Summary
Transabdominale echografie wordt beschreven als een effectief, niet-invasief middel voor het beoordelen van de reproductieve status bij Reeves' muntjac herten. Deze methoden kunnen worden gebruikt om vroege zwangerschapsdiagnose te bereiken en de levensvatbaarheid van de foetus te evalueren. Toekomstige toepassingen van deze techniek omvatten een schatting van de zwangerschapsduur en de effecten van moederziekte op de foetale ontwikkeling.
Abstract
Reeves' muntjac herten (Muntiacus reevesi) zijn een kleine hertsoort afkomstig uit Zuidoost-Azië, en worden momenteel onderzocht als een potentieel model van prionziekte overdracht en pathogenese. Verticale overdracht is een aandachtsgebied onder onderzoekers die infectieziekten bestuderen, waaronder prionziekte, en deze onderzoeken vereisen efficiënte methoden voor het evalueren van de effecten van maternale infectie op reproductieve prestaties. Echoografisch onderzoek is een bekend instrument voor het diagnosticeren van zwangerschap en het beoordelen van de foetale gezondheid bij veel diersoorten1-7, waaronder verschillende soorten gekweektehertachtigen 8-19, maar deze techniek is niet beschreven in Reeves' muntjac herten. Hier beschrijven we de toepassing van transabdominale echografie om zwangerschap in muntjac te detecteren en foetale groei en ontwikkeling gedurende de zwangerschapsperiode te evalueren. Met behulp van deze procedure werden zwangere dieren al 35 dagen na het koppelen van doe-buck geïdentificeerd en dit was een effectief middel om de zwangerschap met regelmatige tussenpozen veilig te controleren. Toekomstige doelstellingen van dit werk zijn onder meer het vaststellen van normale foetale meetreferenties voor de schatting van de zwangerschapsduur, het bepalen van de gevoeligheid en specificiteit van de techniek voor het diagnosticeren van zwangerschap in verschillende stadia van de zwangerschap, en het identificeren van variaties in foetale groei en ontwikkeling onder verschillende experimentele omstandigheden.
Introduction
Echoografisch onderzoek is een goed beschreven methode voor zwangerschapsdiagnose bij runderen1,schapen2,3,geiten4,paarden5,gezelschapsdieren6,7en andere huisdieren. Deze beeldvormingsmodaliteit is ook geïdentificeerd als een waardevol hulpmiddel voor zwangerschapsdetectie en foetale leeftijdsschatting bij verschillende soorten in gevangenschap levende hertachtigen, waaronder damherten8-11, edelherten12-16, Hokkaido sikaherten17en rendieren18,19. In veel gevallen heeft echografie hogere nauwkeurigheidssnelheden geproduceerd dan andere mechanismen voor zwangerschapsdetectie, zoals serumprogesteron of zwangerschapsgerelateerde glycoproteïneanalyse9,18. Bovendien kan ultrasonografische visualisatie van het voortplantingskanaal aanvullende informatie bieden over foetale levensvatbaarheid, zwangerschapsduur en identificatie van ontwikkelingsafwijkingen die anders moeilijk te beoordelen zouden zijn. Het nut van ultrasonografie voor het evalueren van de reproductieve status suggereert dat deze methodologie moet worden aangepast aan andere soorten waarin actieve fokprogramma's worden gebruikt.
Reeves' muntjac herten (Muntiacus reevesi) zijn een kleine hertsoort afkomstig uit Zuidoost-Azië20. Hoewel de voortplantingscyclus van deze dieren niet goed wordt gekarakteriseerd in hun geboortegebieden, hebben studies van wilde populaties in delen van Zuid-Engeland hun fokpatronen verbeterd20. In tegenstelling tot de meeste hertachtigen lijkt reeves' muntjac het hele jaar door te broeden, zonder duidelijke seizoensgebonden fawning pieken20-22. Vrouwelijke muntjac bevallen meestal van een enkel reekalf na een draagtijd van 210 dagen en komen betrouwbaar binnen 24 uur20-22uur in een postpartum oestrus . Wordt dat niet verwekt tijdens deze postpartumperiode zal terugkeren naar oestrus ongeveer 24-25 dagen later20. In gevangen situaties wordt reproductie meestal bereikt door huisvesting met een of meer intacte mannen. Dit systeem produceert bevredigende conceptiepercentages en vereist weinig technische vaardigheid voor personeel, maar exacte fokdata zijn moeilijk, zo niet onmogelijk, te bepalen.
Muntjac worden vaak gebruikt in cytogenetische studies vanwege het brede scala aan diploïde chromosoomnummers en de hoge mate van karyotypische diversificatie tussen de verschillende soorten23. Deze dieren worden momenteel ook onderzocht als een model van pathogenese en overdracht van prionziekte, met bijzondere aandacht voor de studie van verticale overdracht van chronische verspillingsziekte (CWD) bij hertachtigen. Het belang van de muntjac in een aantal verschillende onderzoekstoepassingen suggereert dat verbeterde reproductieve technologieën moeten worden opgezet als aanvulling op de huidige onderzoeksprocedures. In het bijzonder kunnen niet-invasieve mechanismen om de zwangerschapsperiode te beoordelen mogelijk kritieke variaties in reproductieve prestaties en foetale groei en ontwikkeling onder verschillende experimentele omstandigheden verduidelijken. Bovendien zou de ontwikkeling van real-time foetale metingsreferenties potentieel waardevol zijn bij het schatten van de zwangerschapsduur in situaties waarin fokdata niet kunnen worden bepaald. Eerdere studies hebben mechanismen beschreven voor het gebruik van foetale metingen, zoals kroon-romplengte (CRL), borstdiepte (CD) en hoofdlengte (HL) om het geschatte stadium van de dracht bij hertachtigen te schatten11-14, 16,17. Bovendien hebben sommige van deze studies ook richtlijnen vastgesteld die beschrijven wanneer specifieke ontwikkelingsmijlpalen, zoals skeletmineralisatie of foetale hartslag, kunnen worden geïdentificeerd8-19. Hoewel deze gegevens nuttig kunnen zijn om reproductieve echografieanalyse in de muntjac te helpen begeleiden, hebben de meeste andere onderzochte hertsyvidsoorten een veel grotere lichaamsgrootte en langere zwangerschapsperioden, waardoor de translationele waarde van deze studies voor muntjac-toepassingen wordt verminderd.
Het hier geschetste protocol beschrijft transabdominale echografie van de vrouwelijke muntjac met het oog op het diagnosticeren en monitoren van zwangerschap. Succesvolle uitvoering van dit protocol kan vroege zwangerschapsdetectie en evaluatie van foetale groei en ontwikkeling vergemakkelijken. Deze techniek heeft waardevolle toepassingen bij het uitvoeren van studies naar reproductie, bij utero-ontwikkeling of verticale overdracht van infectieziekten in een klein hertsmodel en kan ook nuttig zijn voor klinische doeleinden bij in gevangenschap fokoperaties.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Procedurele voorbereiding
Alle beschreven dierprocedures zijn beoordeeld en goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committee van de Colorado State University, een Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC), Intl. geaccrediteerde instelling.
- Immobiliseer dieren voorafgaand aan het onderzoek met behulp van geschikte sedatie- of anesthesieprotocollen om ontspanning te bieden en een geschikte positionering mogelijk te maken. Eén handler houdt het hert vast terwijl een tweede persoon de sedatie aan het dier toedeert.
Opmerking: De auteurs hebben de volgende combinatie gevonden om effectieve sedatie bij deze soort te bieden: butorphanol (0,45 mg/kg), azaperone (0,035 mg/kg) en medetomidine (0,04 mg/kg), intramusculair toegediend in de bilspieren. - Zodra de doe een sedatievlak heeft bereikt dat een conforme behandeling mogelijk maakt, plaatst u haar in dorsale of laterale lighouding op een onderzoekstafel of binnen een V-trog. Verhef het hoofd, de nek en de thorax iets (ongeveer 20-30°) om het risico op oprispingen en aspiratie van de pensinhoud te verminderen en om een goede ventilatie tijdens de procedure te vergemakkelijken.
Opmerking: Bij de meeste hertachtigen of andere herkauwers wordt abdominale echografie uitgevoerd bij staande dieren; de kleine omvang en gedragsoverwegingen van deze soort vereisen echter zware sedatie voor onderzoek en sternale positionering is daarom moeilijker en kan een effectieve beeldvormingstechniek uitsluiten. Het plaatsen van het dier halverwege tussen sternale en laterale lighouding kan ideaal zijn om het risico op oprispingen en hypoventilatie te verminderen en moet indien mogelijk worden overwogen. In elke ligfietspositie is het van cruciaal belang om de ademhaling van de dieren zorgvuldig te controleren en onmiddellijk het onderzoek te stoppen en het dier in sternale lighouding te plaatsen als regurgitatie of hypoventilatie wordt opgemerkt. - Knip indien nodig haar uit het te onderzoeken gebied van de buik om voldoende contact te bereiken tussen de voetafdruk van de transducer en de huid.
Opmerking: In de vroege zwangerschap kan bewijs van zwangerschap worden gedetecteerd in de caudale buik in de buurt van de borstklieren. Dit gebied van de muntjac is meestal haarloos en daarom is scheren op dit moment mogelijk niet geïndiceerd. Naarmate de foetus groeit en de baarmoeder uitstijt om een meer craniale positie in de buik in te nemen, is het knippen van het haar nodig voorafgaand aan de beeldvorming. Zorg ervoor dat er geen mechanisch letsel aan de huid ontstaat, waaronder snijwonden door scheermesjes of thermisch letsel door elektrische tondeuses. - Plaats de echografie-eenheid op een locatie waarmee de technicus de monitor gemakkelijk kan visualiseren tijdens het uitvoeren van het onderzoek met zijn of haar dominante hand. Voer dieridentificatiegegevens (naam, identificatienummer, enz.)in het systeem in om opgeslagen afbeeldingen en videolussen automatisch te labelen.
2. Transabdominaal reproductief echoscopisch onderzoek
- Breng een royale hoeveelheid akoestische koppelingsgel aan op de staartbuik.
- Plaats een 5-10 MHz gebogen lineaire transducer op de huid van de staartbuik, onmiddellijk craniale naar de schaamstreek, en beweeg deze langzaam in een craniale richting om de structuren in de bekkenholte te evalueren. Scan de linker- en rechterkwadranten van de staartbuik om beide hoorns van de bicornuaat baarmoeder van de muntjac te beoordelen.
Opmerking: Uitgebreide abdominale echografie omvat de beoordeling van alle buik ingewanden, inclusief de lever, nieren, milt, maagdarmkanaal, urineblaas en voortplantingskanaal. Voor de toepassing van dit protocol zal alleen het onderzoek van de zwangerschap in detail worden besproken; het normale uiterlijk van andere caudale buikorganen moet echter worden herkend, aangezien deze structuren zich waarschijnlijk in de loop van het onderzoek zullen voordoen. Organen die het meest op deze locatie worden gezien, zijn segmenten van het maagdarmkanaal, de urineblaas en het voortplantingskanaal. De grote en dunne darmen worden geïdentificeerd door het karakteristiek gelaagde uiterlijk van de darmwand. Het lumen kan al dan niet worden uitgesproken, afhankelijk van het type en de hoeveelheid inhoud, waaronder vocht- en gas-, slijm- of voedseldeeltjes. De urineblaas kan moeilijk te identificeren zijn, tenzij opgezwollen met urine, en de lagen van de blaaswand zijn aanzienlijk minder verschillend dan die van de darmen. Afgezien van de baarmoeder kunnen de eierstokken ook worden gevonden op echografie van het voortplantingskanaal van de vrouwelijke muntjac. De eierstokken verschijnen als eivormige structuren in de buurt van de staartpool van de nieren en hun uiterlijk kan in de loop van de estrous cyclus veranderen. De aanwezigheid van meerdere volwassen, met vloeistof gevulde follikels in de cortex suggereert oestrus.
Opmerking: Door de scankop van de transducer te roteren en/of te "waaieren", kunnen structuren worden geëvalueerd in dwars- of sagittale vlakken.- Indien nodig om een gravid baarmoeder van de urineblaas te onderscheiden, leeg de blaas handmatig door zachte druk op de caudale buik uit te oefenen of door een urinekatheter te plaatsen en de scan te herhalen.
Opmerking: Handmatige expressie van de blaas mag alleen worden geprobeerd wanneer het dier zich in een sternale of rechtopstaande positie bevindt, wat een meer natuurlijke oriëntatie van de buik ingewanden vergemakkelijkt en het risico op trauma aan andere structuren vermindert. De baarmoeder kan ook worden onderscheiden van de urineblaas door de dikte van de wand van het orgaan te beoordelen. De typische dikte van een matig opgezwollen blaas is ongeveer 1,4 mm24, terwijl de auteurs hebben ontdekt dat de meer gespierde wand van de gravid baarmoeder in de muntjac over het algemeen tussen 7-8 mm meet.
Opmerking: Vroege zwangerschap is moeilijk definitief te diagnosticeren vanwege een gebrek aan identificeerbare foetale structuren, en in feite kan de eerste indicatie van zwangerschap gewoon een kleine vloeibare zak in de staartbuik zijn. Indien gezien op dit moment, zal het zich ontwikkelende embryo verschijnen als een hyperechoïsche, eivormige tot amorfe structuur in de baarmoeder (Figuur 1).
- Indien nodig om een gravid baarmoeder van de urineblaas te onderscheiden, leeg de blaas handmatig door zachte druk op de caudale buik uit te oefenen of door een urinekatheter te plaatsen en de scan te herhalen.
- Breng de diepte, frequentie en versterking zo nodig aan om het contrast en de beelddetails te verbeteren.
Opmerking:hogere frequenties worden geassocieerd met kortere golflengten, die nodig zijn voor een verbeterde beeldresolutie. De meeste transducers kunnen werken binnen een frequentiebereik (bijvoorbeeld 6-10 MHz)24. De frequentie kan worden aangepast met behulp van de scannerregelaars op de echografie-eenheid en het verhogen van de frequentie zal resulteren in een duidelijker beeld. Toenemende frequentie vermindert tegelijkertijd de diepte van de geluidsgolfpenetratie; daarom kan het verminderen van de frequentie nodig zijn om diepere structuren te visualiseren, maar de resolutie kan in gevaar komen24. Om deze reden is het belangrijk om de hoogst mogelijke frequentie te selecteren om de gewenste weefseldiepte te bereiken. Aanpassingen aan de versterkingsregelaars veranderen de versterking van geluidsgolven die vanuit de weefsels naar de transducer terugkeren en beïnvloeden de mate van contrast in het beeld24. De versterking moet worden ingesteld op een punt waar een optimaal contrast tussen hyperechoïsche en hypo-echoïsche weefsels wordt bereikt, en deze instellingen moeten mogelijk worden aangepast afhankelijk van de structuren die worden afgebeeld.
3. Foetale metingen verkrijgen
Opmerking: De zwangerschapsduur bij veel gedomesticeerde diersoorten kan worden geschat met behulp van vastgestelde referentiebereiken voor foetale metingen verkregen uit echografisch onderzoek. De meest gebruikte metingen omvatten rechte kroon-romplengte (SCRL), borstdiepte (CD) en hoofdlengte (HL)17. Hoewel er nog niet voldoende gegevens zijn verzameld om betrouwbare richtlijnen voor de zwangerschapsduur te ontwikkelen bij reeves' muntjac herten, kunnen metingen worden verzameld om te beginnen met het vaststellen van deze referenties. Foetale hartslag (FHR) is aangetoond bij andere soorten hertachtigen en herkauwers om lineair te stijgen naarmate de dracht vordert tot een bepaald punt (meestal rond dag 60 van de dracht), op welk moment de hartslag begint te dalen17. FHR kan worden gebruikt om de zwangerschapsduur te schatten in combinatie met andere ultrasone waarnemingen, maar het wordt vaker gebruikt als een maat voor de foetale levensvatbaarheid17,24. FHR is al 35 dagen na de waargenomen paring berekend in reeves' muntjac.
- Om SCRL te meten, plaatst u de baarmoeder op de monitor en brengt u de positie van de transducer fijn aan totdat een sagittale weergave van de hele foetus is verkregen (figuren 2 en 3). Bevries het beeld en meet de afstand tussen het meest dorsale aspect van de schedel en de basis van het heiligbeen (figuren 2 en 3).
- Om CD te meten, verkrijgt u een sagittale weergave van de foetus (hetzelfde beeld kan worden gebruikt om SCRL te meten) en meet u de afstand tussen de dorsale en ventrale aspecten van de thorax (figuren 2 en 3).
- Om HL te meten, met behulp van dezelfde sagittale weergave van de foetus zoals beschreven voor de SCRL- en CD-metingen, meet u de afstand van de occipitale top tot de basis van de neus (figuren 2 en 3).
- Om de foetale hartslag te berekenen, identificeert u het hart in de borstholte van de foetus door de ritmische samentrekkingen te visualiseren. Bereken de hartslag door het aantal weeën (hartslagen) te tellen dat binnen een periode van 1 minuut optreedt.
Opmerking: Als de gebruikte echografie-eenheid Doppler-mogelijkheden heeft, kan deze functie worden gebruikt om het hart verder te onderscheiden van andere niet-specifieke foetale bewegingen. - Controleer of alle opgeslagen afbeeldingen en videolussen alle benodigde identificatiegegevens bevatten, inclusief de naam of het nummer van het dier, de datum, de metingen en de juiste structuurlabels.
4. Procedurele conclusies en terugvordering
- Verwijder alle resterende ultrasone contactgel uit de buik van het dier met een zachte doek of papieren handdoeken. Reinig de gel van de transducer voordat u deze opbergt.
- Bij gebruik van het in stap 1.1 beschreven sedatieprotocol moet atipamezol subcutaan worden toegediend in een dosis van 0,25 mg/kg om de effecten van medetomidine om te keren. Als u een ander sedatieprotocol gebruikt waarin een antagonist beschikbaar is, dient u dit middel aan het dier toe te dienen volgens gepubliceerde doseringen aan het einde van de procedure om het herstel te versnellen.
- Plaats de muntjac op een zacht bedoppervlak in sternale ligfiets, waarbij het hoofd iets verhoogd is om het risico op oprispingen en aspiratie van pensinhoud te verminderen. Houd het dier nauwlettend in de gaten totdat het volledig is hersteld en zonder hulp door het verblijf kan ambuleren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Met behulp van het hier beschreven protocol kan zwangerschap worden gediagnosticeerd en gecontroleerd bij Reeve's muntjac herten met minimaal invasieve technieken. Het vroegste tijdstip dat zwangerschap door de auteurs kon worden gedetecteerd was ongeveer 35 dagen na waargenomen paringsgedrag.
In de vroege stadia van de zwangerschap werd zwangerschap gediagnosticeerd door het visualiseren van een met vloeistof gevulde baarmoeder die werd geïdentificeerd als een anechoïsche ruimte in de staartbuik. In de baarmoeder verscheen het zich ontwikkelende embryo als een hyperechoïsche, eivormige structuur met weinig identificeerbare kenmerken (Figuur 1). Naarmate de zwangerschap vorderde, werden foetale structuren duidelijk en kon een sluitende diagnose worden gesteld na de observatie van skeletmineralisatie en foetale hartslag (figuren 2 en 3).
Foetale metingen kunnen worden verkregen en gebruikt om referentierichtlijnen vast te stellen voor het schatten van de zwangerschapsduur in gevallen waarin een exacte fokdatum niet bekend is, hoewel we dit systeem nog niet volledig hebben ontwikkeld in de muntjac. Rechte kroon-romp lengte (SCRL), HL, en CD zijn standaard foetale metingen die vaak worden gebruikt om foetale leeftijd te schatten in veel soorten17, en deze metingen werden verkregen uit echografie beelden van muntjac zwangerschappen met behulp van het hier beschreven protocol. Alle drie deze metingen kunnen worden verkregen uit hetzelfde goed gepositioneerde sagittale beeld(figuren 2 en 3),maar afzonderlijke foto's kunnen worden gebruikt als de hele foetus niet in staat is om in één sagittale weergave te worden vastgelegd. In de toekomst kunnen deze technieken ook worden gebruikt om variaties in groei en ontwikkeling te identificeren die onder verschillende experimentele omstandigheden worden waargenomen en om de foetale levensvatbaarheid te bepalen.
Figuur 1. Echografie die vroege zwangerschap in een muntjachert van Reeves demonstreert. De doe in deze studie was 46 dagen gehuisvest met een intacte mannelijke muntjac, maar een exacte broeddatum is niet bekend. Foetale kenmerken zijn in dit stadium van de zwangerschap niet te onderscheiden.
Figuur 2. Echografie afbeelding van dezelfde zwangerschap afgebeeld in figuur 1, 91 dagen na de introductie van de doe op de bok. (CD - borstdiepte, HL - hoofdlengte, P - placentome, SCRL - rechte kroon-romplengte).
Figuur 3. Echografiebeeld van een tweede zwangerschap die aangewezen positionering voor het verkrijgen van foetale metingen aantoont. Beeld dat 91 dagen na inleiding van doe aan de bok wordt genomen. (CD - borstdiepte, HL - hoofdlengte, P - placentome, SCRL - rechte kroon-romplengte).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Dit protocol beschrijft de toepassing van transabdominale echografie voor zwangerschapsdiagnose bij Reeves' muntjac herten. In overeenstemming met andere echografiestudies zijn geschikte apparatuur en technische bekwaamheid noodzakelijk voor een succesvol reproductief onderzoek van de muntjac doe. Zorgvuldige beoordeling van de anatomie van zoogdieren, de fysische principes van diagnostische echografie en het typische ultrasonografische uiterlijk van de abdominale ingewanden zal helpen bij het verminderen van verkeerde diagnoses. Bovendien is de selectie van geschikte transducers en de vertrouwdheid met de instrumentatie- en scannerbesturingen van cruciaal belang voor het verkrijgen van beelden van hoge kwaliteit en nauwkeurige interpretatie.
Voor veel onervaren ultrasonografen zijn beeldartefacten een veel voorkomende oorzaak van een slechte beeldresolutie en onnauwkeurige beoordeling van structuren. Nagalm op de skin-transducer interface is een van de meest voorkomende artefacten in veterinaire abdominale echografie en kan aanzienlijk worden verminderd door de aanwezigheid van gas tussen de twee oppervlakken te elimineren. Voldoende ontharing en de royale toepassing van akoestische gel op de huid moeten voldoende zijn om de impact van dit artefact te minimaliseren. Discussies over andere beeldvormende artefacten zijn te vinden in verschillende teksten van menselijke en veterinaire echografie, en zullen daarom hier niet in detail worden besproken; een algemene kennis van deze verschijnselen zal de ultrasonograaf echter in staat stellen ze effectiever te beheersen24.
Bij het uitvoeren van een reproductief onderzoek moet worden begrepen dat de baarmoeder moeilijk te visualiseren kan zijn bij een normaal, niet-pregnant dier. In het begin van de zwangerschap kan het lumen van de baarmoeder identificeerbaar worden als een hypo-echoïsche tot anechoïsche ruimte als de zwangerschapszak zich vormt. In dit stadium in de muntjac kan de baarmoeder meestal worden gevonden door te scannen op het niveau van, of enigszins caudale aan, de borstklieren. Voorafgaand aan de skeletmineralisatie of het verschijnen van een foetale hartslag, kan zwangerschap verkeerd worden gediagnosticeerd in aanwezigheid van andere reproductieve omstandigheden waardoor vocht zich ophoopt in de baarmoeder, waaronder pathologie zoals pyometra, hydrometra of mucometra. Echografiediagnoses moeten worden gemaakt in combinatie met een volledige klinische beoordeling van het dier voorafgaand aan sedatie voor de procedure. In de vroege zwangerschap zal het concept verschijnen als een bolvormige tot eivormige, hyperechoïsche structuur in de vruchtzak. Specifieke ontwikkelingstijdpunten worden niet goed gekarakteriseerd bij deze soort; skeletmineralisatie en foetale hartbeweging lijken echter consistent detecteerbaar te zijn na ongeveer 8 weken na de paring.
Onder ideale omstandigheden kan transabdominale echografie een ongelooflijk nuttig hulpmiddel zijn voor de evaluatie van voortplantingsstructuren bij veel soorten, waaronder Reeves' muntjac. De waarde van deze techniek is echter sterk afhankelijk van de specifieke mogelijkheden van de huisvestingsfaciliteiten van de dieren. In tegenstelling tot meer passieve mechanismen van zwangerschapsdetectie, zoals visuele observatie van paringsgedrag en daaropvolgende opgezette buik van de doe, vereist echografie fysieke en / of chemische beperking van het dier gedurende een periode van 5-10 minuten of langer. In veel faciliteiten is dit niet mogelijk of praktisch, en de noodzaak van het onderzoek moet worden overwogen op basis van de specifieke doelstellingen van het onderzoek. Bovendien kunnen bepaalde fysiologische of pathologische toestanden suggereren dat ultrasonografie bij bepaalde dieren gecontra-indiceerd is vanwege de potentieel schadelijke effecten van nood in verband met vangst en sedatie. Het is belangrijk om de geschiktheid van elk dier voor echografisch onderzoek te beoordelen voordat het onderzoek wordt gestart, en een dierenarts moet worden geraadpleegd in de planningsfasen van deze projecten.
De huidige praktijken voor zwangerschapsdetectie in Reeves' muntjac en andere diersoorten zijn meestal passief van aard (observatie van paringsgedrag en opgezette buik). Serumprogesteron of zwangerschapsgerelateerde glycoproteïnespiegels kunnen worden gemeten om de diagnose18,25te bevestigen , maar de resultaten van deze onderzoeken geven geen informatie over het stadium van de zwangerschap of de levensvatbaarheid van de foetus. Echografie biedt het voordeel dat real-time beoordeling van de reproductieve status met nauwkeurigheid vergelijkbaar met of groter dan die van serumhormoontesten18, met behoud van minimale invasiviteit en nood voor de dieren. Bij operaties waarbij de fokdatum moeilijk of onmogelijk te bepalen is, kan echografie een nauwkeuriger mechanisme bieden om het stadium van de zwangerschap te schatten dan hormonale assays, zelfs als er geen gepubliceerde zwangerschapstabellen zijn. Bovendien lijkt fysieke en chemische terughoudendheid voor echografisch onderzoek minimale problemen te veroorzaken voor gezonde muntjac en biedt het een ideale gelegenheid om een grondig lichamelijk onderzoek uit te voeren en extra monsters (bloed, urine, enz.)te verzamelen voor algemene gezondheidsbeoordelingen.
De schatting van de zwangerschapsduur door middel van ultrasonografische metingen is vastgesteld bij veel soorten, waaronder runderen1, schapen2,3, geiten4en paarden5, en is beschreven in een beperkt aantal hertachtigen en8-19. Bij gebrek aan exacte broeddata of vastgestelde drachttabellen kan de foetale leeftijd van Reeves' muntjac slechts ruwweg worden geschat op basis van foetale ontwikkelingsparameters die voor andere soorten zijn beschreven. Een specifiek doel van het hier beschreven werk is om meer formele richtlijnen vast te stellen voor foetale veroudering bij deze soort. Met voldoende normatieve gegevens zullen toekomstige toepassingen van ultrasonografie in deze kolonie het identificeren van afwijkingen in de foetale ontwikkeling in aanwezigheid van verschillende experimentele variabelen omvatten en het beoordelen van de levensvatbaarheid van de foetus. Bovendien kunnen gevoeligheid en specificiteit van transabdominale echografie worden bepaald en vergeleken met andere veelgebruikte mechanismen voor het detecteren van zwangerschap bij hertachtigen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets bekend te maken.
Acknowledgments
De auteurs willen Jeanette Hayes-Klug en Kelly Anderson bedanken voor het beheer van de muntjac kolonie, Dr. Alan Young voor het introduceren van ons aan de muntjac en de heer Cleve Tedford van Cervid Solutions Inc. voor het leveren van het zaad muntjac voor dit project. Dit werk werd ondersteund door NIH-subsidie R01AI093634.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg) | Fort Dodge Animal Health, Fort Dodge, Iowa | NADA 135-780 | |
| Azaperone tartrate (0.035 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Medetomidine HCl (0.04 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Ultrasound contact gel | Medline, Mundelein, Illinois | MDS092005 | |
| Atipamezole hydrochloride (Antisedan) (0.25 mg/kg) | Orion Corporation, Espoo, Finland | NADA 141-033 | |
| V-trough (optional) | N/A | N/A | Animal may be supported in dorsal recumbency on a standard examination table or other surface without the use of a V-trough |
| Electrical clippers or razor blades for hair removal | Oster, McMinnville, Tennessee | 78005-140 | |
| Ultrasound system: Ibex Pro portable ultrasound | E.I. Medical Imaging, Loveland, CO | Ibex Pro | |
| 5-10 MHz transducer: CL3.8 5-2.5 MHz 60 mm curved linear array | E.I. Medical Imaging, Loveland, CO | 290420 | |
| 3 ml syringes | Covidien | 1.18E+09 | |
| 22 G needles | Covidien | 8.88E+09 |
References
- White, I. R., Russel, A. J., Wright, I. A., Whyte, T. K. Real-time ultrasonic scanning in the diagnosis of pregnancy and the estimation of gestational age in cattle. Vet Rec. 117 (1), 5-8 (1985).
- Sergeev, L., et al. Real-time ultrasound imaging for predicting ovine fetal age. Theriogenology. 34 (3), 593-601 (1990).
- Aiumlamai, S., Fredriksson, G., Nilsfors, L. Real-time ultrasonography for determining the gestational age of ewes. Vet. Rec. 131 (24), 560-562 (1992).
- Lee, Y., et al. Ultrasonic measurement of fetal parameters for estimation of gestational age in Korean black goats. J. Vet. Med. Sci. 67 (5), 497-502 (2005).
- Renaudin, C. D., Gillis, C. L., Tarantal, A. F., Coleman, D. A. Evaluation of equine fetal growth from day 100 of gestation to parturition by ultrasonography. J. Reprod. Fertil. Suppl. (56), 651-660 (2000).
- Lopate, C. Estimation of gestational age and assessment of canine fetal maturation using radiology and ultrasonography: a review. Theriogenology. 70 (3), 397-402 (2008).
- Gatel, L., Rosset, E., Chalvet-Monfray, K., Buff, S., Rault, D. N. Relationships between fetal biometry, maternal factors and birth weight of purebred domestic cat kittens. Theriogenology. 76 (9), 1716-1722 (2011).
- Mulley, R. C., English, A. W., Rawlinson, R. J., Chapple, R. S. Pregnancy diagnosis of fallow deer by ultrasonography. Aust. Vet. J. 64 (8), 257-258 (1987).
- Willard, S. T., Sasser, R. G., Jaques, J. T., White, D. R., Neuendorff, D. A., Randel, R. D. Early pregnancy detection and the hormonal characterization of embryonic-fetal mortality in fallow deer (Dama dama). Theriogenology. 49 (4), 861-869 (1998).
- Willard, S. T., Petty, S. J., Sasser, R. G., White, D. L., Randel, R. D. Pregnancy detection and the effects of age, body weight, and previous reproductive performance on pregnancy status and weaning rates of farmed fallow deer (Dama dama). J. Anim. Sci. 77 (1), 32-38 (1999).
- Lenz, M. F., English, A. W., Dradjat, A. Real-time ultrasonography for pregnancy diagnosis and foetal ageing in fallow deer. Aust. Vet. J. 70 (10), 373-375 (1993).
- White, I. R., McKelvey, W. A., Busby, S., Sneddon, A., Hamilton, W. J. Diagnosis of pregnancy and prediction of fetal age in red deer by real-time ultrasonic scanning. Vet. Rec. 124 (15), 395-397 (1989).
- Bingham, C. M., Wilson, P. R., Davies, A. S. Real-time ultrasonography for pregnancy diagnosis and estimation of fetal age in farmed red deer. Vet. Rec. 126 (5), 102-106 (1990).
- Wilson, P. R., Bingham, C. M. Accuracy of pregnancy diagnosis and prediction of calving date in red deer using real-time ultrasound scanning. Vet. Rec. 126 (6), 133-135 (1990).
- Revol, B., Wilson, P. R. Ultrasonography of the reproductive tract and early pregnancy in red deer. Vet. Rec. 128 (10), 229-233 (1991).
- Revol, B., Wilson, P. R. Foetal ageing in farmed red deer using real-time ultrasonography. Anim. Reprod. Sci. 25 (3), 241-253 (1991).
- Yanagawa, Y., et al. Fetal age estimation of Hokkaido sika deer (Cervus nippon yesoensis) using ultrasonography during early pregnancy. J. Reprod. Dev. 55 (2), 143-148 (2009).
- Savela, H., Vahtiala, S., Lindeberg, H., Dahl, R. E., Beckers, J. F., Saarela, S. Comparison of accuracy of ultrasonography, progesterone, and pregnancy-associated glycoprotein tests for pregnancy diagnosis in semidomesticated reindeer. Theriogenology. 72 (9), 1229-1236 (2009).
- Vahtiala, S., Sakkinen, H., Dahl, E., Beckers, J. F., Ropstad, E. Ultrasonography in early pregnancy diagnosis and measurements of fetal size in reindeer (Rangifer tarandus tarandus). Theriogenology. 61 (4), 785-795 (2004).
- Chapman, N. G., Harris, S. Evidence that the seasonal antler cycle of adult Reeves' muntjac (Muntiacus reevesi) is not associated with reproductive quiescence. J. Reprod. Fertil. 92 (2), 361-369 (1991).
- Chapman, D. I., Chapman, N. G., Dansie, O. The periods of conception and parturition in feral Reeves' muntjac (Muntiacus reevesi) in southern England, based upon age of juvenile animals. J. Zool. 204 (4), 575-578 (1984).
- Chapman, N. G., Furlong, M., Harris, S. Reproductive strategies and the influence of date of birth on growth and sexual development of an aseasonally-breeding ungulate: Reeves' muntjac (Muntiacus reevesi). J. Zool. 241 (3), 551-570 (1996).
- Liming, S., Yingying, Y., Xingsheng, D. Comparative cytogenetic studies on the red muntjac, Chinese muntjac, and their F1 hybrids. Cytogenet. Cell Genet. 26 (1), 22-27 (1980).
- Nyland, T. G., Mattoon, J. S. Chapter 2. Small Animal Diagnostic Ultrasound. , 2nd edition, Saunders. Philadelphia. 19-29 (2002).
- Huang, F., Cockrell, D. C., Stephenson, T. R., Noyes, J. H., Sasser, R. G. A serum pregnancy test with a specific radioimmunoassay for moose and elk pregnancy-specific protein B. J. Wildl. Manag. 64, 492-499 (2000).
