Introduction
Microscopia de força atómica (AFM) é uma técnica que permite a imagiologia quantitativa e qualitativa e sondagem de uma superfície do material. 4-6 Tradicionalmente, a AFM é utilizado para a avaliação da topografia da superfície, morfologia e estrutura dos materiais multi-fásicos. AFM tem a capacidade de avaliar quantitativamente as interações nano-escala, tais como carga, atração, repulsão e de adesão forças entre uma sonda e substrato específico no ar e meios líquidos 7,8 A AFM originalmente desenvolvido pela Binning, Quate e Gerber 9 usos. uma sonda de conhecida determinada sensibilidade / e constante da mola para se aproximar e / ou digitalização de uma amostra. Devido às interacções físicas entre a sonda e a amostra, o braço de suporte é desviado durante o contacto ou a proximidade e, dependendo do modo de operação, este desvio pode ser traduzido para adquirir a topografia das forças de amostra ou medir presentes entre a sonda e amostra. Modificações para o téc AFMOpaco, como Nanoscopia sonda coloidal, 10 têm permitido cientista para avaliar diretamente as interações nano-força entre dois materiais presentes em um sistema coloidal de interesse.
Em Nanoscopia sonda coloidal, uma partícula esférica de escolha é anexado ao ápice de um cantilever, substituindo os tradicionais cônicos e piramidais dicas. Uma partícula esférica é ideal para permitir a comparação com modelos teóricos, tais como a Johnson, Kendal, Roberts (JK) 11 e Derjaguin, Landau, Vervwey, Overbeek (DLVO) 12-14 teorias e para minimizar a influência da rugosidade da superfície na medição. 15 Estas teorias são utilizadas para definir o mecanismo de contacto e das forças inter-partículas esperados dentro de um sistema coloidal. A teoria DLVO combina as forças de van der Waal atraente e forças eletrostáticas repulsivas (devido a camadas duplas elétricas) para explicar quantitativamente o comportamento de agregação de sistemas coloidais aquosas, enquanto a JTeoria KR incorpora o efeito da pressão de contacto e a adesão ao modelo de contacto elástica entre dois componentes. Uma vez que uma sonda apropriada é produzida, que é usado para se aproximar de qualquer outro material / partículas para avaliar as forças entre os dois componentes. Usando uma ponta de um padrão fabricado será capaz de medir forças interativas entre a ponta e um material de escolha, mas a vantagem de usar uma sonda coloidal custom made permite a medição de forças presentes entre os materiais presentes no sistema estudado. Interacções mensuráveis incluem:.. Adesiva, atractivo, repulsivo, carga, e as forças electrostáticas presentes mesmo entre as partículas 16 Além disso, a técnica de sonda coloidal pode ser utilizada para explorar as forças tangenciais presentes entre as partículas e material de elasticidade 17,18
A capacidade de realizar medições em vários meios é uma das principais vantagens da Nanoscopia sonda coloidal. Condições ambientais, líquido mEDIA, ou condições controladas de umidade podem ser usados para simular as condições ambientais do sistema estudado. A capacidade de realizar medições em um meio líquido permite o estudo dos sistemas coloidais em um ambiente que ocorre naturalmente; assim, ser capaz de adquirir quantitativamente dados que é directamente transponível para o sistema no seu estado natural. Por exemplo, as interacções de partículas presentes dentro de inaladores de dose calibrada (MDI) podem ser estudados utilizando um modelo de propulsor líquido com propriedades semelhantes às do propulsor usado no IDC. As mesmas interacções medidos no ar não seria representativo do sistema existente no inalador. Além disso, o meio líquido pode ser modificado para se avaliar o efeito da entrada de humidade, um agente tensioactivo secundário, ou de temperatura sobre as interacções de partículas em um MDI. A capacidade de controlar a temperatura pode ser utilizado para imitar certos passos na fabricação de sistemas coloidais para avaliar o modo como a temperatura, quer na fabricação de ouarmazenamento dos sistemas coloidais podem ter um impacto sobre as interações de partículas.
Medidas que podem ser obtidos utilizando as sondas coloidais incluem; Digitalização Topografia, curvas individuais força-distância, mapas de adesão força-distância, e habita medições força-distância. Principais parâmetros que são medidos utilizando o método Nanoscopia sonda coloidal apresentada neste artigo incluem os valores de energia de separação snap-in, carga máxima, e. Snap-in é uma medida das forças atrativas, máx carregar o valor da força máxima aderência, ea energia separação transmite a energia necessária para retirar a partícula de contato. Estes valores podem ser medidos através de medições instantâneas ou de força habitar. Dois tipos diferentes de medidas de parada incluem deflexão e recuo. O comprimento e tipo de medição de permanência pode ser especificamente escolhido para imitar as interacções específicas que estão presentes no interior de um sistema de interesse. Um exemplo é o uso de deflexão de permanência - que detémas amostras em contato em um valor deflexão desejada - para avaliar as ligações adesivas que se desenvolvem em agregados formados em dispersões. As ligações adesivas formadas podem ser medidos como uma função do tempo, e pode fornecer informações sobre as forças necessárias para redispersar os agregados após armazenamento prolongado. A multiplicidade de dados que podem ser obtidos com este método é uma prova da versatilidade do método.
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Protocol
1. Preparando o coloidal Probe e AFM Substrato
- Para preparar sondas coloidais, utilizar um método desenvolvido anteriormente pelos autores. 19
- Em resumo, utiliza um suporte de ângulo de 45 ° para fixar uma consola sem pontas, com o ângulo específico de 45 ° (Figura 1A).
- Prepara-se uma corrediça de epóxi manchando uma fina camada de epóxi sobre uma lâmina de microscópio. Usar uma espátula limpo ou uma corrente lenta de azoto para assegurar que a camada de epóxi adicionado à lâmina do microscópio é de altura mínima.
- Apor o slide epóxi para uma lente de microscópio óptico de 40X zoom usando um suporte de design personalizado (Figura 1B). Em seguida, use o cantilever se aproximar do slide epóxi e adquirir uma pequena quantidade de epóxi sobre o cantilever.
- Repita essas etapas para anexar também uma única partícula de interesse no ápice do cantilever (Figura 1C).
- Prepare o substrato AFM pela aposição par coloidaltigos para uma lamela de AFM utilizando um adesivo de montagem termoplástico.
- Aquecer de 35 mm em volta da tampa deslizante para 120 ° C, e aplicar uma pequena quantidade de adesivo para a lamela. A temperatura elevada é necessária para fundir o adesivo termoplástico para aplicação.
- Depois arrefecer, a lamela de 40 ° C, antes de limpar o pó das partículas coloidais para a cola. NOTA: A 40 ° C, a cola é suficientemente definido que as partículas não se tornará incorporado na cola, mas a cola é pegajoso suficiente para garantir que as partículas vão aderir ao substrato.
- Além disso esfriar a lamela para RT e usar um fluxo suave de nitrogênio para explodir a qualquer excesso de partículas desagregadas.
- Lavar várias vezes de substrato com o meio líquido que vai ser usado para medições da sonda coloidal para assegurar que todas as partículas não ligadas são removidas do substrato. NOTA: É importante reduzir os efeitos de partículas de fluxo livre durante a medição, que pode, interagir com o braço de suporte e introduzir erros nos resultados.
2. Montar o coloidal Probe, alinhamento a laser, eo equilíbrio do sistema
- Colocar a tampa com as partículas coloidais para a metade inferior de uma célula de líquido, certificando-se de que o O-ring está encaixado corretamente para evitar qualquer vazamento.
- Coloque uma folha transparente hidrofóbico para o palco microscópio para se proteger contra qualquer líquido que possa vazar durante a experiência, especialmente se usando apenas a metade inferior de uma célula de líquido para a medição, e coloque a célula de líquido para o palco microscópio. NOTA: Para simplicidade pode-se usar apenas a metade inferior de uma célula de líquido, uma vez que o sistema pode ser equilibrada de forma adequada; dica - a evaporação muda a condição da medida e os impactos de resultados / leitura.
- Fixe a sonda coloidal para a cabeça de varredura AFM e montar para a AFM. Com o software de instrumento em AFM, use os botões nocabeça de leitura para trazer a ponta do cantilever em foco. NOTA: Todas as etapas processuais e as medições foram realizadas utilizando um MFP-3D-Bio AFM com software Asylum Research.
- Para maximizar a intensidade, alinhar o laser na ponta do cantilever usando os botões de ajuste apropriadas na cabeça de digitalização.
- Permitir que o sistema atinja o equilíbrio durante 5-10 minutos ou até que o valor da deflexão estabiliza. Use o botão de ajuste de deflexão para trazer o desvio de zero ou ligeiramente negativa.
- Depois que o sistema foi equilibrada no ar, use o software AFM (Painel térmica na janela do Painel Master) para calcular as InvOLS termicamente (sensibilidade) e constante da sonda coloidal primavera. NOTA: Esta sensibilidade será utilizado temporariamente até que a verdadeira sensibilidade é medida após a conclusão da medição (veja o passo 4).
- Selecione "Cal Primavera Constant" ou "Cal InvOLS" e depois clique em "capturar dados térmica".
- Uma vezum pico proeminente é aparente, parar a captura de dados, e clique para aumentar ao longo do pico principal.
- Clique em "Inicializar Fit" seguido de "ajustar os dados de térmicas," para obter a constante da mola calculada automaticamente ou valores InvOLS.
- Lentamente, adicionar 2 ml de meio líquido para a célula de líquido através de uma seringa e assegurar que não há bolhas de ar em torno do braço de suporte. Re-alinhar o laser, uma vez que o índice de refracção do meio mudou agora, e uma vez novamente equilibrar o sistema, permitindo que o valor de desvio para a estabilizar antes de se ajustar o desvio de volta a zero. NOTA: Se uma grande diferença de temperatura existente entre o ambiente eo líquido, o equilíbrio vai demorar mais tempo.
3. Imaging and Data Acquisition
- Defina o tamanho da digitalização inicial a 20 mM, velocidade de varredura de 1 Hz, ângulo de leitura para 90 º, definir o ponto para 0,2 V e obter uma varredura da amostra. Ajuste o ganho conforme necessário para obter traço sobrepostoe refazer curvas.
- Uma vez que uma partícula de interesse for encontrado, zoom imediatamente para que partículas de limitar as interações sonda prolongados com o substrato antes de obter medições de volume vigor.
- Uma vez ampliada, adquirir uma imagem suficiente de uma única partícula ou porção de uma única partícula. Então mude para o Painel de Força no software. Traga a barra de posição vermelho para a posição mais alta, defina a distância vigor a 5 mm, velocidade de varredura de 0,1 Hz, canal de gatilho para nenhum e realizar uma medição de força única. Certifique-se que a sonda não entre em contato com o substrato.
- A partir do gráfico única medida obtida, calcular a linha de deflexão virtuais com o botão direito na janela de gráfico, e selecionar a opção "Calcular Virtual Def Line". Isto irá calcular automaticamente a deflexão virtual e atualizar o valor conforme necessário dentro do software.
- Mude o canal de gatilho para deflexão e definir o ponto de disparo de 20 nm. Defina a dist vigorance de 1 mícron e ajustar a velocidade de varredura se for o caso, dependendo das forças medidas de interesse.
- Ajustar manualmente o valor para a deflexão Inverse Optical Lever Sensibilidade (InvOLS) no Painel de Revisão da Força após a realização de 2-3 medidas de força único preliminares consecutivos.
- Realizar uma medição de força única, em seguida, clique no botão "comentário" no painel de força que abre um Painel Mestre Force.
- Destaque a medição de força mais recentemente concluída. De acordo com o "Eixo" título garantir que apenas "DeflV" está marcada. Altere o "eixo X" campo de entrada para "Setembro", usando o menu suspenso e clique em "fazer gráfico."
- Clique na aba "Parm" no Painel de Mestre Força e ajustar o valor de "InvOLS" até a região de contato do gráfico é completamente vertical. Em seguida, preencher esse valor no campo "DEFL InvOLS" localizado sob o Cal60; sub-guia na guia Força localizada na janela do Painel de mestre principal.
- Repetir este 2-3 vezes para garantir que o valor InvOLS não se altera significativamente.
- Agora que todos os parâmetros foram estabelecidos, garantir que o nível médio líquido ainda é suficiente e que a deflexão ainda é estável. NOTA: Neste momento, curvas de força única ou mapas de força pode ser obtida. Se medidas de força de permanência são desejados, as opções de permanência pode ser acessado no painel de força.
4. Pós-ajuste de sensibilidade para Análise
- Após a conclusão da aquisição de medição, medir a verdadeira sensibilidade da sonda coloidal. Para fazer isso, realizar uma medição de força através de um relativamente grande deflexão / força com a sonda coloidal no mesmo meio líquido contra um "infinitamente" superfície dura, tal como a mica. NOTA: A sensibilidade foi obtido após a conclusão dos experimentos, pois a grande deflexão / force pode danificar collosondas Idal preparados com colóides porosos ou frágeis.
- O declive da região de contacto é usado pelo software para calcular automaticamente a sensibilidade (Figura 2). Utilize este verdadeiro valor da sensibilidade durante a análise de todas as curvas obtidas com essa sonda coloidal específico de dados.
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Representative Results
Sistemas coloidais líquidos são usados para vários sistemas de entrega de drogas farmacêuticas. Para a entrega de drogas de inalação, um sistema coloidal comum é a suspensão de inalador de dose medida pressurizada (pMDI). Interacções de partículas presentes no pMDI desempenham um papel vital na formulação de estabilidade física, o armazenamento, e uniformidade de administração de fármaco. Neste artigo, as forças inter-partículas entre as partículas porosas à base de lípidos (~ 2 mm de diâmetro médio de partícula óptico) em um modelo de propulsor (2H, 3H-perfluoropentano) foram avaliadas à RT para transmitir a funcionalidade e possíveis erros associados com o apresentado procedimento.
A Figura 3 mostra duas sondas representativas coloidais preparadas usando as partículas inaláveis à base de lípidos que podem ser usados para Nanoscopia sonda coloidal. É importante que uma única partícula coloidal é afixada ao ápice do cantilever tal que é a característica mais proeminente e será o primeiro pontode contato durante a medição. Isso garante que as interações são medidos apenas devido à partícula coloidal. Colocar várias partículas ou aglomerados de partículas podem produzir resultados errados (Figura 4), devido a vários desvios cantilever causadas por ambas as partículas de detecção simultaneamente a mesma partícula presente único sobre o substrato. Usando sondas coloidais adequadamente preparadas, imagens topográficas de um substrato de partículas, tais como os mostrados na Figura 5 pode ser conseguida em um meio líquido.
Scans Topografia utilizando uma sonda coloidal será menos definida do que os obtidos usando uma ponta cônica afiada; no entanto, no CPN, o objetivo principal de uma varredura topográfica é localizar uma partícula sobre o substrato que pode ser utilizado para avaliar as interações entre partículas. Figura 6 transmite várias curvas de força se pode encontrar ao realizar medições da sonda coloidal em meio líquido . Medições de líquidosconter mais fontes de erro durante a medição e um deve estar ciente de todas as fontes para minimizar adequadamente seus efeitos sobre a precisão da medição (Figura 6A).
Os picos rápidos e afiados evidente na curva de força na Figura 6B são indicativas de um distúrbio súbito para o sistema durante a medição. Isto pode ser atribuído para a AFM ou um instrumento movimento súbito ruído de fundo (p. ex porta bater, espirros) que resulta num curto período de desestabilização instantânea e rápida. Na Figura 6C a flutuação da linha de base na aproximação e afastamento do cantilever sugerem um problema com o meio líquido. Isto pode ocorrer se a célula de líquido não é suficientemente cheio permitindo a evaporação do meio de ter um grande impacto sobre a estabilidade do sistema e de medição. Uma fonte alternativa de esta instabilidade pode ser de equilíbrio impróprio do cantilever no liqumeio id antes da análise. O cantilever é sensível às mudanças de temperatura e as ações como "topping off 'da célula líquido exigem tempo re-equilíbrio adequado. Figura 6D representa uma mudança de linha de base durante a abordagem e retrair ciclo. Esta mudança limpo é inexistente durante medidas de força instantânea, mas é mais evidente em medidas de força habitar. Este desvio é um efeito de cantilever desvio térmico, que pode ocorrer por várias razões incluindo: a evaporação lenta do meio líquido que conduz a uma mudança na temperatura do meio, que utilizam um meio que ainda se equilibrar à temperatura ambiente, ou que efectuam o medição de um ambiente que não está idealmente controladas. Mudanças mínimas na constante a temperatura do meio líquido durante a medição de produzir tais desvios. Este tipo de medição deriva é difícil de controlar para líquidos de alta evaporação, a menos que uma célula de líquido fechado é utilizado durante a medição; however, a maioria software de análise de AFM pode corrigir tais desvios.
Depois de todas as fontes de erro controláveis foram atenuados e o sistema está adequadamente equilibradas, mapeamento de adesão pode ser utilizado para se obter uma grande massa de análise estatística de dados através de um determinado tamanho da amostra. Mapeamento de força pode ser usada de forma independente ou em conjunto com a digitalização topográfico para avaliar o efeito da topografia em forças adesivas das partículas (Figura 7). Mapeamento de força irá fornecer dois principais gráficos de interesse: um mapa topográfico da amostra com base na altura em que os contactos em cantilever do substrato (Figura 7A) e um mapa da adesão transmitir a força de tracção máxima de cada curva de força individual (Figura 7B). O gráfico na Figura 7B pode também ser usado para obter um desvio médio e padrão numérico de aderência e encaixe em forças, bem como as energias de separação ao longo de toda a amostra. Estas uvas dados brutoshs podem ser vistos como representações tridimensionais da topografia ou propagação de medidas de adesão através da amostra (Figura 7C / D) e sobrepondo-os produzirá uma ilustração tridimensional da distribuição das forças de adesão em função da topografia ( Figura 7E). Este tipo de dados fornece a compreensão fundamental das forças presentes entre colóides e como a superfície dos colóides outras interacções efeito.
Medições de força Adicionalmente habitam pode ser usado para avaliar o efeito do mecanismo de contacto e da duração do contacto com as forças adesivas. Partículas lipídicas sólidas foram utilizados para expressar o efeito da permanência sobre as forças adesivas medidos (Figura 8). Figura 8 indica que as forças adesivas aumento como uma função do tempo utilizando indentação de permanência, enquanto planalto utilizando deflexão de permanência. Esta tendência se torna mais evidente em tempos de permanência mais longos (180 seg).
.. Figura 1 Representação do método utilizado para produzir sondas coloidais para Nanoscopia sonda coloidal (A) AFM cantilever, ligado a um design personalizado 45 ° titular cantilever; (B) Epoxy / Particle slide é afixada a um suporte secundário que é deslizou para a lente do microscópio, (C) O cantilever é lentamente elevada para a aquisição de epóxi e uma partícula.
Figura 2. A sensibilidade do cantilever é o declive da região de contacto de uma deflexão em função da curva z-distância.
Figura 4. A utilização de uma sonda coloidal que tem múltiplas partículas fixadas podem resultar na duplicação errónea de uma única partícula presente no substrato durante o varrimento topográfica do substrato.
Figura 5. Varreduras Topografia obtidos utilizando uma sonda adequadamente preparado. Coloidal (A) Um grandedigitalizar revelando várias partículas de interesse, (B) uma analise mais focado revelando uma grande partícula de interesse, (C) um scan centrada na superfície de uma única partícula.
(A) Exemplo de uma curva de força bom Figura 6 curvas de força obtidos com várias limitações que se deve estar ciente de,.. (B) curva de força, mostrando um distúrbio ou pelo movimento da AFM ou pelo ruído durante a medição; (C ) flutuação devido a cantilever equilibrada-un pode levar a abordagem instável / retração; (D) deriva presente térmica durante uma medição, existe por causa de evaporação lenta levando a refrigeração do controle ambiental instável médio ou.
.. Mapeamento Figura 7 uma força de adesão que podem ser obtidas usando Nanoscopia sonda coloidal (A) de distribuição topográfica da superfície da amostra,. (B) distribuição da força de aderência máxima em toda a amostra (C / D) representações 3-dimensionais dos gráficos mostrados em A e B, respectivamente, (E) sobreposição das forças de adesão e topografia produzindo uma única ilustração tridimensional das forças de adesão, como um função da topografia.
Figura 8. Forças de adesão medidos como uma função do tempo de permanência usando dois diferentes medições de permanência (n = 30), (◊) indentação (□) deflexão; * Indica uma diferença significativa entre os valores no ponto de tempo específico usando um teste t de duas caudas, com 95% de confiança (P <0,05).
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Discussion
Várias fontes de instabilidade do sistema presente durante líquido Nanoscopia sonda coloidal podem ser facilmente mitigados por meio de procedimentos de equilíbrio adequados. Instabilidades como discutido anteriormente resultar em resultados errôneos e curvas de força que são mais difíceis de analisar objetivamente. Se todas as fontes de instabilidade foram cuidadas e gráficos semelhantes ao que é mostrado na figura 4 estão ainda presentes, outro parâmetro de medição pode ser o motivo. Outros parâmetros de medição que são importantes a considerar durante Nanoscopia sonda coloidal incluem a velocidade com que o cantilever está envolvida e retraída a partir da amostra e do ponto de disparo de medição de força. Além disso, deve notar-se que a localização do centro da sonda coloidal pode ser diferente a partir de uma ponta de AFM tradicional. Por isso, é aconselhável posicionar o ponto de laser diretamente acima do centro da partícula sondagem para maximizar a precisão da medição.
Eut é importante escolher uma velocidade que é suficiente para a força se está interessado na medição e que é adequado para usar no meio líquido. Se interessado apenas nas forças de adesão presentes entre as partículas, a velocidade de aproximação não é crítica. No entanto, para medições de forças atrativas e repulsivas entre as partículas, a escolha de uma abordagem e retrair velocidade que é lento o suficiente é importante. Uma velocidade de aproximação deve ser escolhida para permitir que as interacções e não a velocidade de dominar a deflexão do braço de suporte. Uma abordagem rápida vai ofuscar e não dar tempo para as interações atrativas para formar, enquanto uma abordagem muito lento em meio líquido irá produzir linhas de base instáveis semelhantes a Figura 6C. A instabilidade causada por uma abordagem lenta é porque a força de empuxo sobre o braço de suporte líquido é similar à da força utilizada na abordagem cantilever.
Outro parâmetro de medição que deve ser considerado antes de dadosaquisição é a força de disparo final. Uma força de gatilho demasiado grande pode resultar em grandes deformações durante a medição e pode mesmo esmagar a sonda ou amostra, em função das propriedades do material. Alternativamente, muito pequena de uma força irá produzir resultados imprecisos, como a camada de líquido entre a sonda e a amostra não pode ser suficientemente empurrado para fora de entre as partículas, assim, a interacção não é medido de partícula-partícula. Optimização método é importante para a tela de forma adequada e testar diversos parâmetros de medição para assegurar que os dados obtidos é representável e precisas.
Força mapeia mostrado na Figura 7 pode fornecer grandes conjuntos de dados obtidos facilmente. A resolução do mapa topográfico e representações tridimensionais posteriormente sobrepostas estão diretamente relacionados com o número de medições realizadas. No entanto, apesar de um maior número de pontos de dados irá produzir imagens de alta resolução, tempos de varredura pode ser muito maior.Manter sistemas de medição de líquidos estáveis ao longo de mapeamento força pode ser um desafio, dependendo dos controles de médio e ambientais líquidos. Evaporação líquida, que é uma das maiores preocupações, pode ser limitada por regularmente 'topping off "do sistema com o líquido adicional. No entanto, é imperativo que o exame é uma pausa e tempo suficiente é dado para re-equilíbrio do sistema antes de retomar a medição. Um tempo de verificação apropriado deve ser escolhido para assegurar que o sistema pode ser mantido estável para garantir a exactidão das medições.
A capacidade de realizar curvas de força instantânea, habitar curvas de força e, em grandes conjuntos de dados de mapas de força transmite a versatilidade de Nanoscopia sonda coloidal na avaliação de interações presentes em sistemas coloidais em ambientes que imitam naturais. Dados experimentais obtidos utilizando o método descrito aqui pode fornecer informações importantes sobre a estabilidade coloidal, interações eletrostáticas, umacinética de coagulação nd. Esta informação pode ser utilizada para pesquisar e ou melhorar os actuais sistemas coloidais todo várias indústrias. Além disso, este método pode ser utilizado com linhas de células biológicas para avaliar o efeito de certos fármacos ou materiais (preparados em uma sonda coloidal) sobre as interacções e funções celulares. Isso pode proporcionar uma grande visão em pequena molécula, descoberta de drogas e design formulação. Além disso, com os recentes avanços na capacidade de produzir submicron e sondas mesmo nano-coloidal, pode-se usar o método apresentado aqui para estudar sistemas de mesmo nano-coloidal.
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Acknowledgments
Os autores reconhecem (1) apoios financeiros do Departamento de Ciência e NanoBioMedicina BK21 PLUS NBM Global Research Center de Medicina Regenerativa na Universidade Dankook, e da prioridade do programa Centros de Pesquisa (n º 2009-0093829) financiado pela NRF, República da Coreia, ( 2) as instalações, bem como a assistência técnica e científica, do Centro Australiano de Microscopia e Microanálise da Universidade de Sydney. HKC é grato ao Conselho de Pesquisa Australiano para os apoios financeiros através de uma bolsa de Descoberta de Projetos (DP0985367 & DP120102778). HAB é grato ao Conselho de Pesquisa Australiano para os apoios financeiros através de uma bolsa de ligação do projeto (LP120200489, LP110200316).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Double-Bubble Epoxy | Hardman | 4004 | |
| Veeco Tipless Probes | Veeco | NP-O10 | |
| Porous Particles | Pearl Therapeutics | ||
| Atomic Force Microscope (MFP) | Asylum | MFP-3D | |
| SPIP Scanning Probe Image Processor Software | NanoScience Instruments | ||
| 35 mm Coverslips | Asylum | 504.003 | |
| Tempfix | Ted Pella. Inc. | 16030 |
References
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