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Genetics

Indagine basata RNA interferenza della funzione di shock termico proteine ​​27 durante la guarigione della ferita corneale epiteliale

Published: September 27, 2016 doi: 10.3791/54280
Automatic Translation
*1, *2, 2, 2, 2, 2
1Department of Ophthalmology, Saevit Eye Hospital, 2Department of Ophthalmology, University of Ulsan College of Medicine, Asan Medical Center
* These authors contributed equally

Introduction

Corneali cellule epiteliali (PEC) sono continuamente capannone in film lacrimale, mentre sono allo stesso tempo sostituite da cellule del limbus e corneali strati basali epiteliali. 1 vari fattori di stress estrinseci possono indurre l'apoptosi e desquamazione della CEC. 2 Le proteine da shock termico (HSP) sono altamente conservati e possono essere suddivisi in due famiglie secondo dimensione molecolare. 3 la più grande famiglia HSP comprende HSP90, HSP70 e HSP60, e la famiglia più piccola comprende HSP27. 4 la fosforilazione di HSP27 è noto a svolgere un ruolo importante nella sopravvivenza cellulare ed è necessario per la migrazione delle cellule a causa del ruolo di questa proteina in actina rimodellamento. 5-7 Pertanto, abbiamo cercato di verificare il ruolo potenziale di HSP27 fosforilazione nella migrazione CEC e l'apoptosi in un modello in vitro di cellule epiteliali guarigione della ferita.

RNA interference (RNAi) utilizzando sia piccoli o brevi RNA interferenti (siRNA) ha geinteressi nerated sia in biologia di base e applicata, in quanto consente potenzialmente l'espressione di un gene di interesse da abbattuto. 8 In questo, abbiamo usato specifici siRNA-HSP27 per valutare il contributo di HSP27 a CEC guarigione della ferita e l'apoptosi. i metodi tradizionali per RNAi gene knock-down in cellule utilizzano duplex RNA sintetici, tra cui due non modificati oligonucleotidi 21-mer che possono essere assemblati per creare siRNA. La RNAi siRNA che abbiamo usato in questo studio è un metodo semplice e molto efficace trasfezione le cellule, e questo reagente funziona con varie linee cellulari immortalizzate. In questo studio, abbiamo dimostrato i metodi utilizzati per questa analisi, tra cui un saggio di zero-indotta ferita direzionale, western blotting, saggio di transfezione siRNA, test di immunofluorescenza e citometria a flusso.

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Protocol

1. Cell Line

  1. Culture 10 6 umani corneali cellule epiteliali telomerasi-immortalata (HCECs) in un 6-pozzetti (densità: 1039,9 cellule / mm 2) in un incubatore a 37 ° con un'atmosfera 5% di CO 2 con terreno di crescita dell'epitelio bronchiale (BEGM) fino raggiungono il 95% di confluenza.

2. Analisi Western Blot dopo aver creato epiteliali Ferite Scratch

  1. Streak uno sterile 200 ml punta della pipetta sulla superficie di un pozzo di confluenti HCECs coltivate quattro volte al piatto in un armadio di sicurezza biologica (Classe II, Tipo A2) e incubare HCECs separatamente in un incubatore a 37 ° con un CO 2 atmosfera 5% per 1, 5, 10, 30, 60 e 120 min.
  2. Utilizzare una piastra da 6 pozzetti per sei campioni differenti a seconda del tempo di incubazione dopo corneale ferimento epiteliale.
  3. Lavare feriti monostrati HCEC tre volte con PBS 1x e quindi aggiungere 2,0 ml BEGM in ogni pozzetto.
  4. Staccare HCECs utilizzando 2ml 0,25% di acido tripsina-etilendiamminotetraacetico (EDTA) per pozzetto per 5 minuti, centrifugare a 900 xg per 5 minuti in una provetta da 15 ml, e aspirare tripsina-EDTA con una pipetta 1 ml.
  5. Sospendere HCECs con 1 ml di PBS 1x e trasferirli in una provetta da 1,5 ml.
  6. Centrifuga HCECs a 10.000 xg per 15 sec e aspirare 1x PBS utilizzando una pipetta 1 ml.
  7. Risospendere HCECs in 100 microlitri tampone di lisi ghiacciata (10 mM Tris, 10 mM NaCl, 2 mM EDTA, 25 mM NaF, 2 mM Na 3 VO 4, 1 mM phenylmethanesulfonyl fluoruro [PMSF], inibitori della proteasi [1 micron pepstatina A, 1 pM leupeptina, e 0,1 pM aprotinina] e 0,5% Triton X-100 [pH 7]) e mescolare bene.
  8. Incubare le cellule per 30 min in ghiaccio per indurre lisi cellulare.
  9. lisati centrifugare a 4 ° C a 10.000 xg per 15 minuti, e poi il trasferimento a surnatanti freschi provette da 1,5 ml (90 aliquote microlitri) e conservarli a -80 ° C.
  10. Determinare le concentrazioni di proteine ​​totali di lisati cellulari che utilizzano il pr Bradfordsaggio otein. 9
  11. Carico 30 mg proteine ​​cellulari totali in un gel di acrilammide 10% o 12% di sodio dodecil solfato-poliacrilammide gel (SDS-PAGE) e quindi elettroforesi trasferimento separate bande proteiche filtri di nitrocellulosa con una corrente di 200 mA per 1 ora a 4 ° C da utilizzare in saggi di Western blot.
  12. Blocco di nitrocellulosa membrane filtranti con il 5% di latte scremato in soluzione salina Tris tamponata con Tween 20 (TBST) per 1 ora, aggiungere anticorpi policlonali di coniglio primaria contro i non-fosforilata HSP27 (1: 1.000 diluizione) o primaria anticorpo policlonale di coniglio contro fosforilata HSP27 (1 : 1.000 diluizione) in 5% di albumina di siero bovino (BSA), e incubare le membrane notte a 4 ° C su un agitatore.
  13. Rileva bande immunoreattive con rafano anticorpi di capra anti-coniglio coniugati con perossidasi (1: 10.000) diluizione in 5% di BSA dopo il lavaggio per 10 minuti 3 volte con TBST.
  14. Incubare la membrana nei reagenti luminol Western blotting (6-7 ml per 10 cm x 5 cm membrane) per 1 min a temperatura ambiente.
  15. Rimuovere la membrana dalla soluzione del reagente, rimuovere il liquido in eccesso con un panno assorbente, e posto in un protettore foglio di plastica.
  16. Lavorare in una stanza buia con una luce di sicurezza, posizionare la membrana ricoperta di una cassetta pellicola con il lato rivolto verso l'alto di proteine.
  17. Posizionare pellicola a raggi X in cima a membrana ed esporre per 1 min.

3. siRNA Transfection Assay 10

  1. HCECs Culture a 5 × 10 5 cellule / pozzetto in una piastra da 6 pozzetti in un incubatore a 37 ° con un'atmosfera 5% CO 2 utilizzando BEGM fino a raggiungere il 95% di confluenza.
  2. Diluire il reagente di trasfezione (2.5 o 7.5 ml) con 100 ml riduzione media siero per trasfezione (il fattore di diluizione è 41 o 14.3) e sciogliere il HSP27-specifica e strapazzate controllo siRNA in 100 ml di medio siero ridotto per creare 10 o 50 nm di specifici HSP27 e si arrampicò di controllo siRNA.
  3. Mescolare 100 μ; L soluzione siRNA con 100 microlitri di reagente diluito trasfezione (rapporto 1: 1) e incubare la miscela per 15 minuti a temperatura ambiente.
  4. Aggiungere i complessi siRNA-lipidi alle cellule. Poi, dopo 4 mezzi di modifica ore per completare BEGM e incubare le cellule per 2 giorni a 37 ° C.
  5. Analizzare le cellule trasfettate mediante western blotting, come descritto dalle sezioni da 4.1 a 4.7.

4. Western Blot test per celle siRNA-trasfettate 11

  1. Estrarre specifici HSP27 e strapazzate controllo HCECs siRNA-trasfettate in una cappa di sicurezza biologica con 100 microlitri tampone di lisi ghiacciata (10 mM Tris, 10 mM NaCl, 2 mM acido etilendiamminotetraacetico (EDTA), 25 mM NaF, 2 mM Na 3 VO 4, 1 mM phenylmethanesulfonyl fluoruro (PMSF), inibitori della proteasi, e 0,5% Triton X-100, pH 7).
  2. Incubare le cellule per 30 min in ghiaccio per indurre lisi cellulare.
  3. lisati pellet a 10.000 xg per 15 minuti e poi trasferire surnatanti di fresco 1,5 ml vascaes (90 microlitri aliquote) e conservarli a -80 ° C.
  4. Determinare le concentrazioni di proteine dei lisati cellulari che utilizzano il Metodo di Bradford. 9
  5. Caricare i campioni con la stessa quantità di proteine ​​cellulari totali su un gel di acrilammide 10% o 12%, sottopongono il gel di SDS-PAGE, e trasferire elettroforeticamente le bande proteiche separate su filtri di nitrocellulosa con una corrente di 200 mA per 1 ora a 4 ° C a utilizzare nei test Western blot.
  6. Blocco membrane filtranti di nitrocellulosa con 5% di latte scremato in soluzione salina Tris tamponata con Tween 20 (TBST) per 1 ora, aggiungere anticorpi primari contro fosforilata e non fosforilata HSP27 (1: 1000 diluizione), fosforilata Akt (1: 1000 diluizione), non fosforilata Akt (1: 1000 diluizione, usato come marcatore sopravvivenza cellulare), Bcl-2 associata X proteina (1: 1000 diluizione, usato come una proteina pro-apoptotica) e gliceraldeide 3-fosfato deidrogenasi (GAPDH; 1 : 200 diluizione, usato come controllo di carico) in 5% di albumina di siero bovino (BSA), eincubare le membrane notte a 4 ° C su un agitatore.
  7. Rileva bande immunoreattive con rafano anticorpi di capra anti-coniglio coniugati con perossidasi (1: 10.000) diluizione in 5% di BSA dopo il lavaggio 3 volte con TBST, 10 minuti ogni lavaggio.
  8. Incubare la membrana nei reagenti luminol Western blotting (6-7 ml per 10 cm cm x 5 cm membrane) per 1 min a temperatura ambiente.
  9. Rimuovere la membrana dalla soluzione del reagente, rimuovere il liquido in eccesso con un panno assorbente, e posto in un protettore foglio di plastica.
  10. Lavorando in una stanza buia con una luce di sicurezza, posizionare la membrana coperto in una cassetta pellicola con il lato rivolto verso l'alto proteine.
  11. Posizionare pellicola per raggi X sulla parte superiore della membrana ed esporre per 1 min.

5. Scratch-indotta direzionale Ferimento test di valutazione della migrazione delle cellule 12

  1. In una cappa di sicurezza biologica, fare una ferita trascinando una punta di pipetta sterile attraverso la superficie di un pozzo di culture confluenti dispecifici HSP27 siRNA-trasfettate o HCECs siRNA-trasfettate controllo strapazzate.
  2. Subito dopo il ferimento, lavare le cellule due volte con 1x tampone fosfato salino (PBS) e mantenerli nelle culture BEGM in un incubatore a 37 ° con un CO 2 atmosfera 5% per 24 ore dopo il ferimento.
  3. Fotografare immagini HCEC utilizzando un microscopio in posizione verticale a ingrandimento 100X 24 ore dopo il ferimento ed eseguire sfondo appiattimento utilizzando il filtro comando nel software di analisi delle immagini.
  4. Utilizzando il comando SELECT Misure, definire l'area di interesse (AOI), con la stessa forma poligonale dimensioni che possono coprire perpendicolarmente da un capo all'altro della ferita iniziale, e determinare tre diversi AOI nella zona ferita di ciascun campione.
  5. contare automaticamente il numero di cellule in ogni campo usando il conteggio / Dimensioni opzioni di menu Misura.

6. flusso Analisi Citometria di Apoptosis

  1. Cultura HSP27-specifici siRNA-trasfettate e controllo sHCECs contenenti ciascuna 10 nM siRNA iRNA-trasfettate ad una concentrazione di 5 x 10 5 cellule / pozzetto in piastre da 6 pozzetti fino a quando le cellule raggiungono il 95% di confluenza in un incubatore a 37 ° con CO 2 atmosphere 5% in BEGM.
  2. Sfilare HCECs utilizzando 2 ml 0,25% tripsina-EDTA per pozzetto per 5 minuti, centrifugare a 900 xg per 5 minuti in una provetta da 15 ml, e aspirare tripsina-EDTA con una pipetta 1 ml.
  3. Lavare le cellule due volte con PBS freddo e risospendere le cellule in 1x tampone (0,1 M HEPES / NaOH [pH 7,4], 1.4 M NaCl, e 25 mM CaCl 2) rilegatura ad una concentrazione di 10 6 cellule / ml.
  4. Trasferire 100 microlitri sospensione cellulare (1 x 10 5 cellule) in una provetta 5 ml.
  5. Aggiungere 5 ml di fluoresceina isotiocianato coniugato annessina V e 5 ml ioduro di propidio.
  6. Delicatamente vortice le cellule e incubare per 15 min a temperatura ambiente al buio.
  7. Aggiungere 200 ml di 1x tampone di legame a ciascuna provetta e analizzare le cellule da un flusso cytometer entro 1 ora.

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Representative Results

L'espressione di HSP27 fosforilata significativamente aumentata a 5, 10, e 30 minuti dopo il ferimento zero confrontato con HCECs illesi 13. Analisi Western Blot ha rivelato che l'espressione di HSP27 fosforilata e fosforilata Akt sono stati entrambi significativamente ridotto, mentre l'espressione di Bax era significativamente aumentata in HCECs siRNA-trasfettate specifici Hsp27 (Figura 1A-E). L'espressione HSP27 fosforilata è stato ridotto del 30% e del 40% a 10 nm e 50 nm di HSP27-specifiche cellule siRNA-trasfettate, rispettivamente, rispetto alle cellule siRNA-trasfettate controllo, ma l'espressione HSP27 fosforilata non è stato ridotto (Figura 1A-B ). Inoltre, l'espressione HSP27 non fosforilato è stato ridotto del 20% e del 30% in 10 nM e 50 nM di HSP27 specifiche cellule transfettate siRNA, rispettivamente, ma l'espressione HSP27 non fosforilato non è stata ridotta (Figura 1A e C </ Strong>).

Il saggio ferimento direzionale zero indotta indicato che a 24 ore dopo il ferimento, HSP27-specifiche cellule siRNA-trasfettate a 10 e 50 nm esibivano ridotta migrazione (Figura 2). Inoltre, HSP27-specifici HCECs siRNA-transfettate sono stati sottoposti a morte cellulare per apoptosi più e necrotica rispetto al controllo strapazzate cellule siRNA-trasfettate mediante citometria di flusso (Figura 3).

Figura 1
Figura 1. Analisi Western Blot utilizzando anticorpi contro fosforilata HSP27 (p-HSP27), non fosforilata HSP27 (non-p-HSP27), fosforilata Akt (p-Akt) come marker delle cellule sopravvivenza, non fosforilata Akt (non p-Akt), Bcl-2eassociated X proteine (Bax) come una proteina pro-apoptotica, e GAPDH (a). L'espressione di HSP27 fosforilata e nonphosphorylated e fosforilata Akt significativamente diminuita (B - D), tuttavia, l'espressione di Bax significativamente aumentata nelle HCECs siRNA transfettate specifico Hsp27 (E), rispetto a quella osservata nelle cellule transfettate siRNA-controllo (p <0.05). L'espressione HSP27 fosforilata è stato ridotto del 30% e del 40% a 10 nm e 50 nm di HSP27-specifiche cellule siRNA-trasfettate rispetto al controllo finta rispettivamente, ma l'espressione HSP27 fosforilata non è stata ridotta a 10 nm e 50 nm di siRNA di controllo cellule transfettate (B). **, *; †, ††; ‡, ‡‡; §, §§: una differenza statisticamente significativa tra i gruppi (p <0.05). Le barre di errore rappresentano la deviazione standard (SD). Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.

"> figura 2
Figura 2. Scratch-indotta test ferimento direzionale per valutare la migrazione delle cellule dopo il ferimento in HCECs siRNA-transfettate. Una ferita scratch è stato creato nel controllo e cellule siRNA-trasfettate HSP27-specifici (A). Le cellule sono state rimosse dalle zone "trascinati. A 24 ore dopo il ferimento, 10 e 50 nM di cellule trasfettate siRNA-specifico Hsp27 esposto numero inferiore di migrazione delle cellule rispetto alle cellule trasfettate siRNA-10 e 50 nM di controllo (B). ** E * indicano una differenza statisticamente significativa tra i gruppi (p <0.05). I dati sono mostrati come media ± deviazione standard. Si prega di cliccare qui per vedere una versione più grande di questa figura.

Figura 3 <br /> Figura 3. citometria di flusso di 50 Nm di controllo scrambled siRNA e umani cellule HSP27-specifici siRNA-trasfettate corneali epiteliali (HCECs) etichettati con annessina V e PI (A e B). La percentuale delle cellule totali nei quadranti corrisponde alle prime cellule apoptotiche (cellule annessina V-positivi e PI-negativi, Q4, in basso a destra), le cellule ritardo apoptotici (annessina V-positivo e PI-positivo cellule, Q2, in alto a destra), e le cellule necrotiche (cellule annessina V-negativi e PI-positivi, Q1, alto a sinistra). HCECs siRNA-trasfezione specifici Hsp27 avevano morte cellulare per apoptosi più e necrotico di controllare le cellule siRNA-trasfettate. Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.

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Disclosures

Gli autori non hanno interessi finanziari o esclusive in qualunque materiale o metodi citati in questo studio.

Acknowledgments

Questo studio è stato sostenuto dalla Student Research Grant (13-14) dell'Università di Ulsan College of Medicine, Seoul, Corea e una borsa di studio (2014-464) presso l'Istituto di Scienze della Vita Asan, Seoul, Corea.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Biological safety cabinet CHC LAB Co.Ltd,  Daejeon, Republic of Korea  CHC-777A2-06 Class II, Type A2 
Stealth RNAi™ siRNA Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA RNAi siRNA; scrambled control-siRNA and HSP27-specific siRNA
BEGMTM Lonza, Inc., Walkersville, MD CC-3171, CC4175 Bronchial epithelium growth medium 
Protease inhibitor  Sigma-Aldrich, Inc., St. Louis, MO P8340 ,P7626 1 μM Pepstatin A, 1 μM Leupeptin, 0.1 μM Aprotinin
Bradford protein assay  Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA #500-0001 Bradford protein assay 
Nitrocellulose filters  Amersham, Little Chalfont, UK RPN3032D Western blotting membrane
Non-phosphorylated HSP27  Abcam Inc., Cambridge, MA ab12351 1:1,000 dilution (Total HSP27)
Phosphorylated HSP27 (Ser85) Abcam Inc., Cambridge, MA ab5594 1:1,000 dilution HSP27 was phosphorylated at Ser85
Lipofectamine® RNAiMAX reagent  Invitrogen, Carlsbad, CA 13-778-075 Transfection reagent
Phosphorylated Akt (Ser473) Cell Signaling Technology, Danvers, MA No. 4060 1:1,000 dilution Akt was phosphorylated at Ser473 (cell survival marker)
Non-phosphorylated Akt  Cell Signaling Technology, Danvers, MA No. 4061 1:1,000 dilution (Total Akt)
Bcl-2-associated X protein  Cell Signaling Technology, Danvers, MA No. 4062 1:1,000 (anti-apoptotic protein marker)
GAPDH Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA No. 4063 1:1,000 loading control marker (house keeping gene)
Horseradish peroxidase-conjugated goat anti-rabbit antibodies Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA NCI1460KR 1:10,000 dilution
OPTI-MEM Invitrogen, Carlsbad, CA 31985 reduced serum medium for transfection
Image analysis software Olympus, Inc., Tokyo, Japan Image-Pro Plus 5.0
Skimed milk powder  Carl Roth GmbH + Co. KG, Karlstruhe, Germany T145.2
Tris  Amresco LCC, Inc. Solon, OH No-0497
Sodium Chloride  Amresco LCC, Inc. Solon, OH No-0241
Six well culture plate Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA 140675 35.00 mm diameter / well
24-well culuture dish Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA 142475
Orbital shaker N-Bioteck, Inc., Seoul, South Korea NB1015
Bovine serum albumin Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA sc-2323 
BDFACSCantoTM II BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ Flow cytometry
X-Ray Film Kodak, Rochester, NY Medical X-Ray Cassette with Green 400 Screen 
western blotting luminol reagent Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA sc-2048 
FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit I BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ 556547

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References

  1. Dua, H. S., Gomes, J. A., Singh, A. Corneal epithelial wound healing. Br. J. Ophthalmol. 78 (5), 401-408 (1994).
  2. Estil, S., Primo, E. J., Wilson, G. Apoptosis in shed human corneal cells. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 41 (11), 3360-3364 (2000).
  3. Guay, J., et al. Regulation of actin filament dynamics by p38 map kinase-mediated phosphorylation of heat shock protein 27. J. cell. Sci. 110, Pt 3 357-368 (1997).
  4. Park, J. W., et al. Differential expression of heat shock protein mRNAs under in vivo glutathione depletion in the mouse retina. Neurosci. Lett. 413 (3), 260-264 (2007).
  5. Rane, M. J., et al. Heat shock protein 27 controls apoptosis by regulating Akt activation. J. Biol. Chem. 278 (30), 27828-27835 (2003).
  6. Shin, K. D., et al. Blocking tumor cell migration and invasion with biphenyl isoxazole derivative KRIBB3, a synthetic molecule that inhibits Hsp27 phosphorylation. J. Biol. Chem. 280 (50), 41439-41448 (2005).
  7. Jain, S., et al. Expression of phosphorylated heat shock protein 27 during corneal epithelial wound healing. Cornea. 31 (7), 820-827 (2012).
  8. Alekseev, O. M., Richardson, R. T., Alekseev, O., O'Rand, M. G. Analysis of gene expression profiles in HeLa cells in response to overexpression or siRNA-mediated depletion of NASP. Reprod. Biol. Endocrinol. 7, 45 (2009).
  9. Park, H. Y., Kim, J. H., Lee, K. M., Park, C. K. Effect of prostaglandin analogues on tear proteomics and expression of cytokines and matrix metalloproteinases in the conjunctiva and corea. Exp. Eye. Res. 94 (1), 13-21 (2012).
  10. Voegeli, T. S., Currie, R. W. siRNA knocks down Hsp27 and increases angiotensin II-induced phosphorylated NF-kappaB p65 levels in aortic smooth muscle cells. Inflamm. Res. 58 (6), 336-343 (2009).
  11. Shi, B., Isseroff, R. R. Arsenite pre-conditioning reduces UVB-induced apoptosis in corneal epithelial cells through the anti-apoptotic activity of 27 kDa heat shock protein (HSP27). J. Cell. Physiol. 206 (2), 301-308 (2006).
  12. Shen, E. P., et al. Comparison of corneal epitheliotrophic capacity among different human blood-derived preparations. Cornea. 30 (2), 208-214 (2011).
  13. Song, I. S., et al. Heat shock protein 27 phosphorylation is involved in epithelial cell apoptosis as well as epithelial migration during corneal epithelial wound healing. Exp Eye Res. 118 (1), 36-41 (2014).

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Genetica shock termico proteina 27 epitelio corneale la guarigione delle ferite corneali epiteliali l'apoptosi delle cellule epiteliali la migrazione epiteliale interferenza del RNA siRNA biologia molecolare
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