Abstract
बैक्टीरिया से प्लेटलेट इकाइयों के प्रदूषण को लंबे समय के कारण उनके पद-दान भंडारण की स्थिति के लिए एक महत्वपूर्ण आधान जोखिम के रूप में स्वीकार किया गया है। उत्पादों को नियमित, एक आंदोलनकारी प्रकार के बरतन पर 22 डिग्री सेल्सियस पर बैक्टीरिया विकास को बढ़ावा देने के कर सकते हैं कि एक की हालत जमा हो जाती है। एक प्लेटलेट उत्पाद में पेश होने का विश्वास बैक्टीरिया की कुल संख्या बेहद कम है, इन जीवाणुओं संभावित गंभीर प्रतिकूल घटनाओं, जिसके परिणामस्वरूप एक बहुत उच्च अनुमापांक करने से पहले आधान के लिए बढ़ सकता है। इस अध्ययन का उद्देश्य प्लेटलेट उत्पादों की आम contaminants के रूप में पहचान की गई है कि बैक्टीरिया के एक पैनल के खिलाफ एक राइबोफ्लेविन आधारित रोगज़नक़ कमी प्रक्रिया का मूल्यांकन करने के लिए किया गया था। इस पैनल निम्नलिखित जीवों शामिल: एस एपिडिडर्मिस, एस ऑरियस, एस mitis, एस pyogenes, एस marcescens, वाई enterocolitica, बी neotomae, बी cereus, ई कोलाई, पी aeruginosa और लालकृष्ण निमोनिया। प्रत्येक प्लेटलेट इकाई एक उच्च बैक्टीरियल लोड के साथ inoculated किया गया था और नमूने ख हटा दिया गया हैपहले और इलाज के बाद अन्य संगठनों के। एक कॉलोनी, परख के गठन के लिए एक अंत बिंदु कमजोर पड़ने योजना का उपयोग कर, पूर्व उपचार और बाद इलाज बैक्टीरियल titers निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। लॉग कमी पूर्व उपचार अनुमापांक से उपचार के बाद अनुमापांक को घटाकर की गणना की गई। निम्न लॉग कटौती मनाया गया: एस एपिडिडर्मिस 4.7 लॉग (99.998%), एस ऑरियस 4.8 लॉग (99.998%), एस 3.7 लॉग (99.98%) mitis, एस pyogenes 2.6 लॉग (99.7%), एस marcescens 4.0 लॉग (99.99%), वाई enterocolitica 3.3 लॉग (99.95%), बी neotomae 5.4 लॉग (99.9996%), बी cereus 2.6 लॉग (99.7%), ई कोलाई ≥5.4 लॉग (99.9996%), पी aeruginosa 4.7 लॉग (99.998%) और कश्मीर । निमोनिया 2.8 लॉग (99.8%)। इस अध्ययन के परिणामों से प्रक्रिया जीवाणु संक्रमण के साथ जुड़े गंभीर प्रतिकूल आधान घटनाओं के खतरे को कम करने में मदद कर सकता है सुझाव देते हैं।
Introduction
प्लेटलेट्स की ट्रांसफ्यूजन, प्लाज्मा, पैक लाल रक्त कोशिकाओं और पूरे रक्त उत्पादों को आधुनिक चिकित्सा के क्षेत्र में एक प्रमुख भूमिका निभाते हैं और विभिन्न चिकित्सा शर्तों का इलाज महत्वपूर्ण तरल पदार्थ की जगह है और अंतत: जान बचाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। प्लेटलेट्स या तो पूरे रक्त से अलग और जमा एक transfusable खुराक में या प्लेटलेट apheresis की प्रक्रिया के माध्यम से एकत्र कर रहे हैं कि एक सेलुलर उत्पाद हैं। शरीर में प्लेटलेट्स की मुख्य भूमिका घाव स्थलों पर रक्तस्राव को रोकने के लिए और खून बनाए रखने में मदद करने के लिए है। एक कम प्लेटलेट सेल गिनती (थ्रोम्बोसाइटोपेनिया) से पीड़ित मरीजों को सहज रक्तस्राव की घटनाओं के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं और उनके प्लेटलेट सेल एक सामान्य श्रेणी में वापस गिनती लाने के लिए प्लेटलेट्स के साथ चढ़ाया जाता है। एकत्र प्लेटलेट्स 5-7 दिनों की एक अधिकतम के लिए जमा हो जाती है और लगातार आंदोलन के तहत, जबकि 22 ± 2 डिग्री सेल्सियस पर जमा हो जाती है।
प्लेटलेट चढ़ाने के गुणों को जीवन रक्षक वहाँ की वजह से सह के आधान प्राप्तकर्ताओं के लिए एक मामूली जोखिम रहता बावजूदपरजीवी, बैक्टीरिया और वायरस 11 से इन उत्पादों की ntamination। वायरल न्यूक्लिक एसिड परीक्षण के कार्यान्वयन (नेट) इस तरह के हेपेटाइटिस सी वायरस (एचसीवी), हेपेटाइटिस बी वायरस (एचबीवी) और मानव इम्युनो कमी वायरस (एचआईवी) के रूप में प्रमुख रक्त जनित एजेंटों, वायरल संचरण के जोखिम को कम किया है काफी 5। इन एजेंटों एचआईवी के लिए 1 लाख 8 के अनुसार दान, एचसीवी के लिए 1 6,700,000 प्रति दान और एचबीवी 15 के लिए 1 17 लाख प्रति दान होने के लिए कनाडा के रक्त सेवा से हाल के एक प्रकाशन अवशिष्ट जोखिम का अनुमान है।
प्लेटलेट उत्पादों की हर साल लाखों चढ़ाया जाता है, क्योंकि कई प्राप्तकर्ताओं संभावित जीवन धमकी जटिलताओं को उजागर कर रहे 1,000 7 और: बैक्टीरिया आम तौर पर आम जनता में कम ध्यान जुटाने हालांकि, प्लेटलेट उत्पादों में जीवाणु संक्रमण की आवृत्ति के रूप में उच्च के रूप में 1 होने का अनुमान लगाया गया है पूति 6 की तरह। अनुसंधान के समय पर कि बैक्टीरियल लोड चलता हैसंदूषण कम है की, <100 कॉलोनी बनाने इकाइयों (सीएफयू) / उत्पाद 2,16, हालांकि पोषक तत्व युक्त वातावरण और कमरे के तापमान भंडारण आधान से पहले खतरनाक तरीके से उच्च titers को पैदा करने के लिए बैक्टीरिया को दूषित की अनुमति देता है। वर्तमान में, एक प्लेटलेट प्राप्तकर्ता तक पहुँचने से bacterially दूषित उत्पादों को रोकने के लिए ही उपलब्ध अनुमोदित विधियों संस्कृति आधारित प्रणालियों और देखभाल परीक्षण के तेजी से बिंदु के उपयोग के माध्यम से होता है। संक्षेप में, संस्कृति आधारित प्रणालियों के लिए प्लेटलेट उत्पादों को एक 4-8 मिलीलीटर नमूना एक बोतल में प्लेटलेट उत्पाद से हटा दिया है और टीका है जिस पर बैक्टीरिया उत्पाद में पैदा करने के लिए अनुमति देने के लिए 12-24 घंटे के लिए 22 डिग्री सेल्सियस पर एक आंदोलनकारी पर जमा हो जाती है पोषक तत्व मीडिया वाले। बोतल बैक्टीरिया विकास के लिए बोतल पर नजर रखता है जो एक साधन के रूप में रखा गया है। साधन बोतल में बैक्टीरिया विकास का पता लगाता है तो यह झंडी दिखाकर रवाना किया जाता है और इसी प्लेटलेट इकाई खारिज कर दिया है। इस प्रक्रिया को तेजी से gro का पता लगाने में काफी सफल हैविंग जीवों, धीमी गति से बढ़ रही प्रजातियों में से कई इस प्रकार आधान 7,12,14,16,22 के लिए जारी होने की झूठी नकारात्मक इकाइयों के लिए क्षमता निर्माण, पता लगाया जा करने के लिए एक उच्च पर्याप्त अनुमापांक करने के लिए जाना नहीं है। बैक्टीरियल लोड काफी बढ़ गया है जब संस्कृति आधार पर पता लगाने प्रणालियों के विपरीत, ध्यान परीक्षण के तेजी से बिंदु आम तौर पर प्लेटलेट भंडारण अवधि में बाद में किया जाता है। उच्च titers देखभाल परीक्षण के बिंदु संस्कृति आधारित प्रणालियों की तुलना में कम संवेदनशील होते हैं, क्योंकि आवश्यक है, और वे एक अनुमापांक ≥1 एक्स 10 3 सीएफयू / एमएल 17 तक पहुंचने के केवल एक बार मज़बूती से बैक्टीरिया का पता लगाने कर रहे हैं। हालांकि इस तरह के परीक्षण नमूने के 1 घंटे के भीतर परिणाम प्रदान कर सकते हैं। इन परीक्षणों के प्रदर्शन में परिवर्तनशीलता प्राप्तकर्ता 9 में एक घातक सेप्टिक प्रतिक्रिया के कारण, एक झूठी नकारात्मक उत्पाद की रिहाई के लिए मार्ग प्रशस्त किया है।
प्लेटलेट उत्पादों के जीवाणु संक्रमण के मुद्दे से निपटने के लिए एक वैकल्पिक तरीका एक रोगज़नक़ कमी proc के नियमित प्रयोग के माध्यम से होता हैदूषित बैक्टीरिया को निष्क्रिय करने के बजाय उन्हें पता लगाने की कोशिश कर सकते हैं कि ईएसएस। पराबैंगनी प्रकाश के साथ संयोजन में, एक photosensitizer रूप राइबोफ्लेविन का उपयोग करना, बैक्टीरिया 3,4,8,10,19-21 राइबोफ्लेविन और यूवी की व्याप्ति उपयोग सहित रोगजनक रक्त जनित प्रदूषणों से एक व्यापक रेंज की संक्रामकता को कम करने के लिए दिखाया गया है रोगज़नक़ कमी के लिए प्रकाश गैर विषैले और गैर म्यूटाजेनिक है, और राइबोफ्लेविन और पराबैंगनी प्रकाश का इलाज घटकों आधान प्राप्तकर्ताओं के लिए और साथ ही रक्त उत्पादों 18 से निपटने के उन लोगों के लिए सुरक्षित करने के लिए दिखाया गया है। संक्षेप में, राइबोफ्लेविन अणुओं बैक्टीरिया, परजीवी, वायरस और किसी भी केन्द्रक सेल (जैसे सफेद रक्त कोशिकाओं) का न्यूक्लिक एसिड (डीएनए और आरएनए) के साथ संबद्ध कर सकते हैं। पराबैंगनी प्रकाश के संपर्क में इस प्रकार न्यूक्लिक एसिड की प्रतिकृति और / या प्रतिलेखन रोकने और 13 निष्क्रिय जीव छोड़ने न्यूक्लिक एसिड (मुख्य रूप से गुआनिन कुर्सियां) का कार्य समूहों के लिए एक रासायनिक परिवर्तन के कारण, राइबोफ्लेविन सक्रिय। प्लेट की तरह Anucleated कोशिकाओंसुविधा देता है और लाल रक्त कोशिकाओं के कारण न्यूक्लिक एसिड की कमी के राइबोफ्लेविन रसायन शास्त्र से प्रभावित नहीं हैं।
राइबोफ्लेविन और पराबैंगनी प्रकाश प्रौद्योगिकी के साथ पिछले काम एक चिकित्सकीय प्रासंगिक बैक्टीरियल लोड (<20 CFU / उत्पाद) 8 के साथ दूषित एक प्लेटलेट उत्पाद की नकल करने के उद्देश्य से एक प्रयोगात्मक डिजाइन का उपयोग कर जीवाणुओं के एक समूह का चयन का मूल्यांकन किया। इस अध्ययन का लक्ष्य उच्च अनुमापांक जीवाणु संक्रमण के खिलाफ राइबोफ्लेविन और पराबैंगनी प्रकाश की प्रक्रिया का मूल्यांकन करने के लिए किया गया था (> 1.0 x 10 5 सीएफयू / एमएल) प्रणाली की कुल बैक्टीरियल कमी क्षमता को मापने के क्रम में प्लाज्मा में इलाज प्लेटलेट उत्पादों में। Hemovigilance अध्ययनों 1 से एकत्र किए गए आंकड़ों के आधार पर, आमतौर पर होने वाली ग्राम नकारात्मक और ग्राम सकारात्मक जीवों का एक पैनल इस अध्ययन में मूल्यांकन के लिए चुना गया है और निम्नलिखित प्रजातियों को शामिल किया गया था: स्टाफीलोकोकस एपिडिडर्मिस, स्ताफ्य्लोकोच्चुस, स्ट्रेप्टोकोकस mitis, स्ट्रैपटोकोकस pyogenes, सेराटिया marcescens, यर्सीनिया enterocolitica ,ब्रूसिला neotomae, बेसिलस cereus (वनस्पति फार्म), Esherichia कोलाई, Pseudomonas aeruginosa और क्लेबसिएला निमोनिया। बी छोड़कर सभी जीवों, cereus, ATCC से प्राप्त किया गया है और एक प्राथमिकता रक्त घटकों से अलग होने के रूप में पहचान की गई थी कि जीवाणु उपभेदों प्राप्त करने पर रखा गया था। बी cereus इस अध्ययन में परीक्षण एक दूषित प्लेटलेट उत्पाद से आंतरिक रूप से अलग-थलग एक नैदानिक तनाव है।
Protocol
1. जीवाणु निलंबन तैयारी:
- एक परेशान संस्कृति की थाली से, aseptically बाँझ inoculating पाश के माध्यम से उचित विकास मीडिया (1 टेबल) की 100 मिलीग्राम से युक्त एक 250 मिलीलीटर बाँझ बोतल में एक ही कॉलोनी टीका लगाना।
- समय-समय पर विकास के लिए जाँच, 1-2 दिनों के लिए उपयुक्त परिस्थितियों (1 टेबल) पर एक कक्षीय मिलाते इनक्यूबेटर में बोतल रखें। 140 आरपीएम करने के लिए एक प्रकार के बरतन गति सेट करें।
- Aseptically 23 डिग्री सेल्सियस पर 20 मिनट के लिए 3,000 XG पर दो बाँझ 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब और अपकेंद्रित्र ट्यूबों में जीवाणु निलंबन हस्तांतरण।
- सतह पर तैरनेवाला Aspirate और बाँझ peptone पानी की 15 मिलीलीटर के साथ प्रत्येक बैक्टीरिया गोली resuspend। भंवर के रूप में आवश्यक। एक ट्यूब / कंटेनर में निलंबित बैक्टीरिया संस्कृति का मिश्रण।
- शेयर संस्कृति अनुमापांक निर्धारित करने के लिए धारा 4 के अनुसार तीन प्रतियों में शेयर संस्कृति अनुमापांक।
- सर्द 2 सप्ताह तक 4 के लिए77; 2 डिग्री सेल्सियस तक की जरूरत है। पुन अनुमापांक उपयोग के समय में संस्कृति, कदम 4.8 देखते हैं।
2. प्लेटलेट उत्पाद तैयारी:
- एक मान्यता प्राप्त ब्लड बैंक में एक मानक apheresis मानव प्लेटलेट उत्पाद लीजिए। प्लेटलेट उत्पाद निम्नलिखित संग्रह विनिर्देशों को पूरा करना होगा: 90-360 मिलीग्राम की मात्रा और 0.8 -3.8 एक्स 10 6 प्लेटलेट्स / μl एकाग्रता।
- प्लेटलेट उत्पाद रोगज़नक़ कमी के लिए पूर्व प्रसंस्करण के लिए 2 घंटे की एक न्यूनतम के लिए विश्राम किया गया है कि सुनिश्चित करें। इन 2 घंटे के लिए आंदोलन के बिना एक प्लेटलेट इनक्यूबेटर में 22 ± 2 डिग्री सेल्सियस पर उत्पादों की दुकान। दो घंटे के बाद प्लेटलेट उत्पाद एक प्लेटलेट इनक्यूबेटर में 22 ± 2 डिग्री सेल्सियस पर उत्तेजित है सुनिश्चित करते हैं। अप करने के लिए 22 घंटे के बाद वसूली के लिए उत्पाद का प्रयोग करें।
- एक 3 मिलीलीटर सिरिंज एक 2 मिलीलीटर नमूना निकालें का उपयोग प्लेटलेट उत्पाद का पीएच 22C मापने के लिए। उत्पाद को सुनिश्चित करने के लिए एक रक्त गैस विश्लेषक का उपयोग एक पीएच> 6.6 है। एक hematological विश्लेषक का उपयोग प्लेटलेट उत्पाद का प्लेटलेट एकाग्रता को मापने के लिए एक ही नमूना का प्रयोग करें। उत्पाद 0.80-3.8 एक्स 10 6 प्लेटलेट्स / μl संग्रह एकाग्रता की आवश्यकता को पूरा किया जाता है।
- दिखने में प्लेटलेट उत्पाद के भंवर का मूल्यांकन। उत्पाद है, तो एक "0" उत्पाद खारिज कर दिया जाएगा ज़ुल्फ़।
- एक सीधा सफेद प्रकाश स्रोत के तहत प्लेटलेट बैग को पकड़ो और संक्षेप में प्लेटलेट बैग निचोड़। दिखने में प्लेटलेट नमूना का घूमता पैटर्न का पालन। निम्नलिखित पैमाने का उपयोग कर उत्पाद स्कोर।
नोट: 2 - सकारात्मक भंवर: मजबूत विपरीत के साथ पूरे बैग भर में दिखाई दे inhomogeneity घूमता। 1 - मध्यवर्ती भंवर: कुछ inhomogeneity दिखाई दे रहा है, लेकिन केवल कुछ ही स्थानों में और गरीबों के विपरीत के साथ। 0 - नकारात्मक भंवर: पहले और प्लेटलेट बैग निचोड़ के बाद शेष Turbid एकरूपता
3. राइबोफ्लेविन और यूवी लाइट प्रक्रिया:
- ट्रॅनएक बाँझ ट्यूबिंग डॉकिंग डिवाइस का उपयोग कर एक राइबोफ्लेविन और यूवी प्रकाश रोशनी और भंडारण बैग को प्लेटलेट उत्पाद sfer। हस्तांतरण के बाद एक ट्यूबिंग मुहर का उपयोग कर खाली प्लेटलेट इकाई संग्रह बैग को हटा दें और biohazardous अपशिष्ट के रूप में खाली बैग त्यागें।
- इसके प्रकाश सुरक्षा बाहरी लपेटो से शेयर समाधान राइबोफ्लेविन 500 माइक्रोन की 35 मिलीलीटर पाउच निकालें। बाँझ गोदी उपचार और भंडारण बैग के इनलेट लाइन पर राइबोफ्लेविन किट। सामग्री प्लेटलेट इकाई में पलायन करने की अनुमति दें।
- राइबोफ्लेविन थैली से सेट राइबोफ्लेविन थैली / उपचार और भंडारण बैग लटका और धीरे उपचार और भंडारण बैग के बाहर और राइबोफ्लेविन बैग में अवशिष्ट हवा व्यक्त करते हैं। प्लेटलेट उत्पाद की एक छोटी राशि सुनिश्चित भी प्लेटलेट उत्पाद में किसी भी अवशिष्ट राइबोफ्लेविन कुल्ला करने के लिए राइबोफ्लेविन थैली में व्यक्त किया जाता है। राइबोफ्लेविन और प्लेटलेट समाधान उपचार और भंडारण बैग में वापस नाली की अनुमति दें और फिर इनलेट लाइन दबाना। खाली राइबोफ्लेविन बैग हमें हटायेएक ट्यूबिंग मुहर हैैं और biohazardous अपशिष्ट के रूप में खाली बैग त्यागें।
- बाँझ गोदी रोशनी और भंडारण बैग के इनलेट लाइन पर महिला सिरिंज कनेक्टर के साथ एक 6 "ट्यूबिंग लाइन। महिला सिरिंज कनेक्टर पर एक 10 मिलीलीटर सिरिंज प्रति बैरल (सवार निकालने के लिए) संलग्न।
- Aseptically एक विंदुक के माध्यम से सिरिंज बैरल में शेयर बैक्टीरिया के 5 मिलीलीटर जोड़ें। इनलेट लाइन पर दबाना खोलें और बैक्टीरिया प्लेटलेट उत्पाद में पलायन करने की अनुमति देते हैं। कुछ प्लेटलेट उत्पाद 10 मिलीलीटर सिरिंज बैरल में वापस प्रवाह करने की अनुमति देकर सिरिंज प्रति बैरल कुल्ला। 10 मिलीलीटर सिरिंज प्रति बैरल निकालें।
- Aseptically एक 30 मिलीलीटर सिरिंज देते हैं और प्लेटलेट उत्पाद में मिलाया जाता है शेयर बैक्टीरिया सुनिश्चित करने के लिए प्रवेश बंदरगाह दो बार की एक न्यूनतम फ्लश। उत्पाद अच्छी तरह से मिश्रित होने के बाद, एक साफ 5-10 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करें और एक 2 मिलीलीटर पूर्व उपचार नमूना हटा दें। टीका कदम से शुरू की किसी भी हवाई सुनिश्चित एक नई सिरिंज का प्रयोग या कदम नमूने निकाल दिया जाता है।
- धारा 4 के अनुसार पूर्व उपचार नमूना अनुमापांक।
- उपचार और भंडारण बैग से इनलेट लाइन को हटाने और उत्पाद वजन।
- प्रकाशक में उत्पाद प्लेस और एक मानक प्लेटलेट उपचार शुरू करने के लिए परदे पर आदेशों का पालन करें।
- ऑपरेटर आईडी में दर्ज करें।
- सुरक्षित और प्रकाशक पट्ट को बैग माउंट।
- बारकोड रीडर या मैनुअल प्रविष्टि कीपैड या तो उपयोग प्रकाशक में नमूना आईडी दर्ज करें।
- स्कैन उत्पाद प्रकार।
- क्वार्ट्ज दबाना बंद करें।
- रोशनी डिवाइस स्वचालित रूप से ऊर्जा की 6.24 जम्मू / मिलीलीटर वितरित करेंगे। ठेठ उपचार समय 5-10 मिनट लगते हैं।
- उपचार और भंडारण बैग का नमूना बल्ब लाइन पर महिला सिरिंज कनेक्टर के साथ एक 6 "ट्यूबिंग लाइन उपचार बाँझ गोदी के बाद। उत्पाद अच्छी तरह से मिला है सुनिश्चित करें और उसके बाद एक 5 मिलीलीटर सिरिंज देते हैं और एक 2 मिलीलीटर के बाद इलाज के नमूने को हटा दें।
- उपचार के बाद सैम अनुमापांकधारा 4 के प्रति मिसाल।
4. बैक्टीरियल टिटर
- पूर्व उपचार और बाद इलाज के नमूनों की अनुमापांक का अनुमान है और प्रत्येक नमूने की एक अंत बिंदु धारावाहिक कमजोर पड़ने प्रदर्शन करने की जरूरत 5 मिलीलीटर कमजोर पड़ने ट्यूब की उपयुक्त संख्या में तैयार करते हैं। Aseptically peptone पानी की 1.8 मिलीलीटर के साथ आवश्यक ट्यूबों को भरने।
- अनुमापांक एक 10 गुना धारावाहिक कमजोर पड़ने योजना का उपयोग कर प्रत्येक नमूना। Aseptically पहले कमजोर पड़ने ट्यूब (10 -1) को undiluted नमूने से 0.2 मिलीलीटर हस्तांतरण। भंवर इस कमजोर पड़ने ट्यूब और हस्तांतरण अगले कमजोर पड़ने ट्यूब के लिए 0.2 मिलीलीटर। Dilutions की अपेक्षित संख्या के माध्यम से धारावाहिक कमजोर पड़ने जारी रखें।
- Aseptically हस्तांतरण प्रत्येक कमजोर पड़ने के 100 μl एक उपयुक्त अगर प्लेट (1 टेबल) को चढ़ाया जा करने के लिए।
- एक बाँझ सेल स्प्रेडर का उपयोग करना, समान रूप से प्रत्येक अगर प्लेट पर नमूना वितरित।
- (पलटना और उपयुक्त परिस्थितियों में प्लेटें सेते
- 30-300 कालोनियों के साथ प्लेटों की गणना करें। 300 से अधिक कालोनियों युक्त प्लेट्स (TNTC) की गिनती करने के लिए भी कई माना जाता है। कम से कम 30 कालोनियों युक्त प्लेट्स मात्रा का ठहराव की सीमा (LOQ) से नीचे माना जाता है।
- प्रत्येक परीक्षा के नमूने की अनुमापांक गणना और सीएफयू / एमएल के रूप में परिणाम रिकॉर्ड है।
- सीएफयू / एमएल की गणना करने के लिए निम्न समीकरण का उपयोग करें:
- सबसे कमजोर पड़ने प्लेट पर कोई कालोनियों देखते हैं, तो जांच (लोद) की सीमा की गणना करने के लिए निम्नलिखित समीकरण का उपयोग करें:
और
कहां है:
एन पी में कणों (सीएफयू) की सबसे कम संख्या =आत्मविश्वास के साथ पता लगाया जा सकता है कि roduct।
एक सूक्ष्मजीव नहीं चल पाता है कि हो जाएगा पी = संभावना; एक सूक्ष्मजीव का पता लगाने के एक 95% आत्मविश्वास के लिए, पी .05 =।
मिलीलीटर में वी = कुल उत्पाद की मात्रा
थाली के वी = मात्रा चढ़ाया (एमएल) एक्स कमजोर पड़ने के स्तर
- नकारात्मक नियंत्रण के लिए, दो अगर प्लेट में से प्रत्येक पर धारावाहिक dilutions के लिए प्रयोग किया जाता है कि peptone पानी के 0.5 मिलीलीटर थाली। नमूनों का परीक्षण किया जा करने के रूप में एक ही थाली प्रकार का प्रयोग करें। पलटना और 1-2 दिनों के लिए समय समय पर विकास के लिए जाँच के लिए उपयुक्त परिस्थितियों पर थाली सेते हैं।
- विकास तो अगर प्लेट पर मनाया जाता है, का इस्तेमाल किया peptone पानी की बोतल खारिज किया जाना चाहिए; अध्ययन के परिणामों से भी अवैध कर रहे हैं।
- सकारात्मक नियंत्रण, फिर से अनुमापांक इस्तेमाल किया गया था कि बैक्टीरिया का जायजा संस्कृति के लिए। पलटना और 1-2 दिनों के लिए समय समय पर विकास के लिए जाँच के लिए उपयुक्त परिस्थितियों में प्लेटें सेते हैं। अनुमापांक रिकॉर्ड की CFU / एमएल लॉग ऑन 1.0 ± किया जाएगाअध्ययन के लिए एड शेयर अनुमापांक (खंड 1.5 देखें) वैध पर विचार किया जाएगा।
Representative Results
ग्यारह विभिन्न प्रजातियों के जीवाणु की कमी राइबोफ्लेविन और पराबैंगनी प्रकाश आधारित पीआरटी प्रक्रिया का उपयोग कर मूल्यांकन किया गया था। इन एजेंटों प्लेटलेट उत्पादों की अधिक आम प्रदूषणों से कुछ का प्रतिनिधित्व करते हैं और सकारात्मक पांच ग्राम और छह ग्राम नकारात्मक जीवों में शामिल हैं। कम से कम छह प्लेटलेट उत्पादों जीव प्रति मूल्यांकन किया गया और प्रत्येक उत्पाद प्लेटलेट उत्पाद में जीवाणुओं की> 1.0 x 10 5 सीएफयू / एमएल अंतिम अनुमापांक उपज के लिए पर्याप्त बैक्टीरिया के साथ inoculated किया गया था। पहले उपचार के लिए एक नमूना प्लेटलेट उत्पाद तुरंत राइबोफ्लेविन और यूवी की प्रक्रिया के साथ इलाज किया गया था, जिसके बाद पूर्व उपचार अनुमापांक, निर्धारित करने के लिए हटा दिया गया था। निम्न लॉग कटौती मनाया गया प्लेटलेट उत्पादों के उपचार के बाद: एस एपिडिडर्मिस 4.7 लॉग (99.998%), एस ऑरियस 4.8 लॉग (99.998%), एस 3.7 लॉग (99.98%) mitis, एस pyogenes 2.6 लॉग (99.7%), एस marcescens 4.0 लॉग (99.99%), वाई enterocolitica 3.3 लॉग (99.95%), बीneotomae 5.4 लॉग (99.9996%), बी cereus 2.6 लॉग (99.7%), ई कोलाई ≥ 5.4 लॉग (99.9996%), पी। aeruginosa 4.7 लॉग (99.998%) और लालकृष्ण निमोनिया 2.8 लॉग (99.8%) (चित्रा 2)। राइबोफ्लेविन और यूवी प्रक्रिया के लिए जैसा कि ऊपर कहा सभी इकाइयों प्रणाली विशिष्टताओं से मुलाकात की। अतिरिक्त कमी परीक्षण एस के साथ प्रदर्शन किया गया था बफी कोट निकाली गई प्लेटलेट्स का उपयोग कर pyogenes। कोई महत्वपूर्ण अंतर एस की कमी में मनाया गया apheresis प्लेटलेट्स बनाम बफी कोट निकाली गई प्लेटलेट्स में pyogenes (डेटा) नहीं दिखाया।
तालिका 1: राइबोफ्लेविन और पराबैंगनी प्रकाश का उपयोग कर मूल्यांकन बैक्टीरियल प्रजातियों के लिए विकास की स्थिति। प्लेटलेट उत्पादों को दूषित करने के लिए दिखाया गया है कि दोनों ग्राम नकारात्मक और ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया के एक पैनल इस अध्ययन के लिए चयन किया गया था। विकास का प्रचार करने के लिए इस्तेमाल की स्थिति (तापमान और मीडिया प्रकार) और Titeआर जीवों दिखाए जाते हैं।
चित्रा 1: राइबोफ्लेविन और पराबैंगनी प्रकाश रोगज़नक़ कमी प्रक्रिया। राइबोफ्लेविन 500 माइक्रोन की नाममात्र की एकाग्रता में 0.9% खारा में भंग कर दिया गया था। समाधान प्रत्येक प्लेटलेट उत्पाद में जुड़ा हुआ है और सूखा बाँझ था। जीवाणु प्रत्येक प्लेटलेट इकाई के लिए aseptically जोड़ा और फिर यूवी ऊर्जा (लगभग 6-10 मिनट) का 6.2 जम्मू / मिलीलीटर के साथ इलाज किया गया था। इस में इन विट्रो में उपचार के बाद प्लेटलेट इकाई अंतिम बैक्टीरियल अनुमापांक निर्धारित करने के लिए नमूना था अध्ययन।
चित्रा 2:। राइबोफ्लेविन और पराबैंगनी प्रकाश राइबोफ्लेविन के साथ इलाज किया और पराबैंगनी प्रकाश प्लेटलेट उत्पादों की आम जीवाणु प्रदूषणों से जीवाणु भार को कम करने के लिए इस्तेमाल किया गया था जब विभिन्न प्रजातियों के जीवाणु की कमी। लॉग 10 में कमी का अंतर हैऔसत पूर्व उपचार अनुमापांक और औसत के बाद इलाज अनुमापांक के बीच। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
Discussion
बैक्टीरियल स्क्रीनिंग रक्त बैंकिंग संस्थानों में आम बात हो गई है और कई स्थानों के लिए यह bacterially दूषित प्लेटलेट्स की आधान को रोकने के लिए प्राथमिक विधि के रूप में कार्य करता है। बैक्टीरियल स्क्रीनिंग आम तौर पर एस की तरह तेजी से बढ़ ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया के बहुमत interdicts यद्यपि marcescens, ई कोलाई और ई cloacae, यह एस की तरह धीमी गति से बढ़ रही है ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया का पता लगाने के लिए संघर्ष ऑरियस, स्ट्रैपटोकोकस एसपीपी। और एस एपिडिडर्मिस 8। दुर्भाग्य से, इन तीन ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया रोगी मृत्यु दर 1 को जन्म दिया है सब दूषित प्लेटलेट इकाइयों और इन तीन जीवों से युक्त प्लेटलेट उत्पादों का आधान के 50% के ऊपर में फंसा रहे हैं।
कम से कम एक जीव ठेठ 4-8 मिलीलीटर स्क्रीनिंग नमूना भीतर निहित है, इसलिए है कि बैक्टीरियल स्क्रीनिंग पर्याप्त पर्याप्त उच्च होने के लिए एक प्लेटलेट उत्पाद में बैक्टीरियल अनुमापांक पर निर्भर करता है। एक जीवाणु 4-8 मिलीलीटर नमूना मात्रा में कब्जा करने के लिए जीवाणु अनुमापांक पर्याप्त उच्च नहीं है, तो इकाई को गलत तरीके से नकारात्मक रूप में चिह्नित किया जाता है और यह आधान के लिए जारी की है। बैक्टीरियल स्क्रीनिंग के लिए एक वैकल्पिक दृष्टिकोण सभी प्लेटलेट इकाइयों पर किया जा सकता है और कहा कि गैर कार्यात्मक रूप में दूषित जीवों प्रदान सकता है कि एक सक्रिय प्रक्रिया को रोजगार के लिए हो सकता है।
इस अध्ययन में, बैक्टीरिया के उच्च titers जानबूझकर राइबोफ्लेविन और पराबैंगनी प्रकाश रोगज़नक़ कमी प्रक्रिया की कुल कमी क्षमता का परीक्षण करने के प्लेटलेट इकाइयों के लिए जोड़ा गया था। जीवाणु भार इस अध्ययन में परीक्षण किया गया है, हालांकि अब तक सामान्य रूप से दान के समय रक्त उत्पादों में पाया उन लोगों से अधिक है, इस अध्ययन राइबोफ्लेविन और पराबैंगनी प्रकाश प्रक्रिया काफी द्वारा एक दूषित प्लेटलेट इकाई में व्यवहार्य बैक्टीरिया की अनुमापांक को कम करने में सक्षम है कि प्रदर्शन करने में मदद करता है 5.4 लॉग (बैक्टीरिया contaminating की 99.7-99.9996% की कमी) (चित्रा 2) के लिए 2.6। एक ACCURA प्राप्त करने के लिएते लॉग कमी मूल्य, यह जीवाणु अनुमापांक चरणों का प्रदर्शन जब ऑपरेटर सटीक pipetting के कौशल के साथ साथ अच्छा सड़न रोकनेवाला तकनीक है कि महत्वपूर्ण है। धारावाहिक dilutions जब प्रदर्शन imprecise pipetting त्रुटियों का एक संग्रह है, इस प्रकार एक गलत अनुमापांक माप करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं।
इस अध्ययन में एकत्र किए गए आंकड़ों कम स्तर, चिकित्सकीय प्रासंगिक बच्तेरेमिया (<20 सीएफयू / इकाई) के खिलाफ प्रणाली को चुनौती दी जो राइबोफ्लेविन और पराबैंगनी प्रकाश, के साथ पिछले काम का समर्थन करता है। पिछले अध्ययन के लिए एक वास्तविक नैदानिक संदूषण घटना नकल करने के लिए बनाया गया है और परिणाम राइबोफ्लेविन दिखाया और पराबैंगनी प्रकाश 7 दिन के प्लेटलेट भंडारण अवधि में बैक्टीरिया विकास को रोकने में प्रभावी था। पिछले अध्ययन के आंकड़ों पर आधारित मॉडलिंग प्लेटलेट उत्पादों के जीवाणु संक्रमण के वर्तमान जोखिम का अनुमान है कि मौजूदा स्तर 8 से ज्यादा के रूप में 98% से कम हो सकता है कि पता चलता है। राइबोफ्लेविन और पराबैंगनी प्रकाश प्रक्रिया बैक्टीरियल स्क्रीन के लिए अनुकूल तुलनाकेवल एक चिकित्सकीय प्रासंगिक बैक्टीरियल लोड 8 के साथ चुनौती दी जब प्लेटलेट इकाइयों में बैक्टीरियल दूषित पदार्थों को पता लगाने के लिए एक 66% प्रभावशीलता का प्रदर्शन किया जो आईएनजी,।
सभी तकनीकों के साथ के रूप में, प्लेटलेट उत्पादों की पीआरटी उपचार bacterially दूषित प्लेटलेट इकाइयों के साथ अपनी सीमाएं हैं संबंधित जटिलताओं को रोकने के लिए। पीआरटी सिस्टम बैक्टीरियल बीजाणुओं के खिलाफ प्रभावी नहीं हैं और एक पीआरटी सिस्टम शेष अन्तर्जीवविष अभी भी प्राप्तकर्ता में सेप्टिक सदमे का कारण बन सकता ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया के उच्च titers निष्क्रिय कर सकते हैं, इस प्रकार, भले ही अन्तर्जीवविष निष्क्रिय नहीं है। बैक्टीरिया उच्च titers के लिए प्रचार कर सकते हैं इससे पहले पीआरटी सबसे अच्छा भंडारण के दौरान जल्दी किया जाता है।
इन दो अध्ययनों के संयोजन के द्वारा प्रदर्शन के रूप में अंत में, राइबोफ्लेविन और पराबैंगनी प्रकाश प्रक्रिया दोनों ग्राम नकारात्मक और ग्राम सकारात्मक जीवों के जीवाणु भार को कम करने में प्रभावी है और बैक्टीरियल स्क्रीनिंग के लिए एक व्यवहार्य विकल्प प्रदान कर सकता है। नियमित रूप से treatinराइबोफ्लेविन और यूवी प्रकाश के साथ जी प्लेटलेट उत्पादों को भी वायरस और परजीवी की तरह अन्य रक्त जनित एजेंटों के संभावित संचरण को कम करने के अतिरिक्त लाभ है।
Disclosures
इस पत्र के सभी लेखकों वर्तमान में Terumo BCT, Mirasol पीआरटी प्रणाली के डेवलपर और निर्माता द्वारा नियोजित कर रहे हैं। इस वीडियो लेख के लिए प्रकाशन फीस Terumo BCT द्वारा भुगतान किया गया है।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mirasol Illuminator | Terumo BCT | N/A | |
| Mirasol Treatment/Storage Bag | Terumo BCT | N/A | |
| Hematology Analyzer | Beckman-Coulter | Ac•T diff | |
| Blood Gas Analyzer | Siemens | RapidLab 1265 | |
| Sterile Docking Device | Terumo BCT | TSCD | |
| Platelet Incubator | Helmer | PC2200 | |
| Orbital Incubator Shaker | Lab-Line | 4628 | |
| Dry Incubator | Fisher | Iso-temp | |
| Class II A/B3 Biosafety Cabinet | Thermo-forma | 1286 | |
| Tubing Sealer | Sebra | Smart Sealer II | |
| Table Top Centrifuge | IEC | Centra GP8R | |
| 10 ml Syringe | BD | 309604 | |
| 30 ml Syringe | BD | 309650 | |
| 5 ml Dilution Tube | VWR | 211-0058 | |
| 50 ml Conical Tube | Corning | 430290 | |
| Micropipette | Gilson | P-200 | |
| Micropipette | Rainin | R-200 | |
| Repeat Pipette | Eppendorf | 4780 | |
| 1-200 µl Filter Tip | Costar | 4810 | |
| 25 ml Disposable Serrological Pipette | Costar | 4489 | |
| 5 ml Disposable Serrological Pipette | Costar | 4487 | |
| 35 ml 500 µM Riboflavin | Terumo BCT | 35 mL 500 µM | |
| Brucella Agar with 5% Horse Blood | BBL | 221547 | |
| Brain Heart Infusion | Teknova | B9993 | |
| Peptone Water | BD | 257087 | |
| Trypticase Soy Broth | BD | 299113 | |
| Trypticase Soy Agar | Remel | R01917 | |
| Heat Inactivated Horse Serum | Gibco | 26050 |
References
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