Summary
نعرض هنا
Abstract
البحوث قبل السريرية في نماذج حيوانية من أمراض الشرايين المحيطية تلعب دورا حيويا في اختبار فعالية من العوامل العلاجية المصممة لتحفيز دوران الأوعية الدقيقة. اختيار طريقة التسليم لهذه كلاء مهم لأن طريقة التعاطي تؤثر تأثيرا عميقا في النشاط الحيوي ونجاعة هذه العوامل 1،2. في هذه المقالة، ونحن لشرح كيفية إدارة محليا مادة في hindlimbs الدماغية باستخدام مضخة التناضحي مقسطر. هذه المضخة يمكن أن يحقق وحدة تخزين ثابتة من محلول مائي مستمر لفترة من الوقت المخصص. نقدم أيضا لدينا نموذج الفأر من جانب واحد نقص التروية hindlimb الناجمة عن ربط الشريان الفخذي المشتركة الأقرب إلى أصل الفخذي العميق والشرايين الشرسوفية في hindlimb اليسار. وأخيرا، نحن تصف في القسطرة الجسم الحي وربط الشريان الأورطي البطني infrarenal ونضح من الأوعية الدموية hindlimb مع Microfil، وهو ظليل للأشعة سيليكون وكيل الصب. Microfil يمكن أن يروي وملء السرير الوعائي بأكمله (الشرياني الوريدي و)، ولأن لدينا و ligated القناة الأوعية الدموية الرئيسية للخروج، وكيل ويمكن الاحتفاظ بها في الأوعية الدموية لمستقبل التصوير فيفو السابقين مع استخدام عينة صغيرة الصغرى-CT 3 .
Introduction
مرض الشرايين الطرفية (PAD) هو مرض تصلب الشرايين الذي يسبب عدم كفاية إمدادات الدم في الساقين 4. أنه يؤثر 8-12٬000٬000 الأميركيين، والعلاجات الطبية الحالية لا تقدم سوى 5،6 الإغاثة محدودة. والعوامل العلاجية الرواية التي تعمل على تحسين الدورة الدموية في الساقين ليس فقط كبح تطور المرض ولكن أيضا تحسين نوعية الحياة. وقوع PAD هو أعلى في الأشخاص الذين تزيد أعمارهم على 50 عاما، والعلاج الدوائي المحلي حتى هو طريقة العلاج أكثر من المرغوب فيه لأن الكلى انخفاض وظيفة الكبد غالبا ما ينظر في المرضى من كبار السن يمكن أن تقلل الأيض المخدرات وزيادة الاثار الجانبية مع الإدارة النظامية.
وهكذا، أنشأنا نموذج الفأر من وسادة لدراسة ما إذا كان وكلاء تدار محليا تخفيف نقص التروية hindlimb من خلال تشجيع تكوين الأوعية الدموية وإعادة عرض الاوعية الدموية الدقيقة. على وجه التحديد، استخدمنا مضخة التناضحي مقسطر باستمرار تقديم وكيل العلاجية للنقص تروية عضلة الفخذ من الفئران. باستخدام نظام التسليم لدينا، كنا قادرين على المحافظة على تركيزات الأمثل للدواء في البيئة المحلية، وهذا النهج يتيح للمخدرات النشاط الحيوي المناسب، ويتجنب الآثار الجانبية الجهازية ممكن، ويتغلب على عيوب محدودة وصول المخدرات المحلية المرتبطة الإدارة النظامية. بالإضافة إلى ذلك، لتقييم ما إذا كان وكلاء تدار محليا تشجيع عودة التوعي، استخدمنا الصب المتطورة وتقنيات التصوير عالية الوضوح التي تمكن الكمي للتغيرات في الأوعية الدموية الدقيقة. بشكل جماعي، ومزيج من المنهجيات المستخدمة في هذه المقالة الفيديو هو مفيد في الدراسات قبل السريرية للمساعدة في فهم عودة التوعي التي يسببها دوائيا في المرضى PAD 7-9.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. فتيلة مضخة الأسموزي
- استخدام تقنيات العقيمة (مثل القفازات، وغطاء تدفق الصفحي) عند إعداد مضخات. إزالة المضخة وتدفق مشرف من التعبئة والتغليف. تزن المضخة فارغة وتسجيل الوزن (ملغ).
- ملء المضخة ببطء، لتجنب خلق فقاعات الهواء، باستخدام حقنة 1CC الصغيرة وحادة ذات الرؤوس 27G أنبوب الملء. عندما حل تصل إلى الجزء العلوي من مضخة، ووقف التعبئة.
- يمسح الحل الزائدة وتزن المضخة شغلها. بالنسبة لمعظم المحاليل المائية، والوزن في ملغ هو نفس وحدة التخزين في ميكرولتر. الفرق في الوزن فارغة مليئة مقابل أن تكون أكثر من 90٪ من متوسط حجم التعبئة المحدد. إذا لم يكن كذلك، إخلاء مضخة مع المحاقن والملء. إذا واجهت صعوبة التقنية يرجى الرجوع إلى قسم استكشاف الأخطاء وإصلاحها من التعليمات مضخة في http://www.alzet.com/products/guide_to_use/filling.html
- استخدام زوج من ملقط لكسر شفة الأبيض من تدفق moderatأو؛ يجب الحرص على عدم ثني أو سحق الأنبوب. إرفاق القسطرة P50 إما إلى نهاية الجلسة، التي تغطي حوالي 3-4 ملم. استخدام حقنة لملء القسطرة والمرفقة مشرف وترك الحقنة التي تعلق على الجزء الأعلى من القسطرة.
- إدراج مشرف تصب في مضخة حتى القسطرة هو مطاردة مع سطح المضخة. ثم، وإزالة المحقنة من النهاية البعيدة للقسطرة. وضع مضخة في العقيمة المالحة 0.9٪ أو محلول PBS في الحاضنة 37 درجة مئوية لمدة لا تقل عن 6 ساعة (ويفضل O / N) لرئيس المضخة قبل ترسيخه في شكل الماوس. معدل تسليم مضخة يختلف مع رقم طراز (أي نموذج 1002 = 0.25 ميكرولتر / ساعة لمدة 14 يوما).
2. خلق نقص التروية Hindlimb من جانب واحد في الماوس
- تخدير الفئران مع مجموعة isoflurane وبين 2-4٪ في 100٪ O 2 بمعدل تدفق 0.4 لتر / دقيقة وإزالة الشعر (ويفضل في اليوم قبل الجراحة) على منطقة hindlimb ومرة أخرى مع depilatoراي كريم.
- تعقيم جميع الأدوات الجراحية قبل الجراحة. ضع الماوس في غرفة التخدير الاستقراء. استخدام الإعدادات التخدير نفسه وصفت في القسم 2.1.
- الانتظار حتى الماوس غير قابلة للاستجابة للمثيرات الخارجية ثم وضعه في وضعية الانبطاح على طاولة العمليات مع مخروط الأنف المجهزة التي توفر تدفقا مستمرا من isoflurane و(1.5-2.0٪).
- حقن الجرعة الموصى بها من مخدر (بوبيفاكايين؛ 0.25٪ (<1 مل / كجم)) في موقع شق؛ علاج الجلد مع حل بوفيدون اليود تليها الايثانول 70٪. جعل شق 4-6 ملم في الخلف (في جانب من العمود الفقري، في المنطقة للكتف). فصل الغشاء تحت الجلد مع ملقط غرامة، ثم يتحول الماوس إلى موقف ضعيف علاج الجلد مع حل بوفيدون اليود تليها الايثانول 70٪ وجعل 0،8-1 سم شق مع مقص الجراحية الصغرى فوق الركبة نحو الفخذ وسطي، بعد مسار الشريان الفخذي.
- نفق يصلجانب من الجذع مع أنابيب غمد صغير (6 الفرنسية) من الفخذ الإنسي إلى شق على ظهره.
- ضع الماوس في وضعية الانبطاح. إزالة مضخة التناضحي معبي / القسطرة من حل PBS وتوجيه القسطرة، من خلال أنابيب غمد، في الفخذ.
- وضع المضخة داخل الظهر وإغلاق شق مرة أخرى مع 6-0 البرولين خياطة (علاج الجلد مع حل بوفيدون اليود تليها الايثانول 70٪). ضع الماوس مرة أخرى في موقف ضعيف، وإزالة أنابيب غمد، وترك القسطرة يتعرض من خلال شق في الفخذ. تأمين الساق مع الشريط الجراحية.
- فصل الدهون تحت الجلد الأنسجة للكشف عن الأوعية الدموية. لتصور أفضل الأوعية الدموية، واستخدام ضام لفتح شق.
- بيرس غمد الفخذ غشائي بلطف باستخدام ملقط غرامة الرؤوس للوصول إلى حزمة الأوعية الدموية. تشريح وفصل الشريان الفخذي من الوريد الفخذي والعصب قرب الفخذ، مع الحرص على عدم تسبب السابقيننزيف cessive.
- مكان اثنين من الغرز 8-0 المتاخمة البرولين ليقطع شريان الفخذ 2-3 ملم الأقرب إلى التشعب الفخذ (أصل الفخذي العميق والشرايين الشرسوفية).
- قطع القسطرة إلى طول مناسب ووضع تلميح إلى المنطقة الأمامي من الفخذ، وتأمين ذلك مع البرولين خياطة 6-0 في اللفافة السطحية لضمان تسليم المستهدفة من هذه المادة. إغلاق شق الساق مع خياطة 6-0 التوالي. تدير الحقن تحت الجلد النهائية للمسكن (البوبرينورفين؛ 0.1 ملغ / كلغ)، وعلاج الجلد مع حل بوفيدون اليود تليها الايثانول 70٪ وعودة الماوس إلى القفص. استخدام مصباح التدفئة خلال الانتعاش.
- بعد فترة نقاهة لمدة 30 دقيقة، وإعداد الماوس ليزر دوبلر التصوير للتأكد من خلق نقص التروية hindlimb.
- رصد الحيوانات مرتين يوميا لمدة 5 أيام بعد الجراحة. وسيراعى في التنقل من الحيوان لتحليل الألم، وسوف النفايات في القفص بمثابة الهنديةأتور من تناول الطعام. أيضا، خلال الفترة شاشة تحديد ما إذا كان الحيوان يعاني من الألم أو عدم الراحة، وإعطاء الحقن تحت الجلد من البوبرينورفين (0.1mg/kg) مرتين يوميا.
3. التصوير إعداد نموذج
- تخدير الماوس كما هو مذكور في القسم 2.1. نقل الماوس على طاولة العمليات في موقف ضعيف. حقن 1،000 وحدة دولية من الهيبارين تحت الجلد لمنع تخثر الدم في الأوعية الدموية. في حين يتم إرفاق الماوس إلى الرؤوس، وجعل شق كبير بما فيه الكفاية لفضح تجويف الصدر وأسفل البطن. نقل أعضاء البطن إلى الجانب الأيسر من الحيوان لفضح الشريان الأورطي البطني infrarenal (IAA). فصل بعناية الشريان الأورطي من الوريد الأجوف السفلي.
- Ligate على IAA الأقرب إلى تقليل النزيف أثناء إدخال القسطرة. ثم، وجعل شق صغير على IAA. إدراج 27 ½ G إبرة حادة (تعلق على القسطرة P10) في IAA وضمان الحصول عليها مع خياطة 6-0.
- ملء اثنينالمحاقن 20CC مع المالحة heparinized و 10٪ محايدة مخزنة الفورمالين (NBF). ملء حقنة 5CC مع تباين ظليل للأشعة سيليكون المطاط المركب. مزيج من المكونات الثلاثة من MV-مركب: MV-مخفف: وكيل MV-علاج في نسب العاملين من 1:1.25:0.5. منذ الخليط (Microfil) ليس لديها سوى وقت العمل من 20 دقيقة قبل يبلمر الوكيل، فمن المستحسن عدم إضافة وكيل MV-علاج حتى الحق قبل الحقن في الأوعية الدموية.
- اجراء خفض في الأذين الأيمن وإدارة جرعة زائدة من isoflurane وللحث على القتل الرحيم والسماح لتصريف المياه من السوائل الزائدة. نعلق حقنة مليئة المالحة لطرف الإبرة والبدء في تدفق الأوعية الدموية لمدة 5 دقائق. تأكد من مسح كافة الدم من الأوعية؛ إيقاف isoflurane وقطع الرؤوس وبمجرد أن يبدأ احمرار. المقبل، نعلق حقنة مملوءة الفورمالين إلى القسطرة المفصلة أعلاه (3.2) ويروي الضغط للحصول على 5 دقائق إضافية. وأخيرا، يروي الحقنة الماضي، مع التباينوكيل، ببطء في الماوس لمدة 5 دقائق.
- اختياري: تصوير Microfil في الأوعية الدموية مع الكاميرا لضمان أن فقط بنية الشرايين وperfused.
- ضع الماوس في حاوية مليئة 10٪ بنك الفجيرة الوطني وتخزينها في 4 درجات CO / N على النقيض عامل البلمرة. بعد 24 ساعة، وإزالة الجلد على النصف السفلي من الجذع (البعيدة إلى ربط الشريان الأبهر أسفل البطن) باستخدام أدوات التشريح، وتحديث بنك الفجيرة الوطني بنسبة 10٪، ووضع الماوس مرة أخرى في وعاء لمدة 4 أيام أكثر في RT.
- تشريح hindlimbs المقابل والدماغية، ووضع العينات في محلول حمض الفورميك (كال-EX II) لمدة 48 ساعة لتسهيل زوال الكلس في العظام. ثم، شطف العينات تحت الماء الجاري لمدة 1 ساعة والعودة إلى 10٪ بنك الفجيرة الوطني والمضي قدما في Faxitron (نظام الأشعة السينية المستخدمة لضمان مخلص من الكالسيوم في العظام) والصغرى-CT التصوير.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
يوضح الرسوم المتحركة الإدراج مضخة ناضح وجراحة نقص التروية hindlimb مفصل في البروتوكول. ويبين الشكل 1 دوبلر الليزر الصور من نضح من hindlimb، مؤكدا نقص التروية. بعد الصب الأوعية الدموية مع Microfil، وهو 3D الصغرى-CT صورة من شبكة الأوعية الدموية يبين أن Microfil يمكن ملء الأوعية فعال (الشكل 2A)، ولكن يمكن أن يحدث أن انقطاعات (الشكل 2B) وذلك بسبب عوامل إجرائية مختلفة (على سبيل المثال، فقاعات الهواء، والافتقار إلى الضغط، اللزوجة من Microfil).
الرسوم المتحركة أسطورة
- ضع الماوس في وضعية الانبطاح وإجراء شق على ظهرها على جانب من العمود الفقري.
- فضح شق مرة أخرى صغيرة.
- ضع الماوس في موقف ضعيف وجعل شق صغير فوق الركبة في الفخذ وسطي.
- فصل الجلد، وفضح الأوعية الدموية، وإدراج أنابيب غمد يصل الجذع جانب من مذكرات التفاهمه إلى شق الظهر.
- خذ مضخة ناضح وإدراج قسطرة في أنابيب غمد.
- ضع الماوس في موقف ضعيف وتوجيه القسطرة إلى أسفل من خلال الأنبوب على شق في الفخذ.
- ضع الماوس في وضعية الانبطاح ووضع مضخة على ظهرها وإغلاق شق.
- ضع الماوس في موقف ضعيف وإزالة أنابيب غمد.
- سحب الجلد مع ضام واستخدام أدوات المجهرية لفصل الوريد من الشريان. مضاعفة ligate الشريان الفخذي فوق التشعب الفخذ مع الدرز.
- تأمين القسطرة إلى الأنسجة السطحية للفخذ.
- إغلاق شق الساق مع الدرز.
الشكل 1. تأكيدا لنقص التروية hindlimb عبر دوبلر الليزر تصوير نضح. ممثل دوبلر الصور SHOث نضح الدم قبل وبعد الربط الجراحي من الشريان الفخذي في hindlimb الماوس. تم إنشاء نقص التروية في hindlimb اليسار (انظر الأسهم).
الشكل 2. 3D مايكرو-CT صورة hindlimb الأوعية الدموية. الصب الأوعية الدموية مع Microfil تكشف عن وجود شبكة من الأوردة والشرايين في جميع أنحاء hindlimb (A). يمكن أن يحدث انقطاع للMicrofil أيضا (B)، وتعطيل التصور من شبكة الأوعية الدموية مفصلة (انظر الأسهم).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
ونحن هنا نقدم وسيلة لناضح تسليم المخدرات / مادة في نموذج الفأر من نقص التروية hindlimb. وبالإضافة إلى ذلك، نحن تصف تقنية الصب التي استخدمناها Microfil لإنتاج إعادة الإعمار 3D لتحليل شبكة الأوعية الدموية.
مستوى أو شدة نقص التروية يختلف وفقا لحيث يتم ربط الشرايين / الختان. أنشأنا ربط مزدوج في الشريان الفخذي المشتركة الأقرب إلى أصل الفخذي العميق والشرايين الشرسوفية، وهذا النهج يمكن أن يؤدي إلى نقص التروية أكثر شدة في hindlimb البعيدة. تأكد من مراقبة الحيوانات بعد الجراحة وتقديم الإغاثة الألم عن طريق الإدارة المحلية من المسكنات. بالإضافة إلى ذلك، قد لا يروي Microfil دائما الأوعية الدموية أطرافهم تماما. وبالتالي، فمن المهم التأكد من أن يتم شطف جميع الدم من الأوعية الدموية بعد نضح من المياه المالحة heparinized. وتشمل أسباب نضح غير مكتملة من Microfil عدم وجودالضغط pplied أو اللزوجة غير لائق للMicrofil، وكلاهما يجب أن يكون كافيا لضمان Microfil تصل إلى أكثر المناطق البعيدة للhindlimb وبالتالي يملأ الأوعية الدموية بأكملها. لمعالجة هذه القضايا، وتطبيق ضغط ثابت عند 100 ملم زئبقي والتجربة مع المجمع: نسب مخفف لتطبيق حيوان معين.
لدراسة تخلق الشرايين (نمو الشريان الضمانات موجودة من قبل)، فإن النهج المثالي هو أن ligate الشريان الفخذي القاصي فورا إلى الأصل للفرع الفخذ العميق لإعادة توجيه تدفق الدم في الأوعية ضمانات. ومع ذلك، فإن الاستجابة لهذا الإجراء يختلف على نطاق واسع بين سلالات الفئران، ومدى نقص التروية قد لا تكون كافية في بعض سلالات الفئران (على سبيل المثال، C57BL / 6). نموذج الدماغية أقل حدة قد لا توفر نافذة لفترات طويلة من الوقت للتحقيق في الآثار العلاجية بشكل كبير سلالات الفئران أوعية دموية مثل C57BL / 6. لتجنب هذه المشاكل، أنشأنا hindlimb نقص التروية بY ligating الشريان الفخذي الداني، مما أدى إلى نقص التروية أكثر شدة لإظهار أفضل الآثار المحلية الافراج عن المخدرات، إلا أن هذا النهج يحول دون تحليل تخلق الشرايين في الأوعية العميقة الدانية ضمانات فرع. وبالتالي، يتم رسمها الآثار العلاجية أساسا من المنطقة الدماغية البعيدة، وهو ما يتسق مع موقع تشريحي (الفخذ الأمامي الوحشي) حيث يتم تحرير المخدرات / مادة. أثناء الجراحة، فمن الأهمية بمكان أن لا تجرح الوريد الفخذي هشة بسبب النزيف المحلية يمكن أن يؤدي إلى الالتهاب والوذمة، والتي تؤثر على كل من تخلق الشرايين والأوعية الدموية. ونحن نوصي باستخدام الغرز 8-0 البرولين إلى ligate الشريان الفخذي مع عقدة ربطة المناسبة لتجنب وتمتد، السلالة، أو تمزق الشريان. وبالإضافة إلى ذلك، Microfil يجب استخدام فورا (خلال 20 دقيقة) بعد خلط المكونات 3 (مجمع، مخفف، وكيل علاج) لأنه يبلمر بسرعة، مما يخلق صعوبات تقنية للحقن. كما سبق ستاتيد، Microfil لا دائما يروي بنجاح الأوعية الدموية الصغيرة، ولكن الممارسة واستخدام التقنيات المناسبة يمكن أن تساعد في التغلب على هذا القيد.
حجم التعبئة مضخة يجب أن يكون أكثر من 90٪ من حجم التعبئة يعني، وإذا لم يكن كذلك، الهواء اضافية قد الحصول على المحاصرين داخل المضخة. يقع معلومات تقنية إضافية في www.alzet.com . وبالإضافة إلى ذلك، يجب أن يكون وكيل Microfil في اللزوجة المفضل لتطبيق معين، لذلك قد تحتاج نسبة مخفف لمركب إلى تعديل.
نموذج نقص التروية hindlimb هو تكرار للغاية وقابلة للتطبيق على PAD 10،11. تسليم مستقرة من العوامل العلاجية في هذا النموذج هو ضروري للحصول على نتائج مفيدة لل2. في الختام، فإن تقنية التصوير 3D استخدمنا لتصور هياكل المورفولوجي هو أداة ممتازة لفحص الأوعية الدموية الماوس ويوفر نظام قوي للstudyiأمراض الأوعية الدموية نانوغرام.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح. أجريت جميع الإجراءات الحيوانية وفقا للمبادئ التوجيهية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية وتمت الموافقة من قبل اللجنة الاستخدام (IACUC) المؤسسات ورعاية الحيوان في جامعة تكساس مركز العلوم الصحية في هيوستن.
Acknowledgments
فإن الكتاب أود أن أشكر كيث ميشيل من أندرسون مرفق التصوير الحيوانات الصغيرة MD للحصول على المساعدة الفنية له مع الدقيقة CT التصوير، إدوارد TH يه، دكتوراه في الطب، للحصول على المساعدة الجراحية، وريبيكا بارتو، دكتوراه، للحصول على المساعدة التحريرية. وأيد هذا العمل في جزء من جمعية القلب الأمريكية.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent/Material | |||
| Surgical tools | Fine Science Tools | Type: Tool | |
| Puritan sterile cotton swabs | Fisher Scientific | 22-029-499 | Type: Tool |
| Betadine (povidone-iodine) | Fisher Scientific | 19-065534 | Type: Reagent |
| 70% Alcohol pads | Fisher Scientific | NC9926371 | Type: Reagent |
| Phosphate buffered saline | Lonza | 17-516F | Type: Reagent |
| 6-0 prolene suture | Cardinal Health | 8709 | Type: Tool |
| 8-0 prolene suture | Cardinal Health | 2775 | Type: Tool |
| Depilatory cream | Nair | Type: Tool | |
| Osmotic pump |  ALZET |
1002 | Type: Tool, 14 day release |
| Vinyl catheter | ALZET |
7760 | Type: Tool |
| Heparinized saline (0.9%) | Baxter | 2B0944 | Type: Reagent |
| Neutral buffered formalin | Richard-Allan Scientific | 5705 | Type: Reagent |
| Microfil (silicone rubber contrast agent) | Flowtech | MV-112 | Type Reagent, Microfil White |
| Cal-Ex II (formic acid solution) | Fisher Scientific | CS511-1D | Type: Reagent |
| Buprenex | CIII | 7571 | Type: Analgesic |
| Bupivicaine | Hospira, Inc. | 381 | Type: Analgesic |
| Equipment | |||
| Dissecting microscope | Carl Zeiss Microimaging | Zeiss Stemi 2000-C | Type:Equipment |
| Laser Doppler perfusion imager | Perimed Inc. | Periscan PIM3 | Type:Equipment |
| Micro-CT imaging system | GE Healthcare | Explore Locus SP | Type:Equipment |
References
- Epstein, S. E., Fuchs, S., Zhou, Y. F., Baffour, R., Kornowski, R. Therapeutic interventions for enhancing collateral development by administration of growth factors: basic principles, early results and potential hazards. Cardiovasc. Res. 49, 532-542 (2001).
- Esaki, J., Marui, A., Tabata, Y., Komeda, M. Controlled release systems of angiogenic growth factors for cardiovascular diseases. Expert Opin. Drug Deliv. 4, 635-649 (2007).
- Bentley, M. D., Ortiz, M. C., Ritman, E. L., Romero, J. C. The use of microcomputed tomography to study microvasculature in small rodents. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 282, 1267-1279 (2002).
- Golomb, B. A., Dang, T. T., Criqui, M. H. Peripheral arterial disease: morbidity and mortality implications. Circulation. 114, 688-699 (2006).
- Hiatt, W. R. Pharmacologic therapy for peripheral arterial disease and claudication. J. Vasc. Surg. 36, 1283-1291 (2002).
- Hirsch, A. T., et al. Peripheral arterial disease detection, awareness, and treatment in primary care. JAMA. 286, 1317-1324 (2001).
- McDonald, D. M., Choyke, P. L. Imaging of angiogenesis: from microscope to clinic. Nat. Med. 9, 713-725 (2003).
- Hirsch, A. T., et al. ACC/AHA Guidelines for the Management of Patients with Peripheral Arterial Disease (lower extremity, renal, mesenteric, and abdominal aortic): a collaborative report from the American Associations for Vascular Surgery/Society for Vascular Surgery, Society for Cardiovascular Angiography and Interventions, Society for Vascular Medicine and Biology, Society of Interventional Radiology, and the ACC/AHA Task Force on Practice Guidelines (writing committee to develop guidelines for the management of patients with peripheral arterial disease)--summary of recommendations. J. Vasc. Interv. Radiol. 17, 1383-1397 (2006).
- Zagorchev, L., Mulligan-Kehoe, M. J. Molecular imaging of vessels in mouse models of disease. Eur. J. Radiol. 70, 305-311 (2009).
- Losordo, D. W., Dimmeler, S. Therapeutic angiogenesis and vasculogenesis for ischemic disease. Part I: angiogenic cytokines. Circulation. 109, 2487-2491 (2004).
- Waters, R. E., Terjung, R. L., Peters, K. G., Annex, B. H. Preclinical models of human peripheral arterial occlusive disease: implications for investigation of therapeutic agents. J. Appl. Physiol. 97, 773-780 (2004).
