder. Akuta experiment inkluderar ex vivo visualisering av humana nasala / luftvägar borste biopsier 6,7 och analys av enkla tvärgående luftvägarna avsnitt 8. De in vitro-metoder använder olika cellodlingstekniker att generera ark differentierad cilierade epitel, t.ex. i luft vätskegränsytan kulturer eller luftvägarna kulturer fjädring 9-11. Men dessa luftvägsepitel reciliation tekniker kräver mycket stora investeringar i tid och träning innan några användbara cilierade epitelceller produceras för experiment (4-6 veckor 9,10). Medan akut ex vivo analys av luftvägsepitelceller borste biopsier används ofta för kliniska studier, är denna metod inte kan användas musstudier grund förvärras mekanisk vävnadsskada 12.
Tekniken som beskrivs i detta protokoll för analys av mouse luftrör luftvägsepitel är inte bara enkel att utföra, men det kräver inga speciella dissektion kompetens eller någon specialutrustning förutom de standard för avbildning av videomikroskopi. Det finns många fördelar med denna enkelt protokoll. Först, som musen luftstrupen vävnad skörd är snabb och enkel att utföra, gör det för snabb bedömning av luftvägarna flimmerhår funktion i ett stort antal möss. Detta kan inkludera akut analys av de kortsiktiga effekterna av olika in vitro behandlingar. Andra, som en ex vivo teknik förblir cilierade luftvägsepitel fäst vid den underliggande stödjande vävnader och därmed bevara tillhörande cell signalvägar. Därför i jämförelse med in vitro reciliated luftvägsepitel, är detta preparat en bättre representation av den naturliga in vivo vävnad miljö. Tredje, medger detta protokoll förvärv av ett antal olika kvantitativa parametrar som kan ge en objektiv bedömning av rörliga flimmerhår fsmörjelse. Slutligen, i motsats till andra nuvarande metoder för luftvägarna cilier visualisering, ger detta protokoll för visualisering av cilier i rät vinkel mot flimmerhåren slå riktningar, vilket gör profilvy av cilier som är optimal för högupplösande avbildning av cilia beat och metachronal vågalstring .
Detta protokoll kan modifieras på ett antal sätt att hantera ett brett spektrum av experimentella behov såsom den roll av farmakologiska medel, genetiska faktorer, miljömässiga exponeringar och / eller mekaniska faktorer såsom slem belastning på luftvägarna cilier funktion och produktion / underhåll av luftvägarna cilier beat och metachronal vågutbredning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Ett. Reagens Setup
1.1 Dissection och bildalstringsmedium
Leibovitz L-15 medium (L15) kompletteras med FBS (10%) och penicillin-streptomycin (100 enheter / ml av penicillin G natrium och 100 | ig / ml streptomycinsulfat) används under både skörd och avbildning av luftstrupe prover.
2. Grunt muromgärdade Culture Chamber Assembly
Kammaren används för att hålla luftstrupen vävnad visas i figur 1. Golvet i kammaren är glaset bottnat 35 skålen mm kultur. Den övre och sidan av kammaren genereras genom att placera en liten bit av 0,3 mm tjock silikon arkmaterial över glasskål. I kanten av arket skärs för att passa runt nedre skålen och centrum är vidare trimmas för att bilda en grund central kammare (se steg 2.1-2.3). Ovanpå detta aggregat används en 18 mm rund täckglas placerade för att generera en sluten kammare lämplig för avbildning.
- Helt täcka en 18 mm rund slip glaskupa med en kvadrat med 0,3 mm tjock silikon plåt.
- Med vanliga vassa dissektion sax klippa bort överflödigt silikon folien från runt kanten av locket halka (resulterar i ett cirkulärt skikt av silikon plåt).
- Med en vass skalpell skära ut och ta ett centralt torg i silikon plåt (ca 10 mm fyrkant) från mitten av den täckta locket halka (bildar sålunda toppen och sidorna av avbildning kammare).
Tre. Trachea Harvest och beredning
- Euthanize möss i enlighet med lokala Institutional Animal Care och användning kommittén och / eller statliga riktlinjer och ta bort luftstrupen i en vanlig plast 35 mm kultur maträtt med tillräckligt L15 media att dränka vävnad (författare har använt möss strax före födseln på dräktighetsdag 16.5, genom att nyfödda, neonatal, och vuxna djur 2).
- Avlägsna icke-luftstrupen tillhörande vävnad fäst på utsidan avluftstrupen med trubbig dissektion.
- Ta struphuvudet med ett tvärgående snitt strax under krikoidbrosket med mikro dissektion sax (Figur 2A, rad 1).
- Ta bort vänster och höger primära bronkial grenar med en tvärgående snitt strax ovanför carina använda mikroteknik dissektion sax (Figur 2A, rad 2).
- Håll försiktigt luftstrupen med fin pincett och spola lumen 2-3 gånger med ~ 1 ml av badplatsen L15 medium med en P1000 Pipetman och P1000 tips för att rensa alla slem och blod.
- Skär ut en 3-4 ring segment av luftstrupen med ett tvärgående snitt med mikro dissektion sax (Figur 2B, rad 1).
- Skär längdled genom mitten av trachealis muskeln av denna korta luftstrupe segment med mikro dissektion sax (Figur 2B, rad 2).
- Skär längdled genom mitten av trakeal brosk ringar med mikro dissektion sax (Figur 2C fig 2D).
4. Cilia Imaging
- Överför luftstrupe vävnadssegmenten, lumen nedåt på mitten av en 35 mm glas botten kultur skålen med 100-200 pl L-15-medium.
- För att kvantifiera cilia genererade flöde tillsätta en liten mängd av fluorescerande 0,20 um mikrosfärer till L-15-medium badar luftstrupen vävnadsprovet (~ 1 x 10 11 partiklar / ml eller 20 | il / ml av den Fluoresbrite 2,5% vattenhaltig mikrosfärsuspensionen).
- Placera avbildning kammaren tidigare framställda (se Procedur 1-3 ovan) ovanpå luftstrupen provets silikon arksidan nedåt, med luftstrupen provet ligger i mitten av den grunda walled kammare bildas av fönstret skär in i silikon folien (figur 1 ).
- Pressa försiktigt ned täckglaset säkra på plats och ta bort eventuella överskott L-15 media från kanterna usinga P1000 tips och P1000 Pipetman.
- Montera 35 mm glasskål botten kultur och luftstrupe prov på ett inverterat mikroskop med 100X objektiva och DIC optik.
- Med hjälp av en höghastighetskamera och film förvärv programvara samla filmer av cilia motilitet vid 200 + bilder per sekund längs cilierade trakeal epitel av uppkrupen kant trachealis muskeln (Figur 2D Outlined box, E: exempel stillbilder från inspelade filmer) (Kompletterande Movie 1).
- Använda FITC epifluorescent bildbehandling och ett svagt ljus CCD-kamera (se utrustningslista ovan), samla filmer av fluorescerande mikrosfärer rörelse över ytan av cilierade trakeal epitel att möjliggöra senare kvantifiering av flimmerhår genererade flödet (Kompletterande Movie 2).
Fem. Kvantifiering av Cilia Motility
- Ladda DIC bildförsedda filmer till ImageJ programvara och enligt den teknik som beskrivits av jagain Drummond 13 använda linjen för att rita ett raster korsar slå flimmerhår. En "återindela" av denna linje genererar en bild kymograph typ där flimmerhår rörelse över linjen genererar ett vågmönster. Antalet pixlar mellan varje vågtopp är dem mätte (en pixel = en filmruta) från vilken antalet slag per minut (dvs Hz) kan därefter beräknas.
- För att mäta cilier genererade flöde belastning fluorescerande pärla filmer till ImageJ programvarupaket och använda MTrackJ plugin 14 att manuellt spåra fluorescerande pärlor över ytan av luftstrupen epitel och låta programmet generera bead hastighet och riktning för varje kula funnen.
Försiktighet bör iakttas vid användning av fluorescerande pärlor att kvantifiera flödet som avståndet från slå flimmerhåren kan starkt påverka uppmätt flöde magnitud. Den pärlan rörelsen i Supplemental Movie 2 är ett bra exempel på detta. I detta exempel pärlarörelsen är snabb på ytan av slå flimmerhår och påtagligt sjunker för pärlor längre bort i bad media. För att kontrollera detta, bör pärla spårningar endast samlas in på ett fast avstånd ovanför cilierade epitel i alla prov för att möjliggöra korrekta jämförelser. Slutligen, för att få representativa data på vätskeflöde, bör pärlor spåras så länge som möjligt, vi föredrar att använda pärla spår som täcker 10 + ciliated celler för att beräkna vätskeflöde.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Kontroll luftvägarna cilier ska vara klart synliga och sett att slå på ett samordnat sätt (Supplemental Movie 1, filmuppspelning saktas till 15% realtid), med märkbar flöde i riktning flimmerhår slå (Supplemental Movie 2, filmuppspelning är 100% realtid). Kvantifiering av flimmerhår filmer bör ge resultat som liknar den som ses i figur 3. Insamling av höghastighetståg DIC filmer möjliggör kvantifiering av cilier svävningsfrekvensen (fig 3C) och ger bra bilder för kvalitativ bedömning av cilier slå form, medan spårning av fluorescerande pärlor tillåter mätning av cilier genererade flödeshastighet (figur 3D) och riktning (figur 3E).
Vi använder riktverkan för att ge ett index på linjärt flöde. Riktningsverkan beräknas genom att dividera den totala förskjutningen rest av ett fluorescerande kula (dvs. den kortasteAvståndet mellan start-och slutpunkt för spårning) med den sträcka ett fluorescerande pärla rör sig över hela kurvan. Således skulle ett fluorescerande pärla sig i en rak linje har en riktning av en medan en fluorescerande pärla slingrande utsträckning från en rak bana kommer att ha en riktning betydligt mindre än 1.
Vi har avbildat prover i upp till en timme med någon märkbar förändring i flimmerhår slå funktion.
Figur 1. Förstorad isometrisk vy av odlingsskålen inställning och luftstrupe prov positionering. NB: täckglas och silikon plåt ska monteras innan du sätter i luftstrupen provet i kulturen skålen.
Figur 2. Exempel på en mus luftstrupen dissektion med detta protokoll, med början från en intakt luftstrupen (A) till den slutliga avbildade resultatet (E) (se proceduren steg 3,2-3,8 för förklaring av etiketter). Skala barer i AD representerar 500 nm. Scale bar på E representerar 25 | im.
Figur 3. Förväntade resultat erhölls med en vild typ mus luftstrupen prov som utarbetats av det protokoll som beskrivs här. (A) Single frame från en hög hastighet DIC film (se kompletterande film 1 för representativa DIC film). (B) Förflyttning spår fyra fluorescerande pärlor över surface av en trakeal epitel prov (se kompletterande filmen 2 för representativa fluorescerande film). (C) Cilia svävningsfrekvensen kvantifieras från höghastighetståg DIC filmer flimmerhår motilitet (n = 41 kontrollpunkten mätningar från 6 mus tracheas). (D) Flöde hastighet och (E) Flow riktverkan kvantifieras från att spåra fluorescerande pärla rörelse över ytan av luftstrupen epitel prover (n = 31 fluorescerande pärla kurvor från 6 mus tracheas). Data förskjuts som medelvärde ± SEM. Skalstrecken 10 uM.
Supplemental Movie 1. DIC film som visar form flimmerhår beat och flimmerhår genererade flödet observeras med en vildtyp mus luftstrupen prov. Filmen samlades på 200 fps, medan uppspelningen är 30 fps. Klicka här för att se filmen .
Supplemental Movie 2. Movie av cilia GEnerated flödet över en vildtyp mus luftstrupen prov med 0,20 ìm fluorescerande mikrosfärer och epifluorescent mikroskopi. Filmsamling och lek är tillbaka 15 fps. Klicka här för att se filmen .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Mätning av cilia slagfrekvens (CBF) är relativt lätt att använda höga mål power mikroskop och snabb bildtagning hårdvara 13,15, och förklarar varför CBF mätningar ligger till grund för de flesta studier som undersöker mucociliary clearance vid hälsa och sjukdom. Men medan CBF mätning är väsentliga för förståelsen mucociliary clearance, mätning av CBF enbart ignorerar den underliggande betydelsen av både genererade ciliär flöde och flimmerhår slå vågform, som båda är svårare att mäta, ignoreras ofta, och kanske inte korrelerar med CBF. Ett exempel på hur ökat CBF inte kan motsvara ökade genererade ciliära flöde ses hos vissa patienter med DNAH11 mutationer. DNAH11 är en axonemal dynein tung kedja protein, mutationer som har rapporterats orsaka både hyperkinetic (snabbare) ciliernas och onormala flimmerhår slå vågform som förutsägs orsaka problem med sekrettransport clearance 16. Den significant fördel med våra protokoll är att det möjliggör enkel visualisering av cilier i rät vinkel mot flimmerhåren takten riktning, som tillåter en profilvy av cilier som är optimal för högupplösande avbildning av cilier slå form och cilier genererade fluidflöde över ytan av beating cilier, vilket möjliggör direkt jämförelse av CBF med flimmerhår slå vågform och / eller cilier genererade flödet i ett enda prov.
En annan fördel med denna teknik är att flimmerhåren i nyskördade luftstrupen behåller sin förmåga att slå på ett samordnat sätt över hela ytan av det respiratoriska epitelet, vilket möjliggör enkel korrelation mellan CBF och flimmerhår genererade flödet. Sådan samordnad ciliär rörelse observeras inte i reciliating mus trakeal epitelceller kulturer, vilket ofta ciliaten dåligt och visa flimmerhår slå i slumpmässiga riktningar 9,10. Den samordnade ciliernas observeras med trakeal epitel teknik som beskrivs här kan göra det möjligt att interrogate de mekanismer som reglerar ciliernas samordning och dess potentiella roll i mucociliary clearance.
Den mest utmanande delen av detta protokoll för forskare kommer att vara luftstrupen förberedelse, inklusive röjning av fett och bindväv från luftstrupen ytan (figur 2a), och längsgående skär genom mitten av trachealis muskeln (Figur 2b, rad 2). Vi finner med bra mikro dissektion sax väsentliga för både vävnad clearing och efterföljande trachealisotomy. Vidare finner vi det lättare att använda den nedre delen av luftstrupen bara anterior till carina där luftstrupen förgrenar i vänster och höger primära bronker som trachealis muskeln här är bredast. Men med tillräcklig erfarenhet, kan någon längre luftstrupen, eller faktiskt det primära bronkerna med framgång användas för att generera högkvalitativa filmer av cilia motilitet och cilier generera kassaflöde.
Möjliga tekniskaproblem i samband med detta protokoll inkluderar luftstrupen provet rör sig under avbildning och / eller provet inte kan tas i fokus. Båda dessa problem kan uppstå om för mycket L-15 lades med provet och / eller avbildning kammare täckglas inte trycktes ned ordentligt, vilket gör provet för att flyta inom täckglaset kammaren resulterar i prov rörelse eller provet flyter ovanför fokus planet gör att fokusering misslyckas. För att undvika detta är det viktigt att försöka minimera den mängd vätska används för att montera varje luftstrupe prov.
En eventuell begränsning av denna teknik är att mätningen av cilia genererade vätskeflöde kan inte helt stämmer in vivo mukociliär transporter. Vår slutsats av cilier genererade flödet av ~ 10 ìm / sek är betydligt mindre än de 100 pm / sek mucociliary transporter redovisas enligt in vivo mus luftstrupen 17. Denna skillnad beror sannolikt på flimmerhåren vara nedsänkt i media som opposed att helt enkelt flytta ett tunt skikt av slem över luft-vätske-gränssnitt. Ändå har denna metod bra verktyg för relativ jämförelse av ciliär motilitet mellan olika prover.
Det bör noteras att medan den experimentella Teknik och data som presenteras här utfördes vid rumstemperatur, spelar temperaturen sig en viktig roll vid reglering av cilier aktivitet. CBF i människans näsa och luftrör prover ses vara linjärt korrelerade med temperatur mellan 5-20 ° C, med en liten ökning av CBF sett mellan 20-45 ° C 18. Vi ser ett liknande förhållande mellan temperatur och CBF i mus luftvägarna prover (opublicerade observationer). Således, medan vi rekord flimmerhår aktivitet vid rumstemperatur för snabb bedömning av eventuella brister i flimmerhår motilitet i nya muterade möss, inkubera vi också några prover vid 37 ° C för bestämning av flimmerhår aktivitet under fysiologiska förhållanden. För att åstadkomma detta en standard lm mikroskop inkubationbärnsten kan användas för att upprätthålla prover vid 37 ° C.
Enkla ändringar av detta protokoll kommer att göra det till ett kraftfullt verktyg för att bedöma regleringen av luftvägarna cilier aktivitet genom en rad olika faktorer såsom den roll som farmakologiska medel, temperatur, genetiska faktorer, miljömässiga exponeringar, och / eller mekaniska faktorer såsom slem belastning på luftvägarna cilier funktion och produktion / underhåll av luftvägarna flimmerhår beat.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har ingenting att lämna ut.
Acknowledgments
Projektet stöddes av NIH bidrag U01HL098180 från National Heart, Lung, and Blood Institute. Innehållet är ensamt ansvarig för författare och inte nödvändigtvis representerar officiella ståndpunkter National Heart, Lung, and Blood Institute eller National Institutes of Health
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Leibovitz’s L-15 Medium | Invitrogen | 21083-027 | No phenol red |
| Fetal bovine serum | Hyclone | SH30088.03 | |
| Penicillin-Streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | |
| 2x fine forceps | Roboz | RS-4976 | |
| Dissection scissors | Roboz | RS-5676 | |
| Micro dissection scissors | Roboz | RS-5620 | |
| Scalpel | Roboz | RS-9801-15 | |
| P1000 pipetman | Gilson, Inc | F123602 | |
| P1000 tips | Molecular BioProducts | 2079E | |
| 18 mm round glass cover slips | Fisher Scientific | 430588 | |
| Plastic 35 mm culture dishes | Corning | 430588 | |
| Glass bottom 35 mm culture dishes | Warner Instruments | W3 64-0758 | |
| Silicone sheet 0.012" (0.3 mm) thick | AAA Acme Rubber Co | CASS-.012X36-63908 | |
| 0.20 μm diameter Fluoresbrite YG Carboxylate Microspheres | Polysciences | 09834-10 | |
| Inverted microscope, with 100x oil objective and DIC filters | Lecia | DMIRE2 | Brand is not critical. |
| 100-watt mercury lamp, epifluorescent FITC excitation/emission filters | Lecia | Brand is not critical. | |
| Microscope stage Incubator | Lecia | 11521749 | Not required if imaging cilia at room temperature |
| High-speed camera bright field | Vision Research | Phantom v4.2 | Brand is not critical. Must be faster than 125 fps |
| High-speed fluorescent camera | Hamamatsu | C9100-12 | Brand is not critical. Must be faster than 10 fps |
| Movie analysis software | National Institutes of Health | ImageJ with MtrackJ plugin |
References
- Stannard, W., O'Callaghan, C. Ciliary function and the role of cilia in clearance. J. Aerosol. Med. 19, 110-115 (2006).
- Francis, R. J., et al. The initiation and maturation of cilia generated flow in the newborn and postnatal mouse airway. American Journal of Physiology: Lung Cellular and Molecular Physiology. 296, 1067-1075 (2009).
- Aune, C. N., et al. Mouse model of heterotaxy with single ventricle spectrum of cardiac anomalies. Pediatric Research. 63, 9-14 (2008).
- Tan, S. Y., et al. Heterotaxy and complex structural heart defects in a mutant mouse model of primary ciliary dyskinesia. J. Clin. Invest. 117, 3742-3752 (2007).
- Zhang, Z., et al. Massively parallel sequencing identifies the gene Megf8 with ENU-induced mutation causing heterotaxy. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 3219-3224 (2009).
- Caruso, G., Gelardi, M., Passali, G. C., de Santi, M. M. Nasal scraping in diagnosing ciliary dyskinesia. Am. J. Rhinol. 21, 702-705 (2007).
- Leigh, M. W., Zariwala, M. A., Knowles, M. R. Primary ciliary dyskinesia: improving the diagnostic approach. Curr. Opin. Pediatr. 21, 320-325 (2009).
- Delmotte, P., Sanderson, M. J. Ciliary beat frequency is maintained at a maximal rate in the small airways of mouse lung slices. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 35, 110-117 (2006).
- Choe, M. M., Tomei, A. A., Swartz, M. A. Physiological 3D tissue model of the airway wall and mucosa. Nat. Protoc. 1, 357-362 (2006).
- Fulcher, M. L., Gabriel, S., Burns, K. A., Yankaskas, J. R., Randell, S. H. Well-differentiated human airway epithelial cell cultures. Methods Mol. Med. 107, 183-206 (2005).
- You, Y., Richer, E. J., Huang, T., Brody, S. L. Growth and differentiation of mouse tracheal epithelial cells: selection of a proliferative population. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 283, 1315-1321 (2002).
- Thomas, B., Rutman, A., O'Callaghan, C. Disrupted ciliated epithelium shows slower ciliary beat frequency and increased dyskinesia. Eur. Respir. J. 34, 401-404 (2009).
- Drummond, I. Studying cilia in zebrafish. Methods Cell Biol. 93 (08), 197-217 (2009).
- Meijering, E., Dzyubachyk, O., Smal, I. Methods for cell and particle tracking. Methods Enzymol. 504, 183-200 (2012).
- Sisson, J. H., Stoner, J. A., Ammons, B. A., Wyatt, T. A. All-digital image capture and whole-field analysis of ciliary beat frequency. J. Microsc. 211, 103-111 (2003).
- Schwabe, G. C., et al. Primary ciliary dyskinesia associated with normal axoneme ultrastructure is caused by DNAH11 mutations. Hum. Mutat. 29, 289-298 (2008).
- Shah, A. S., et al. Loss of Bardet-Biedl syndrome proteins alters the morphology and function of motile cilia in airway epithelia. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 3380-3385 (2008).
- Clary-Meinesz, C. F., Cosson, J., Huitorel, P., Blaive, B. Temperature effect on the ciliary beat frequency of human nasal and tracheal ciliated cells. Biology of the Cell / under the auspices of the European Cell Biology Organization. 76, 335-338 (1992).
