Introduction
技術はすぐにそのままマウスでローズベンガル光血栓の誘導後のインビボ細胞応答の許可の可視化について説明しました。ローズベンガル（4,5,6,7-テトラクロロ-2 '、4'、5 '、7'-テトラヨード）は、動物モデルにおける虚血性脳卒中（マウス及びラット）を誘導するために使用される感光性染料です。 564 nmのレーザー光を薄く頭蓋骨を介して尾静脈を介して後続の照明RBのボーラス注射に続いて、血栓が生理的発作を引き起こし1に誘導されます。この方法は、もともと1977年にローゼンブラム、エル·Sabbanによって記述し、それ以降の1980年代半ば1,2にワトソンによって適応されました。要するに、ローズベンガルは、その後、組織因子、凝固カスケードの開始剤を活性化し、活性酸素種の生産を生成緑色励起光（この場合は561 nmレーザー）を照射します。凝固カスケードの誘導は虚血性レを生成します臨床ストローク3に病理学的に関連するイオン。
脳卒中は、ニューロン、グリア、内皮および免疫系を含む多くの異なる細胞タイプの相互作用に起因する複雑な病態生理を持っています。特定の細胞プロセスを研究するための最良の方法を選択すると、複数の配慮が必要です。実験技術は、3つのカテゴリのいずれかに広く分類さ： インビトロ 、 インビボ及びそれぞれが長所と短所とインシリコin vitro試験は、それらの天然の環境から細胞を除去する主な欠点を持っているので、そのままで見られる効果を再現できない場合があり、動物を生きた。in vivoでの技術増加翻訳意義と病態の強化実験的複製を提供する。 インシリコ一般的疾患または細胞プロセスのコンピュータモデリングを参照して、ますます試験の潜在的な薬物相互作用を研究するために利用しながら、PLE、収集されたすべての情報は、まだ生きている細胞や組織で試験されなければなりません。
実験室の設定における脳卒中の理想的なモデルは、ヒト集団において見られるものと同様の病理学的特徴を実証する必要があります。ヒト集団において脳卒中の一般的な生理学的特性がありますが、経験した損傷の種類に応じて多くの違いもあります。ヒト集団においてストロークを変化させ、梗塞ボリュームだけでなく、それぞれの病状に関連するメカニズムの違いをもたらすような小さなまたは大血管閉塞、出血性病変、および動脈または心臓塞栓動脈に発生します。動物の脳卒中モデルを利用する利点は、人間のストロークの特性を模倣再現性梗塞の発生です。中大脳動脈閉塞（塞栓または血管内フィラメント法）をモデル遠位MCAOおよび光血栓モデル：もっとも一般的な動物ストロークモデルが使用して動脈閉塞が含まれます。利点各モデルのd欠点は（ 図4、図5を参照してください）他の場所で検討されています。グローバル虚血モデル（MCAO）、実行するのが比較的容易に焦点脳卒中モデルであるよりも、人間のストロークにはあまり関連していました。さらに、これらの方法は、再現性の脳梗塞病変を誘導するのに非常に可変です。実験者は、MCAOモデル上で明確な利点を提供し、よく彼らの実験を制御するように光血栓モデルがあれば高い再現性です。しかし、微小血管傷害のモデルは、最小限虚血性ペナンブラ、細胞を救出6,7であると考えられる領域を表示することが記載されています。また、血管原性浮腫及び細胞毒性浮腫形成はまた、撮像領域の照射後の誘導され得ます。これらの制限にもかかわらず、技術は、脳卒中8、9、10、11以下の多くの生理学的プロセスに新たな洞察を提供しました。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
注：すべての動物の手順は、テキサス大学健康科学センターのサンアントニオの施設内動物管理使用委員会によって承認され、ARRIVEガイドラインと一致しました。
1.皮質の準備のために麻酔
- 麻酔を誘導するために、酸素と混合して2〜3％のイソフルランで誘導チャンバ内にマウスを置きます。マウスが誘導されると呼吸速度の低下を観察します。マウスはノーズコーンに移動する準備ができているかどうかを決定するために、マウスの足をつまみます。注：麻酔レベルは、任意のin vivoでの調製における重要なステップであるとケアがグローバル虚血の原因となるレベルを誘発しないように注意してください。
- マウスが十分に麻酔されると、手術/イメージングプラットフォームに動物を転送し、ノーズコーンにマウスの鼻を配置し、麻酔状態を維持するために、1から1.2パーセントのイソフルランを適用します。マウスは、温度共に横たわっていることを確認してくださいntrolled加熱パッドは、残りの手順を通して、体温（37℃+/- 0.5℃）を維持します。麻酔下ながら乾燥を防ぐために、目の上の獣医軟膏を置きます。
- システムに付属の尾や足のクリップを使用して、パルス酸素濃度計システムを使用して、マウスの生理機能を監視します。呼吸数が50〜65呼吸/分の間で維持されることを確認してください。 300から450 BPMと酸素飽和度は、動物の長期生存を確保するために、97から98までパーセントの間で維持される間に心拍数が残っていることを確認してください。
- マウスが十分に麻酔されると、電気バリカンを用いて頭蓋の上に髪を剃るエタノール綿棒に続く残留髪とベタジンできれいにし、削除します。無菌手術用環境を確保するために3回にこの手順を繰り返します。
2.手術手順
- 頭皮が完全に洗浄され、坊主で、頭蓋fissuを明らかにするために、マウスの頭皮に、5mmの切開を作りますブレグマを検索する解像度と。
- 頭蓋の上にある残りの筋膜を除去するために滅菌綿棒を使用してください。
- ブレグマの定位座標を用いて、頭頂葉皮質の上にある骨に組織接着剤を使用したカスタムステンレス製リング（ 図1）接着剤：横-1〜-3ミリ、2-4ミリメートル。注：接着剤は、典型的には、骨の上にリングを配置した後、2分以内に設定します。
- マウスを安定させ、画像形成中の移動を防止するために、定位ホルダー（ 図2）環を貼付。
- 外科用グレードの解剖顕微鏡下で、ゆっくりとそれが開けられるように領域レベルを維持することを確認すること速度制御DREMELのようなツール（Meisinger 3.9ミリメートルドリルビット）を使用して、頭蓋中で1〜2ミリのセクションをドリル。ジグザグパターンを使用してこれを達成します。熱を避けるために構築、低へのドリル速度を設定し、頻繁に休憩を取ります。
- 頭蓋頭蓋骨は、外観に登るとなると、間伐を続けます頭蓋頭蓋骨の薄層の円滑な除去を容易にするために薄くなった面レベルを維持するために、同じジグザグパターンを利用して手術用メスの刃を使用して頭蓋。メスの刃の先端を使用すると、一度に骨の薄い層を除去するための光の圧力で小さなリニアストロークを行います。血管系は、解剖顕微鏡を通してはっきりと表示されるまでこれを続けます。
- 実験者の穿刺を介して、または間引き処理中に頭蓋骨を破壊した場合、基礎となる皮質への可能性損傷に動物を安楽死させます。
注：マウスの頭蓋骨は、約300ミクロンの厚さであり、2つの薄い緻密骨の層（1外部と一つの内部層）とコンパクトな骨の2つの層の間に挟まれた海綿骨の層で構成されています。外部コンパクト骨の層および海綿骨の大部分が残っているコンパクトな骨のおおよそ50μmの層が得られ、5mmの掘削領域内に削除されます（ 図2B参照します ）。 Visualiz血管系のationが最終そのまま薄く頭蓋骨が約50μmの厚さであることを保証します。この厚さまで薄くする際の頭蓋骨はまだそのために存在します。
3.顕微鏡セットアップ
- 客観的なインバータを有している倒立顕微鏡システム（従来、共焦点または二光子システム）を使用します。注：これは、標準的な正立顕微鏡を利用することも可能です。制限要因は、ステージと目標との間の空間になります。ステージへの変更は、このセットアップを実行する必要があるかもしれません。
- 脇顕微鏡のベースに位置してカスタムメイドのステージに外科的/撮影台を固定します。注：プラットフォームは、対物下外科手術/撮影台の垂直運動を可能にするために、実験室ジャッキを使用して行われます。実験用ジャッキは、4つの円筒状のポールに固定されたプレートに取り付けられています。 （ 図2を参照してください）。
- 20Xを含む客観的なインバータを置き頭蓋窓の上の目的。顕微鏡の接眼レンズを通して見ることにより、頭蓋窓を見つけ、撮影領域に目標を配置するために外部光源を使用してください。注：撮像領域は、脈管構造の存在によって示されます。
- 水ベースの目的のために、人工脳脊髄液（aCSFの）を使用します（; 30のKCl、130mMの塩化ナトリウムを12mMのKH 2 PO 4、200mMの炭酸水素ナトリウム、30mMのHEPES、100 mMグルコース）培地として、潜在的に撮影時の頭蓋腔への漏出（ 図3）。
4.ローズベンガル染料準備、管理および脳卒中の誘導
- 人工脳脊髄液（aCSFの）中のローズベンガルの新鮮な20 mg / mlの溶液を調製します。フィルタリングし、投与前に滅菌します。それが混合された後にローズベンガルを再利用したり、保管しないでください。各実験のために新鮮なソリューションを行います。
- ローズベンガルの一方で、0.1mlの尾静脈注射を与えます溶液の適切な注入を保証するために、561 nmのレーザーで頭蓋窓を缶詰。注：ローズベンガルは、脳の血管系内注射後5秒以内に可視化されます。容器全体は、ローズベンガルで満たされるべきです。
- ローズベンガル色素の十分な注射後特定の病変体積の再現性を保証するために、血管の直径（40〜80ミクロン）に基づいて、血栓症の適切な容器を選択します。血流の方向を見て、動脈と静脈を区別：動脈は小径血管に大きな直径から移動し、静脈はより大きな直径の血管に小さいから移動します。ローズベンガルが注入されると、これは、容易に可視化することによって達成されます。
- 次のように顕微鏡の設定を変更します。
- 滞留時間を増加させます。注：これは、利用される顕微鏡システムに依存して変化します。
- 100％にレーザーパワーを大きくしてください。
- 使用して1フレーム/秒で時系列画像を収集最大スキャン速度。
- 安定した凝血塊が血管内に形成されるまでマウスをスキャンします。注：この一般的に連続スキャンの5分以内に達成される（ 図4を参照してください）。
- ローズベンガルを用いた血栓形成の誘導後、バック解剖顕微鏡の撮像領域からマウスを取り外します。慎重に頭蓋頭蓋骨からステンレス製のリングを取り外します。出血のための頭蓋窓を調べます。出血が発生した場合は、実験を終了します。
- 頭蓋骨の上に切開部を閉じるために、6.0モノフィラメント縫合糸を使用してください。感染を防ぐために、縫合線に沿って抗生物質軟膏を置きます。 Buprenex（0.05ミリグラム/ kg）の疼痛管理のために3日間皮下12時間毎に注入します。
- 完全に覚醒し、自由に移動するまで麻酔から除去した後の回復室にマウスを返します。
- 後で、さらなる調査のためにきれいなケージにマウスを返します。
5。その後の日に縦イメージング
- その後の日後に光血栓の縦撮影を行うには、次の方法を採用しています。
- 方法の第1節で説明したように、マウスを麻酔。
- 十分な麻酔の際に、以前に掘削撮像視野を覆う皮膚を再度オープンするために、任意の残留縫合糸を除去することにより、頭皮を再オープンします。
- 頭蓋の上にある残りの筋膜を除去するために滅菌綿棒を使用してください。
- 前回の撮像視野を覆う骨に組織接着剤を使用したカスタムステンレス製リング（ 図1）を接着。
- マウスを安定させ、画像形成中の移動を防止するために、定位ホルダー（ 図2）環を貼付。
- 以前に薄く頭蓋骨の基礎となる血管系を探します。以前に誘導された血餅の存在を確認するためにFITCデキストランの尾静脈注射を使用してください。
- 内を閉じるために6.0モノフィラメント縫合糸を使用頭蓋骨の上cision。感染を防ぐために、縫合線に沿って抗生物質軟膏を置きます。 Buprenex（約0.05mg / kg）を、疼痛管理のために3日間皮下12時間毎に注入します。
- 完全に覚醒し、自由に移動するまで麻酔から除去した後の回復室にマウスを返します。
脳卒中の誘導の6検証（死後）
- 研究の終わりに、 図5に示すように、2,3,5-トリフェニルテトラゾリウムクロリド（TTC）染色を使用して、ストローク量を確認する。完全な方法は、12に見出すことができます。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
この方法の目的は、561 nmのレーザー光を薄く頭蓋骨の尾静脈とその後の照明を介してRBのボーラス注射後の動物モデルにおける虚血性脳卒中（マウス、ラット）を誘導することでした。 図4の画像は、0、1、1.5、2分間の領域の照射後の単一の容器内に血栓形成の進行を示しています。血栓形成の前に容器全体はローズベンガルを流れる自由に起因白です。容器の照射誘導後そこに容器の一部が明らかに暗くし、血餅形成（フレーム1と1.5分）の誘導を示しています。完全な閉塞に続いて血管内凝固塊（黒領域）の前のローズベンガル色素（白い部分）の顕著な蓄積があります。 2分のフレームは、動脈の完全閉塞を示しています。
虚血性脳卒中のTTC染色の存在を利用することができるかどうかを確認します。 TTCが共同でmmonly健康な組織の赤いホルマザンTTC生成物の形成によって脳梗塞の検出のための染色を使用していました。ホルマザン生産（白組織）の欠如は、梗塞領域を示しています。 図5のボックスで示された領域は、直径約80ミリメートルの容器内で生成血塊次の2つの独立した動物からの1と5日に得られた典型的な病変の大きさを示しています。画像解析は、フラットベッドスキャナ及びImageJソフトウェアを使用することで行われます。関心領域は、各脳のためのストローク量の面積を測定するためにImageJの内に描画することができます。
図1：ステンレススチールリング三面図（上面、側面および底面図）は、定位ホルダーにそれを固定するために、マウスの頭蓋骨に適用されたステンレス製のリングホルダーの図示されています。
図2：RB光血栓のための顕微鏡イメージングプラットフォームのセットアップ /外科イメージングプラットフォームは、ノーズコーンとの間に動物の動きを減少させるために、動物の頭蓋骨に固定されているステンレス製のリングのための定位ホルダー麻酔管用ホルダーが含まれています。イメージング。プラットフォームは、頂部に配置され、顕微鏡対物レンズの下にマウスを配置するための垂直移動を可能にするために、実験室用ジャックに固定されています。実験用ジャッキは、水平移動を可能にする顕微鏡ステージに取り付けられます。顕微鏡ステージは、上部に配置四円筒極に固定されています。
図3：目的INVの下で撮影/外科用プラットフォーム設計と向きの写真erter。（A）左側のパネルには、麻酔したマウス（麻酔ノーズコーンは、写真を撮るための簡単に除去された）の位置の代表画像を示します。イメージング手順を通して呼吸アーチファクトの寄与を減少させるために、マウスの頭蓋骨を添付するカスタムスチールリングの使用に注意してください。右の画像は、解剖顕微鏡下で皮質ウィンドウの画像を示しています。 （B）硬膜とフル頭蓋骨の厚さに関連して薄型化エリアの厚さに関連して頭蓋骨の層を実証する冠状ビューから薄い頭蓋骨の準備のスケッチ。
図4：ローズベンガル血栓形成の画像尾VEIを介して注入したローズベンガル染料を含む単一容器の代表的な画像。マウスのn個。画像は、0、1、1.5、2分間の領域の照射後の血管内の血栓形成の進行を示します。動脈の完全閉塞を実証する2分枠で血餅（黒）の前のローズベンガル色素（白）の蓄積に注意してください。
図5：RB誘導された病変の塩化2,3,5-トリフェニルテトラゾリウム（TTC）画像の代表画像は1日目と5ポスト光血栓の誘導に示されています。マウスを屠殺し、脳を迅速に標準的な方法に従って除去し、1ミリメートルの冠状切片にスライスし、TTCで染色しました。 TTCは、健康な組織の赤いホルマザンTTC産物の形成による脳梗塞の検出のための一般的に使用される染色です。ホルマザン生産（白組織）の欠如は、梗塞領域を示しています。ザボックスで示された領域は、直径が約80μmの容器内で生成血塊を後に得られた典型的な病変の大きさを示しています。
図6：ローズベンガル光血栓手順の概略図。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
動物からヒトへの適用に実験的なストローク病態生理を変換する機能は、障害に悩まされています。しかし、このような光血栓モデルなどの動物モデルの使用は、改良されたストローク病態生理の理解と脳卒中後の神経保護を提供するための新しい治療法の探求を可能にします。光血栓モデルによって生成される小さな皮質ストロークとmicroinfarctionsは、臨床的に無症状または高い有病率を持っており、毎年16米国の人口（約11万人）の約4％に影響を与える"サイレント"脳卒中13-15、に関連しています。サイレントストロークが中大脳動脈（MCA）閉塞または一過性脳虚血発作（TIA）17に見られるような麻痺、感覚消失や難易度などのより大きなストローク中に存在する古典的な脳卒中の症状は、そのような話す必要はありません。また、サイレントストロークは、どのラクナストロークとは異なります深い脳の構造や脳幹内の単一貫通動脈の閉塞と、モータと、臨床的にマニフェスト、感覚または混合赤字18によって引き起こされます。無症状または「サイレント」脳卒中患者は、典型的には、任意の外側に症状が表示されませんし、多くの場合、彼らはストロークをしても苦戦している気づいていません。メモリ内の障害、意思決定、および行動の変化によって示される認知機能の無症状の減少でサイレントストローク結果。時間が経つにつれて、複数のサイレントストロークは、血管または多発脳梗塞性認知症として知られている記憶喪失の臨床的に有意な兆候につながります。しかし、サイレントストローク脳の 損傷は、神経画像を用いて検出し、今後19でTIA、主要な脳卒中のリスクがある患者を配置することができます。
光血栓モデルは、コンビに感光性色素ローズベンガル（RB）を使用して、無傷の、麻酔したマウスにおける血栓症の in vivoモデルで再現性の産生を可能にします共焦点顕微鏡と国家。 in vivoでの光血栓モデルの多くの利点があります。この方法の一つの利点は、定位座標を使用して、ストロークの位置を事前に定義する能力です。一つは、動物全体で特定の細胞集団を研究することを可能にします。さらに、病変の大きさおよび体積の再現性がよく、レーザ光 の強度を変化させ、20を照射して容器サイズを制御することによって、この方法を利用して制御されます。この方法は、梗塞周囲の神経伝達および対応する対側皮質4の変化を詳細に検討することができます。単一サイレントストロークが最小障害を引き起こすが、このモデルの再現性は、血管性認知症のような様々な脳機能障害を模倣するために使用することができる特定の領域内の複数の無音のストロークを誘導する能力を可能にします。複数のサイレントストロークと臨床的に明らかな赤字の間の閾値の開発が具体に決定することができますFICこの方法を使用することにより、脳の領域にも。最後に、モデルは、急性および慢性の両方の効果を観察するためにできるように、同じ動物での縦断的研究を可能にします。
光血栓モデルを使用していくつかの欠点は、しかし、存在します。一つの欠点は、焦点ストローク4の他のモデルと比較した場合、小さな虚血性ペナンブラを有するものとして注目される病変の生産が含まれています。第二に、血管原性および細胞傷害性浮腫の形成が原因で、より密接に焦点ストローク4よりも外傷性脳損傷に似た光血栓の誘導で生じるおそれのある損傷することが可能です。
光血栓モデルを使用する場合は、実験を通してモニターされなければならない多くの要因があります。それは、動物の生理状態が全てのイメージング手順を通してモニターすることが重要です。これはよく麻酔レベルが生理番目に影響を与えることが知られています麻酔の上に原因で動物のatusは、動物に心拍数と酸素供給を減少させました。これは、虚血をもたらす脳への酸素の利用可能性を減少させるので、これは重要な考慮事項です。したがって、動物の生理的状態を監視するためのシステムの使用は、同時に非侵襲的記録を可能にする：動脈血酸素飽和度（たSpO 2）。ハートレート;呼吸数、パルス膨満（ローカル血流および信号品質の指標）。ブレス膨満（intraplueral圧力の代理）。マウス、ラットおよびコア温度。これは、麻酔のために制御することがますます重要になってきている臨床ストロークで利益に実験結果を変換するときに、予期しない交絡を低減するために、任意の動物モデルでの作業時混乱させる。麻酔の選択肢、期間および深さは、実験的な脳卒中の動物モデルにおいて劇的な影響を与えることができます。研究は、麻酔薬は、梗塞SIを低減することができることが実証されていますZEさらには脳虚血21-23,24からいくつかの保護を提供することができます。また、活性酸素種の産生の変化はまた、ハロタンおよびプロポフォール25の使用を比較した研究において実証されています。脳卒中に関連する神経細胞死の主要な仮説の一つは、反応性酸素種の産生と同様に、この交絡は重要です。
脳卒中に対する脳の反応を研究するために生体内顕微鏡検査に利用する1つの複雑は、達成可能な撮像深度の制限です。我々の研究室では達成することができる撮像深度を、共焦点顕微鏡を用いた2光子顕微鏡を使用して400〜500ミクロンの間には、この深さを増加させることができるが、100〜200ミクロンの範囲です。これらの交絡が大きく作動距離とし、サイズを小さくする目的の開発によって緩和されています。例えば、勾配屈折率（GRIN）マイクロレンズがmicroendoscopesウィットあります35-1,000ミクロンの間の時間の直径とは、日付に利用可能な最小です。プローブのこのタイプは、侵襲的な損傷を与えることなく、組織に挿入され、低い開口数を持つことができません。低いNAに解像度は、従来の光学顕微鏡の対物レンズ26に比べて劣っています。
要約すると、ローズベンガルの光血栓モデルは、小さいサイズの梗塞を誘発し、明確に定義された細胞集団における急性および慢性期の両方における梗塞に対する細胞応答を研究するのに有用です。このモデルは、MCAO以下の局所的虚血に見られる本質的な細胞特性を実証するため、神経保護/神経再生治療法の評価に有用です。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
著者は、彼らが競合する金融利害関係がないことを宣言します。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| Rose Bengal | Sigma | 330000 | |
| Isoflurane Anesthetic | MWI Veterinary Supply | 088-076 | |
| Vetbond | 1469SB | 1469SB | |
| aCSF | 126 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1.25 mM NaH2PO4, 2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 10 mM glucose and 26 mM NaHCO3 (pH 7.4). | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Dissecting Scissors | Bioindustrial Products | 500-410 | |
| Operating scissors 14 cm | Bioindustrial Products | 12-055 | |
| Forceps Dumont High Tech #5 style, straight | Bioindustrial Products | TWZ-301.22 | |
| LabJack 132X80 | Optosigma Co | 123-6670 | |
| Platform for Labjack 8X 8 | Optosigma Co | 145-1110 | |
| Ear bar holder from stereotaxic setup | Stoelting/Cyborg | 51654 | |
| Dispomed Labvent Rodent anesthesia machine | DRE, Inc. | 15001 | |
| Tech IV Isoflurane vaporizer | DRE, Inc. | 34001 | |
| F Air Canister | DRE, Inc | 80120 | |
| Bain circuit breathing tube | DRE, Inc | 86111B | |
| Rodent adapter for bain tube | DRE, Inc | 891000 | |
| O2 regulator for oxygen tanks | DRE, Inc | CE001E | |
| Rodent induction chamber | DRE, Inc | 15004C | |
| Ethicon Silk 6-0; 18 in with P-3 needle | Suture Express | 1639G | |
| Objective inverter Optical Adapter | LSM technologies | ||
| Foredom drill Dual voltage 110/120 | Foredom | 134.53 | |
| Meisinger 3.9 mm drill bit | Meisinger | (Ref#310 104 001 001 009) | |
References
- Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis. Annals of Neurology. 17, 497-504 (1985).
- Rosenblum, W. I., El-Sabban, F. Platelet aggregation in the cerebral microcirculation: effect of aspirin and other agents. Circulation Research. 40, 320-328 (1977).
- Owens, A. P. 3rd, Mackman, N. Sources of tissue factor that contribute to thrombosis after rupture of an atherosclerotic plaque. Thrombosis Research. 129, Suppl 2. S30-S33 (2012).
- Carmichael, S. T. Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose. NeuroRx : the journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 2, 396-409 (2005).
- Manual of stroke models in rats. , 332 CRC Press. (2009).
- Herz, R. C., Kasbergen, C. M., Hillen, B., Versteeg, D. H., de Wildt, D. J. Rat middle cerebral artery occlusion by an intraluminal thread compromises collateral blood flow. Brain Research. 791, 223-228 (1998).
- Brint, S., Jacewicz, M., Kiessling, M., Tanabe, J., Pulsinelli, W. Focal brain ischemia in the rat: methods for reproducible neocortical infarction using tandem occlusion of the distal middle cerebral and ipsilateral common carotid arteries. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism : Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 8, 474-485 (1988).
- Zheng, W., et al. Purinergic receptor stimulation reduces cytotoxic edema and brain infarcts in mouse induced by photothrombosis by energizing glial mitochondria. PloS One. 5, e14401 (2010).
- Zheng, D. M., Wewer, J., Lechleiter, J. P. 2Y. 1R. -initiated IP3R-dependent stimulation of astrocyte mitochondrial metabolism reduces and partially reverses ischemic neuronal damage in mouse. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 33, 600-611 (2013).
- Witte, O. W., Stoll, G. Delayed and remote effects of focal cortical infarctions: secondary damage and reactive plasticity. Advances in Neurology. 73, 207-227 (1997).
- Hagemann, G., Redecker, C., Neumann-Haefelin, T., Freund, H. J., Witte, O. W. Increased long-term potentiation in the surround of experimentally induced focal cortical infarction. Annals of Neurology. 44, 255-258 (1998).
- Kramer, M., et al. TTC staining of damaged brain areas after MCA occlusion in the rat does not constrict quantitative gene and protein analyses. Journal of Neuroscience Methods. 187, 84-89 (2010).
- Blinder, P., Shih, A. Y., Rafie, C., Kleinfeld, D. Topological basis for the robust distribution of blood to rodent neocortex. Proceedings of the National Academy of Sciences. 107, 12670-12675 (2010).
- Nishimura, N., Rosidi, N. L., Iadecola, C., Schaffer, C. B. Limitations of collateral flow after occlusion of a single cortical penetrating arteriole. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 30, 1914-1927 (2010).
- Nishimura, N., Schaffer, C. B., Friedman, B., Lyden, P. D., Kleinfeld, D. Penetrating arterioles are a bottleneck in the perfusion of neocortex. Proceedings of the National Academy of Sciences. 104, 365 (2007).
- Blum, S., et al. Memory after silent stroke: Hippocampus and infarcts both matter. Neurology. 78, 38-46 (2012).
- Heinsius, T., Bogousslavsky, J., Van Melle, G. Large infarcts in the middle cerebral artery territory Etiology and outcome patterns. Neurology. 50, 341-350 (1998).
- Wardlaw, J.
- Inoue, Y., et al. Ischemic stroke under anticoagulant therapy]. Rinsho shinkeigaku. Clinical Neurology. 50, 455-460 (2010).
- Tiannan Wang, W. C., Xie, Y., Zhang, W., Ding, S. Controlling the Volume of the Focal Cerebral Ischemic Lesion through Photothrombosis. American Journal of Biomedical Sciences. 2, 33-42 (2009).
- Head, B. P., Patel, P.
- Kirsch, J. R., Traystman, R. J., Hurn, P. D. Anesthetics and cerebroprotection: experimental aspects. International Anesthesiology Clinics. 34, 73-93 (1996).
- Koerner, I. P., Brambrink, A. M.
- Gelb, A. W., Bayona, N. A., Wilson, J. X., Cechetto, D. F. Propofol anesthesia compared to awake reduces infarct size in rats. Anesthesiology. 96, 1183-1190 (2002).
- Bhardwaj, A., Castro, I. A., Alkayed, N. J., Hurn, P. D., Kirsch, J. R. Anesthetic choice of halothane versus propofol: impact on experimental perioperative stroke. Stroke; A Journal Of Cerebral Circulation. 32, 1920-1925 (2001).
- Barretto, R. P., Messerschmidt, B., Schnitzer, M. J. In vivo fluorescence imaging with high-resolution microlenses. Nature Methods. 6, 511-512 (2009).
